生物化学实验课程论文

生物化学实验论文

论文题目：牛奶中活性物质的鉴定与测量实验地点：生命科学学院室

实验单位：大学

指导老师：

专业：生物工程

学号：

姓名：

摘要：通过一系列的实验对牛奶中的活性物质——水、粗脂、乳糖、酪蛋白进行提取、鉴定以及测量，并计算它们在牛奶中的含量。从乳糖中分离出糖晶体并在显微镜下观察糖脎晶体的形状，掌握一些基本的实验方法。学习从牛乳中测定水分提取粗脂的方法。掌握从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的原理和方法。学习常用鉴定蛋白质和乳糖的方法。

关键字：粗脂酪蛋白乳糖糖脎

前言：牛奶中含有丰富的营养物质，对人体大有裨益，是我们日常生活中不可或缺的饮食。通过该实验，我们初步学会并掌握对牛奶中活性成分的鉴定与测量，了解牛奶中各活性成分的提取及分离方法。食品质量检测和食品安全保证是当今社会的热点问题，因此本实验的意义比较明显。

Identification and measurement of active substances in milk

Summary: through a series of experiments on active substances in milk--water, thick fat, lactose, casein extraction, identification and measurement, and calculate their content in the milk. Isolated from the lactose and sugar crystals under a microscope observation of glucose osazone Crystal shape, mastering some basic experimental methods. Learning method for determination of water extract of crude fat in milk. Master from the principle of the separation of casein and lactose in milk and methods. Learn common method for identification of protein and lactose.

Keywords: casein lactose glucose osazone

Preface: crude FAT: milk is rich in nutrients and beneficial to the human body, is an integral part of the diet in our daily lives. Through this experiment, we learn and master on the identification and measurement of the active ingredient in milk,understand the extraction and isolation of active constituents in the milk. Food quality and food safety assurance is a hot issue in today's society, this experimental significance of more obvious.

1.实验部分

1.1实验目的

1)学习和掌握牛乳中水分测定方法，学习和掌握用索氏提取器提取脂肪的原理

和方法。

2)学习从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的原理和方法。

3)掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

4)学习常用蛋白质和乳糖的鉴定方法。

1.2实验原理

1)粗脂肪是脂肪、游离脂肪、蜡、磷脂、固醇、及色素等脂溶性物质的总称。

索氏提取管为一回流装置，由浸提管、小烧瓶及冷凝管组成。浸提管两侧分别有虹吸管及通气管，盛有样品的滤纸包放在浸提管内，试剂盛于小烧瓶中，加热后，溶剂蒸汽经通气管至冷凝管，经冷凝后滴入浸提管浸提样品，浸提液不断升高至虹吸管，溶于浸提液的粗脂一起流入小烧瓶，如此反复提取

回流，可将样品中的粗脂提尽，并带到小烧瓶中，可通过测量小烧瓶质量的增加或者滤纸包重量的减少来测定粗脂含量。

2)牛奶中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质

的80%。牛乳在ph4.7时酪蛋白等电点聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。

酪蛋白是白色，无味道的物质，不溶于水，乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。

乳清蛋白不同于酪蛋白，其离子水合能力强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最小的原理，将牛乳中的 ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后得到纯的酪蛋白。酪蛋白的含量约35g/L

3)牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D-半乳糖分子C1上的半缩

醛羟基和D-葡萄糖分子C4上的醇羟基脱水通过甘键连接而成。乳糖也不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖分子中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。

1.3实验器材与试剂

牛乳层析滤纸，烘箱干燥器，分析天平，电烘箱，

索氏提取器恒温水浴锅. 鲜牛奶, 温度计, 离心机 ,

抽滤装置 , 蒸发皿 , 电泳仪。

0.2mol/LpH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液100ml 乙醇乙醚

混合液（95%乙醇、无水乙醚体积比1:1）巴比妥缓冲

液（pH8.6，离子强度0.06）染色液：0.25g考马斯

亮蓝R250，加91ml50%甲醇，9ml冰醋酸。漂洗液:50ml

甲醇，75ml冰醋酸加入875ml蒸馏水混合而成。盐酸本

肼溶液，加水稀释溶解并定容至100ml，过滤，储存于棕

色瓶中。

1.4实验步骤

1)水分测定：

取一张烘干至恒重的层析滤纸，称重，为M滤纸，向滤纸上滴加新鲜牛乳约

4克，记下M

牛奶，放置70℃烘箱，烘干后，称滤纸与牛奶干物质重量M

纸+牛奶干

物质（M

前

）则M

水

=M

纸

+M

牛奶

—M

纸+干物质

2)牛乳中粗制提取与测定：

将洗净的索氏提取器蒸干，连接，向小烧杯中倒入1/2~2/3体积的石油醚，将有干物质的层析滤纸用普通滤纸包好（注意高度不要超过虹吸管），放入浸提管，水浴锅加热回流2~4小时，控制水浴锅的温度，以每小时回流3~5次为宜，提取完毕，石油醚完全流入小烧杯时，取出滤纸包，晾至无石油醚味后，放置70℃烘箱烘20min，称量，提取后滤纸与干物质重量记为M

后

，

按同法，以滤纸包做空白对照。则粗脂含量M

前-M

后

3)酪蛋白的分离

将20ml牛奶盛于100ml的烧杯中加热到40摄氏度。在搅拌下慢慢加入预热至40度、Ph4.7的醋酸缓冲液20ml。用冰醋酸调节PH至4.7，此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心5分钟（3000r/min），弃去上清液。再沉淀中加入碳酸钙粉末中和醋酸留作乳糖测定用，沉淀即为酪蛋白粗品。

用蒸馏水洗涤三次沉淀，每次约20ml，离心5min，弃去上液，再沉淀中加