小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR实验
小鼠肝核酸实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠肝组织中核酸的提取方法。
2. 了解DNA和RNA的组成差异及其鉴定方法。
3. 掌握防止核酸酶降解的措施。
4. 分析实验结果，验证实验方法的有效性。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA两种类型。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA则参与蛋白质的合成和调控等生物学过程。
本实验旨在从小鼠肝组织中提取核酸，并对其进行鉴定和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏、小牛胸腺细胞、氯化钠、柠檬酸钠、盐酸、硫酸、3，5-二羟甲苯、二苯胺、无水乙醇、氯仿等。
2. 实验仪器：高速冷冻离心机、电子天平、研磨器、恒温水浴锅、移液器、离心管等。
四、实验方法1. 小鼠肝匀浆制备：（1）取新鲜小鼠肝脏，用生理盐水洗净，去脂。
（2）将肝脏剪成小块，加入适量的生理盐水，用研磨器进行研磨。
（3）将研磨好的肝匀浆转移至离心管中，离心去除细胞碎片。
（4）收集上清液，即为肝匀浆。
2. 核酸提取：（1）取适量的肝匀浆，加入适量的氯化钠溶液，混匀。
（2）加入柠檬酸钠溶液，混匀，置于冰浴中10分钟。
（3）加入等体积的氯仿，混匀，静置10分钟。
（4）将混合液转移至新的离心管中，离心，收集上层水相。
（5）加入等体积的无水乙醇，混匀，静置30分钟。
（6）将混合液转移至新的离心管中，离心，收集沉淀。
（7）用75%乙醇洗涤沉淀，离心，收集沉淀。
3. DNA和RNA的鉴定：（1）取适量的DNA沉淀，加入适量的盐酸和硫酸，共热，观察颜色变化。
（2）取适量的RNA沉淀，加入适量的3，5-二羟甲苯和二苯胺，共热，观察颜色变化。
4. 防止核酸酶降解：（1）选取核酸酶含量较低的材料，如小牛胸腺细胞等。
（2）在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行。
（3）尽快加入含0.01 mol/L柠檬酸钠的0.14 mol/L氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶。
五、实验结果与分析1. 肝匀浆制备成功，细胞破碎充分。
RNA提取,RT-PCR实验报告
RNA制备及其鉴定实验目的初步掌握组织总RNA制备的原理及其基本方法，掌握RNA纯度鉴定的基本方法。
实验原理细胞内的RNA通常与蛋白质结合，以核蛋白（RNP）的形式存在。
分离制备RNA时，首先必须破碎细胞，使RNP释放到溶液中并与蛋白质分离，然后将RNA同其他的细胞成分分离开并保证RNA的完整性。
本次实验我们选用了Trizol法分离提取小鼠肝组织的总RNA，Trizol法分离提取的RNA产率高、纯度好且不易降解。
评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性。
均一的RNA取决于有效的去除RNA提取物中的DNA、蛋白质和其他杂质；完整的RNA取决于最大限度地避免纯化过程中内源性及外源性RNA酶对RNA的降解。
通常采用紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度，纯RNA的A260/A280=2.0，但由于所用的标本不同，此比值有一定的变化，一般在1.8~2.0之间，低于改值表明有蛋白污染，需进一步用酚/氯仿抽提。
RNA的完整性可通过琼脂糖电泳法进行鉴定。
完整的RNA电泳时，28S和18SrRNA经EB染色后，两条电泳条带的显色强度近似为2比1。
本实验中几个重要试剂的作用：Trizol试剂：Trizol的主要成分是苯酚、异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、醋酸钠、柠檬酸钠。
它的主要作用是1、裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。
2、使蛋白质变性，有利于DNA和RNA与蛋白质的分离。
3、抑制内源和外源RNase。
氯仿：氯仿的作用有多个方面，一、作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去。
二、通过变性作用抑制RNase活性；三、通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；四、作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。
异丙醇：异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量要比乙醇少。
异丙醇是等体积，而乙醇一般需要2.5倍体积。
在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
小鼠肝脏组织总RNA的提取及RT-PCR
（2）逆转录反应：
（3）反转录反应条件如下：
37℃ 15min (反转录反应) 85℃ 8sec （反转录酶的失活反应） 4℃
（4）得到的CDNA可用于下一步的PCR 反应
四、RT-PCR
目的： 1.掌握RT-PCR的基本原理； 2.熟悉RT-PCR的反应体系、操作及电泳分析
原理：提取组织或细胞中的RNA，采用oligo(DT) 或随机引物，利用反转录酶反转录成CDNA， 然后以CDNA为模板进行PCR扩增，从而获得目 的基因的表达。首先，RNA在反转录酶作用下 反转录成CDNA第一链，在DNA聚合酶的作用 下扩增目的基因
9、取10μL所提取的肝脏总RNA，用 2μL10×Loading Buffer混合后加入胶孔中
10、150V ，电泳15min，用凝胶成像仪器 成像
三、CDNA的合成
RT-PCR 方法由从RNA 合成cDNA的逆转录 反应和对此cDNA 进行扩增的PCR 反应组 成
PCR 中如果扩增了错误的DNA 序列的话， 将有可能损坏目的基因本来具有的机能 的风险
反应条件： 37℃ 15min 85℃ 5s 4℃
2. RT-PCR:
10×PCR Buffer 3.0
dNTP
2.0
F
1.0
R
1.0
rTaq
1.0
CDNA
2.0
DH20
20
反应条件：
95℃ 5min
①95℃ 45s
②58℃ 30s
③72℃ 30s ①～ ③：38cycle
操作
逆转录反应： （1）制品内容 5× primscipt@ RT Master Mix RNase Free dH2O
5× primscipt@ RT Master Mix中含有RT-PCR 中含有的反转录反应所需要的所有试剂 （primscipt RTase , RNase inhibitor , random 6 mers, Oligo dT primer , dNTP Mixture , 反 应Buffer）, 加入模扳RNA 和水就可迅速进 行反应
dd小鼠肝脏RNA的抽提纯化与鉴定
RNA产物的鉴定
RNA的纯度与含量用紫外分光光度法检验。 ❖高纯度RNA的A260/A280应处于至之间， ❖A260与RNA浓度呈正比，1 OD = 40μg/ml
RNA。 RNA的完整性可通过电泳检测 ❖R N A 为 单 链 分 子 ， 二 级 结 构 复 杂 ， 需 先 经 甲 酰
实验原理
理论基础： 真核生物结构基因有内含子 基因在转录水平的表达
实验原理：四步骤 组织或细胞匀浆 分离总RNA 纯化RNA 检测RNA的纯度及完整性
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理论基础
真核生物中绝大多数基因有内含子，如直接由基因组克隆目的基因，不利于编码基因的序列分析及体外利 用原核细胞表达。提取RNA并逆转录形成cDNA或构建cDNA是获取真核生物表达基因的主要手段。
150V电泳30分钟，紫外灯下观察电泳结果。
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分光光度法操作步骤
加1μl RNA溶液于0.4ml DEPC-H2O，充分混 匀，读取260nm与280nm的吸光度数值。
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操作注意事项（一）
因为RNA酶分布广、活性强、且难以失活， 使RNA极易降解，操作时应特别注意： 高压消毒实验器皿，烤干。 以0.1% DEPC过夜处理所有试剂配置用水，并高压消毒。 抽提RNA时，应戴手套和口罩，少说话。
检测基因在转录水平的表达，需检测mRNA含量，定量RT-PCR是主要方法之一。
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内含子
外显子
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实验原理
抽提RNA的关键在于去除DNA与蛋白质，常用酸性酚法。在酸性条件下苯酚可溶解DNA而不溶解RNA， 同时酚又是蛋白变性剂。利用酸性酚试剂加氯仿共抽提，可一步完成细胞的裂解以及蛋白质与RNA的分离。 最后利用异丙醇沉淀，即可获得纯化的总RNA。
分子生物学实验指导
实验一RT-PCR法钓取小鼠肝脏GAPDH基因一、TRlzol试剂提取小鼠肝脏总RNATRIzol RNA提取试剂盒是由GIBCOBRL公司推出的产品，其操作方法简捷、方便，lh之内即可完成，所制备的RNA可用于cDNA合成及Northern blot等。
【试剂】TRlZOL试剂氯仿异丙醇75％乙醇（DEPC水配制）无RNase水【操作方法】（1）收获细胞1~5×106；或50-100mg组织，加TRlzol试剂lml匀浆。
（2），移入1.5ml Ep管中，室温静置5min。
（3）每1ml TRIZOL中加氯仿0.2m1，摇振15s，置室温2～3min。
（4）4℃离心，12,000g×15min。
（5）仔细吸取上层水相，移至另一Ep管中。
（6）加0.5ml异丙醇，混匀，置室温10min。
（7）4℃离心，12,000g×10min。
（8）弃上清，加75％乙醇1m1，轻轻摇振，充分洗涤沉淀，4℃离心，7500g×5min。
（9）弃上清，真空干燥后，沉淀重悬于50μl无RNase水中。
一70℃保存备用。
二、核酸的定量（1）分光光度法测定核酸浓度。
组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收波长为250~270nm之间。
例如腺嘌呤的最大紫外线吸收值在260.5nm，胞嘧啶：267nm 鸟嘌呤：276nM胸腺嘧啶：264.5 nm尿嘧啶259nm。
这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后，其最大吸收峰不会改变，但核苷酸最大吸收波长是260nm，吸收低谷在230nm，这个物理特性为紫外分光光度法测定核酸溶液浓度提供了基础。
在波长260nm紫外线下，1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50ug/ ml；单链DNA或RNA为40ug/ml；单链寡核苷酸为20ug/ml。
另外，还可以通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值，然后根据其比值来估计核酸的纯度。
DNA样品的比值为1.8，RNA样品的比值为2.0。
RNA提取,RT-PCR
72 ℃
45 S
延伸 (Extension)
上述温度变化进行 30 个循环 (cycles) 。 72 ℃ 10 min (Further extension)。
3. 将同学们分成三组，分别观察PCR的温度循环。 其它同学课间休息。
实验操作 三、 PCR产物的电泳
1. 教师指导学生将琼脂糖凝胶（1%）放入胶床上。 2. 样品制备：
dNTPs (10mM) 3 ’引物 (10mol/L)
5 l
1 l 1 l
5 ’引物 (10mol/L)
3）加去离子水 ，补足50l最终反应体系 4）Taq DNA 聚合酶(2U/l) 3. 轻弹管底混匀，然后放入离心机的套管内，用离心机甩一下； 4. 将PCR小管交给老师，老师统一将样品放入PCR仪。
2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp
？ GAPDH gene 片段 (746bp)
？
（1）观察： 蓝色箭头指示的是何种DNA ？ （2）此PCR 结果存在什么问题？ 原因？你拟采用哪些措施解决上述问题？
实验操作五、PCR产物的回收
挤胶法回收PCR产物：
PCR电泳结果
实验操作一、建立 PCR 反应体系
取 1 支200 l 微量离心管（在第一组同学的实验台上方的平皿里）中， 用 Marker 笔 在管的侧面 标记； 2. 依次加入下列试剂： 1）模板DNA (上次课逆转录的cDNA） 4 l 1. 2）加入下列试剂,，顺序可以改变
10X PCR buffer (含MgCl2 )
用TriZol试剂提取总RNA时，全程均在室温进行。 当RNA沉淀用水溶解后，应该注意在冰上操作，操作要迅速。
11)室温干燥3－5 min （根据 RNA 沉淀大小决定，干燥后的沉淀应该是无 色胶样透明状，避免过分干燥,此步骤非常关键。）
小鼠肝脏RNA的抽提纯化与鉴定及逆转录(RT)-PCR
小鼠肝脏RNA的抽提纯化与鉴定及逆转录(RT)-PCR实验名称：小鼠肝脏RNA 的抽提纯化与鉴定及逆转录(RT)-PCR实验目的：1、掌握RNA 操作注意事项2、了解RNA 抽提原理3、熟悉RNA 抽提方法4、了解鉴定RNA 含量和质量的方法5、了解逆转录(RT)-PCR方法实验原理：真核生物中绝大多数基因有内含子，如直接由基因组克隆目的基因，不利于编码基因的序列分析及体外利用原核细胞表达。
提取 RNA 并逆转录形成 cDNA 或构建 cDNA 文库是获取真核生物表达基因的主要手段。
检测基因在转录水平的表达，需检测 mRNA 含量，定量 RT-PCR 是主要方法之一。
实验基础：酸性酚法；四步骤（组织或细胞匀浆、分离总 RNA、纯化 RNA、检测 RNA 的纯度及完整性）酸性酚法：在酸性条件下苯酚可溶解 DNA 而不溶解 RNA，同时酚又是蛋白变性剂。
利用酸性酚试剂加氯仿共抽提，可一步完成细胞的裂解以及蛋白质与 RNA 的分离。
最后利用异丙醇沉淀，即可获得纯化的总 RNA。
实验步骤：1、准备工作：去除外源性 RNA 酶。
2、处死小鼠。
3、取小鼠肝组织匀浆，取肝 50~100mg Trizol（酸性酚+异硫氰酸胍） 1ml。
4、加入氯仿 0.2ml，剧烈振荡 15s，室温放置 10min。
12000rpm， 15min，取上清置一新 EP 管。
（离心后溶液分为三相，即上层的水相、下层的有机相以及中间的变性蛋白。
小心吸取上层水相，绝不能有中层蛋白混入。
）5、加入异丙醇 0.5ml，振荡混匀，室温放置 10min， 12000rpm,10min，弃上清。
（加入 50％的异丙醇沉淀核酸。
异丙醇的用量应与以上所取上清液的体积相当。
）6、 1ml 75％乙醇洗涤沉淀， 12000rpm,5min，重复一次。
7、空气干燥沉淀 5-8min，溶解于 20μl DEPC-H2O。
留样 2μl，其余－70℃保存备用。
肝脏组织提取实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握肝脏组织提取的原理和步骤。
2. 熟悉肝脏组织提取过程中所需的仪器和试剂。
3. 掌握肝脏组织提取过程中注意事项，提高实验操作技能。
二、实验原理肝脏组织提取实验主要是通过一系列的物理和化学方法，将肝脏组织中的细胞、细胞器、蛋白质、核酸等生物大分子分离出来，以便于后续的生物学研究。
本实验采用匀浆法提取肝脏组织，通过裂解细胞、离心、洗涤等步骤，获得较为纯净的肝脏组织。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜小鼠肝脏组织2. 试剂：TRIzol试剂、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水、RPMI 1640培养基等3. 仪器：匀浆器、高速离心机、移液器、离心管、玻璃匀浆器、EP管等四、实验步骤1. 匀浆处理：将新鲜小鼠肝脏组织在玻璃匀浆器中磨碎，每50到100mg组织加入1ml TRIzol试剂，用匀浆器进行匀浆处理。
样品体积不应超过TRIzol试剂体积的10%。
2. 室温放置：将匀浆器样品在室温放置5分钟。
3. 振荡混合：每使用1ml TRIzol试剂加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
4. 离心分离：2到8 10000Xg离心五分钟，样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中。
5. 转移水相：将水相转移到新管中。
6. 沉淀RNA：每使用1ml TRIzol试剂加入0.5ml异丙醇，室温放置1分钟。
7. 离心分离：2到8 10000Xg离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
移去上清。
8. 洗涤RNA：用75%乙醇洗涤RNA沉淀，每使用1ml TRIzol试剂至少加入1ml 75%乙醇，2到8 8000转离心5分钟，弃上清。
9. 干燥RNA：室温放置干燥RNA沉淀，大约晾5到10分钟即可。
10. 溶解RNA：加入25微升无RNase的DEPC水，用枪头吸打几次，放置10分钟使RNA溶解。
11. 保存RNA：-20℃保存。
小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR实验
RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR
RT-PCR操作步骤
5x Prime Script Buffer
Prime Script RT Enzyme Mix
Oligo dT primer (50 m)
Random 6 mers (`100 m)
提取的RNA
RNase Free 水
37℃ 85℃
25 cycle
1%琼脂糖凝胶电泳观察结果
RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色） 主要为DNA和蛋白质。
三、实验步骤
RNA提取 1、新鲜肝组织置EP管中，加200l Trizol充分研磨后，补加
800l Trizol，枪头吹匀。 2、加入200l 氯仿，剧烈震荡15秒，4℃ 12000g离心15min。 3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500l异丙醇颠倒混匀。 4、4℃ 12000g离心10min。 5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50l DEPC水中。
15min 5 sec
2 l ① 0.5 l ② 0.5 l ③ 1 l ④ 0.5 l 5.5 l ⑤
10 l
精选2021版课件
7
PCR
10x PCR Buffer 5 l
dNTP 模板DNA 引物1 引物2 Taq 酶
4 l 2 l 2 l 2 l 0.5 l
H2O
34.5 l
50 l
94℃ 5 min 94℃° 30 sec 54℃° 30 sec 72℃ 30 sec 72℃ 7 min
小鼠肝组织RNA提取及 RT-PCR
一、试剂及材料
1、小鼠肝脏 2、DEPC处理过的EP管、PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水
RT-PCR实验步骤
(1)RNA提取1、取出新鲜肝组织，放在液氮中冻存备用。
2、取匀浆器，加入lml的Trizol Reagent，置冰上预冷。
3、取100mg新鲜肝组织，加入到匀浆器中。
4、充分研磨直至无可见组织块，转移到1.5ml EP管中。
(2)两相分离每lml的Trizol Reagent试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。
手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。
4C下12000rpm离心15分钟。
离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。
RNA全部被分配于水相中。
水相上层的体积大约是匀浆时加入的Trizol Reagent试剂的60％。
(3)RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。
加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30C孵育10分钟后，于4C下12000rpm离心10分钟。
此时离心前不可见的RNA 沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
(4)RNA清洗移去上清液，每lml Trizol Reagent试剂裂解的样品中加入至少lml的75％乙醇(75％乙醇用DEPC H2O配制)，清洗RNA沉淀。
混匀后，4C下7000rpm离心5分钟。
(5)RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
(6)溶解RNA沉淀溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40u1用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80C待用。
(7)测定RNA的质量1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。
然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液浓度和纯度。
①浓度测定：A260下读值为1表示40 ug RNA/ml。
样品RNA浓度(ug/m1)计算公式为：A260×稀释倍数×40 ug／ml。
具体计算如下：RNA溶于4u1 DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495 ul的TE中，测得A260=0.21RNA浓度=0.21×100×40ug/ml=840ug/ml或0.84ug/ul取5ul用来测量以后，剩余样品RNA 为35u1，剩余RNA总量为：35u1×0.84 ug/ul=29.4 ug②纯度测定：RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
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0.5 l ② 0.5 l ③
Random 6 mers (`100 m)
提取的RNA
1 l
0.5 l
④
RNase Free 水
5.5 l ⑤
10 l
37℃
15min
85℃
5 sec
PCR
10x PCR Buffer 5 l
dNTP
模板DNA
4 l
2 l
引物1
引物2 Tag 酶 H2O
2 l
2 l 0.5 l 34.5 l 50 l
94℃
5 min
94℃° 30 sec
54℃° 30 sec
25 cycle
72℃
72℃
30 sec
7 min
1%琼脂糖凝胶电泳观察结果
，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使 RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿 时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水
3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500l异丙醇颠倒混匀。 4、4℃ 12000g离心10min。 5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50l DEPC水中。
RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR
RT-PCR操作步骤
5x Prime Script Buffer Prime Script RT Enzyme Mix Oligo dT primer (50 m) 2 l ①
Oligo dT Primer
特异性下游引物 (PCR时的下游引 物)
逆转录反应的引物
1. 随机引物 约30％论文采用，缺点：rRNA的干扰 2. Oligo(dT)引物 约40％论文采用，缺点：mRNA 5’端的合成 另有10％论文同时采用以上两种引物 3. 基因特异性引物（GSP）
约20％论文采用，缺点：cDNA的通用性，低丰 度mRNA的逆转录
常用的两种逆转录酶 AMV（avian myeloblastosis virus）： 酶活性最适温度42℃ MMLV（Moloney murine leukemia virus）：酶活性最适温度37℃
双酶切反应
RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）
主要为DNA和蛋白质。
三、实验步骤
RNA提取
1、新鲜肝组织置EP管中，加200l Trizol充分研磨后，补加
800l Trizol，枪头吹匀。
2、加入200l 氯仿，剧烈震荡15秒，4℃ 12000g离心15min。
Random 6 mers
适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。 包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所 有RNA的反转录反应都可使用本引物。
适用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意： 原核生物的RNA、真核生物的 rRNA、 tRNA以及某些种类的真核生 物的mRNA等不具有Poly(A)+ Tail)。 必须与模板序列互补，需了解Target序 列。
小鼠肝组织RNA提取及
RT-PCR
一、试剂及材料
1、小鼠肝脏 2、DEPC处理过的EP管、PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水
二、实验原理
TRIZOL：异硫氰酸胍 + 苯酚 裂解细胞，RNA与蛋 白质分离，将RNA释 放到溶液中。 促使RNA进入水相， 离心后可形成水相 层和有机层。相，离心后可源自成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有
机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为 RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。
反转录反应时Primer的选择 反转录引物的选择，应结合实验的具体情况，选择以下三种引物，即： Random 6 mers、Oligo dT Primer或特异性下游引物。对没有发夹结构的短链mRNA，上述三 种引物都可以使用；一般情 况下的反转录引物的选择请参照以下说明。