临床检验中发光免疫.
临床免疫学检验 名词解释整理
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。
亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。
抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。
带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。
在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。
抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。
免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。
半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。
当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。
载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。
载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。
单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。
多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。
化学发光免疫技术及其在临床检验中应用论文
化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用【摘要】化学发光免疫分析是基于放射免疫分析的基本原理，然后将高灵敏的化学发光分析与高特异性的免疫反应结合而建立的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。
这种技术操作方便，检测灵敏度高，且不会造成污染，是当前免疫分析中最完善的分析方法，也是免疫分析重要的发展方向，本文笔者就对这一技术及其在临床检验中的应用做一介绍。
【关键词】学发光免疫分析技术；基本原理；分类；应用文章编号：1004-7484（2013）-01-0463-01化学发光免疫分析技术（chemiluminescence immuno-assay，clia），是在二十世纪八十年代发展起来的，它是比荧光免疫测定、酶免疫、发射免疫更先进的一种最新的免疫测定技术。
这种技术主要用于对各种抗体、抗原、半抗原、脂肪酸、激素和药物的检测分析，下面就介绍一下这种技术的基本原理和分类。
1化学发光免疫分析技术的基本原理化学发光免疫分析技术是由免疫分析和化学发光分析两个系统构成的。
其中免疫分析是用标记物直接标记在抗原或抗体之上的，然后再经过抗原与抗体反应生成抗体免疫复合物，其中标记物可以是化学发光物质，也可以是某种酶。
化学发光免疫分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，待发光物质氧化后就会形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测，其中被测物的含量就是根据化学发光标记物与发光强度的关系利用标准曲线计算出来的。
化学发光的原理是指分子或原子中的电子吸收能量后，发生能级跃迁而释放光子的过程，能级跃迁过程是电子从基态到激发态的过程，实现了从较低能级向较高能级的跃迁。
其中可以根据形成激发态分子的能量来源不同将发光过程分为化学发光（chemiluminescence）、光照发光（photoluminescence）和生物发光（bioluminescence）。
化学发光免疫分析技术
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多 以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英 钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
• T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。
化学发光免疫分析
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用敏感性和特异性评价
化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用敏感性和特异性评价发布时间：2022-10-14T03:46:58.386Z 来源：《中国医学人文》2022年13期作者：勾宗蓉[导读] 目的：分析化学发光免疫分析法检测甲功5项的敏感性及特异性。
方法：选择2021年1月-2022年1月医院检验科接受检查的甲状腺疾病患者73例为研究对象，两组患者均接受化学发光免疫分析法检测血清中甲功5项水平勾宗蓉绵阳市人民医院四川绵阳 621000【摘要】目的：分析化学发光免疫分析法检测甲功5项的敏感性及特异性。
方法：选择2021年1月-2022年1月医院检验科接受检查的甲状腺疾病患者73例为研究对象，两组患者均接受化学发光免疫分析法检测血清中甲功5项水平，并以彩照检查结果为金标准，比较化学发光免疫分析法检测的敏感性及特异性水平。
结果：检测结果表明，化学发光免疫法在检测甲功5项指标的敏感性及特异性满足临床检验要求，数据比较有意义（P＜0.05）。
结论：针对甲状腺疾病临床检验，化学发光免疫分析法的应用，检测敏感性及特异性满足临床要求，可推广。
【关键词】化学发光免疫分析法；甲状腺；游离甲状腺激素；检测；敏感性Sensitivity and specificity evaluation of chemiluminescence immunoassay in clinical examination of thyroid diseases【Abstract】Objective: To analyze the sensitivity and specificity of chemiluminescence immunoassay for the detection of 5 items of thyroid function. Methods: From January 2021 to January 2022, 73 patients with thyroid disease who were examined in the laboratory department of the hospital were selected as the research subjects. Both groups of patients received chemiluminescence immunoassay to detect the levels of 5 items of thyroid function in serum, and color photos were used for examination. The results are the gold standard to compare the sensitivity and specificity levels of chemiluminescence immunoassay detection. Results: The test results showed that the sensitivity and specificity of chemiluminescence immunoassay in the detection of 5 indicators of thyroid function met the requirements of clinical testing, and the data were significant (P<0.05). Conclusion: For the clinical examination of thyroid disease, the application of chemiluminescence immunoassay, the detection sensitivity and specificity meet the clinical requirements and can be promoted.【Key words】Chemiluminescence immunoassay; Thyroid; Free thyroid hormone; Detection; Sensitivity当前临床上检测甲功5项指标最常用的检测方式即为化学免疫发光法免疫分析法。
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较目的比较发光免疫、酶联免疫这两种免疫学方法检测乙肝病毒标志物的特点和各自的应用价值。
方法用这两种不同的免疫学方法分别对182例乙肝患者的血清标本进行检测,然后计算结果、分析结果。
结果两种方法对乙肝病毒标志物前四项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb)均敏感,灵敏度达到ng/mL,结果的相互符合率也达到96%以上。
而对HbcAb而言,结果的相互符合率仅为89%,因为发光免疫法检测HbcAb时未稀释标本,所以发光免疫法的灵敏度要高于酶免法。
结论两种实验方法各有特点,操作时应根据实验的实际情况来选择。
标签：酶联免疫法; 发光免疫法; 乙肝病毒标志物现在实验室免疫学分析用的最广的方法是酶联免疫法和发光免疫法。
这两种方法哪种的灵敏度高、它们又有什么样的不足之处,现就这两种方法对乙肝病毒表面标志物的检测作比较,结论如下。
1 材料与方法1.1 材料收集182例临床确诊乙肝的病人静脉血样离心,分离出的血清用未加抗凝剂的密闭试管中保存,放置于-20℃环境中备用。
酶免法表面抗原质控品由北京市临检中心提供,浓度为2ng/mL。
1.2 试剂和仪器酶联免疫法试剂采用上海科华生物工程有限公司生产的乙肝两对半诊断试剂盒(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);试剂为同批号试剂,批号:20081106,校期:20091105。
仪器有洗板机(BIORAD MODEL 1575),酶标比色仪(Rayto RT-6000)。
化学发光法采用北京源德生物医学工程公司JETLIA-962化学发光免疫测定系统及配套使用的专用试剂盒,试剂批号:200902012290318A,校期:20090917。
1.3 方法酶联免疫法的操作严格按照使用说明书进行,以表面抗原定值血清作为质控,设空白一空,阴阳对照各两孔。
主要步骤是加样,加酶,孵育,洗板,加显色剂,显色,比色。
其中核心抗体检测时用生理盐水作1∶30稀释。
电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析
电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析苏东梅【摘要】目的：探讨电化学发光免疫分析及在临床检验中的应用效果。
方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检验人员分别利用ECLIA、ELISA等方法完成100例乙肝患者血样中乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）检验。
记录两种方法检测抗-HBc阳性率，给予统计学分析后得出结论。
结果ECLIA法检测100例乙肝患者血样中抗-HBc阳性率高达98.00％，显著高于ELISA法检测阳性率81.00％，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。
结论电化学发光免疫分析方法可显著提高临床检验结果准确性，为临床医生提供真实可靠的诊断依据，使患者及时确诊病情并获得正确治疗，保障其临床疗效及预后。
%Objective To explore the electrochemiluminescence immunoassay and the application effect in clinical examination. Methods A clinical laboratory staff with professional knowledge and rich experience was specified, using ECLIA, ELISA respectively(anti-HBc)test completed 100 cases of hepatitis B blood samples of patients with hepatitis B virus core antibody. The positive rate of anti–HBc of the two methods was detected and record, gives statistical analysis conclusion. Results The positive rate of anti-HBc ECLIA was up to 98%in 100 cases of hepatitis B patients, it was significantly higher than those of detected by ELISA(81%), comparison of the results was statistical significance(P<0.05). Conclusion Electrochemiluminescence immunoassay method can significantly improve the accuracy of clinical test results, provide the reliable basis for the diagnosis for clinicians, enable patients totimely diagnose the disease and get the correct treatment, ensure the therapeutic effect and prognosis.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2014(000)023【总页数】3页(P102-103,156)【关键词】电化学发光免疫分析;临床检验;应用效果【作者】苏东梅【作者单位】广东省茂名市中医院检验科，广东茂名525000【正文语种】中文【中图分类】R446.6电化学发光免疫分析（electro-chemiluminescence immunoassay，ECLIA）是近年来于临床推广使用的新型标记免疫测定技术，特点为检测速度快、易于控制、灵敏度较高等[1-3]。
免疫化学发光检验项目
免疫化学发光检验项目
免疫化学发光（Immunochemiluminescence，ICL）检验是一种常用的免疫测定技术，通过测量化学发光信号的强度来定量测定样品中的生物分子。
免疫化学发光检验项目广泛应用于临床诊断、药物研发和生命科学研究领域。
免疫化学发光检验项目包括但不限于以下几个方面：
1. 抗体测定：通过检测特定抗体的存在或水平来诊断某些疾病。
例如，乳腺癌标志物CA15-3、甲状腺功能相关抗体（TPO-Ab、TG-Ab）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）等。
2. 药物测定：检测药物在体内的浓度，用于药物治疗的监测和调整剂量。
常见的药物测定项目包括抗生素、抗抑郁药物、免疫抑制剂等。
3. 激素测定：检测体内激素水平的变化，用于诊断内分泌疾病。
常见的激素测定项目包括性激素（雌激素、孕激素等）、甲状腺激素（T4、T3、TSH等）、肾上腺皮质激素（皮质醇等）等。
4. 微量元素测定：测定体内微量元素的水平，用于评估人体营养状况和某些疾病的诊断。
常见的微量元素测定项目包括钙、铁、锌、镁、铜等。
5. 肿瘤标志物测定：通过检测肿瘤标志物的水平来筛查、诊断和监测肿瘤的发展。
常见的肿瘤标志物测定项目包括癌胚抗原
（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、甲胎蛋白（AFP）等。
6. 受体测定：测定体内受体的水平，用于研究受体与相关疾病的关系以及药物研发。
常见的受体测定项目包括雌激素受体（ER）、雄激素受体（AR）等。
总之，免疫化学发光检验项目广泛涉及了多个医学领域，通过对特定生物分子的定量检测，可以为临床诊断、疾病监测和药物治疗提供有力的支持。
化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用价值分析吴秀娟
化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用价值分析吴秀娟发布时间：2023-06-16T09:00:09.597Z 来源：《健康世界》2023年6期作者：吴秀娟[导读] 目的对甲状腺疾病临床检验中应用化学发光免疫分析法的价值进行研究。
方法选择本院在2021年8月至2022年8月期间收治的60例甲状腺疾病患者，共包括甲亢患者30例，甲减患者30例，同时期到我院进行早孕体检者32例及同期在医院体检的29例健康人群，分别对上述研究人员采用化学发光免疫法检查，主要检查TSH、FreeT3、FreeT4、TPOAb等甲状腺自身抗体指标，并计算检查结果的敏感性和特异性。
结果采用化学发光免疫分析法检测，经整理分析检查数据后发现，甲亢组、甲减组的TSH、FreeT3、FreeT4、TPOAb等指标检验结果与对照组、早孕组相比均存在显著差异，并且这些差异在各组间都具有统计学意义（P＜0.05）。
此外，化学发光免疫分析法也被用于检验各项指标，结果表明该方法在确诊方面的特异性和敏感性均达到了100%。
结论将化学发光免疫分析法应用于甲状腺疾病的临床检验中，可以为临床医生提供良好的诊断帮助，从而取得显著的应用价值。
四川省遂宁市安居区人民医院 629000摘要：目的对甲状腺疾病临床检验中应用化学发光免疫分析法的价值进行研究。
方法选择本院在2021年8月至2022年8月期间收治的60例甲状腺疾病患者，共包括甲亢患者30例，甲减患者30例，同时期到我院进行早孕体检者32例及同期在医院体检的29例健康人群，分别对上述研究人员采用化学发光免疫法检查，主要检查TSH、FreeT3、FreeT4、TPOAb等甲状腺自身抗体指标，并计算检查结果的敏感性和特异性。
结果采用化学发光免疫分析法检测，经整理分析检查数据后发现，甲亢组、甲减组的TSH、FreeT3、FreeT4、TPOAb等指标检验结果与对照组、早孕组相比均存在显著差异，并且这些差异在各组间都具有统计学意义（P＜0.05）。
临床医学检验临床免疫技术：荧光免疫技术真题
临床医学检验临床免疫技术：荧光免疫技术真题1、单选免疫荧光技术的基本原理是（）A.将特异性抗体标记上荧光检测抗原B.将特异性抗原标记上荧光检测抗体C.将特异性抗体标记上荧光检测抗原或抗体D.将特异性抗原（江南博哥）标记上荧光检测抗原或抗体E.以上都不对正确答案：C参考解析：免疫荧光技术中，直接法可以用于检测抗原，而间接法除了可以检测抗原外，还可以检测抗体，如抗核抗体的检测。
2、单选组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是（）A.光源B.聚光器C.滤板D.目镜E.物镜正确答案：D3、单选荧光色素中呈现明亮黄绿色荧光的是（）A.藻红蛋白B.四甲基异硫氰酸罗丹明C.四乙基罗丹明D.异硫氰酸荧光素E.亮绿正确答案：D参考解析：异硫氰酸荧光素呈明亮的黄绿色荧光；四乙基罗丹明呈橘红色荧光；四甲基异硫氰酸罗丹明呈橙红色荧光；藻红蛋白呈明亮的橙色荧光。
4、单选能阻断红外线的透过，安装在荧光显微镜灯室聚光镜前面的是（）A.衍射滤板B.隔热滤板C.激光滤板D.吸收滤板E.折射滤板正确答案：B参考解析：安装在荧光显微镜灯室聚光镜前面的隔热滤板，是用来阻断红外线的。
5、单选下列哪项方法不属于免疫荧光细胞化学（）A.直接法B.夹心法C.间接法D.补体法E.捕获法正确答案：E参考解析：用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
免疫荧光细胞化学分为直接法、夹心法、间接法和补体法。
6、单选荧光是指某些物质受到一定波长光激发后（）A.在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光B.在极短时间内发射出的波长小于激发光波长的光C.在极短时间内发射出的波长等于激发光波长的光D.将全部吸收的光能都转变为荧光E.发射荧光前无能量部分消耗正确答案：A参考解析：荧光是指在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。
7、单选目前公认的最有效的检测抗核抗体的方法（）A.ELISAB.放射免疫技术C.直接荧光法D.间接荧光法E.补体法正确答案：D参考解析：由于抗核抗体(ANA)的复杂性及多样性，故测定方法繁多。
临床免疫学检验-荧光免疫技术
标记方法：搅拌法(适合大样品) 透析法(适合小样品)
标记抗体的纯化：透析法、凝胶过滤法
标记免疫物的分离与鉴定
1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：凝胶过滤法
2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义
争结合抗体。反应平衡后，与抗体结合的荧光 标记抗原的量与标本中抗原浓度的量呈反比。 由于抗体的分子量远大于抗原的分子量，游离 的荧光标记抗原与结合抗体的荧光标记抗原所 产生的偏振荧光强度相差甚远。因此在FPIA中 测定的偏振荧光强度与标本中抗原的浓度呈反 比。通过小分子抗原标准品与荧光偏振强度关 系建立标准曲线，可检测小分子抗原的浓度。
BG：325-500
OG：410-650
(exciting the fluorochrome) ↓
each droplet (cell) emits the fluorescence
(small electrical change)
10. Flow cytometry & Fluorescence
• Fluorochromes have the ability to absorb energy from light an emit it at a longer wavelength.
• 某些物质能够从外部接受能量而进入激 发态,当其从激发态回复至基态时,过剩 的能量以电磁波的形式发射称为发光(荧 光).
ห้องสมุดไป่ตู้
• 时间分辨 • Stokes位移（激发光谱和发射光谱的波长
差）
• 较窄的发射光谱（613nm +- 10nm)
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常、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。
消化样品 ↓ 萃取有机相 ↓ 分子筛柱分离各类甾体 ↓ 测定
减少—— 结合蛋白 类似物 前体 代谢产物 ——干扰
血清直接测定 + 高特异性单抗 + 结合蛋白屏蔽技术
经典方法
直接测定法
游离甲状腺激素测定方法的进展
常见甲功指标：TSH、FT3、FT4、TT3、TT4 对甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4 对甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3 但FT3 、 FT4灵敏度要求高，且易受干扰 发光法提高了灵敏度，使得其临床应用普遍性超过TT4和TT3 第一代（放免） 两步法 操作时间长 灵敏度差 准确性差 第二代 类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好 血清FT3 、 FT4试剂盒的发展 （消除结合蛋白对测定的影响） 测定游离激素的参考方法（“金”标准）：平衡透析法（透析液过多可导致测值偏高） 操作复杂、采样量大，不适于临床常规 第三代 反向竞争法 （标记抗体） 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好
化学发光的分类
按化学反应类型
酶促化学发光：
辣根过氧化物酶系统
碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统
按发光持续时间
闪光（Flash）:
发光时间在数秒内，如吖啶酯
以原位进样(In Situ Injector) 和时 间积分法测量
非酶促化学发光：
吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统
辉光（Glow）:
商品化发光免疫分析产品的某些宣传误区
某些产品宣称的灵敏度远超过免疫反 应的理论极限——10-19mol/L 即：六个待测物分子/ 100ul样品 所以，片面宣扬检测技术灵敏度和线性 范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是 荒谬的。
就发光分析而言，制约灵敏度的瓶颈 在于抗体亲合力和干扰因素，而不是 检测技术。
已成为现代生物技术最活跃的领域之一
光生物学检测技术的优越性
彻底消除了放射性危害 无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长
容易实现连续、动态、重复测定
适合于复合标记系统进行多指标并行测定 操作简单，反应速度快，容易实现自动化 灵敏度和线性范围超过以往技术
几种标记/检测技术理论极限灵敏度的比较
对仪器的要求：结构简单、运行效率高、故障率低、维护费用少 对试剂盒的相应要求：标准化、成套化、简单化，具体为：
反应/洗涤/测定条件一致；操作步骤少且趋于一致 反应时间短； 通用成分多、专用成分少
抗体选择——游离PSA
总PSA
PSA
•针对非掩蔽性抗原 •与结合和游离PSA等分子结合
PSA
结合蛋白
针对掩蔽性抗原
游离PSA
小分子性激素测定方法的进展
男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其 结构也非常相似；而且普遍与血清中的某些蛋白结合。 因此，皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、血清蛋白异
发光时间在数十分钟以上，如：
HRP-Luminol系统
AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、 以速率法测量。
闪光与辉光及其测量方式的差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
速率法测量
原位进样
时间
商业化产品中常见的化学发光系统（一）
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2 O 2 +
化 学 发 光
铕（Eu）、镝(Dy)、 灵敏度较高、试剂较 钐（Sm）、铽 稳定 （Tb）、等络合物 脉冲光源激发 钌(Ru)的络合物脉 冲电场激发
电化学发光
•化学发光：Chemiluminescence •时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）Time Resolved Fluorescence（Time Delayed Photoluminescence） 标记物为稀土元素络合物，通常采用解离增强荧光免疫分析（DEFIA） •电化学发光（也称场致发光）Electrochemiluminescence（Electroluminescence）标记物为稀土元素络合物
发光（Luminescence）
化学发光（Chemiluminescence） 生物发光（Bioluminescence）
由于化学反应（通常是氧化）或生物化学反应产生电 子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量并 产生光子，从而导致的发光现象。与荧光最大的区别 在于无需激发光，因此后者也被称为光致发光。 生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发 光体温度升高所致，因此其反应能量绝大部分用于发 光而不是发热，发射波长也与温度无关。 发光测定属发射光谱分析，多采用动力/速率法或积分 法，无需终止反应，也不受朗伯-比尔定律限制； 而酶标显色测定属吸收光谱分析，多采用终点法，需 终止反应，并受朗伯-比尔定律限制。
使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线 部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)
流动池检测方式示意图
冲洗液 干燥空气 检测器 负压泵
四通阀
检测池
废液
计量泵
氧化剂 样品管 原位进样泵
优点：结构简单，运行成本低 缺点：易产生交叉污染，工作效率受限
标准化——自动化免疫分析系统对试剂盒的技术要求
开始发挥作用
成为甲亢诊断的
首选指标之一
更新了部分临床概念
改写了甲功的调控理论
第一代 TSH检测试剂盒
第二代 TSH检测试剂盒
第三代 TSH检测试剂盒
第四代 TSH检测试剂盒
以TSH(促甲状腺素)为例
目前商品化发光免疫分析产品的几个特点
大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式
多采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使反应时间缩短
80,000 60,000 40,000 20,000 0
放免
酶标
发光
三种免疫测定技术的成本及费用 三种免疫测定技术的成本及费用
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
单光子计数器是目前高灵敏度 发光分析仪的核心部件
激发光阴极 产生光电子 在各打拿极之间得到 能量和数目的倍增
在阳极上形 成较强信号
发光样品 产生光子
光电倍增管 高 压 高速分频器 高速比较器 高速放大器
相对发光单位 数字脉冲(RLU)
脉冲信号
单光子计数器的工作特性
光子计数（Y） 理论/校正曲线
由于：单光子计数是在检测随机光子事件 因此：随光子数量增多检测效率持续下降 所以：准确的校正技术是设备品质的关键
信号强度（Y） 理论/校正曲线 实际曲线
由于：不同发光体系和免疫分析模式具有不同的实际信号曲线
因此：科学准确的特定校正技术是衡量设备和试剂匹配性的关键
标记物浓度（X）
发光信号检测
光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD） 原理：
光信号 光电转换器件 电压或电流信号 放大
主要特点 结构简单、性能稳定 但灵敏度低、线性范围较窄。
故， K≈
[TT4] [FT4] ([总TBG]－[TT4])
即， [FT4]≈
[TT4] K([总TBG]－[TT4])
所以，样品被稀释N倍后， [FT4]≈ [TT4]/N K ([总TBG]/N－[TT4] /N) = [TT4]/N
相
同
[TT4] = K([总TBG]－[TT4]) K ([总TBG]－[TT4])/N
Hook(前滞)效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
抗体筛选、干扰屏蔽，生产工艺、管理 水平和技术服务是决定产品性能的关键
例如：电化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L
第四代化学发光TSH检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L
原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。
抗体选择——胰岛素
多抗或无选择性单抗
免疫源性胰岛素
胰 岛 素
胰 岛 C肽 胰岛素原 素
灵敏度(mol/L)
10-18
10-15
10-12
10-9
酶标 荧光
放免
发光
几种标记/检测技术理论线性范围的比较
线性范围
105 104 103
102
酶标 荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18
15 12 9 6
3
0
酶标
荧光
放免
发光
试剂盒
仪器
100,000
人民币 人民币
特殊防护 治理污染
游离激素测定法的试金石——稀释实验
以游离T4为例,样品稀释20倍以内测值无明显变化 （应扣除实验本身对样品的稀释度并注意基质效应,建议用6-8%BSA稀释）
FT4 + TBG
游离 T4 游离结合蛋白
K
T4TBG
结合常数
结合T4
其中：K=
[T4TBG] [FT4] [TBG]
(固定常数，不变)
由于绝大部分T4呈结合状态，因此：[T4TBG]≈[TT4](总T4); [TBG]≈[总TBG]－[TT4]