SOP-TBA(循环酶法)
总胆汁酸(TBA)试剂盒标准操作程序
总胆汁酸（TBA）试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定直接胆红素浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆汁酸（TBA）试剂盒采用的是循环酶法。
5.原理血清中微量的胆汁酸（3α-羟甾醇）会被3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性氧化生成3α-酮甾醇，同时Thio-NAD被还原成β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
新生成的3α-酮甾醇在3α-HSD及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还化型（NADH）存在下，还原成胆汁酸，同时NADH氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD）。
这样，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环的过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。
在405nm处测定Thio-NADH吸光度的变化值，可以求得血清中胆汁酸的含量。
胆汁酸THio−NAD3α−HSD→THio−NADHNAD←NADH3α−铜羟甾醇6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2注册号：沪食药监械（准）字2011第2400009号7.3试剂瓶内主要成分：R1： -硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（THio-NAD）、Good’s缓冲液；R2 ：β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH）、3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）、Good’s 缓冲液、叠氮钠7.4试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年；开瓶后2-8℃避光保存，可稳定一个月8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
总胆汁酸(TBA)测定试剂(盒)(酶循环法)产品技术要求新产业
医疗器械产品技术要求编号：总胆汁酸（TBA）测定试剂（盒）（酶循环法）2.性能指标2.1外观试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2装量试剂装量的装量应按表1，液体装量的最大允许负偏差应为5%。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂（盒）测试空白样本，在37 ℃±0.1 ℃ 、405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.800 Abs。
2.3.2试剂空白吸光度变化率用试剂（盒）测试空白样本，在37℃ 0.1℃，405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度变化率≤0.010 Abs/min。
2.4分析灵敏度试剂（盒）测试27.1 μmol/L 的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）≥0.060 Abs/min。
2.5线性区间试剂（盒）线性在(0.00，200.00] μmol/L区间内：a) 线性相关系数r≥0.990；b) (0.00，50.00] μmol/L 区间内，线性绝对偏差应在±5 .00 μmol/L 范围内；(50.00，200.00]μmol/L 区间内，线性相对偏差应在±10%范围内。
2.6精密度2.6.1重复性试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，变异系数CV≤4.0%。
2.6.2批间差试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，相对极差R≤6.0%。
2.7准确度测可溯源至有证参考物质的校准品，相对偏差 B 在±10%范围内。
血清总胆汁酸测定标准操作规程
血清总胆汁酸测定（循环酶法）标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清总胆汁酸测定(缩写TBA)；组合项目申请：血生化中肝功能测定加选本项目。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一周，在冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理循环酶法。
胆汁酸被3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮类固醇及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）。
生成的3酮类固醇在3a-羟基类固醇脱氢酶及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）存在下，生成胆汁酸及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如此进行循环反应，最后测定生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NAD）的吸光度，求得胆汁酸浓度值。
胆汁酸测定试剂盒(循环酶法)标准化操作规程TBA-SOP
胆汁酸测定试剂盒（循环酶法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中胆汁酸的含量。
4 检验方法本试剂盒采用循环酶法测定胆汁酸的含量。
5 检验原理本试剂采用酶分析法测定血清总胆汁酸。
3α-羟基类固醇脱氢酶特异性作用于3α-羟甾族化合物，使之转化为相应的酮类固醇，反应中thio-NAD被还原为thio-NADH。
通过在405nm波长处测定单位时间内吸光度的变化值，可以计算出样品中总胆汁酸的含量。
6 标本要求6.1 样本为空腹患者血清。
样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。
6.2 样本应避免微生物污染，在2℃～8℃可稳定数月。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆汁酸试剂盒（循环酶法）7.27.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白：试剂空白吸光度：A≤0.800。
试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.040。
8.2.2 分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.0002。
8.2.3 线性范围：1μmol/L～180μmol/L；线性相关系数r≥0.9900；[1,36]μmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±7.2µmol/L；（36,180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15％。
8.2.4 准确度：比对试验：r≥0.9900；[1，36]μmol/L区间内，绝对偏差不超过±7.2μmol/L，（36，180]μmol/L区间内，相对偏差不超过±15%。
总胆汁酸(TBA)测定试剂盒(循环酶法)产品技术要求科方
1外观性状
1.1试剂盒各组分应齐全、完整、无液体渗漏；中文包装标签应清晰，准确、牢固；
1.2R1 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
1.3R2 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
2
试剂盒装量
试剂净含量应不小于标示值。
3准确度
与比对试剂盒做比对试验，两组结果的相关系数 r 应≥0.975，相对偏差应≤10%。
4灵敏度
测定TBA含量为50.0μmol/L的样品时，平均每分钟吸光度变化值（△A/min）≥0.08。
5试剂空白
在温度37℃、波长405nm条件下检测，试剂空白吸光度≤0.40（比色杯光径1.0cm）；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.1（比色杯光径1.0cm）。
6线性范围
a）线性范围（0.5-150）μmol/L，相关系数 r 应≥0.990； b）（0.5～5.0）μmol/L范围内偏差绝对值不大于1.0μmol/L；（5.0以上
～150）μmol/L范围内线性偏差应≤15%。
7测量精密度
7.1重复性
CV%应≤5%。
7.2批间差
相对偏差（R）应≤8%。
8特异性
胆红素≤342μmol/L，甘油三酯≤5.6mmol/L，血红蛋白≤2.0g/L，维生素
C≤0.3g/L 对测定结果造成的干扰，偏倚在±15％内。
总胆汁酸测定试剂盒(循环酶法)产品技术要求蓝韵生物
性能指标
2.1外观
试剂盒中液体试剂外观应澄清、透明，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3试剂空白
试剂盒以纯化水为空白在37℃ 1℃，405nm主波长条件下，试剂空白吸光度应≤1.000，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.005。
2.4分析灵敏度
试剂盒测定浓度为50.0µmol/L的样品时，吸光度变化率（△A/min）应≥0.010。
2.5精密度
2.5.1试剂盒的批内不精密度变异系数（CV）应≤
3.00%。
2.5.2试剂盒的批间不精密度相对极差（R）应≤ 4.00%。
2.6准确度
试剂盒的准确度相对偏差应在±10.0%范围内。
2.7线性范围
试剂盒在2.0μmol/L~180.0μmol/L的范围内，其线性相关系数（r）应≥0.9900，线性相对偏差应在±10.0%以内。
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求meigaoyi
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)适用范围：用于定量检测人血清中总胆汁酸（TBA）浓度。
1.1包装规格a) 试剂1：2×45ml，试剂2：2×15ml；b) 试剂1：4×45ml，试剂2：4×15ml；c) 试剂1：6×60ml，试剂2：2×60ml；d）试剂1：3×60ml，试剂2：3×20ml；e）试剂1：2×300ml，试剂2：2×100ml；f）试剂1：12×16.8ml，试剂2：12×5.6ml；g）试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；h）试剂1：1×30ml，试剂2：1×10ml。
1.2试剂主要组成成分试剂1主要组成成分甘氨酸缓冲液25 mmol/Lβ-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷氧化型（Thio-NAD） 1 mmol/L试剂2主要组成成分Tris缓冲液25 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷还原型（NADH）10 mmol/L3α-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）12500 U/L2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.1.2 试剂1应为淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。
2.2 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应＜0.5。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.04。
2.4 分析灵敏度测试150umol/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.02。
2.5 准确度回收率90%～110% 范围内。
2.6 精密度2.6.1批内精密度批内变异系数应不大于5％。
2.6.2批间精密度批间相对极差应不大于10％。
2.7 线性区间2.7.1在[2,180)umol/L区间内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990；2.7.2在（50，180）umol/L区间内，相对偏差不超过±15%；2.7.3在[2,50]umol/L区间内，绝对偏差不超过±5umol/L。
血清总胆汁酸操作程序
血清总胆汁酸操作程序1.目的规范血清总胆汁酸（TBA）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1 测定方法：循环酶法4．2 测定原理：胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化，以求的胆汁酸的浓度。
5. 标本采集与处理5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
5.3 标本稳定性：4℃保存可稳定1周，-20℃保存可稳定3个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用浙江伊利康生物工程有限公司试剂盒，为即用式液体双试剂。
试剂内各主要成分如下：试剂成分浓度试剂1 Good’缓冲液80mmol/LThio-NAD 0.95g/L试剂2 Good’缓冲液80mmol/L3α-羟甾醇脱氢13KU/LThio-NADH 6.10g/L防腐剂适量6.2 总胆汁酸校准血清：浙江伊利康生物工程有限公司浓度50μmol/L标准品。
6.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于2~8℃避光保存，可稳定至有效期（12个月）。
如试剂空白吸光度大于0.5即不能使用。
6.4 试剂不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
7. 仪器参数设定AU2700参数设定：科华试剂仪器参数设置参见试剂厂家提供相应仪器设置参数。
8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
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目录
目录 (1)
第1章目的和范围 (2)
1.1 目的 (2)
1.2 适用范围 (2)
第2章操作规程 (2)
2.1 测定原理 (2)
2.2 试剂贮存与稳定性 (2)
2.3 试剂与样本准备 (2)
2.4 测定参数 (2)
2.5 操作步骤 (3)
2.6 校准和质控 (3)
第3章结果计算 (3)
3.1 吸光度变化率的计算 (3)
3.2 活性的计算 (3)
第4章方法学特性 (3)
4.1 正常参考范围 (3)
4.2 线性范围 (3)
第5章临床意义 (4)
第6章安全防护 (4)
第1章目的和范围
1.1目的
为用户使用迈瑞公司TBA试剂时，提供正确的操作流程和操作规范。
1.2适用范围
适用于各级医疗机构的用户。
第2章操作规程
2.1测定原理
γ-GT催化胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
2.2试剂贮存与稳定性
试剂贮存在2～8℃环境时，在试剂盒上规定的有效期前可以保持稳定。
2.3试剂与样本准备
本试剂为液体双试剂，取出后可以直接使用。
样本可以为血清、肝素或EDTA抗凝的血浆。
尽量使用新鲜标本。
2.4测定参数
测定波长：405nm；
分析类型：连续监测法，扣除试剂空白；
孵育时间：3分钟；
延迟时间：1分钟；
读数时间：3分钟；
第一试剂/样本/第二试剂比例：270/4/90。
2.5 操作步骤
A/min
· R1： 270 μl
2.6 校准和质控
请使用迈瑞公司推荐的校准品和质控品。
第3章 结果计算
3.1 吸光度变化率的计算
ΔA/min=A/min 校准品管或样本管–A/min 空白管
3.2 活性的计算
C 样本=（ΔA 样本／ΔA 校准）×C 校准
C 样本：为测定的样本活性
C 标准：为校准品的活性
第4章 方法学特性
4.1 正常参考范围
4.2 线性范围
本法线性范围上限为150μmol/L ，当样品测定值超过上限时，应将样品用生理盐水作1+ 1稀释后重测，结果乘以2。
第5章临床意义
当患有肝脏疾病和胆酸吸收障碍时，进入血中的胆酸增加。
在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病时，总胆汁酸都有不同程度的升高。
另外，总胆汁酸的升高还见于胆汁淤积，胆管阻塞、胆囊炎等慢性疾病。
第6章安全防护
所有样本，包括病人样本、校准品和质控品等，可能含有致病性微生物，有被感染的危险性,操作时应采取防范措施；
使用试剂时应采取必要的预防措施，避免与皮肤及粘膜接触；本试剂含有NaN3，应避免与铅铜等金属接触。