绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用_张雨丽
绿色荧光蛋白GFP的显微观察及其在转基因研究中的应用
报告基因的特点
已被克隆和全序列已测定； 表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细 胞中无相似的内源性表达产物；
其表达产物容易观察或能进行定量测定
常用的报告基因
基因名称 GUS 基因编码蛋白
β-D-glucuronidase（β-D葡萄糖苷酶）
检测方法
催化底物形成β-D-葡萄糖苷 酸，它在植物体中几乎无背 景，组织化学检测很稳定
实验仪器：荧光显微镜
实验步骤：
1. 2. 3.
取部分转基因幼苗放入IAA溶液中处理5-10分钟 。 无IAA处理的作为对照。 PI 染色 将植物根部浸泡在1XPI工作液中10秒左右。 用水冲洗30秒。
4. 制片 用擦镜纸擦载玻片 滴一滴水 用镊子取一棵幼苗，将根部在水中展开（可以将叶 片切除） 用镊子夹取盖玻片，从一侧轻轻盖上 5.显微镜观察 放下载物台，将载玻片放上载物台，旋转20X物镜 至光路，滤光片在明场位置（1） 将载物台上升至离物镜很近处，不要碰到物镜 寻找视野中模糊的根，下调载物台，聚焦 移动载物台，寻找根尖 转换至40X物镜，滤光片调至蓝光（3）或绿光（4 ），打开shutter，观察、拍照和保存实验结果。
3:绿色荧光蛋白--GFP
GFP最初从水母，jellyfish Aequorea victoria 中分离出 在分子生物学和细胞学领域，GFP是广 泛使用的报告基因
GFP
GFP蛋白含238 氨基酸残基， 分子量29.6KDa Fluorescent protein (荧光蛋白 ): 在蓝-紫外光的激发下产生强的 绿色荧光
普通生物学实验
GFP报告基因的显微观察及其在
绿色荧光蛋白作为报告基因在分子生物学中的应用
绿色荧光蛋白作为报告基因在分子生物学中的应用绿色荧光蛋白作为报告基因在分子生物学中的应用摘要：随着科学技术的不断更新和发展，绿色荧光蛋白在动物学、植物学、微生物学等领域的应用研究越来越广泛。
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)可作为报告基因，且具有分子量较小、荧光性质稳定、对生物体无毒性作用、检测时不需要底物等的特点。
本文就对荧光蛋白在分子生物学中的应用做一综述。
关键词：绿色荧光蛋白；报告基因；应用The Application of GFP As Reporter Gene In the Molecular Biology Abstract: With the upgrade and development of science and technology, the application of green fluorescent protein used in Zoology, Botany and microbiology is more extensive. As a reporter gene, GFP have some characteristics, such as low molecular weight, good fluorescent stability, non- toxicity to organisms. This paper reviews the application of GFP in the molecular biology. Key words: green fluorescent protein, reporter gene, application of GFP绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)是一类来自于海洋生物如水母、水螅和珊瑚等腔肠动物内的一种生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，能发射出绿色荧光。
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用近几十年来，绿色荧光蛋白（GFP）被广泛用于生物学的研究，特别是在细胞生物学领域，它在基因表达分析、膜蛋白研究，以及定位和追踪细胞外状态变化等方面提供了有力的工具。
绿色荧光蛋白最初是从拟南芥中分离出来的，它是一种可以在生物细胞中发出可见的绿光的蛋白质。
GFP可以与其他蛋白质结合在一起，可以用来检测特定蛋白质的表达和定位。
利用绿色荧光蛋白的特性，我们可以实现转基因技术的可视化，同时实现基因的定位，这使得细胞的动态变化以及基因调控可以被直观定量地观察出来。
在GFP的研究过程中，科学家发现GFP本身也有可以改进的特性，不仅可以让它发出绿色的光，也可以被用来实现转基因技术的可视化。
它的发光强度与温度变化和环境改变有关，当温度提升或温度较高时，GFP的发光强度会增强。
GFP还可以用来检测特定的一种或多种蛋白质，能够实现精确的蛋白质定位。
同时，研究人员还发现GFP的表达能力可以被亚细胞定位，发现细胞内部基因表达的动态变化。
GFP也被用于膜蛋白研究，可以很好地实现膜蛋白在细胞表面的定位，从而有助于我们更好地分析膜结构和功能，为细胞生物学研究带来新的视角。
此外，GFP还可以被用于探索和分析细胞外状态变化，它能够通过显示细胞的迁移、聚类、分离等状态变化来揭示细胞的行为和表型特征，成功地帮助了许多细胞生物学研究。
绿色荧光蛋白是一种重要的细胞生物学研究工具，它的出现使得细胞的研究变得更加容易，提高了生物学研究的效率。
它不仅可以被用于基因表达分析和定位，也可以用于膜蛋白研究，使我们更好地了解细胞的行为和表型特征，实现细胞外状态变化的追踪，进而发现基因调控的模式，目前，GFP的技术已经成为细胞生物学研究技术的重要组成部分，将为未来更多的细胞生物学研究带来更多的帮助。
综上所述，GFP在细胞生物学研究中具有重要的意义，它提供了一种强大的分析工具，可以实现基因表达分析、膜蛋白研究和细胞外状态变化的定量观察。
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用
绿色荧光蛋白及其在细胞生物学研究中的应用绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）是一种从水母Aequorea victoria中分离出来的荧光蛋白质，可以发射绿色荧光。
由于GFP具有结构简单，对细胞无毒性和较强稳定性等特点，因此被广泛应用于细胞生物学和生命科学研究中。
以下是关于GFP及其在细胞生物学研究中的应用的介绍。
一、荧光蛋白及GFP的来源荧光蛋白质是一种含有环状芳香族氨基酸残基的蛋白质，能够吸收外部能量并将其转化为荧光发射。
GFP最初是在1955年，美国南加州大学的Osamu Shimomura研究水母发光机制时发现的。
GFP由238个氨基酸组成，分子量约27kDa。
GFP基因被克隆后即可在其他生物中表达，使它成为了生物体内最常用的荧光标记物之一。
二、GFP的结构和原理GFP的荧光由3个氨基酸残基Tyr（酪氨酸）、Ser（丝氨酸）和Gly（甘氨酸）构成的环状结构决定。
当氧气与Tyr形成共轭键时，便使荧光激发能量被吸收，并在GFP分子腔内缓慢扩散，直至荧光发射。
三、GFP在细胞生物学中的应用1、荧光定位GFP被广泛用于生命科学中细胞定位的研究。
由于GFP具有细胞膜透性和结构稳定性等特性，可以将其组装到生物体内，使其具有明亮的绿色荧光。
通过转化所需的基因序列来表达GFP，可以使研究人员直接在活细胞中观察到融合GFP蛋白质的定位和空间分布状况。
2、蛋白质交互作用GFP也被用作蛋白质交互作用的研究工具。
在这种情况下，GFP被连接到研究的蛋白质上，而研究人员观察到GFP与其他蛋白质结合的情况，从而确定蛋白质之间是否相互作用。
3、表达和异常行为GFP还可用于研究蛋白质的表达和异常行为。
通过表达GFP基因，可以探究研究对象的分泌情况、活动状态、质量控制和分解情况等。
4、细胞轨迹追踪GFP被广泛应用于细胞追踪研究中。
通过转染GFP基因，可以实时跟踪特定细胞类型的运动和位置，比如细胞分裂、游走和迁移等。
绿色荧光蛋白及在生物技术研究中的应用
２ ＧＦ Ｐ的应用特点
２ 世 纪 ， Ｆ 为 一种 新 的报 告 基 因Ｔ 具 得到 了迅 速发 展 ， １ Ｇ Ｐ作
与其他报告基 因相比， Ｆ 具有许多显著的特点： ） ＧＰ （ 无需损伤细 １
ｌＧ Ｐ的结构 和荧 光性 质 Ｆ
胞 即可研究细胞 内事件 ， 且无毒作用 （肿 属不依耪胜， ； ２ 在原核 、
利用 Ｄ Ａ重组技 ， 目的基因与 Ｇ Ｐ基因构成融合基因， Ｎ 将 Ｆ 转染合适的细胞进行表达 ， 然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋 白质进行细胞内活体观察。由于 Ｇ Ｐ分子量小 ， Ｆ 在活细胞 内可溶 且对细胞毒性较小， 应用得最多和最成功的是 Ｇ Ｐ与宿主蛋白构 Ｆ
蛋 白原 有的 正常 功能 和定 位 的融合 蛋 白效 果最 佳 。利用 Ｇ Ｐ的 Ｆ
蛋白标示不 同的蛋白质和细胞。由此 ， 下村修 、 马丁 一查尔菲和 加底物或辅助因子等协助指示 ； ） （ 易于构建载体 ， ８ 可进行活细胞 钱永健获得了 ２ ０ 年度诺贝尔化学奖［ ０８ ２ １ 。
Ｇ Ｐ属 于 五 大类 报 告 基 因 之 ～ ，是 虚用 最 多 的 发 光 蛋 白 。 Ｆ Ｇ Ｐ用 ３ ５ ｎ 的 紫外 光 和 ４ ５ ｎ 的 蓝 光激 发 ， 在 ５ ８ ｍ处 Ｆ ９ ｌ ｎ ７ ｌ ｎ 可 ０ｎ 自行 发 出绿 色荧 光 。 之 所 以能够 发 光 ， 因其 氨 基 酸序 列 中第 它 是
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取南方医科大学2011预防医学（卫生检验检疫）摘要目的：研究绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达，以及对其进行粗提取。
方法：从E.coli DH5ɑ中用碱提取质粒的方法提取质粒pEGFP-N3和质粒pET-28a。
然后用质粒DNA 的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒。
再用限制性内切酶BamHI和NotI对成功提取的质粒进行酶切，并对酶切后的质粒进行琼脂糖凝胶电泳，用以确定已经提取了GFP基因。
将含有GFP基因的质粒转化到感受态细胞E.coli BL-21中，用LB培养基对转化后的E.coli进行扩大培养。
用IPTG诱导GFP基因表达可以看到浅绿色菌落。
最后对绿色荧光蛋白进行粗提取。
结论：本实验有助于学生掌握最基本的分子生物学实验技术，为进一步的实验奠定基础。
关键词：绿色荧光蛋白基因克隆重组表达转化粗提取目录1 前言 (3)2 实验目的 (4)3 实验设备 (4)4 材料及试剂 (5)5 实验操作步骤 (5)5.1操作流程 (5)5.2质粒DNA的分离与纯化 (6)5.2.1 质粒的培养 (6)5.2.2 质粒的DNA的碱提取法 (6)5.2.3 质粒DNA的鉴定与纯化 (7)5.3酶切及连接 (8)5.3.1 双酶切 (8)5.3.2 回收酶切产物（采用DNA回收试剂盒进行回收） (8)5.3.3 连接 (9)5.4大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 (9)5.4.1 LB（Luria-Bertain）液体和固体培养基的配制（参考附录）.. 95.4.2．感受态细胞的制备 (CaCl2法) (9)5.4.3 转化涂板 (10)5.5GFP蛋白的诱导表达 (10)5.6绿色荧光蛋白的粗提取 (11)参考文献 (11)附录 (12)1LB培养基的配制： (12)2.溶液Ⅰ (12)3.溶液Ⅱ (12)4.溶液Ⅲ（100ML） (12)5.DN ASE-FREE RN ASE A (13)6.TE缓冲液（P H8.0） (13)7.20×TBE (13)8.G ENE F INDER-溴酚蓝上样缓冲液 (13)9．PEGFP-N3质粒全图谱 (13)10．P ET-28A质粒全图谱 (14)1 前言绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
绿色荧光蛋白标记基因在肿瘤研究中的应用
绿色荧光蛋白标记基因在肿瘤研究中的应用于丽莉;陈诗书【期刊名称】《中国肿瘤生物治疗杂志》【年(卷),期】1999(6)2【摘要】绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团,有效地发射内部荧光且易于观察.这种特性使其具有吸引力而且有很大的应用价值.GFP的晶体结构分析提供了一种很好的机会去了解和使用蛋白质结构和光谱功能之间的关系.由于GFP的克隆基因能在异源组织中表达产生荧光,90年代初提出了GFP作为报告分子可用于生物学研究领域.GFP作为报告基因的特点和优势:①野生型GFP在395nm波长处可吸收一个激发光,在510nm发射一个绿色荧光,只要有足够的表达,在长紫外波长或蓝光照射下,无需引入别的物质,在活体内通过显微镜就能清晰地观察到.而其它一些报告基因如氯霉素乙酰转移酶Ⅱ(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、荧光素酶(Luc)【总页数】2页(P81-82)【关键词】绿色荧光蛋白;基因;标记;肿瘤转移;肿瘤发生【作者】于丽莉;陈诗书【作者单位】上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心【正文语种】中文【中图分类】Q513;R73－37【相关文献】1.绿色荧光蛋白基因在脂肪细胞分化研究中的应用 [J], 祝骥;马文丽;毛向明;李凌;吴清华;郑文岭2.绿色荧光蛋白基因作为报告基因在水稻基因转化中的应用研究 [J], 程在全;WURAY;等3.绿色荧光蛋白基因在植病研究中的应用 [J], 王震;郭爱玲;冯莉4.绿色荧光蛋白标记的D氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究(英文) [J], 何志颖;江千里;陈元晓;温丽敏;姚玉成;王新民;李文林;王健民;胡以平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光蛋白基因在大肠杆菌中的表达与检测
1μL 1μL 0.2μL
12.3μL 20μL 5min 45s 45s 120s 10min 无限制
}
29次循环
PCR扩增完后可进行琼脂糖凝胶电泳检测看是否有目的基 因。
6.目的基因的诱导表达——IPTG诱导表达
1.取含有重组质粒pET-28a的BL21(DE)菌株的单菌落，接种于 20mL含100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基，37℃培养过夜。同 时取只含质粒载体pET-28a的BL21(DE)菌株的单菌落做实验对照。 2.分别取过夜培养物100μL接种于10mL含100μg/mL卡那霉素的 LB液体培养基（实验组转接两瓶），37℃恒温培养1~2h。当细菌 浓度A600达到0.4~0.6时，分别取出样品1mL作为IPTG诱导前的样 品，其余样品中添加100mmol/L的IPTG至终浓度为2mmol/L，其 中一瓶实验组不加IPTG的对照。继续培养，分别在1、2、3h和过 夜培养后各取1mL样品，作为诱导后的样品。
GFP各种突变体
GFP工作原理
• GFP形状呈圆柱形，如一个桶，负责发光的基团位于桶中 央，因此，GFP可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”。 装在“桶”中的发光基团对蓝色光照特别敏感。当它受到蓝 光照射时，会吸收蓝光的部分能量，然后发射出绿色的荧 光。利用这一性质，生物学家们可以用绿色荧光蛋白来标 记几乎任何生物分子或细胞，然后在蓝光照射下进行显微 镜观察。原本黑暗或透明的视场马上变得星光点点——那 是被标记了的活动目标。
所用器材：
恒温水浴锅、EP管、微量移液器、PCR仪、His-Tag亲 和纯化柱等。
所用培养基：
LB培养基、麦康凯培养基
时间安排：
第一天：PCR获得目的基因，验证； 第二天：目的基因、pET-28a质粒双酶切，连接； E.coliBL21(DE)感受态细胞的制备； 第三天：重组质粒的转化； 第四、五天：重组子的筛选与验证：酶切验证和PCR验 证； 第六天：目的基因诱导表达； 第七天：目的蛋白的检测； 第八天：目的蛋白的纯化。
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点 , 所以逐步成为转基因研究的良好材料和工具 。
1 GFP在转基因研究中的应用特点
目前转基 因研 究与应 用 的发 展十 分迅 速 , 将 GFP基因应用到转基因研究中 , 具有其它基因所无 法比拟的以下诸多优点 。
黄国存等 [ 12] 分别用花粉管通道法和农杆菌介
导法将携带有 GFP基因的外源基因导入棉花 , 发现 用手持紫外灯结合显微镜检技术能够快速地对转化
子进行活体筛选鉴定 , 明显比 GUS检测方法优越 。 程在全等 [ 13] 用基因枪法将带有绿色荧光蛋白基因
的质粒 pJPM5和 pSBG700分别转入水稻 TNG67愈 伤组织 , 在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白基 因的表达 , 绿色荧光蛋白基因表达出的绿色荧光蛋 白信号比植株的自发荧光强得多 , 且不会受自发荧 光的太大影响 。因此 , 绿色荧光蛋白基因可以作为 水稻 (甚至小麦 、玉米 )转基因研究中的报 告基因 。 李华等[ 14] 将 GFP表达质粒导入 BHK、DK、RK等真 核细胞 , 建立真核细胞转基因指示系统 , 结果表明 , GFP的表达对胚胎无损伤 , 又经济简便 , 可避 免 β 半乳糖苷酶等报告基因的不足 , 是提高基因转移与 筛选效率的理想途径 。 Vain等 [ 15] 第一次对抗生素 筛选与 GFP筛选进行了直接比较 , 研究表明 GFP能 大大提高转化的工作效率 , 减少了转基因植株分子 检测步骤和工作量 。 2.2 用于寻找转基因所需的启动子 、增强子等调控
情况下 , 也能在活细胞内发荧光 , 可用于标记细胞和 蛋白质 。 Tsien[ 4] 则率先提出了 GFP发光的化学机
制 , 并发展了不同颜色的 GFP突变体 。瑞典皇家科 学院把 2008年 的诺贝尔化学奖授予了以 上 3人 。 科学研究人员利用 GFP能够在分子水平方便地追 踪许多生命活动的发生与发展过程 。 例如 , 能看到 大脑神经细胞的发育过程和癌细胞的传播方式等 。 GFP直接将生物学研究由以前的 “死物学 ”变成了 “活物学 ”, 大大推动了生物学的发展 。目前 GFP基
Abstract: Thegreenfluorescentprotein(GFP)isakindofluminescenceprotein, whichcancatalyzeitselfintochromophoresand emitgreenfluorescentwhenexposedtobluelightorultravoiletlight.GFPwascalledbigdipperofmodernbiology, whichwasused widelyinmanyfieldsofbiology.GFPpossessesthetripleadvantageofstablefluorescence, includingeasyinspection, simpleexpression andregulation, safetoorganisms, thus, ithasbeenusedwidelyinmanyaspectsoftransgenicresearch.Thisarticlebrieflyintroducedthe characteristicsandprogressofGFPapplicationintransgenicresearch.
关键词 : 绿色荧光蛋白 (GFP) 转基 因研究 应用
ApplicationsofGreenFluorescentProteininTransgenicResearch
ZhangYuli ZhangGuizheng SuHongmei MengYiying BiLihui
(GuangxiResearchAcademyofSericulturalScience, Nanning530007)
转基因的方法很多 , 适用于不同生物的转基因 方法也不同 。在做转基因之前 , 研究者必须先摸索 出最有效的方法 , 以提高转基因的成功率 。 目的基
因构建到表达载体上后的表达情况通常是不清楚的 (有许多表达条件需要摸索 ), 一旦检测不到基因的 表达 , 就很难判断是转基因方法不恰当 , 还是基因表 达本身出现问题 。所以如果直接用目的基因进行有 效转基因方法的探索 , 将给转基因工作带来很多困 难 。 GFP的表达无种属特异性 、表达调控及翻译后 修饰过程简单易控制 、通常表达量也很高 , 将目的基 因替换为 GFP基因进行不同生物转基因最优方法 的探索 , 将会缩小研究难度 。
收稿日期 :2010-05-04 作者简介 :张雨丽 , 女 , 硕士研究生 , 助理农艺师 , 研究方向 :家蚕分子育种 ;E-mail:ZYL8324@
2010年第 9期
张雨丽等 :绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
17
突变体 , 且增强了荧光强度 , 适合在不同物种中专性 表达 。 Tsien[ 6, 7] 发展了颜色迥异的 GFP突变体 , 包 括蓝色荧光蛋白 BFP(bluefluorescentprotein)、青色 荧光蛋白 CFP(cyanfluorescentprotein)和黄色荧光 蛋白 YFP(yellowfluorescentprotein)。 随着研究深 入 , 抗酸 、抗漂白 、亮度高 (消光系数与量子产率乘 积 )、成熟快及单体结构的 GFP变体将越来越多 , 激 发和发射光谱范围也将不断拓宽 , 对该蛋白的检测 将越来越容易 。 1.2 表达调控简单 , 构建载体方便
1.1 GFP荧光稳定 , 易于检测 GFP的荧光较稳定 , 抗光漂白能力比荧光素强 ,
能耐受较长时间的光照 。 GFP在 pH7 -12 范围内 都能正常发光 ;对高温 (70℃)、碱性 、除垢剂 、盐 、有 机溶剂和大多数普通酶等都有较强抗性 [ 5] 。
GFP中的发色团是由其一级结构中的一段三肽 自然形成 , 该发色团的形成只需要氧气 , 不依赖于酶 或者其它辅助因子 , 仅以紫外光或蓝光激发 , 即可发 出绿色荧光 。 用肉眼 、荧光显微镜均可以观察到 , 且 灵敏度高 , 还 可进行表达量的 半定量或定量检 测 。 另外 , GFP中氨基酸的替换可产生不同光谱特性n
2010年第 9期
启动子连接 , GFP在玉米原生质体中的表达效率比 对照质粒 (只有 35S启动子 )提高近 15倍 , 因为 5′ UTR片段中含转录增强子 [ 16] 。将蓝氏贾第虫谷氨 酸脱氢酶 (GDH)启动子和 GFP构成融合基因 , 转化 贾第虫 , 可以观到绿色荧光 , 从启动子的 5′-末端进 行逐步缺失 , 制备一系列突变体并构成融合基因 , 转 化蓝氏贾第虫 , 能确定出 GDH启动子核心序列[ 17] 。 2.3 用于探索不同物种的有效转基因方法
GFP中的发光团由一些常见的非特异氨基酸构 建而成 , 它的翻译后修饰过 程不需要原有水母 (A. victoria)细胞中任何其它成分或共因子 , 在细胞内呈 自主表达 。 利用 GFP发光时 , 只需要操纵细胞合成 GFP蛋白 , 无需复杂的翻译后加工过程 , GFP就会自 动折叠催化并开始发光 , 在微生物 、植物 、动物中都 获得了成功的表达 。 由于 GFP分子量较小 , 只含有 238个氨基酸 , 编码 GFP的基因序列也较 短 , 约为 2.6 kb[ 8] , 所以它可以很方便地同其它序列一起构 建多种载体 , 而不至于使质粒过大而影响转化效率 。 1.3 生物安全性好
需要复杂的样品固定和制备过程 、昂贵的底物 ;有些 需要漫长的抗性筛选 , 对胚胎有一定的毒害作用 ;大 部分还需要特殊的检测手段 , 给转基因研究工作增 加了难度 , 均 不够理 想 。 而 将 GFP应用 于标 记基 因 , 可以避免以上缺陷 , 能够有效 、快捷的对转基因 个体进行筛选 , 大大提高了转基因工作效率 。
元件
基因的表达调控研究与转基因研究相辅相成 , 用转基因方法可研究基因的表达调控 , 而基因的表 达调控研究可更好地指导并应用于转基因研究 。 启 动子 、增强子等是基因表达调控的重要元件 , 也是转 基因所需的组件 。 用不同的启动子与 GFP基因相 连 , 构成不同的表达质粒 , 用于转化合适的细胞 , 通 过观察细胞的荧光强度 , 就可以比较判断启动子的 强弱 , 找出适 合用于转基因的启动子 。 Clontech公 司构建了一种叫启动子报告载体 (Promoterreporter vector), 即没有启动子的 GFP质粒 , 专门用来测试 各种启动子对 GFP表达的效率 , 以及某些增强子对 GFP表达的调控效果 。 用玉米 C4PPDK基因 5′端 的非翻译片段 (5′UTR)与 花椰菜花叶病 毒的 35S
·综 述与 专论·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
20 10 年第 9 期
绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
张雨丽 张桂征 苏红梅 蒙艺英 闭立辉
(广西蚕业科学研究院 , 南宁 530007)
摘 要 : 绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein, GFP)是一 种能够 自身催 化形成 生色团 并在蓝 光或紫外 光激发 下发出 绿色荧光的蛋白 。 有现代生物学北斗星 之美誉的它 , 在生 物学的 很多领 域都有 广泛应用 。 GFP具有 荧光稳 定 、易于检测 、表 达调控简单 、生物安全性好等优点 , 在转 基因研究中的各个方面均应用颇多 。 就 GFP在转基因研究中的 应用特点及 应用进展 做一综述 。
Keywords: Greenfluorescentprotein(GFP) Transgenicresearch Applications
1962年 Shimomura等 [ 1, 2] 最早从水母中分离并 描述 了 绿 色 荧 光 蛋 白 (greenfluorescentprotein, GFP), 该 蛋 白 在 紫 外 光 或 蓝 光 激 发 下 发 荧 光 。 Chalfie[ 3] 首次发现 GFP在无任何底物和辅助因子