高效液相色谱_蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
高效液相色谱法测定甜菜碱的含量
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高效液相色谱法测定甜菜碱的含量
张倩茹 1 尹 蓉 1 殷龙龙 2 王贤萍 1 孙慧英 1 梁志宏 1*
（1 山西省农业科学院果树研究所果树种质创制与利用山西省重点实验室，山西太原 030031； 2 山西省农业科学院农产品加工研究所，山西太原 030031）
基金项目：山西省农业科学院“青枣及裂枣的加工产品研发及产品质量评价”（项目编号：YCX2018D2T12），山西省科技厅青年基金项目“木枣发 酵过程中甲醇产生机制及调控研究”（项目编号：201701D221200）；山西省农业科学院农谷研发专项“低酒精度枣汽酒饮品的研究与开 发”（项目编号：YGG1617）；山西省农业科学院公关项目“红枣酒类产品发酵过程中甲醇的控制工艺与技术”（项目编号：YGG17036）；山 西省重点研发计划“杂粮果蔬营养复合功能化太谷饼系列产品研究与开发”。
据文献报道，现阶段对甜菜碱含量的测定方法有滴
定法、分光光度计比色法、离子色谱法、液相色谱法、液相 色谱-质谱联仪法等。周畅［12］等采用比色法测定海产品 中甜菜碱含量，吴燕［13］等采用比色法测定枸杞子中甜菜 碱含量，杨雪［14］等用非水滴方法和离子色谱法比较了5种 产品的甜菜碱含量，吴英键［15］采用高效液相色谱－电喷 雾检测器法测定枸杞子中甜菜碱的含量，张弦飞［16］等采 用超高效合相色谱－串联质谱法快速测定枸杞中甜菜碱 含量，张文昔［17］等也采用超高效液相色谱-串联质谱法测 定了海藻肥中的甜菜碱。
提供了一种快速高效的方法，且灵敏度高，重复性好，简便易行。
关键词：高效液相色谱；甜菜碱；甲醇
中图分类号 S566.3
文献标识码 A 文章编号 1007-77ation of Betaine by High Performance Liquid Chromatography Zhang Qianru1 et al. （1Institute of Pomology，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Shanxi Key Laboratory of Germplasm Improvementand Utilization in Pomology，Taiyuan 030031，China） Abstract：An high performance liquid chromatography method for determination of betaine was built up. The Super⁃ sil SCX 5μm high performance liquid chromatography column was selected，the column was set at 40℃ ，using 0.01mol/L ammonium formate methanol∶water 85∶15（v/v）solution as mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min. The results showed that the method has a good linear relationship and high sensitivity，y=108284x-23952，R2=0.9994， the recovery rate between 99.45%-100.63%.This method provided a fast and efficient for determination of betaine， which was sensitive repeatable and easy to use. Key words：High Performance Liquid Chromatography；Betaine；Methanol
甜菜碱测定方法
甜菜碱药物分析进展甜菜碱（betaine，Bet）又名甘氨酸甜菜碱、甜菜素，化学名称是三甲基氨基乙酸或三甲铵乙内酯，19世纪最早发现于欧洲，是一种季铵型水溶性生物碱，广泛存在于动植物和微生物体内。
其分子式为C5H11NO2，结构式为（CH3）3N+CH2COO ，外观物理形状呈流动性，为鳞状或棱状白色结晶，易溶于水和甲醇，由于常温时极易吸湿潮解，应用时常将其制成甜菜碱盐酸盐（盐酸甜菜碱）。
自上世纪70年代以来，甜菜碱的研究渐成热点，已被广泛应用于畜牧、医药、农林、食品和日化等领域。
特别是在医药领域，甜菜碱许多优良的药理作用被相继发现，可用于对抗高同型半胱氨酸综合症，能保肝护肾、保持心脏与血管健康、维护消化系统、抑瘤抗癌、降压镇静、解热镇痛、耐缺氧、保护细胞抵抗高渗等等。
体内组织或排泄物中甜菜碱的测定有助于临床上诊断人体内代谢异常与否［1］，许多甜菜碱药效研究需要对其进行治疗药物监测，这都涉及到甜菜碱的分析测定。
如何更准确、简单、快速、经济地从生物样品中分离并定量甜菜碱，一直是学者们努力的方向。
1 从生物样品中提取分离甜菜碱基于甜菜碱的溶解性特点，从生物样品中提取甜菜碱最常用的方法有水提和醇提两种，如Hitz和Hanson［2］将生物样品90℃水浴1h，冷却后研磨，2 ℃去离子水浸提共3次，最后65 ℃减压浓缩；最早提出提取甜菜碱方法的Pearce等［3］使用甲醇对生物样品反复提取3次，然后于65 ℃减压浓缩。
国内有用碱性三氯甲烷提取甜菜碱的报道［4］,朴茨茅斯大学的杨昕等［5］则采用了混合提取法，将甲醇 氯仿 0.2 mol·L 1碳酸氢钾（12：5：1 v/v）加入生物样品，60 ℃分别提取2次，然后用甲醇 水（1：1 v/v）60 ℃加热提取，取得较好效果。
基于甜菜碱的两性季铵型生物碱的特殊结构，对其分离纯化大多使用离子交换法。
该方法是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同,经过交换平衡达到分离目的的一种柱色谱法［6］。
中药肉苁蓉多糖和总苷的提取分离及质量控制方法研究
摘要肉苁蓉为多年生草本植物，分布于新疆、内蒙古、陕西、甘肃、宁夏等地，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能。
本论文研究内容主要包括以下4个方面:1、肉苁蓉多糖的研究肉苁蓉多糖是肉苁蓉的有效成分之一，本文采用水提醇沉法对多糖进行提取分离，通过紫外分光光度法测定粗多糖和可溶性多糖的含量。
结果表明，粗多糖和可溶性多糖的含量分别为4.56%和17.41%；在肉苁蓉多糖提取研究的基础上对肉苁蓉多糖部位进行了研究，通过调节醇沉阶段的含醇量进行分段，用蒽酮-硫酸法对各部分多糖部位进行了含量测定。
结果显示，用20%乙醇沉淀所得多糖的含量最高，达到样品量的9.71%，占总多糖的44.0%。
2、肉苁蓉中毛蕊花糖苷的研究采用超声辅助提取法对肉苁蓉有效成分进行提取，用高效毛细管电泳法对肉苁蓉中毛蕊花糖苷进行含量测定。
详细考察了分离电压在8～25 kV范围和硼酸-硼砂缓冲溶液的pH在8.0～10.0之间对毛蕊花糖苷的分离影响，得到最佳分离条件为：电压8kV，运行缓冲溶液为30mmol/L的硼酸-硼砂（pH=9.0），室温，检测波长为334nm。
毛蕊花糖苷的浓度在0.015～0.375mg/mL 范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程y=13946x+560.32,(R2=0.9983) ，样品回收率为99.26%，RSD=1.16%，精密度RSD=0.96%。
通过上述研究，建立了毛蕊花苷的高效毛细管电泳含量测定方法，并用此方法测得肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量为样品的1.02～1.04%。
3、肉苁蓉中红景天苷的测定方法研究采用HPLC和HPCE两种方法对肉苁蓉中红景天苷的测定方法进行了研究。
用HPLC法对肉苁蓉中红景天苷的测定研究，采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙腈∶水(1∶9)，流速为1.0mL/min，室温，红景天苷的检测波长为278nm。
红景天苷在0.055～0.44µg范围呈良好的线性关系，其线性回归方程y=91207x－1097, (R2=0.9953) ，样品的回收率为94.8%，RSD= 1.50%，精密度RSD=0.39%。
盐生肉苁蓉中2种水溶性成分的薄层色谱鉴别
盐生肉苁蓉中2种水溶性成分的薄层色谱鉴别麦吾菊丹·阿力甫;杨建华;曹苑;谯明;胡君萍【摘要】[目的]建立盐生肉苁蓉药材中2种水溶性成分尿囊素和半乳糖醇的薄层色谱分析方法.[方法]采用硅胶G薄层板,分别对乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸、氯仿∶异丙醇∶乙酸等6种不同的展开剂及25％对二氨基苯甲醛、10％硫酸乙醇、3％酸性高锰酸钾溶液、10％香草醛浓硫酸4种不同的显色剂进行考察,确定盐生肉苁蓉提取物中尿囊素、半乳糖醇的最佳薄层分析条件,并对不同产地盐生肉苁蓉中的2种成分进行鉴定.[结果]尿囊素的展开剂为乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸(8∶l∶3),显色剂为25％对二氨基苯甲醛溶液;半乳糖醇的展开剂为乙酸乙酯∶异丙醇∶水∶甲酸(3∶4∶2∶1),显色剂为3％酸性高锰酸钾溶液.不同产地盐生肉苁蓉中均含有尿囊素和半乳糖醇.[结论]该方法快速简便、专属性强、重现性好,可快速鉴别肉苁蓉药材,是全面控制和评价盐生肉苁蓉药材质量的重要补充.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)019【总页数】3页(P55-57)【关键词】盐生肉苁蓉;尿囊素;半乳糖醇;薄层层析【作者】麦吾菊丹·阿力甫;杨建华;曹苑;谯明;胡君萍【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学第一附属医院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9肉苁蓉属(Cistanche Hoffmg．et Link)为列当科(Orobanchaceae)多年生草本，是寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物，为我国西北干旱地区特有的沙生濒危药材，素有“沙漠人参”之美誉［1］，具有增强免疫功能、补肾壮阳、抗氧化、抗衰老、抗辐射等功效［2］。
肉苁蓉作为一味传统名贵中药材，国内外学者对肉苁蓉苯乙醇苷类成分进行了广泛的化学成分、药理活性的研究，对肉苁蓉中其他水溶性成分少见报道，降低了肉苁蓉药材的利用率［3］。
肉苁蓉质量控制及评价的研究进展
展开剂，以改良的碘化铋钾试液为显色剂，结果显示 仅肉苁蓉含有与甜菜碱相同位置的斑点１５Ｊ。 ３．耋谱盗 光谱法具有直观、简便和快速等优点，在鉴别中 药材方面发挥重要作用。钟世杰等１６Ｉ采用红外光谱法 对新疆产四种肉苁蓉（肉苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉 苁蓉和迷肉苁蓉）的红外光谱鉴别分析，选用三个有 明显差异的波段，从峰位和峰数进行了比较鉴别。此 外，肉苁蓉与盐生肉苁蓉的６０％乙醇提取液在紫外 吸收光谱２００～５００ｎｍ波长范围吸收峰的差异，也可
指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别模式，对
中药产品的真实性和质量的一致性及稳定性均可有
效地加以检测和控制。国际上，如美国食品药品管理 局（ＦＤＡ）、欧洲共同体等也都提倡采用指纹图谱技术 对中草药产品进行质量评价。Ｊｉａｎｇｔ９Ｉ等应用高效液相 色谱一二极管阵列检测器一质谱的指纹图谱法鉴别肉 苁蓉属药材，利用主成分分析方法将肉苁蓉作为标 准模式比较其同其它肉苁蓉属药材的相同之处，另 外根据比较它们的保留时间、紫外光谱和极管阵列 检测器一质谱上的数据，鉴别出指纹图上有１８个主
二、有效成分的提取及含量测定研究
量和单糖组成葡萄糖组成，还确定了其空间结构为
直链葡聚糖，南ｌ，４－ｌｉｎｋａｇｅ ｇｌｃｐ和ｌ，６－ｌｉｎｋａｇｅ
ｇｌｃｐ
以３：ｌ的比例连接组成，与直链淀粉不同，为一种新
的葡聚糖。赵伟等［２５】从野生肉苁蓉茎中提取水溶性多 糖，经Ｓｅｖｅｇ法和酶法脱蛋白，超滤分级及Ｓｅｐｈａｄｅｘ
肉苁蓉的主要化学成分包括苯乙醇苷类、多糖、 环烯醚帖、甜菜碱和半乳糖醇等。目前，苯乙醇苷类 是研究最多的，共发现１７种苯乙醇苷类物质，这是 第一个被报道的具有神经保护作用的天然产品，并
在防止脂质过氧化发挥肝保护作用和清除ＮＯ自由
其单糖组成，测定其比旋光度并紫外光谱鉴定多糖 的纯度，发现该多糖的紫外光谱只有单一峰位、其不 同浓度乙醇的沉淀物比旋光度一致，提示此方法分 离纯化的多糖为均一组分。 ２．荃乙醇苷类
肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展
收稿日期:2009-03-18作者简介:李媛(1987-),女,硕士,研究方向:抗炎免疫药理学。
E -mail:liyuan870214@3通讯作者:张洪泉,教授,博士生导师,研究方向:抗炎免疫药理学。
E -mail:hqzhangyz@doi:10.3969/j .issn .1006-9690.2010.01.002肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展李 媛,宋媛媛,张洪泉3(扬州大学医药研究所,江苏扬州225001)摘 要 以近10年国内外发表的文献为依据,对肉苁蓉的生物学特性及其分布作了概述,并特别对化学成分及各种主要化学成分所具有的药理作用作一综述,并展望其发展前景。
关键词 肉苁蓉;资源分布;化学成分;药理作用中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1006-9690(2010)01-0007-05Advances i n Research of Chem i ca l Con stituen ts andM ed i c i n a l Acti v ity of C ist ancheL i Yuan ,Song Yuanyuan ,Zhang Hongquan(The Medical and Phar maceutical Acade my of Yangzhou University,Yangzhou 225001,China )Abstract Taking near 10years domestic and f oreign publicati on’s literature as the basis,this article has carried on the t otal outline t o the bi ol ogical characteristics of Cistanche and its distributi on .I n particular,the che m ical compositi on and the phar macol ogical effects of maj or che m ical constituents were revie wed,and l ook f or t o its p r os pects f or devel opment .Key words Herba Cistanche;res ource distributi on;che m ical compositi on;phar macol ogical effects 肉苁蓉(Herba Cistanche )是列当科(O r oban 2chaceae )肉苁蓉属(C istanche )植物肉苁蓉干燥带鳞叶的肉质茎,又名地精、金笋、苁蓉、大芸。
基于HPLC-QAMS_测定两种寄主肉苁蓉中6_种苯乙醇苷成分含量
2024年2月Feb.2024第48卷第1期Vol.48，No.1热带农业工程TROPICAL AGRICULTURAL ENCINEERING基于HPLC-QAMS 测定两种寄主肉苁蓉中6种苯乙醇苷成分含量安青郭晔红安芳芳马桃桃（甘肃农业大学农学院/干旱生境作物学国家重点实验室/甘肃省中药材规范化生产技术创新重点实验室甘肃兰州730070）摘要建立HPLC-QAMS 同时测定梭梭-肉苁蓉和四翅滨藜-肉苁蓉醇提液中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖、肉苁蓉苷A 、管花苷A 和2′-乙酰基毛蕊花糖苷的含量。
HPLC 法测定6种苯乙醇苷成分在各自线性范围内线性关系良好（r ≥0.9995），方法学考察RSD 均<3.0%，平均加样回收率为98.616%～100.203%，RSD 为1.645%～2.602%。
以松果菊苷为内参物，计算其它5个成分的RCF 分别为0.8839、1.0038、0.7510、0.8430和0.8515。
利用RCF 计算两种寄主肉苁蓉6种苯乙醇苷成分含量，QAMS 与ESM 测得的两种寄主肉苁蓉各成分含量无明显差异。
结果表明，建立的HPLC-QAMS 测定肉苁蓉醇提取液中6种苯乙醇苷成分的方法稳定可靠，可用于其质量控制及药效基础研究。
关键词肉苁蓉；高效液相色谱；一测多评法；苯乙醇苷中图分类号R284.1Determination of Six Phenylethanoid Glycosides in Two Hosts ofC.Deserticola by HPLC-QAMSAN QingGUO Yehong AN FangfangMA Taotao(Agronomy College,Gansu Agricultural University,State Key Laboratory of Aridland Crop Science,Key Laboratory of Standardized Production Technology Innovation of Traditional Chinese Medicinal Materials ofGansu Province,Lanzhou,Gansu 730070)AbstractTo establish HPLC-QAMS and determine echinoside,mulleinside,iso-mulleinside,cistanosideA,tubuloside A and 2'-acetyl-mulleinside in alcohol extracts of Haloxau-Cistanche and Cistanoside guadripennis.The HPLC method showed good linearity in their respective linear ranges (r ≥0.9995).RSD were all lower than 3.0%.The average recoveries were 98.616%～100.203%,and the RSDs were 1.645%～2.602%.Using Echinacoside as the internal reference,the RCFs of the other five components were calculated respectively as 0.8839, 1.0038,0.7510,0.8430and 0.8515,The contents of 6phenylethanolsides in two host species C.deserticola were calculated by RCF,and there was no significant difference between QAMS and ESM in the contents of 6phenylethanolsides in two host species C.deserticola .The results showed that the established HPLC-QAMS method for the determination of 6phenylethanolsides in C.deserticola alcohol extract was stable and reliable,could be used for its quality control and basic research on pharmacodynamics.KeywordCistanche deserticola ;HPLC;QAMS;phenylethanol glycoside传统肉苁蓉（Cistanche deserticola ）为寄生于梭梭（Haloxylon ammodendron ）根部的多年生寄基金项目：国家自然科学基金（No.31860349）；甘肃省科技计划（No.18YFlNA072，21CX6NH279）。
肉苁蓉的质量标准
肉苁蓉拼音名：Roucongrong英文名：HERBA CISTANCHES书页号：2000年版一部-103本品为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎。
多于春季苗未出土或刚出土时采挖，除去花序，切段，晒干。
【性状】本品呈扁圆柱形，稍弯曲，长3～15cm,直径2～8cm。
表面棕褐色或灰棕色，密被覆瓦状排列的肉质鳞叶，通常鳞叶先端已断，体重，质硬，微有柔性，不易折断，断面棕褐色，有淡棕色点状维管束，排列成波状环纹。
气微，味甜、微苦。
【鉴别】 (1) 取本品粉末1g，加含0.5％盐酸的乙醇溶液8ml，加热回流10分钟，趁热滤过，滤液加氨试液调节至中性，蒸干，残渣加1％盐酸溶液3ml 使溶解，滤过。
取滤液1ml,加碘化铋钾试液1～2滴，生成橘红色或红棕色沉淀。
(2) 取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取麦角甾苷对照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-9％醋酸溶液(20:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3) 取本品粉末1g，加80％乙醇10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取肉苁蓉对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取甜菜碱对照品，加80％乙醇制成每1ml 含5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲醇-水-醋酸(9:2:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
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(RSD )分别为 0172%, 2155%和 2112%,表明该测定 方法是可靠的 。
配制系列浓度的标准溶液进样 , 以甜菜碱的峰 面积 ( Y)的对数为纵坐标 , 甜菜碱的质量 ( X )的对 数为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 , 回 归 方 程 为 lgY = 11440 3·lgX + 61866 5, 相关系数 ( r2 )为 01999, 表 明甜菜碱在质量 0125 ～3 μg 范围内有良好的线性 关系 。以 3倍信噪比确定检出限为 011μg。 2. 3 回收率试验 精确称取内蒙产样品约 015 g, 提取 , 在 1 m L 样品中加入 1 g /L 的标样 25μL,测得方法的加样回 收率为 9912%。 2. 4 样品测定 精确称取 4种肉苁蓉样品各约 015 g, 提取 , 测 定 , 3次测定的结果见表 2。标样及样品的 H PLC 2 ELSD 图谱见图 1。
样品 1# 2# 3# 4#
表 2 样品中甜菜碱含量的测定结果
测定结果 / (m g / g)
平均值 / (m g / g)
73. 50 73. 94 73. 42
73. 62
57. 85
58. 01 未检出 未检出
57. 63
57. 80 / /
RSD / % 0. 38 0. 34 / /
图 1 ( a )甜菜碱对照品 、( b )内蒙古产肉苁蓉样品 、( c )甘肃产肉苁蓉样品和 ( d )新疆产肉苁蓉样品的 H PL C 2EL SD 图谱
8 ( 2) : 35
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肉苁蓉 ( H e rba C is ta n ch e)为列当科肉苁蓉属 多年生高等寄生植物 。始载于《神农本草经 》, 具有 填精补髓 、养血润燥 、悦色延年之功效 [ 1 ] 。中国药 典规定以列当科植物肉苁蓉 ( C is ta n che dese r tico la Y. C. M a )的干燥带鳞片肉质茎入药 [ 2 ] 。肉苁蓉中 的甜菜碱 ( b e ta ine )含量丰富 [ 3 ] ,是它的主要化学成 分之 一 。甜 菜 碱 的 化 学 名 称 是 三 甲 基 氨 基 乙 酸 (C5 H11 NO2 ) ,最早从甜菜中分离得到 , 是一种广泛 分布于动植物组织中的季铵型水溶性生物碱 [ 4 ] , 是 人体唯一可替代叶酸或 S 2腺苷蛋氨酸的甲基供体 。 文献 [ 5 ]报道甜菜碱有许多药理活性 。甜菜碱含量 测定的方法多样 , 文献报道有光谱法 [ 6 ] 、薄层扫描 色谱法 [ 7 ] 、高效液相色谱法 ( H PLC ) [ 8 ] 、酸碱滴定及 重量法 [ 9, 10 ]等 。其中 , H PLC 兼具分离效率高 、分析 结果准确的特点, 已成为甜菜碱测定的首选方 法 [ 11 ] 。由于甜菜碱缺乏生色基团 、极性较大 , 目前 对甜菜碱的测定大多采用柱前衍生 2H PLC 2紫外检 测的方法 [ 12 ] , 虽然灵敏度和选择性有了很大的改 善 ,但是操作较为繁琐 。本实验采用 H PLC 2蒸发光 散射检测器 ( ELSD )对中药肉苁蓉中的甜菜碱进行 了测定 ,方法快速 、简便 ,测定结果令人满意 。
ห้องสมุดไป่ตู้
2 结果与讨论
2. 1 色谱条件的选择 甜菜碱具有季铵碱性基团和羧酸酸性基团 , 是 极性较大的两性物质 。实验尝试用酸 、碱以及缓冲 溶液抑制极性 , 采用 C18柱反相色谱分离模式测定
收稿日期 : 2006207228 第一作者 :龚立冬 , 女 ,硕士研究生 , E 2m a il: gong_ld @ s ina. com. cn. 通讯联系人 :曹玉华 ,女 , 教授 , Te l: ( 0510) 85800939, E 2m a il: yuhuacao @ yahoo. com. cn. 基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (N o. 20375013) .
测定结果表明 , 新疆和云南产的管花肉苁蓉中 未检出甜菜碱 ,内蒙和甘肃产正品肉苁蓉中的甜菜 碱含量较为丰富 。目前 , 苯乙醇苷类物质 、甘露醇 、 甜菜碱均被建议作为评价肉苁蓉质量标准的物质 , 但本研究小组的前期工作发现 , 正品肉苁蓉和管花 肉苁蓉中均含有含量相近的苯乙醇苷类物质和甘露 醇 。因此 ,可以是否含有甜菜碱作为鉴别正品肉苁 蓉和管花肉苁蓉的参考依据 。
北京 : 人民卫生出版社 , 1986: 127 [ 6 ] Va ldes M a rtinez S E. A na lys t, 1983, 108 ( 1 290) : 1 114 [ 7 ] 杨东辉 , 王积福 , 魏璐雪. 中国中药杂志 , 1997, 22 ( 10) : 608 [ 8 ] M a r M 2H H, R idky T W , G a rne r S C, Ze ise l S H. J N u tr B io2
2007年 3月 M a rch 2007
色
谱
C h in ese J ou rn a l of C h rom a tog raph y
Vo l. 25 N o. 2 280～281
高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
龚立冬 , 曹玉华 , 侯建霞
(江南大学化学与材料工程学院 , 江苏 无锡 214122)
chem , 1995, 6: 392 [ 9 ] 张立木 , 张颖 , 牛瑞仙 , 齐永秀 , 李同德 , 郝立勇. 泰山医学
院学报 , 2005, 26 ( 2) : 149 [ 10 ] 江泽荣 , 包文芳 , 范知宇 , 高顺国. 沈阳药学院学报 , 1989,
6 ( 2) : 140 [ 11 ] 李炜 , 张丹参. 医学综述 , 2006, 12 ( 8) : 506 [ 12 ] 杨昕 , C live B a rw e ll, 刘焱文. 中国中医药信息杂志 , 2001,
参考文献 :
[ 1 ] 吴向美 , 屠鹏飞. 北京大学学报 (医学版 ) , 2004, 36 ( 1) : 24 [ 2 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 : 一部. 北京 : 化学工
业出版社 , 2000: 103
[ 3 ] 陈妙华 , 刘凤山 , 许建萍. 中国中药杂志 , 1993, 18 ( 7) : 424 [ 4 ] 田玉顺 , 金宝渊. 延边医学院学报 , 1996, 19 ( 1) : 54 [ 5 ] 国家医药管理局中草药情报中心站. 植 物 药 有 效 成 分 手 册.
摘要 :建立了高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定中药材肉苁蓉中甜菜碱含量的方法 。采用 W a te rs Sp he riso rb S5 N H2色谱柱 ( 250 m m ×416 m m , 5μm ) ,柱温 25 ℃,流动相为 011% (体积分数 )三氟乙酸水溶液 2甲醇 (体积比 为 15∶85) ,流速 016 m L /m in。蒸发光散射检测器参数 :漂移管温度 90 ℃,喷雾器温度 45 ℃,载气 (氮气 )压力 110 kP a ( 16 p s i) 。结果表明 ,该法具有良好的线性关系 , 同时 , 不同种肉苁蓉的测定结果表明 :管花肉苁蓉不含甜菜 碱 ,因此建议将甜菜碱作为标志物质来鉴别正品肉苁蓉 ( C is ta n che dese r ticola Y. C. M a )和管花肉苁蓉 ( C. tu 2 bu losa ( sch en k) R. W igh t) 。 关键词 :高效液相色谱法 (H PLC ) ; 蒸发光散射检测 ( ELSD ) ; 甜菜碱 ( be ta in e ) ; 肉苁蓉 ( H e rba C is ta n che) 中图分类号 : O 658 文献标识码 : B 文章编号 : 100028713 ( 2007) 0220280202 栏目类别 :技术与应用
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第 2期
龚立冬 ,等 :高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
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甜菜碱 ,由于 ELSD 本身检测方法的限制 ,实验选用 甲醇和水作为流动相 , 采用挥发性的 TFA、三乙胺 调节水相的 pH 值 。结果显示 :当流动相的 pH 值从 210到 910,以 015为步长变化时 , 甜菜碱的保留时 间短 ,且不随 pH 值而改变 , 说明加入弱酸 、弱碱或 调节缓冲溶液酸度均不能改善甜菜碱在 C18柱上的 保留行为 。而加入离子对试剂来抑制甜菜碱的极性 又是 ELSD 检测所不允许的 。若用离子交换色谱 柱 ,同样不能避免使用盐溶液 ,因此本实验采用了弱 极性的氨基柱 ,利用挥发性的弱酸作洗脱液分析两 性物质甜菜碱 。 选择不同配比和不同酸度的甲醇 2水作为流动 相进行考察 。在水相中加入不同浓度的 TFA, 当其 体积分数从 0105%变化到 011%时 , 甜菜碱的保留 时间逐渐增大 , 且与样品中相邻峰的分离度增加 。 进一步试验了 011% TFA 水溶液与甲醇的配比 , 考 虑到分离度 、峰形以及分析时间 , 选择 011% TFA 水 溶液与甲醇的体积比为 15∶85。 2. 2 重复性 、线性范围 、回归方程及检出限 取 1 g /L 甜菜碱标准溶液 2μL 进样 ,日间重复 进样 7次 ,保留时间 、峰高和峰面积的相对标准偏差
1 实验部分
1. 1 仪器和试剂 W a te rs 1525 二元泵 ; W a te rs 2420 ELSD; 雾化 载气 : 氮 气 ( 99199%) ; Em p ow e r 色 谱 软 件 。甲 醇 (色谱纯 ) ,水 (重蒸水 ) 。其他试剂为分析纯 。盐酸 甜菜碱标准品 ( ≥99%)购自 S igm a 公司 。肉苁蓉药 材均由洛阳高新开发区陆生天然植物研究所王忠东 教授提供并鉴定 ,其种属及产地见表 1。