缺氧对肺腺癌细胞A549MMP-9、TIMP-1表达的影响
缺氧对人非小细胞肺癌细胞系A549生物学行为的影响
浙江实用医学 ２ ０ １ ３ 年２ 月第 １ ８ 卷第 １ 期Ｚ ｈ ｅ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｐ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ， ２ ０ １ ３ ＂ ． Ｖ ｏ １ ． １ ８ ， Ｎ ｏ ． １
・ ｌ ５ ・
【 关键词】 靠小细 胞肺癌 Ａ ５ ４ ９ 缺氧
生物学行 为中肿瘤微 环境的一个显著特点 就
是局 部低 氧 ， 恶性 肿瘤 在 生 长 过 程 中 由于 组 织增 生 过快 必然 会 造 成 局 部 缺 氧 和供 能 与 消 耗 之 间 的不
培养 ４ 小时， 弃上清液加 ２ ０ ０ ｔ ｔ Ｌ Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ ， 振荡 １ ０ 分钟 ， 用酶标仪 测定 ４ ９ ０ ｎ ｍ处各孔 的吸光度值 。计算 生 存率 ： 生存率 ＝ 实验孔 Ａ值／ 对照孔 Ａ值 ×ｌ ｏ ｏ ％。 １ ． ３ 缺氧对 Ａ ５ ４ ９ 细胞系凋亡 的影响 取对数生 长期细胞进行缺氧和常氧培养 ２ ４ 小时 ， 干预结束
ｔ ｒ ｉ ｇ ｅ ｌ 胶 和上 室 内 的 细胞 ， 乙醇 固定 后 结 晶紫 染 色 ，
胞培养基为含 １ ５ ％胎牛血清的 Ｒ Ｐ Ｍ Ｉ １ ６ ４ ０ ， ３ ７ ｏ Ｃ、 ５ ％ ｃ Ｏ ２ 和９ ５ ％０ ２ 的培养箱 中传代培养。取对数生长 期细胞 ， 传代后 （ 未贴壁 ） 立 和９ ５ ％０ ２ 的培养箱 中培养 ， 缺氧培养
MMP-9、TIMP-1在羊水栓塞大鼠模型的表达及意义
MMP-9、TIMP-1在羊水栓塞大鼠模型的表达及意义谢同林;王方;谢成明;余舰【摘要】目的通过检测孕鼠羊水栓塞(AFE)后血清及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)的含量水平变化,探讨其与AFE的关系.方法30只健康SD孕晚期大鼠根据注入液体性质不同随机分为NS组、AF组及MAF组(n=10),建立AFE动物模型,HE染色观察肺组织病理变化,IHC检测肺组织MMP-9、TIMP-1的表达水平,ELISA测定实验前后血清MMP-9、TIMP-1水平变化.结果 HE染色见AF及MAF组肺组织内充血、水肿,大量炎性细胞浸润,部分血管可见角化丝状物质.IHC显示AF组及MAF组MMP-9较NS组的表达明显上调(P＜0.05),AF组及MAF组较NS组的TIMP-1表达明显下调(P＜0.05),ELISA法显示实验后MMP-9浓度增加、TIMP-1的浓度降低;MMP-9/TIMP-1比例失衡,以MAF组最明显,症状出现最早,最严重.结论 MMP-9表达上调、TIMP-1下调及MMP-9/TIMP-1比例失衡可能参与了羊水栓塞肺部病变的发生发展,可能是羊水栓塞肺损伤的发病机制之一.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2016(039)001【总页数】4页(P22-25)【关键词】羊水栓塞;基质金属蛋白酶9;基质金属蛋白酶抑制剂1;炎症反应;肺损伤【作者】谢同林;王方;谢成明;余舰【作者单位】遵义医学院附属医院司法鉴定中心,贵州遵义563099;金沙县公安局,贵州金沙551800;遵义医学院附属医院司法鉴定中心,贵州遵义563099;遵义医学院附属医院司法鉴定中心,贵州遵义563099【正文语种】中文【中图分类】R714.46基础医学研究羊水栓塞(amniotic fluid embolism，AFE)是一种发病率低、死亡率高、不可预测的产科并发症，是导致产妇死亡的重要原因之一。
缺氧诱导因子1在急性肺损伤中的研究进展
㊃综 述㊃缺氧诱导因子1在急性肺损伤中的研究进展林红卫 金发光第四军医大学附属唐都医院呼吸与危重症医学科,西安710000通信作者:金发光,E m a i l j i n f a g@f mm u e d u c n ʌ摘要ɔ 急性肺损伤(A L I )是由各种肺内和肺外致伤因素所致的急性低氧性呼吸功能不全,每年造成全世界数以万计的成人和儿童死亡,给患者个人和社会带来了极大的医疗负担㊂缺氧诱导因子1(H I F -1)是调节细胞缺氧应答的关键转录因子,是许多氧依赖性生理和病理生理过程的核心成分㊂大量研究证实,H I F -1与A L I 的发展过程密切相关,且可以作为A L I 的潜在治疗靶点㊂本文就H I F -1在A L I 中的最新研究进展作一综述㊂ʌ关键词ɔ 急性肺损伤;缺氧诱导因子1D O I 10 3760 c m a ji s s n 1673-436X 2019 24 009A d v a n c e m e n t o f p a t h o l o g i c a l r o l e o f h y p o x i a -i n d u c i b l e f a c t o r 1i na c u t e l u n g i n j u r yL i n H o n g w e i J i nF a g u a n gD e p a r t m e n t o f R e s p i r a t o r y a n d C r i t i c a lC a r e M e d i c i n e T a n g d u H o s p i t a l t h eF o u r t h M i l i t a r y M e d i c a lU n i v e r s i t yX i 'a n710000 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r J i nF a g u a n g E m a i l j i n f a g @fmm u e d u c n ʌA b s t r a c t ɔ A c u t e l u n g i n j u r y A L I i s a n a c u t e h y p o x i c r e s p i r a t o r y i n s u f f i c i e n c y a r i s i n g fr o m v a r i o u s i n t r a p u l m o n a r y a n de x t r a p u l m o n a r y i n j u r i e s c o n s e q u e n t l y r e s u l t i n g i ns i g n i f i c a n tm o r b i d i t ya n dm o r t a l i t y a n da g l ob a ld i s e a s eb u r d e n H y p o x i a -i n d uc i b l ef a c t o r1 H I F -1 i sa ni m po r t a n t t r a n s c r i p t i o n f a c t o r r e g u l a t i n g v a r i o u sh y p o x i a -i n d u c e d c e l l u l a r r e s p o n s e s a n d p l a ys ad o m i n a n t r o l e i nv a r i o u so x y g e n -d e p e n d e n t p h y s i o l o g i c a la n d p a t h o p h y s i o l o g i c a l p r o c e s s e s A l a r g en u m b e ro f e v i d e n c e sh a v e d e m o n s t r a t e d a n i m p o r t a n t r o l e o fH I F -1i n t h e p a t h o g e n e s i s o fA L I i n d i c a t i n g H I F -1a s a p o t e n t i a l t h e r a p e u t i c t a r g e t f o rA L I T h i s p a p e r r e v i e w s t h e l a t e s t r e s e a r c h p r o gr e s so n H I F -1i n t h e p a t h o ge n e s i s o fA L I ʌK e y wo r d s ɔ A c u t e l u n g i n j u r y H y p o x i a -i n d u c i b l e f a c t o r 1D O I 10 3760 c m a ji s s n 1673-436X 2019 24 009急性肺损伤(a c u t e l u n g i n j u r y ,A L I )是由各种肺内和肺外致伤因素所致的急性低氧性呼吸功能不全㊂目前虽然特殊I C U 和肺保护性机械通气策略已经出现,神经肌肉阻滞剂和干细胞治疗正在开发中,但很少有其他方法在A R D S 的治疗中被证明是有效的,这仍然是一个亟待解决的临床问题,迫切需要进一步研究A L I /A R D S 的发病机制,发展判断疾病严重程度㊁治疗反应和预后的生物标志物㊂缺氧诱导因子1(h y p o x i a -i n d u c i b l ef a c t o r1,H I F -1)是调节细胞缺氧应答的关键转录因子,是许多氧依赖性生理和病理生理过程的核心成分㊂A L I 导致缺氧的发生,而缺氧也是调控H I F -1的主要因素之一㊂实验研究发现,H I F -1途径与A L I 密切相关㊂近年来,关于H I F -1与A L I 的研究逐渐成为一个热点㊂1 A L I1 1 概述 A L I 和更严重[氧合指数<200mmH g(1mmH g =0 133k P a )]的A R D S 是急性全身炎症过程的肺部表现,临床表现为双侧肺浸润和严重的低氧血症㊂A L I /A R D S 的病因很多,包括但不限于感染㊁创伤㊁药物效应㊁脓毒血症㊁摄入物㊁吸入物㊁淹溺㊁休克㊁急性嗜酸粒细胞肺炎㊁呼吸机使用㊁免疫介导的肺出血和血管炎以及放射性肺炎㊂A R D S 的总发病率尚不清楚,据报道每年每10万人中约有2~8例A R D S ;A L I 则更为常见,每年每10万人中约有25例[1]㊂另有文献报道,在美国每年大约有15万人被诊断为A R D S [2]㊂A L I 和A R D S 主要发生在年轻㊁以前体健的人群中,每年造成全世界数以万计的成人和儿童死亡,给患者个人和社会带来了极大的负担㊂据统计,A R D S 的病死率一直保持在40%左右[3]㊂1 2 A L I 的发病机制 A L I 和A R D S 的发展和严重程度与肺泡巨噬细胞活化后中性粒细胞向肺部迁移密切相关[4]㊂同时肺泡上皮和中性粒细胞释放趋化因子(如C X C L -8㊁㊃5881㊃国际呼吸杂志2019年12月第39卷第24期 I n t JR e s p i r ,D e c e m b e r 2019,V o l .39,N o .24Copyright ©博看网. All Rights Reserved.E N A-78)㊁促炎细胞因子[如I L-1㊁I L-6㊁肿瘤坏死因子α(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r-α,T N F-α)]㊁急性期反应物(如C 反应蛋白)和基质金属蛋白酶(如基质金属蛋白酶9),过度的中性粒细胞炎症会导致肺泡上皮细胞外基质破坏和通透性增加,损伤肺泡-毛细血管屏障[5-6],引起非心源性肺水肿的发展㊂T a k e u c h i和A k i r a[7]的研究表明模式识别受体在A L I过程中可启动炎症信号级联效应,释放T N F-α㊁I L-8等促炎细胞因子,同时刺激细胞凋亡或自噬㊂在一项小鼠研究中,T o l l样受体(T o l l-l i k er e c e p t o r s,T L R s)信号通路已被证明参与A R D S的发展过程,组织损伤后产生的透明质酸降解产物与T L R4和T L R2相互作用,能够诱导A L I的炎症反应,该研究还报道了肺上皮细胞中高分子量透明质酸的过表达对肺损伤和细胞凋亡具有保护作用[8]㊂此外,补体的血管内活化可导致中性粒细胞活化㊁隔离并黏附于肺毛细血管内皮,导致血管内皮细胞损伤坏死和A L I㊂肺泡内补体的激活可导致补体和中性粒细胞依赖的A L I,引发细胞因子或趋化因子风暴,加重A L I[9]㊂值得注意的是,A R D S的后续过程是可变的㊂部分患者肺泡水肿液再吸收,肺泡上皮损伤区域修复,临床呼吸衰竭恢复㊂其他患者肺泡水肿持续,随后逐渐出现肺泡内纤维化和瘢痕[10]㊂2H I F-121概述H I F-1最初是由S e m e n z a和W a n g[11]在1992年研究缺氧诱导的促红细胞生成素基因表达时从细胞核中提取出的一种蛋白质,广泛存在于机体细胞中㊂目前H I F-1作为调节细胞对氧张力变化反应的主要转录因子被广泛共识[12]㊂H I F-1调节参与能量代谢㊁增殖和细胞外基质重组的基因,从而影响血管张力的调节㊁缺血性心血管功能障碍㊁低氧性肺动脉高压㊁肿瘤的发生和发展㊁糖和能量的代谢㊁铁的代谢㊁休克及炎症等生理和病理生理过程㊂22H I F-1的结构与活性调节H I F-1是一种异源二聚体,由功能亚基H I F-1α和被称为芳香烃受体核转运蛋白的结构亚基H I F-1β组成[13]㊂H I F-1α活性亚基的C末端含有2个反式激活结构域㊁1个富含脯氨酸-丝氨酸-苏氨酸的氧依赖性降解区以及1个抑制域㊂H I F-1有2种转录共激活因子:C R E B结合蛋白和p300,这2种转录共激活因子与反式激活结构域的相互作用是转录激活的必要条件[14]㊂H I F-1β亚基在细胞内比较稳定,H I F-1α亚基的稳定性随细胞内氧含量的变化而波动,其机制与P H D s-H I F s-p V H L 通路密切相关㊂脯氨酸羟化酶(p r o l y l h y d r o x y l a s ed o m a i n p r o t e i n s,P H D s)是一类F e2+依赖性㊁以氧分子为底物的蛋白质,目前只有P H D1㊁P H D2㊁P H D3参与H I F-1α的羟基化作用㊂在常氧条件下,P H D s用氧分子羟化H I F-1α亚基中的2个脯氨酸残基,羟基化的脯氨酸残基被希佩尔㊃林道病肿瘤抑制蛋白/E3泛素-连接酶复合物识别,导致H I F-1α亚基进行蛋白酶体途径水解[15]㊂在缺氧条件下,没有足够的氧气供P H D s羟化H I F-1α亚基,H I F-1α亚基不能被希佩尔㊃林道病肿瘤抑制蛋白识别和进一步降解,从而保持其含量的稳定性㊂H I F-1α进入细胞核后与H I F-1β结合形成H I F-1异源二聚体,结合目标基因启动子中的缺氧反应原件,从而驱动H I F-1依赖的转录程序[16]㊂23 H I F-1在肺中的生物学效应细胞对氧波动的反应在很大程度上由H I F所介导㊂氧气被吸入后,第一个接触到的器官是肺,但目前对肺H I F-1氧敏感通路的认识比较有限㊂在肺血管方面,B r u s s e l m a n s等[17]的研究表明H I F-1α缺失的杂合子小鼠暴露于慢性缺氧环境中,其肺动脉高压进程受阻,部分原因是肺血管重构受限㊂相反,携带R200W突变V H L的小鼠,因不能有效地降解H I F-1,导致其更容易发生肺动脉高压[18]㊂其次,H I F-1在肺动脉平滑肌细胞的活性与缺氧诱导的肺血管重构密切相关㊂体外培养的肺动脉平滑肌细胞在常氧状态下可以表达H I F-1α信号,而在缺氧状态下H I F-1α信号的表达进一步增强㊂B a l l 等[19]的研究显示他莫昔芬诱导的平滑肌特异性H I F-1缺失可减弱慢性缺氧条件下肺血管重构和肺动脉高压㊂另一项研究显示,当肺动脉平滑肌细胞特异性H I F-1α失活的S M22-C r e小鼠暴露于缺氧状态下,细动脉肌化程度有降低的趋势,且H I F-1α可通过抑制肌球蛋白轻链磷酸化来减少血管张力[20]㊂关于H I F-1α在气道上皮的作用机制方面, S h e r m a n等[21]的研究证实了在缺氧的Ⅱ型肺泡上皮细胞中,H I F相关通路和炎性小体激活过程中相关蛋白的表达显著增加㊂其次,有研究证实肺神经上皮小体对持续或慢性缺氧的反应与P H D-H I F依赖机制有关㊂在人类和动物模型中,缺氧导致神经上皮小体的增生,P H D1和P H D3被证实参与了这一反应[22]㊂此外,许多关于H I F-1在肺生物学作用的研究都侧重于慢性缺氧方面,因此有必要进一步研究急性缺氧状态下的H I F-1依赖性通路,以探索肺组织中新的氧敏感相关分子和细胞适应性机制㊂3H I F-1与A L I31 H I F-1与A L I的发病机制311 H I F-1与A L I缺氧缺氧是A L I的表现之一,可以导致肺功能和肺损伤修复的失常㊂A L I的早期事件包括毛细血管内皮损伤㊁肺泡上皮细胞的凋亡和肺水肿,而晚期以Ⅱ型肺泡上皮细胞的反应性增生为主,进而导致肺纤维化㊂有研究指出,H I F-1在肺缺血再灌注损伤中可导致肺血管功能障碍[23],而在脑缺血再灌注损伤诱导的肺损伤研究过程中则发现,机体可能通过H I F-1α/血管内皮生长因子信号通路上调抗氧化应激活性,促进血管生成和修复内皮屏障,实现自我保护[24]㊂虽然这些研究都没有测试H I F-1的缺失与检测到的血管通透性变化是否直接相关,但从表面上看,这些结果意味着H I F-1可能同时发挥屏障保护和屏障破坏的作用㊂关于肺泡上皮细胞损伤和随后的肺纤维化,肺挫伤后低氧Ⅱ型肺泡上皮细胞的分子特征表明H I F-1α在其凋亡过程中起着重要作用[21]㊂通过炎症水平的N O上调H I F-1可能是上皮细胞创伤修复受到抑制的原因[25]㊂此外,有研究证实,上皮-间充质转化可以加剧A L I患者肺纤维化[26],这一过程中肺泡上皮细胞中的活性氧可以起到稳定H I F-1α的作用[27]㊂虽然这些研究为H I F 参与A L I的发展提供了间接证据,但H I F-1在肺毛细血管㊃6881㊃国际呼吸杂志2019年12月第39卷第24期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2019,V o l.39,N o.24Copyright©博看网. All Rights Reserved.通透性等方面的作用仍不乏争议,因此目前还需要进一步在多种肺损伤模型中研究H I F-1α,以确定其在A L I中的确切作用㊂312 H I F-1与A L I的炎症反应 A L I过程中存在正反馈的促炎效应,大量的炎症因子会提高H I F-1的表达,而增加的H I F-1又会刺激炎症因子大量释放,放大炎症反应,加重肺损伤㊂L i u等[28]利用海水吸入性肺损伤大鼠模型研究证实,高渗通过激活A TM和P I3K促进H I F-1α的m R N A表达和激活p38抑制H I F-1α的蛋白降解2种方式增加H I F-1α的表达,H I F-1α的表达增加促进大鼠肺泡巨噬细胞(N R8383)中炎症因子的产生,促进大鼠肺组织炎症㊂一项体外研究报道,由脓毒症淋巴液培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549)和人肺微血管内皮细胞,其细胞活力显著下降,炎症细胞因子(T N F-α㊁I L-6㊁I L-1)水平升高,利用免疫荧光定位及R T-P C R检测H I F-1的表达被激活[29]㊂这些结果初步表明,脓毒症致急性肺炎症损伤过程是通过H I F-1α依赖途径发生的㊂此外,在A L I中H I F-1也可以作用到具体的炎症因子,发挥促炎作用㊂S u r e s h 等[30]的实验表明,与野生型小鼠相比,Ⅱ型肺泡上皮细胞特异性H I F-1α条件敲除小鼠肺挫伤后各时间点肺损伤程度均显著降低,促炎细胞因子如I L-1㊁I L-6㊁巨噬细胞炎性蛋白2的释放明显降低,这一过程是通过核转录因子κB介导的,且肺上皮细胞中的H I F-1被证明可以调节I L-1的启动子活性,由此可以推断Ⅱ型肺泡上皮细胞中H I F-1的活化是肺挫伤后急性炎症的主要驱动因素㊂另一项研究显示H I F-1α作用于T N F-α的下游,抑制血管扩张刺激磷蛋白的表达,调节急性肺部炎症过程,这些分子在肺泡-毛细血管屏障的损伤中发挥重要作用[31]㊂32 H I F-1与A L I的治疗321 H I F-1抑制与A L I A L I的缺氧及炎症反应都与H I F-1密切相关㊂实验证据表明,H I F-1参与了A L I的急性期与慢性期的全过程,目前很多研究都致力于通过药物抑制H I F-1途径来治疗A L I㊂阿托伐他汀可以通过下调H I F-1α-连环蛋白通路,降低百草枯中毒诱导的上皮-间充质转化,减轻大鼠百草枯中毒引起的肺损伤和肺纤维化,且这种效应与剂量有关[32]㊂盐酸戊乙奎醚可以抑制H I F-1α㊁I L-1β和I L-6表达水平,减弱大鼠的重症急性胰腺炎相关A L I的严重程度[33]㊂缺血前给予右美托咪定可通过调控P I3K/A k t/H I F-1α信号通路,在大鼠肺缺血再灌注损伤中起到保护作用[34-35]㊂57-二羟基-8-甲氧基黄酮对内毒素诱导的A L I的保护机制与上调抗氧化酶㊁抑制核转录因子κB磷酸化和H I F-1的上调有关[36]㊂丙泊酚通过降低H I F-1α㊁B c l-2/E1B-19k D a相互作用蛋白3和细胞因子的产生,减少脂多糖诱导的大鼠肺上皮细胞凋亡,预防脓毒症所致A L I[37]㊂此外,一些传统中草药也被证明可以通过抑制H I F-1途径治疗A L I㊂大花红景天萃取物通过下调H I F-1α的靶基因血浆内皮素1和血管内皮生长因子的水平,保持肺泡-毛细血管屏障的完整性,减轻高原肺水肿[38]㊂丹参㊁白藜芦醇等也被证明可以通过抑制H I F-1途径来治疗A L I[39-41],这为传统中医药治疗A L I提供了科学依据,同时在A L I的药物治疗方面提供了新的研究思路㊂322 H I F-1在A L I中的保护作用虽然目前大多数研究都证实可以通过抑制H I F-1途径减轻A L I,但在一些研究中,H I F-1却被发现可以在多种病因导致的A L I中起到保护作用㊂骨髓间充质干细胞可以在损伤肺组织内分化为肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞,增加肺泡表面活性物质的分泌,减少炎症反应,抑制炎症介质的释放㊂百草枯中毒后肺组织中H I F-1α的表达上调,通过血管内皮生长因子的介导对骨髓间充质干细胞发挥显著的增殖动员作用[42]㊂在脂多糖联合急性缺氧诱导A L I大鼠模型中,缺氧可通过激活肺泡巨噬细胞T L R4信号通路加重A L I炎症,靶向上调H I F-1α可以抑制T L R4基因启动子活性,从而抑制T L R4表达和巨噬细胞炎症,提示H I F-1α与T L R4的交互作用通路在A L I中的潜在治疗和预防价值[43]㊂E c k l e 等[44]报道了H I F-1α通过优化肺泡上皮碳水化合物代谢来减轻A L I㊂M a g n a n i等[45]报道了H I F-1介导的蛋白激酶C z e t a降解可以稳定质膜钠钾A T P酶,以防止缺氧引起的肺损伤㊂这些研究揭示了H I F-1在A L I期肺保护中的惊人作用,为研究H I F-1与A L I的治疗提供了另一个重要的方向㊂4结语A L I与A R D S的病理生理学表现为过度炎症反应,通过破坏肺泡-毛细血管屏障导致富含蛋白的肺水肿液积聚, H I F-1是这些过程中的重要参与者,且参与过程是复杂的,尤其是关于H I F-1在肺血管渗漏方面的作用还存在争议㊂此外,进一步阐明H I F-1在肺多种氧敏感通路中的作用,探索肺泡上皮细胞的凋亡机制都可能成为下一步研究的方向㊂在A L I的治疗方面,虽然目前大多数研究都证实可以通过抑制H I F-1途径减轻A L I,但在肺挫伤㊁移植和其他肺损伤的病例中却发现,H I F-1的升高对恢复和生存是有利的[14],这些都为H I F-1在A L I乃至危重症医学治疗中的应用提供了新思路㊂总之,更全面深入地了解H I F-1在A L I/A R D S中的作用,有助于更好地理解这种常见肺部疾病的发病机制,并为新的治疗方法提供新的靶点和预后生物标志物㊂利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突参考文献1 P a r e k hD D a n c e rR C T h i c k e t tD R A c u t el u n g i n j u r y JC l i n M e d L o n d2011116615-618D O I107861c l i n m ed i c i n e11-6-6152 B u t tY K u r d o w s k aA A l l e nT C A c u t e l u n g i n j u r y a c l i n i c a la n dm o l e c u l a rr e v i e w J A r c h P a t h o lL ab M e d20161404345-350D O I105858a r p a2015-0519-R A3S p a d a r oS P a r k M T u r r i n iC e ta l B i o m a r k e r sf o ra c u t er e s p i r a t o r y d i s t r e s ss y n d r o m ea n d p r o s p e c t s f o r p e r s o n a l i s e dm e d i c i n e J J I n f l a mm L o n d2019161D O I101186s12950-018-0202-y4 W i l l i a m s A E C h a m b e r s R C T h e m e r c u r i a l n a t u r e o f㊃7881㊃国际呼吸杂志2019年12月第39卷第24期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2019,V o l.39,N o.24Copyright©博看网. All Rights Reserved.n e u t r o p h i l s s t i l l a n e n i g m a i nA R D S J A mJ P h y s i o l L u n gC e l lM o lP h y s i o l20143063L217-L230D O I101152a j p l u n g0031120135 O'K a n eC M M c K e o w n S W P e r k i n s G D e ta l S a l b u t a m o lu p-r e g u l a t e sm a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e-9i nt h ea l v e o l a r s p a c ei n t h e a c u t e r e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m e J C r i t C a r eM e d20093772242-2249D O I101097C C M 0b013e3181a5506c6 N a t h a n iN P e r k i n s G D T u n n i c l i f f e W e t a l K e r b s v o nL u n g r e n6a n t i g e ni sa m a r k e ro f a l v e o l a r i n f l a mm a t i o nb u t n o to fi n f e c t i o ni n p a t i e n t s w i t h a c u t er e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m e J C r i tC a r e2008121R12D O I101186c c67857 T a k e u c h i O A k i r a S P a t t e r n r e c o g n i t i o n r e c e p t o r s a n di n f l a mm a t i o n J C e l l20101406805-820D O I101016j c e l 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All Rights Reserved.j b i o p h a20170410330S u r e s h MV R a m a k r i s h n a nS K T h o m a s B e t a l A c t i v a t i o n o fh y p o x i a-i n d u c i b l e f a c t o r-1αi n t y p e2a l v e o l a r e p i t h e l i a l c e l l i sam a j o r d r i v e r o f a c u t e i n f l a mm a t i o n f o l l o w i n g l u n g c o n t u s i o nJ C r i tC a r eM e d2*******e642-e653D O I101097C C M 000000000000048831 T a n g M T i a nY L i D e t a l T N F-αm e d i a t e d i n c r e a s e o fH I F-1αi n h i b i t sV A S Pe x p r e s s i o n w h i c h r e d u c e s a l v e o l a r-c a p i l l a r yb a r r i e r f u nc t i o nd u r i n g a c u t el u n g i n j u r y A L I J P L o SO n e201497e102967D O I101371j o u r n a l p o n e010296732 D u J Z h uY M e n g X e t a l A t o r v a s t a t i na t t e n u a t e s p a r a q u a tp o i s o n i n g-i n d u c e d e p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n v i ad o w n re g u l a t i n g h y p o x i a-i n d u c i b l ef a c t o r-1a l p h a J L i f eS c i2018213126-133D O I101016j l f s20181002633 Z h u R Z h a o Y L i X e t a l E f f e c t s o f p e n e h y c l i d i n eh y d r o c h l o r i d eo n s e v e r ea c u t e p a n c r e a t i t i s-a s s o c i a t e d a c u t el u n g i n j u r y i n r a t s J B i o m e dP h a r m a c o t h e r2018971689-1693D O I101016j b i o p h a20171202534 Z h a n g W Z h a n g J Q M e n g F M e t a l D e x m e d e t o m i d i n ep r o t e c t s a g a i n s t l u n g i s c h e m i a-r e p e r f u s i o n i n j u r y b y t h e P I3K A k t H I F-1αs i g n a l i n gp a t h w a y J JA n e s t h2016305826-833D O I101007s00540-016-2214-135 L i a n g S W a n g Y L i u Y D e x m e d e t o m i d i n ea l l e v i a t e sl u n gi s c h e m i a-r e p e r f u s i o ni n j u r y i nr a t sb y a c t i v a t i n g P I3K A k tp a t h w a y J E u rR e v M e dP h a r m a c o lS c i2019231370-377D O I1026355e u r r e v_201901_1678536S u n H L P e n g M L L e eS S e ta l E n d o t o x i n-i n d u c e da c u t e l u n g i n j u r y i n m i c e i s p r o t e c t e d b y57-d i h y d r o x y-8-m e t h o x y f l a v o n e v i a i n h i b i t i o no f o x i d a t i v e s t r e s s a n d H I F-1αJ E n v i r o n T o x i c o l201631121700-1709D O I101002t o x2217237 Y e h C H C h o W S o E C e t a l P r o p o f o l i n h i b i t sl i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e d l u n g e p i t h e l i a l c e l l i n j u r y b y r e d u c i n g h y p o x i a-i n d u c i b l e f a c t o r-1a l p h ae x p r e s s i o n J B rJA n a e s t h20111064590-599D O I101093b j a a e r00538 L e eS Y L i MH S h iL S e ta l R h o d i o l ac r e n u l a t ae x t r a c ta l l e v i a t e sh y p o x i c p u l m o n a r y e d e m ai nr a t s J E v i d B a s e dC o m p l e m e n t A l t e r n a t M e d20132013718739D O I101155201371873939 M aL Z h a o Y L iB e ta l354'-T r i-O-a c e t y l r e s v e r a t r o la t t e n u a t e s s e a w a t e r a s p i r a t i o n-i n d u c e d l u n g i n j u r yb yi n h i b i t i n g a c t i v a t i o no fn u c l e a rf a c t o r-k a p p aBa n dh y p o x i a-i n d u c i b l e f a c t o r-1αJ R e s p i rP h y s i o lN e u r o b i o l20131853608-614D O I101016j r e s p20121101640 M aL Z h a oY W a n g R e t a l354'-T r i-O-a c e t y l r e s v e r a t r o la t t e n u a t e s l i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e d a c u t e r e s p i r a t o r yd i s t re s s s y n d r o m e v i a MA P K S I R T1p a t h w a y J M e d i a t o r sI n f l a mm 20152015143074D O I101155201514307441 X u M C a o F L Z h a n g Y F e t a l T a n s h i n o n e I I At h e r a p e u t i c a l l y r e d u c e s L P S-i n d u c e d a c u t el u n g i n j u r y b yi n h i b i t i n g i n f l a mm a t i o n a n d a p o p t o s i si n m i c e J A c t aP h a r m a c o lS i n2015362179-187D O I101038a p s201411242刘泽岩程景林戚金威等低氧诱导因子1α干预诱导骨髓间充质干细胞增殖治疗百草枯中毒后肺损伤J国际免疫学杂志201841113-18D O I103760c m a j i s s n1673-439420180100343 W u G X u G C h e n D W e t a l H y p o x i a e x a c e r b a t e si n f l a mm a t o r y a c u t el u n g i n j u r y v i at h et o l l-l i k er e c e p t o r4s i g n a l i n gp a t h w a y J F r o n tI mm u n o l201891667D O I103389f i mm u20180166744 E c k l eT B r o d s k y K B o n n e y M e ta l H I F1Ar e d u c e sa c u t el u n g i n j u r y b y o p t i m i z i n g c a r b o h y d r a t e m e t a b o l i s m i nt h ea l v e o l a re p i t h e l i u m J P L o S B i o l2013119e1001665D O I101371j o u r n a l p b i o100166545 M a g n a n iN D D a d aL A Q u e i s s e r MA e t a l H I Fa n d H O I L-1L-m e d i a t e dP K Cζd e g r a d a t i o ns t a b i l i z e s p l a s m a m e m b r a n e N a K-A T P a s e t o p r o t e c t a g a i n s t h y p o x i a-i n d u c e d l u n g i n j u r yJ P r o c N a t l A c a d S c i U S A 201711447E10178-E10186D O I101073p n a s1713563114收稿日期2019-03-26㊃9881㊃国际呼吸杂志2019年12月第39卷第24期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2019,V o l.39,N o.24Copyright©博看网. 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为什么缺氧时癌细胞还能生长
为什么缺氧时癌细胞还能生长大量研究已证实肿瘤缺氧，即肿瘤部分区域含有极低浓度的氧气，的确与更加侵袭性的肿瘤行为和更差的预后相关联。
这似乎表明肿瘤不会屈服于缺氧，相反肿瘤过量增加血液供应，因而经常会导致缺氧，从而给肿瘤发送生长和转移的信号以便寻找新的氧气源。
比如，缺氧性膀胱癌可能转移到肺部，而这经常是致命性的。
当缺乏氧气时，健康细胞将会减缓生长。
但令人惊奇的是，缺氧是恶性肿瘤的特征。
在最新版“自然通讯”杂志上发表的两篇文章显示，歌德大学和吉森大学的研究人员已经寻找出癌细胞是如何成功避免生长抑制的遗传程序的。
我们很早就知道，PHD蛋白质（脯氨酰羟化酶域蛋白）在缺氧调节中发挥着关键作用。
它可以控制低氧诱导转录因子（HIFs）的稳定性，而HIFs可以使细胞适应缺氧环境。
歌德大学的AmparoAcker-Palmer教授和吉森大学的TillAcker教授所领导的两个团队目前发现了一种特殊的PHD蛋白质，PHD3，它可以控制表皮生长因子受体（EGFR）。
在健康的细胞中，PHD3可以对外界压力产生反应，比如当氧气不足时，它可以刺激表皮生长因子受体摄入到细胞内部，从而使生长信号下调。
“我们发现，PHD3作为支架蛋白，可以结合到中央适配器蛋白如EPS15和Epsin1上，从而促进表皮生长因子受体摄入到细胞内。
”Acker-Palmer说。
而这一过程在肿瘤细胞中由于PHD3的损失而被打乱。
从而引起表皮生长因子受体的内化被抑制，造成EGFR信号的过度活化，进而使细胞生长不受控制。
该研究小组已经证明PHD3的损失是人类恶性脑肿瘤（胶质瘤）增长的关键因素。
肿瘤细胞因此可以在缺氧环境下抵制抑制生长的信号。
“这一发现在临床上具有重要意义，因为它展示了除了基因扩增外另一种抑制EGF受体过度活化的机制。
我们可以通过EGFR抑制剂来抑制其反应。
”吉森大学神经病理学家TillAcker解释说。
“我们的工作表明了PHD3在目前两个红火的研究领域上的一个意想不到的新功能：氧气测量和EGFR信号，”Acker-Palmer解释说。
低氧对A549细胞糖皮质激素受体表达的影响
低氧对A549细胞糖皮质激素受体表达的影响吕园园;黄燕;刘荣玉【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2008(043)004【摘要】目的研究不同低氧时间培养下,人肺腺癌上皮A549细胞糖皮质激素受体α(GRα)和糖皮质激素受体β(GRβ)的表达.方法将A549细胞分成6组,低氧组(3组)和对照组(3组),分别放置于低氧小室(37℃,95% N2,5% CO2)和普通培养箱中(37℃,95%空气,5% CO2)培养.24 h、48 h、72 h后收集细胞,运用倒置显微镜下拍摄照片、RT-PCR和免疫细胞化学方法观察缺氧对A549细胞数目、形态以及细胞内GRα、GRβ mRNA和蛋白表达的影响.结果①低氧组细胞形态发生显著改变,随着低氧时间的延长,细胞生长速度逐渐减慢,细胞肿胀变形逐渐加剧.②RT-PCR的结果显示:24 h GRα mRNA表达水平低氧组(0.914±0.079)与对照组(0.883±0.208)比较略有降低,但差异无显著性(P>0.05);48、72 h GRα mRNA表达水平低氧组(0.794±0.029、0.828±0.171)与对照组(1.054±0.120、1.187±0.173)比较显著降低,差异有显著性(P<0.05);24、48、72 h GRβ mRNA表达水平低氧组(0.439±0.175、0.437±0.117、0.433±0.101)与对照组(0.429±0.140、0.443±0.114、0.553±0.110)比较差异无显著性(P>0.05).③免疫细胞化学的结果显示:24 h GRα蛋白表达水平低氧组与对照组比较无显著改变;48、72 h GRα蛋白表达水平低氧组与对照组比较显著降低;24、48、72 h GRβ的蛋白表达水平低氧组与对照组比较无显著改变.结论低氧可导致A549细胞GRα的mRNA和蛋白表达水平显著降低;低氧环境可能会影响糖皮质激素作用的发挥.【总页数】5页(P367-371)【作者】吕园园;黄燕;刘荣玉【作者单位】安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022【正文语种】中文【中图分类】R392.11;R364.4【相关文献】1.低氧对RAW264.7细胞中糖皮质激素受体表达的调节 [J], 马媛媛;蔡浩煜;卢建2.脓毒症时骨骼肌细胞糖皮质激素受体表达与低氧诱导因子关系的研究 [J], 李仁杰;李占飞;白祥军;杨帆;陈驾君3.2-甲基萘[2,3-b]呋喃-4,9-酮(FNQ3)对肺腺癌细胞株(A549)细胞Fas受体表达和细胞凋亡的影响 [J], 杨萌;林江涛4.表皮生长因子受体表达水平对西妥昔单抗及其介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀伤肺腺癌A549细胞的影响 [J], 李瑾昱;焦顺昌;张国庆;孙胜杰5.低氧或/和糖皮质激素诱导大鼠肺和A549细胞中脂筏蛋白stomatin的表达及其对细胞骨架的影响 [J], 卢建;陈继承;蔡浩昱;马媛媛;王燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
缺氧条件下人脐带源性间充质干细胞增强缺氧诱导因子-1α表达促进肺腺癌细胞增殖
缺氧条件下人脐带源性间充质干细胞增强缺氧诱导因子-1α表达促进肺腺癌细胞增殖Li Chang;Zhao Chengling;Chen Shijun;Chen Yuqin【摘要】目的探讨缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在人脐带源性间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hucMSCs)促进肺腺癌A549细胞增殖过程中的可能机制.方法分离培养和鉴定hucMSCs,分别与肺腺癌A549细胞、干扰了HIF-1α 基因的A549细胞在常氧或缺氧条件下进行共培养,荧光定量PCR和Western blot 法分别检测HIF-1α 和生存素(survivin)表达水平,MTT法检测细胞增殖力,划痕实验分析细胞迁移力.结果 MTT和划痕实验检测显示,常氧条件下,hucMSCs共培养的A549细胞增殖能力、迁移能力较无hucMSCs共培养的细胞明显减弱;缺氧条件下,A549细胞增殖力和迁移力较常氧培养的A549细胞明显增强,hucMSCs共培养使二者进一步增强,沉默HIF-1α 则使二者减弱,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α 对细胞增殖力和迁移力的影响.荧光定量PCR和Western blot检测显示,缺氧培养时,A549细胞内HIF-1α 和survivin表达明显上调,hucMSCs共培养明显增强缺氧对HIF-1α 和survivin表达的上调作用;沉默HIF-1α 抑制缺氧对A549细胞HIF-1α 和survivin表达的上调,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α 对HIF-1α 和survivin表达上调的抑制.结论缺氧条件下,hucMSCs共培养导致肺腺癌A549细胞HIF-1α 和survivin表达上调,从而使A549细胞的增殖和迁移能力增强.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2019(028)002【总页数】7页(P108-114)【关键词】肺腺癌;缺氧;人脐带源性间充质干细胞;缺氧诱导因子-1α;生存素【作者】Li Chang;Zhao Chengling;Chen Shijun;Chen Yuqin【作者单位】;;;【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是目前危及人类生命健康的恶性肿瘤，也是国内外死亡率较高的恶性肿瘤之一[1]。
右美托咪定对A549细胞缺氧复氧损伤时细胞凋亡及CHOP的影响
右美托咪定对Ａ５４９细胞缺氧／复氧损伤时细胞凋亡及ＣＨＯＰ的影响罗梓垠１，２，高慧１，项冰倩１，邱晓晓１，戴雍月１△，王万铁１△（１．温州医科大学缺血 再灌注损伤研究所，浙江温州３２５０３５；２．湖北省中西医结合医院病理科，武汉４３００１５）【摘要】目的：探讨右美托咪定（Ｄｅｘ）对缺氧／复氧所致的Ａ５４９细胞（起源于肺泡ＩＩ型上皮细胞系）损伤及对ＣＣＡＡＴ／增强子结合蛋白同源蛋白（ＣＨＯＰ）表达的影响。
方法：将处于对数生长期的Ａ５４９细胞随机分为４组（ｎ＝１０）：常氧培养组（Ｎ组），Ｄｅｘ常氧组（Ｄ组），缺氧／复氧组（Ｈ组），缺氧／复氧＋Ｄｅｘ组（ＨＤ组）。
Ｄ组和ＨＤ组在造模开始时加入１ｎｍｏｌ／ＬＤｅｘ，Ｎ组和Ｄ组细胞常氧培养３０ｈ，Ｈ组和ＨＤ组细胞缺氧６ｈ，复氧２４ｈ。
之后用倒置显微镜观察细胞形态学变化。
采用ＣＣＫ ８法检测Ａ５４９细胞活力。
原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法检测Ａ５４９细胞的凋亡指数（ＡＩ）。
蛋白免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和逆转录 聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）分别检测Ａ５４９细胞ＣＨＯＰ、Ｇｒｐ７８、ｃａｓｐａｓｅ ３蛋白和ＣＨＯＰ、Ｇｒｐ７８ｍＲＮＡ表达水平。
结果：与Ｎ组比较，Ｈ组细胞数量减少，细胞形态发生改变。
Ａ５４９细胞的吸光度值明显下降（Ｐ＜０．０１），ＡＩ值升高（Ｐ＜０．０１），凋亡细胞数明显增加。
ＣＨＯＰ、Ｇｒｐ７８、ｃａｓｐａｓｅ ３蛋白和ＣＨＯＰ、Ｇｒｐ７８ｍＲＮＡ表达显著上升（Ｐ＜０．０１）。
与Ｈ组相比，ＨＤ组细胞损伤减轻，吸光度值上调（Ｐ＜０．０１），凋亡细胞数明显减少（Ｐ＜０．０１）。
ＣＨＯＰ、ｃａｓｐａｓｅ ３蛋白，ＣＨＯＰｍＲＮＡ表达降低（Ｐ＜０．０１）。
结论：Ｄｅｘ可有效减少缺氧／复氧引起的Ａ５４９细胞凋亡，其机制可能与Ｄｅｘ对抗ＣＨＯＰ信号通路所致的凋亡有关。
【关键词】ＣＨＯＰ；右美托咪定；缺氧／复氧损伤；Ａ５４９细胞；凋亡【中图分类号】Ｒ３６３【文献标识码】Ａ【文章编号】１０００ ６８３４（２０１８）０２ １３７ ０６【ＤＯＩ】１０．１２０４７．ｊ．ｃｊａｐ．５５５４．２０１８．０３４ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＣＨＯＰｉｎｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙＡ５４９ｃｅｌｌＬＵＯＺｉ ｙｉｎ１，２，ＧＡＯＨｕｉ１，ＸＩＡＮＧＢｉｎｇ ｑｉａｎ１，ＱＩＵＸｉａｏ ｘｉａｏ１，ＤＡＩＹｏｎｇ ｙｕｅ１△，ＷＡＮＧＷａｎ ｔｉｅ１△（１．Ｉｓｃｈｅｍｉａ／ＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＩｎｊｕｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０３５；２．ＰａｔｈｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗｕｈａｎ４３００１５，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ（Ｄｅｘ）ｏｎｉｎｊｕｒｙｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ（Ｈ／Ｒ）ａｎｄｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＣ／ＥＢＰｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＨＯＰ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＬｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅＡ５４９ｃｅｌｌｓ（ｉｔｏｒｉｇｉｎａｔｅｄｆｒｏｍａｌｖｅｏｌａｒｔｙｐｅＩＩｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ）ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝１０）：ｎｏｒｍｏｘｉｃｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｎ），Ｄｅｘｇｒｏｕｐ（Ｄ），ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅ ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（Ｈ），ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ＋Ｄｅｘｇｒｏｕｐ（ＨＤ）．Ａｔｔｈｅｂｅｇｉｎｎｉｎｇｏｆｍｏｄｅｌｉｎｇ，１ｎｍｏｌ／ＬＤｅｘｗａｓｐｕｔｅｄｉｎｔｏＤａｎｄＨＤｇｒｏｕｐｓ．ＮａｎｄＤｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｔｈｅｎｏｒｍｏｘｉｃｉｎｃｕｂａｔｏｒｆｏｒ３０ｈ．ＨａｎｄＨＤｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎｔｈｅａｎｏｘｉｃｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｆｏｒ６ｈ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｎｏｒｍｏｘｉｃｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ２４ｈ．ＴｈｅｎＡ５４９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｉｎｖｅｒｔｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓ．ＣｅｌｌａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇＫｉｔ ８（ＣＣＫ ８）ａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘ（ＡＩ）ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｎｓｉｔｕｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ（ＴＵＮＥＬ）ｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＨＯＰ、ｇｌｕｃｏｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ７８ｋＤａ（Ｇｒｐ７８）、ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐｉｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ ３（ｃａｓｐａｓｅ ３）ｐｒｏ ｔｅｉｎａｎｄＣＨＯＰ、Ｇｒｐ７８ｍＲＮＡｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎｄＲＴ ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＮｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｄｈｅｒｅｎｔｃｅｌｌｓｉｎＨｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ａｎｄｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｎｇｅｄ．ＴｈｅａｂｓｏｒｂａｎｃｅｖａｌｕｅｉｎＨｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅＡＩｖａｌｕｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＨＯＰ，Ｇｒｐ７８，ｃａｓｐａｓｅ ３ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＣＨＯＰ，Ｇｒｐ７８ｍＲＮＡｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＨｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｃｅｌｌｄａｍａｇｅｉｎＨＤｇｒｏｕｐｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅａｂｓｏｒｂａｎｃｅｖａｌｕｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１），ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｅｌｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０１），ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＨＯＰ，ｃａｓｐａｓｅ ３ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＣＨＯＰｍＲＮＡｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｅｘｈａｓｎｏｔａｂｌｅｅｆｆｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔＨ／Ｒｉｎｊｕｒｙ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｔｈｅＣＨＯＰ’ｓｓｉｇｎａｌｐａｔｈ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】ＣＨＯＰ；ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ；ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙ；Ａ５４９ｃｅｌｌ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ【基金项目】浙江省公益技术应用研究项目（２０１３Ｃ３３１６８）；浙江省新苗人才计划项目（２０１４Ｒ４１３０４３）；温州市公益性科技计划项目（Ｙ２０１４０６５２）【收稿日期】２０１７ ０１ １６【修回日期】２０１７ １０ ２７△【通讯作者】Ｔｅｌ：０５７７ ８６６８９８１７；Ｅ ｍａｉｌ：ｗｗｔ＠ｗｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ肺缺血／再灌注损伤（ｌｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ＬＩＲＩ）是个复杂的病理生理过程，主要表现为再灌注后肺血管阻力增加、肺水肿、肺泡损伤及微血管通透性增加，严重影响患者预后［１ ２］。
缺氧对肺癌细胞CCR7表达及其侵袭力的影响
缺氧对肺癌细胞CCR7表达及其侵袭力的影响李洋;张清富;王洋;邱雪杉;王恩华【摘要】背景与目的缺氧可通过多种机制促进肿瘤的侵袭和转移,但缺氧与CCR7的关系目前未见报道.本研究探讨缺氧对人肺癌细胞趋化因子受体CCR7(Chemokine receptor 7)表达及其侵袭能力的影响.方法将A549细胞分为常氧组和缺氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,21%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养4 h、12 h、24 h.应用RT-RCR和Western blotting方法对CCR7 mRNA和蛋白表达水平进行检测;同时采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化.结果 RT-PCR和Western blotting结果显示:人肺腺癌A549细胞有CCR7表达,随着培养时间的延长,常氧及缺氧状态下A549细胞CCR7相对表达量依次升高,此外,不同时间点的常氧组与缺氧组CCR7mRNA和蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果表明,缺氧组侵袭细胞数与常氧组相比明显增加.差异有统计学意义(t=0.006,P<0.01),加入CCR7抗体后细胞侵袭力降低(t=0.09,P<0.01).结论缺氧可显著上调A549细胞CCR7表达及其侵袭能力,其侵袭力的增加可能与CCR7表达水平增高有密切关系.【期刊名称】《中国肺癌杂志》【年(卷),期】2008(011)005【总页数】3页(P704-706)【关键词】CCR7;缺氧;转移;侵袭;肺肿瘤【作者】李洋;张清富;王洋;邱雪杉;王恩华【作者单位】110001,沈阳,中国医科大学基础医学院病理教研室,中国医科大学附属第一医院病理科;110001,沈阳,中国医科大学基础医学院病理教研室,中国医科大学附属第一医院病理科;110001,沈阳,中国医科大学基础医学院病理教研室,中国医科大学附属第一医院病理科;110001,沈阳,中国医科大学基础医学院病理教研室,中国医科大学附属第一医院病理科;110001,沈阳,中国医科大学基础医学院病理教研室,中国医科大学附属第一医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R734.2CCR7（CC chemokine receptor 7）是 CC家族趋化因子受体的成员之一，近来研究发现，CCR7在多种肿瘤细胞中过表达[1-3]，CCR7通过与其配体CCL21相互作用在肿瘤的特异性器官转移中发挥重要作用，然而CCR7表达调控因素却不是很清楚。
不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞侵袭和转移能力的影响
不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞侵袭和转移能力的影响余桂芳;严跃红;王瑞鑫;曾文铤;朱科伦【摘要】AIM: To study the effects and the underlying mechanisms of hypoxia on adhesion, invasion and migration of HepG2 human liver cancer cells cultured in vitro. METHODS: HepG2 cells were cultured under different concentrations of oxygen for 24 h. MTT assay was used to measure the cell adhesion rate. The Transwell chambers were used to assess in vitro invasion and migration. The expression of CD44v6, matrix metalloproteinase 2( MMP - 2 ), MMP - 9, hypoxia - inducible factor - 1a( HIF - 1 a) and vascular endothelial growth factor( VEGF ) was detectedby the methods of immunocytochemistry, gelatin zymography and RT - PCR. RESULTS: Hypoxia, especially under 3% oxygen, significantly enhanced the adhesion rates of HepG2 cells, and increased the number of the cells migrated through Matrigel - coated chambers ( P <0. 05 ). HepG2 cells treated with 3% and 5% oxygen increased the expression of CD44v6, MMP - 9 , MMP -2, HIF - 1 a and VEGF. CONCLUSION: Pretreatment with moderate hypoxia enhances in vitro adhesion, invasion and migration of HepG2 cells. Multiple molecules including CD44v6, MMP - 2, MMP - 9, HIF - 1 a and VEGF may be involved in the processes.%目的:探讨不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞黏附、侵袭和转移能力的影响及其可能机制.方法:不同浓度的低氧处理对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用MTT法、Transwell膜侵袭系统、免疫细胞化学方法、明胶酶谱分析和反转录PCR检测变异型白细胞分化抗原CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异.结果:HepG2细胞经低氧处理后,细胞的基质黏附率、穿透基底膜与游走迁移的细胞数均增高,以3%氧浓度最为显著(P<0.05);3%和5%氧处理还可显著促进CD44v6的表达,增加MMP-2和MMP-9的表达,并可上调HIF-1α和VEGF.结论:适度缺氧能增强人肝癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,其机制可能与CD44v6、基质金属蛋白酶、HIF-1α和VEGF的表达改变有关.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2012(028)002【总页数】6页(P281-286)【关键词】肝肿瘤;HepG2细胞;缺氧;黏附;肿瘤侵袭【作者】余桂芳;严跃红;王瑞鑫;曾文铤;朱科伦【作者单位】广州医学院第五附属医院内一科,广东,广州,510700;广州医学院第五附属医院内一科,广东,广州,510700;广州医学院第五附属医院内一科,广东,广州,510700;广州医学院第一附属医院肝病研究室,广东,广州,510120;广州医学院第一附属医院肝病研究室,广东,广州,510120【正文语种】中文【中图分类】R73-37原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，大部分肝癌患者就诊时已失去手术机会，经肝动脉化疗栓塞成了主要的治疗措施。
缺氧对胰腺癌细胞转移和侵袭相关基因表达的影响
缺氧对胰腺癌细胞转移和侵袭相关基因表达的影响缪国东，王海涛*（华北理工大学基础医学院，河北唐山 063210）摘要： 目的 探讨缺氧对胰腺癌P ANC-1细胞侵袭性和转移性相关基因表达的影响。
方法 培养胰腺癌P ANC-1细胞，将其分为对照组和缺氧组，对照组常规培养于5%CO 2、95%O 2条件，缺氧组培养于5%CO 2、2%O 2和93%N 2条件。
采用Western blot 和qRT-PCR 方法检测E-cadherin 、Vimentin 、MMP-2、MMP-9的表达水平。
结果 对照组和缺氧组E-cadherin 蛋白表达量分别为0.859±0.087和0.321±0.033；Vimentin 蛋白表达量分别为0.453±0.051和1.128±0.169，E-cadherin mRNA 分别为1.125±0.092和0.352±0.036，Vimentin mRNA 分别为1.253±0.130和2.875±0.366，差异均具有统计学意义（P ＜0.05）。
两组MMP-2蛋白表达量分别为0.254±0.031和0.839±0.073，MMP-9蛋白表达量分别为0.268±0.039和0.733±0.075，MMP-2 mRNA 分别为1.230±0.125和4.369±0.368，MMP-9 mRNA 分别为1.452±0.023和4.136±0.569，差异均具有统计学意义（P ＜0.05）。
结论 缺氧可通过调控转移相关基因的表达促进胰腺癌细胞的侵袭和迁移。
关键词： 胰腺癌； 缺氧； E-cadherin ； Vimentin ； MMP-2； MMP-9中图分类号： R736.3 文献标识码： A 文章编号： 1004-6879（2020）03-0181-04Effect of Hypoxia on the Expression of Metastasis-related Genes in Pancreatic Cancer P ANC-1 CellsMIAO Guo-dong, W ANG Hai-tao *(School of Basic Medicine, North China University of Science and Technology, Hebei Tangshan 063210, China)Abstract: Objective T o investigate the effects of hypoxia on the expression of E-cadherin, Vimentin, MMP-2 and MMP-9 in pancreatic cancer P ANC-1 cells. Methods Pancreatic cancer P ANC-1 cells were divided into control group and hypoxic group. The hypoxic conditions were 5% CO 2, 2% O 2 and 93% N 2 while the control condition is 5% CO 2 and 95% O 2. The expression levels of E-cadherin, Vimentin, MMP-2 and MMP-9 were detected by qRT -PCR and W estern blot. Results The E-cadherin protein expression of control group and hypoxia group were 0.859±0.087 and 0.321±0.033 respectively; the Vimentin protein were 0.453±0.051 and 1.128±0.169 respectively; E-cadherin mRNA were 1.125±0.092 and 0.352±0.036 respectively; Vimentin mRNA were1.253±0.130 and 2.875±0.366 respectively. All the differences were statistically significant (P ＜0.05); The MMP-2 protein and mRNA level in the control and hypoxia groups were 0.254±0.031 and 0.839±0.073, 1.230±0.125 and 4.369±0.368 respectively and the difference was statistically signifi cant (P ＜0.05); The MMP-9 protein and mRNA in the control and hypoxia groups were 0.268±0.039and 0.733±0.075, 1.452±0.023and 4.136±0.569. The difference was statistically significant (P ＜0.05). Conclusion Hypoxia can promote the invasion and migration of pancreatic cancer cells by regulating the metastasis-related genes.Key words: pancreatic cancer; hypoxia; E-cadherin; Vimentin; MMP-2; MMP-9* 通讯作者胰腺癌是消化道恶性程度较高的肿瘤，五年生存率仅为7.2%[1]，其早期易发生转移，对传统治疗方法的低敏感性及手术治疗的局限性，造成胰腺癌患者的死亡率较高。
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关键词 缺氧 明胶酶 肺 腺癌细 胞 金 属蛋 白酶 组织抑制 因子一 ． Ｂ １
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表 达变化规律 。方法 ： 人肺腺癌 细胞 Ａ ４ ５ ９常氧／ 缺氧培 养 ， 酶谱法 测定培养基 中 ＭＭＰ９酶 活性 ， ． 免疫 细胞化学 、 免
疫 印迹技术 分别检测 ＭＭＰ９及 ＴＭＰ １原位 蛋 白及 分泌蛋 白表 达量。 结果 ： 一 Ｉ ． ＭＭＰ９ Ｉ ． ． 、 ＭＰ １的 阳性 染色颗粒主要 Ｙ
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实用 医学 杂志 ２ ０ ０ ８年 第 ２ ４卷第 １ 期
７
・
基 础 研 究 ・
缺 氧对 肺 腺癌 细胞 Ａ ４ ５ ９ＭＭＰ ９、Ｉ ． 达 的影 响 ． 、 ＭＰ １表 Ｔ
徐
摘
丹文富 强 汪 涛应斌源自武王 可胡 晓 波
要 目的 ： 究缺氧 条件 下基 质金属 蛋 白酶 一 （ 研 ９ ＭＭＰ９ 及 基 质金 属蛋 白酶组 织抑制 因子一 （ Ｉ 一） ．） １ ＴＭＰ １ 的
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蛋 白 分 泌蛋白表达均有升 高趋 势（ ． ） 结论 ： 及 Ｐ《Ｏ ５ ｏ ０ 缺氧 ２ Ｍ Ｐ９ ４ｈ内 Ｍ ． 表达 不增加 ， 可能与癌基 因、 激酶活化 引