临检--脑脊液病原生物学检查、质量控制与临床应用
脑脊液病原生物学检查、质量控制与临床应用
病原生物学检查
（一）细菌学检查
1.显微镜检查
脑脊液涂片革兰染色或碱性亚甲蓝染色检查致病菌。
革兰染色用于检查肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌、大肠埃希菌等；碱性亚甲蓝染色用于检查脑膜炎球菌。
显微镜检查对化脓性脑膜炎诊断的阳性率为60%～90%。
如果怀疑为结核性脑膜炎，可采用抗酸染色，油镜下寻找抗酸杆菌。
新生隐球菌检查常采用印度墨汁染色法，若呈假阳性，可采用苯胺墨染色法。
2.细菌培养
主要适用于脑膜炎奈瑟菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌等。
同时，也要注意厌氧菌、真菌的培养。
3.ELISA法
检测结核杆菌抗体：结核杆菌感染时，可产生特异性的抗结核抗体，可采用最简便、灵敏度高的ELISA法检测此抗体。
如果脑脊液中抗结核抗体水平高于血清，这对结核性脑膜炎的诊断及鉴别诊断具有特殊价值。
（二）寄生虫检查
1.脑脊液涂片检查
2.脑囊虫检查
脑囊虫补体结合试验诊断脑囊虫的阳性率可达88%；致敏乳胶颗粒玻片凝集试验诊断脑囊虫的符合率为90%；ELISA法对诊断脑囊虫病具有高度的特异性。
神经梅毒的诊断首选灵敏度、特异性均很高的螺旋体荧光抗体吸收试验（FTA-ABS）；其次选用性病研究实验室玻片试验（VDRL），其灵敏度为50%～60%，特异性为90%。
现多使用快速血清反应素试验（RPR）为筛检，梅毒螺旋体微粒凝集试验（TPPA）为梅毒确诊试验。
3.梅毒螺旋体检查
质量控制与临床应用。
临床医学检验学主治医师：脑脊液检验必看考点三
临床医学检验学主治医师：脑脊液检验必看考点三1、单选收集脑脊液标本做细胞学检查，较好的处理方法是（）。
A.试管低速离心收集B.试管高速离心收集C.自然沉淀收集D.用细胞收集器收集E.直接涂片正确答案：D解析（江南博哥）：采用细胞收集器收集脑脊被细胞，收集的细胞数目多，分布均匀，细胞结构清晰，对细胞形态影响小，是目前用于脑脊液细胞学检查制片较好的方法。
2、单选脑脊液氯化物低于（）mmol/L时，有可能导致中枢抑制而呼吸停止。
A.65B.75C.85D.55E.95正确答案：C参考解析：脑脊液中氯化物含量低于85mmol／L时，有可能导致呼吸中枢抑制而出现呼吸停止。
3、单选正常脑脊液蛋白质定性试验为（）。
A.阳性B.弱阳性C.阴性或弱阳性D.中度阳性E.不定正确答案：C参考解析：正常脑脊液蛋白质定性试验为阴性或弱阳性。
4、单选下列关于化脓性脑膜炎的叙述，正确的是（）。
A.脑脊液细胞数显著升高，以嗜酸性粒细胞为主B.化脓性脑膜炎是典型的急性炎症渗出期改变C.化脓性脑膜炎是典型的亚急性炎症增殖期改变D.脑脊液中白细胞数多不超过200×106/LE.早期以中性粒细胞为主，数天后转变为单核细胞为主正确答案：B参考解析：化脓性脑膜炎是典型的急性炎症渗出期改变，脑脊液细胞数显著升高，白细胞数往往超过200×106/L，以中性粒细胞为主。
5、单选脑脊液检查发现白细胞数增高，涂片中见到白血病细胞，则最可能的情况是（）。
A.中枢神经系统白血病B.细菌性脑膜炎C.病毒性脑炎D.淋巴瘤E.多发性硬化症正确答案：A6、单选下列检测脑囊虫病特异性较高的试验是脑脊液（）。
A.镜检B.补体结合试验C.胶乳凝集试验D.间接血凝试验E.酶联免疫试验正确答案：E参考解析：脑囊虫补体结合试验诊断脑囊虫的阳性率可达88%；致敏乳胶颗粒玻片凝集试验诊断脑囊虫的符合率为90%；ELISA法对诊断脑囊虫病具有高度的特异性。
7、单选脑脊液第二管标本适合于（）。
临床检验师-脑脊液检验考点总结
脑脊液检验考点总结考纲●标本采集与处理●理学检查●显微镜检查●化学与免疫学检查●病原生物学检查●质量控制与临床应用一、标本采集与处理（一）脑脊液检验的适应证和禁忌证适应证禁忌证有脑膜刺激征者颅内高压者可疑颅内出血者、脑膜白血病和肿瘤颅内转移者颅后窝占位性病变者原因不明的剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪者处于休克、全身衰竭状态者脱髓鞘疾病者穿刺局部有化脓性感染者中枢神经系统疾病椎管内给药治疗、麻醉和椎管造影者（二）标本采集与处理留取脑脊液标本于3个无菌试管中，每个试管1～2ml。
第一管做病原生物学检验；第二管做化学和免疫学检验；第三管做理学和细胞学检验。
标本采集后应立即送检，并于1h内检验完毕。
标本放置过久，可造成细胞破坏、葡萄糖等物质分解、细菌溶解等，影响检验结果。
二、理学检查（一）颜色肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色、乳白色、红色、棕色或黑色、绿色等描述。
正常脑脊液无色透明，新生儿胆红素较多可呈黄色。
如表：脑脊液常见的颜色变化及临床意义颜色原因临床意义无色正常脑脊液、病毒性脑炎、轻型结核性脑膜炎、脊髓灰质炎、神经梅毒红色出血穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血黄色黄变症陈旧性出血、黄疸、淤滞和梗阻、黄色素、胡萝卜色素、黑色素、脂色素增高如表：脑脊液新鲜性出血与陈旧性出血的鉴别（二）透明度正常人CSF清晰透明。
病理状态，透明度改变：细胞数量和细菌。
病毒性脑膜炎：清晰透明或微浑。
结核性脑膜炎：毛玻璃样浑浊。
化脓性脑膜炎：脓性、块样浑浊。
当脑脊液白细胞超过300×106-/L时，可呈浑浊。
报告方式：清晰透明、微浑、浑浊三级报告。
（三）凝固性正常人CSF12～24小时以后不形成薄膜。
病理状态，蛋白质＞10g/L，薄膜或凝块。
化脓性脑膜炎静置1～2h即可出现凝块或沉淀物。
结核性脑膜炎静置12～24h内可见有薄膜或纤细的凝块形成。
蛛网膜下腔阻塞黄色胶样状Frion-Nonne（脑脊液同时存在胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离）。
脑脊液检验 ppt课件
其他
肺炎、尿毒症等出现中枢神经系统症状时，脑脊液蛋白 质含量也可增高
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 20
二、 葡萄糖
CSF中的葡萄糖约为血液的60％。
1.参考范围
成 人 腰 椎 2.5~4.4mmol/L ； 小 脑 髓 池 2.8~4.2mmol/L；脑室2.8~4.2mmol/L。
2.临床应用:
第十五章 脑脊液检验
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六、酶学检查
正常时,血清酶不能通过血脑屏障。 1. ADA ：TBM显著高于其他脑（膜）炎。
2. LD ↑：脑组织损伤、细菌感染。
3. CK ↑：脑实质破坏。
4. AST ↑：脑组织坏死、出血、脑萎缩等。 5.溶菌酶↑：细菌感染。
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 27
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 41
（2）建立室内质控
定期校正实验所用的仪器和设备。 选择建立适当的检测方法。 保证所用检验试剂的质量。 采用适当的质控物。
第十五章 脑脊液检验
ppt课件 42
二、临床应用
1、适应证 ①有脑膜刺激症状。 ②疑有颅内出血。 ③中枢神经系统肿瘤。 ④不明原因的剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪。 ⑤中枢神经系统疾病需管内给药治疗及手术前麻醉、造影等。
灵敏度高，标本少， 结果易观察，操作 标本可现弱阳性 简便 检测球蛋白，操作 灵敏度较弱 简便
分别检测球蛋白和 清蛋白
ppt课件
操作较繁琐
第十五章 脑脊液检验
16
２．定量法
方法 优点 缺点
比浊法
简 便 ， 快 速 ， 无 需 标 本 量 大 ， 对 两 种蛋 白 特殊仪器 沉淀能力不同
染料结合法 快 速 ， 灵 敏 度 高 ， 对实验条件的 pH 值要求 考马斯亮蓝 标本量少 较高
脑脊液检测
第一管：生化
三、氯化物 原理：离子选择电极法 参考范围 成人：120-130mmol/L；儿童：111-123mmol/L 临床意义 脑脊液低蛋白含量较少，为了维持脑脊液和血浆渗透压平
衡，氯化物含量为血浆的1.2-1.3倍 （1）减低：细菌性或真菌性脑膜炎早期、细菌性脑膜炎的后期、血氯减 低；病毒性脑膜炎、脊髓灰质炎、脑肿瘤时，氯化物稍减低或不减低 （2）增高：主要见于浆液性脑膜炎。
脑脊液的实验室检查
目录 /CONTENTS
01 脑脊液标本应如何采集与处理 02 如何对一份脑脊液标本进行检验 03 血性脑脊液检查的质量控制 04 常见中枢神经系统疾病脑脊液如何改变
01 脑脊液标本应如何
采集与处理
一、脑脊液采集 腰椎穿刺 小脑延髓池穿刺 侧脑室穿刺
成人脑脊液总量约120180ml，新生儿为10-60ml， 健康儿童脑脊液总量100150ml
= -112.785 ×106/L ？？？
二、脑脊液显微镜检查
问题： 用校正公式进行脑脊液白细胞计数的校正，结果为什么会 出现负值？
校正后脑脊液白细胞=校正前白细胞 -
脑脊液红细胞数 ×血液白细胞数
血液红细胞数
实际来源于血液的白细 胞和脑脊液本身白细胞
理论上来源于血液的白 细胞
三、脑脊液显微镜检查的质量控制
2.形态：如发现较多的红细 胞有皱缩现象，应予以描 述报告，以协助临床鉴别 陈旧或新鲜性出血。
三、脑脊液显微镜检查的质量控制
3.辨别：注意红细胞和淋巴细胞与新型 隐球菌相区别 （1）新型隐球菌具有“出芽”现象，不 溶于乙酸，滴加0.35mol/L的乙酸后， 显微镜下保持原型，淋巴细胞则细胞核 和细胞质更为明显 （2）加印度墨汁一滴，加盖玻片，高 倍镜下新型隐球菌有后荚膜，不着色
脑脊液GeneXpert检测方法和多种生物标志物在结核性脑膜炎诊疗中的应用研究演示课件
多种生物标志物的表达与结核性脑膜炎的相关性：研究结果显示，多种生物标志物（如细胞因子、趋化因子、急性期反应蛋白等）在结核性脑ห้องสมุดไป่ตู้炎患者脑脊液中的表达水平与健康对照组存在显著差异，这些生物标志物的变化与结核性脑膜炎的病理生理过程密切相关。
生物标志物在结核性脑膜炎诊疗中的应用价值：通过综合分析生物标志物的表达谱和临床数据，发现某些生物标志物可以作为结核性脑膜炎的早期诊断指标、疾病活动度监测指标以及治疗反应预测指标，为结核性脑膜炎的精准诊疗提供了新的思路和方法。
实验对象
收集患者的脑脊液样本，并进行相关生物标志物的检测。
样本收集
脑脊液GeneXpert检测方法
采用GeneXpert MTB/RIF技术对脑脊液样本进行结核分枝杆菌及其耐药性的快速检测。
生物标志物的检测
利用免疫学、生化学等方法检测脑脊液中多种生物标志物，如腺苷脱氨酶、乳酸、C反应蛋白等。
数据记录
早期诊断
通过对治疗过程中患者脑脊液样本的连续检测，可以实时监测治疗效果，及时调整治疗方案。
疗效监测
根据检测结果可以评估患者的预后情况，为临床医生制定个性化治疗方案提供依据。
预后评估
多种生物标志物在结核性脑膜炎诊疗中的应用
03
病原相关生物标志物
如结核分枝杆菌特异性抗原、抗体等，用于结核性脑膜炎的诊断和病情监测。
病情监测
动态观察生物标志物的变化，可以评估结核性脑膜炎患者的病情严重程度和治疗效果。
预后评估
某些生物标志物的水平与结核性脑膜炎患者的预后密切相关，可用于预测患者的预后情况。
敏感性比较
不同生物标志物在结核性脑膜炎患者中的敏感性存在差异，需根据具体情况选择合适的标志物进行检测。
脑脊液检验方法及临床意义
脑脊液检验方法及临床意义摘要】探讨脑脊液(CSF)常规检测方法及临床应用。
对标本采集、理学检验、化学检查及显微镜检查方法进行分析。
为临床提供更多的诊断指标，为中枢神经系统疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及预后观察提供了丰富的信息。
【关键词】脑脊液检验方法临床应用【中图分类号】R445 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）33-0068-02脑脊液(CSF)是一种细胞外液，主要由各脑室的脉络丛通过血液透析作用而产生，充满脑室系统及脑和脊髓的珠网膜下腔，最后同到血液循环。
它的产生和叫流保持着动态平衡，正常成人脑脊液量120～180ml[1]。
随着生物化学、免疫学检验技术尤其是分子生物学技术的发展，CSF检验开拓了许多新的研究领域，为临床提供更多的诊断指标，为中枢神经系统疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及预后观察提供了丰富的信息。
1.标本采集标本采集后应立即送检，化验一般不超过1h。
容器要清洁、无菌，容积不应太大。
穿刺采集时，尽量避免将血液带入标本。
为了不影响细胞汁数，遇高蛋白标本时，可加少量抗凝剂。
2.理学检验标本采集2.1颜色正常脑脊液为无色透明。
①无色，除正常外，梅毒性神经炎、慢性结核性脑膜炎、脊髓灰白质炎，脑炎等也无色。
②红色脑脊液中混入血红细胞所致，由于出血量和出血时间的不同，可呈不同颜色，淡红、红色、红褐色。
将脑脊液离心，上层溶液呈黄色，隐血试验阳性多为蛛网膜下腔陈旧性出血，上层液体澄清，无色，红细胞均沉于管底，多为穿刺损伤或病变所致的新鲜出血。
③黄色又称黄变症，主要见于珠网膜腔陈旧性出血、椎管梗阻、化脓性脑炎，重症结核性脑膜炎、流行性脑炎、脊髓肿瘤、重症黄疸，某些药物等。
④绿色见于绿脓杆菌、肺炎双球菌、甲型链球菌性脑膜炎。
⑤乳白色(米汤样)见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。
⑥褐或黑色见于侵犯脑膜黑色素肉瘤。
2.2透明度正常脑脊液为澄清透明，根据混浊程度可报告为清晰、微混和混浊，脑脊液透明度降低见于乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑脓肿等。
第十一章 脑脊液—临床检验专业知识课件
二、脑脊液的采集
脑脊液标本抽取后，可用3支无菌试管收集，每管 1～2ml.
第一管:作细菌学检查 第二管:生化和免疫学检查 第三管:作一般性状和显微镜检查
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三、脑脊液检验的临床应用
脑脊液的检验可了解中枢神经系统的改 变，如感染、肿瘤、外伤、水肿、阻塞等， 可协助诊断，对治疗及预后判断都有很大 价值。
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三、白细胞分类计数
2．玻片离心法 该法综合了沉淀室法与离心法的优点， 将沉淀室类似装置进行离心（RCF177g） 10分钟。由于离心力克服了滤纸的吸附力， 使细胞均匀地分布在玻片上，干燥后染色 镜检。
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四、脑脊髓液中细胞种类和形态
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1．潘（Pandy）氏试验
原理 脑脊液中蛋白质与石炭酸结合成不溶性蛋白盐而 出现白色沉淀。此试验较敏感，不仅局限于球蛋 白，当蛋白质浓度超过0.25g/L即可呈阳性反应， 因此正常人脑脊液也可呈弱阳性反应。
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1．潘（Pandy）氏试验
试剂 饱和石炭酸液
操作 取饱和石炭酸液约2ml于试管中，用滴管加入
（二）稀释计数 如细胞较多，可用等渗盐水或红细胞稀释液将
脑脊液稀释后按上法计数，结果乘以稀释倍数。
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二、白细胞计数
（一）直接计数 若细胞不多，可用吸管吸取冰乙酸湿润管壁 后吹出，用同一吸管吸取均匀的脑脊液，充入计 数池内计数。
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二、白细胞计数
（二）稀释计数 1．若细胞太多，可用白细胞稀释液稀释后计
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一、脑脊液概述
脑脊液是血浆通过脉络丛选择性过滤而成， 因而其成分与血浆有很大差异，正常情况下易通 过脉络丛的有钠、镁、氯化物、CO2等；部分通 过的有蛋白质、葡萄糖、尿素、氨基酸、尿酸、 乳酸及酶等；不易透过的有胆红素、纤维蛋白原、 补体、抗体、胆固醇等。
临床微生物实验室质量控制及质量保证
肠杆菌科 大肠埃希菌ATCC25922 培养基：Mueller-Hinton琼脂
大肠埃希菌ATCC35218 接种液：生长法或直接菌落悬
(用于β-内酰胺类药/β- 液
内酰胺酶抑制剂）
孵育：35℃；空气；16-18h
铜绿假单胞 铜绿假单胞ATCC27853
及不动杆菌 大肠埃希菌ATCC35218 (用
孵育条件 需氧或CO2， 24小时
需氧或CO2， 48小时
已知菌株（ATCC)
化脓链球菌19615 肺炎链球菌6035 大肠埃希菌25922 淋病奈瑟菌43069 流感嗜血杆菌10211
SS琼脂
需氧，24小时
鼠伤寒沙门菌14028 福氏志贺菌12022 粪肠球菌29212 大肠埃希菌25922
预期结果
10.08.2024
8
标本收集和运送的质量控制
向临床提供标本采集说明(sop)
• 不同部位标本的采集方法 • 采集最佳时间、次数 • 标本采集量正确时间、部位、方法等
对收集和运送标本的容器控制 无菌、无防腐剂、足够大、安全严密、不易破碎、 选择合适的运送培养基
10.08.2024
9
标本收集和运送的质量控制
结果报告
3
人员资质
人员
人员能力
人员培训
具备相关教育背景, 每年接受专业技术及知
识培训, 熟悉微生物实验室操作 规程、消毒灭菌及生物
安全知识。
.
10.08.2024
包括其对诸如分 析前、中、后特 定阶段的专业经 验和熟练试验技 术 。并直接参与
质控工作
.包括新员工培训、老员 工的再培训以及员工工作
能力评估
加入后培养基由无色
质控要求: 每批试剂使用前应使用变为相红应色
脑脊液检验
2.5-4.5
120130
稍低
0-8,多为淋巴细胞
无
混浊,脓 性
++以 上
明显减 少或消 失
显著增加 , 数千 , 以中性 粒细胞为主
可发现 病原菌
结脑
增 高
微混,呈 毛玻璃 状
清晰或 微混
+ — +++
增加
减少
明 显 减少
数十或数百 ,早 - 中性粒 细胞为主 , 后 - 淋巴细胞 为主
数十或数百 , 以淋巴细 胞为主
【参考值】
6
蛋白质电泳
【临床意义】
前清蛋白增加见于脑萎缩、脑积水及中枢神经变性疾病。 清蛋白增加见于脑血管病变、椎管阻塞。 α和β球蛋白增加见于脑膜炎、脑肿瘤。 β球蛋白增加可见于动脉硬化，脑血栓及脂肪代谢障碍性疾
病。
γ球蛋白明显增加见于脑肿瘤。
7
免疫球蛋白质分析
【原理】
抗原和抗体在凝胶中或特殊缓冲液中特异结合，形
化脓性 脑膜炎
明显白色混浊
二、一般检查：理学检查
凝固性：正常—无凝块。
蛛网膜下 腔梗阻
黄色胶冻状
结核性 脑膜炎
12-24h液面有薄膜形 成
化脓性 脑膜炎
1-2h出现凝块与沉淀 物
二、一般检查
1、蛋白质定性检查 2、蛋白质定量测定 3、葡萄糖测定 4、氯化物测定 5、酶及其他成分测定 6、蛋白质电泳 7、免疫球蛋白分析 8、髓鞘碱性蛋白测定
自测题
1、如何鉴别穿刺损伤引起出血(新鲜出血)与蛛网膜 下腔或脑出血(陈旧性出血)？ 2、如何根据实验室检验结果鉴别化脓性脑膜炎、结 核性脑膜炎和病毒性脑膜炎?
病例分析
脑脊液检查结果及临床意义
脑脊液检查结果及临床意义一、适应证和标本采集1．适应证①有脑脊膜刺激症状时可检查脑脊液协助诊断。
②疑有颅内出血时。
③有剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪等症状和体征而原因不明者。
④疑有脑膜白血病患者。
⑤中枢神经系统疾病进行椎管内给药治疗、手术前腰麻、造影等。
要严格掌握禁忌证、凡疑有颅内压升高者必须做眼底检查，如有明显视乳头水肿或有脑疝先兆者，禁忌穿刺。
凡病人处于休克、衰竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者均禁忌穿刺。
2．标本采集脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
穿刺后应由医师用压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78～1.76 kpa (80～180 mmH2O)，儿童为0.4～1.0 kpa (40～100 mmH2O)。
任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高。
待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。
每管收集1～2毫升。
脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过外将影响检验结果，是细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。
存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或残废可影响细菌检出率等。
二、检查内容1．一般性状检查（1）颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。
在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变。
①红色：常由于各种出血引起的，脑脊液中出现多量的红细胞，主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或胺富强出血引起。
前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次沽少，经离心后上清液呈无色透明。
当蛛网膜下腔或脑室出血时，三管呈无孔不入红色，离心后旧清液显淡红色或黄色。
红细胞在某些脑脊液中5 分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈早性或新鲜出血。
②黄色：可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。