液相色谱分析仪法
液相色谱仪的使用方法
液相色谱仪的使用方法液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
在科学研究和实验室分析中，掌握液相色谱仪的使用方法至关重要。
本文将从仪器的设置、样品制备、操作步骤和常见问题等方面介绍液相色谱仪的使用方法。
一、仪器设置在使用液相色谱仪之前，首先需要进行仪器的设置。
这涉及到溶液配制、进样器的选择、流动相的选取等等。
根据要分析的化合物，可以选择适当的固定相，例如反相色谱柱、离子交换柱、凝胶色谱柱等。
根据样品溶液的特性，选择相应的流动相，在柱背压范围内调整流速。
二、样品制备样品制备是液相色谱分析的前提。
首先，将待分析的样品溶解在适当的溶剂中，以得到高浓度的样品溶液。
然后，通过滤膜过滤掉悬浮物和杂质，以提高溶液的纯度。
最后，将样品溶液放入进样器中，准备进行进样。
三、操作步骤1. 开机预热首先，将液相色谱仪的电源插头插入电源插座，打开主机电源开关。
接着，设置溶剂系统和检测器的参数，例如流速、进样器温度、柱温等。
预热一段时间，待仪器各部分温度稳定后开始实验。
2. 进样将样品溶液注入进样器，通过设置进样器的体积或时间，控制进样量。
可以选择不同的进样模式，例如定容进样、微体积进样等。
注意，避免进样时引入气泡，以免影响分析结果。
3. 分离与检测将进样的样品送入色谱柱中，根据色谱柱的特性进行分离。
柱温、流速和流动相的组成可以影响分离效果，需要进行优化。
随着样品的分离，各组分会以不同的保留时间出现在色谱图上。
检测器会根据不同的化合物发出相应的信号，例如紫外检测器、荧光检测器等。
4. 数据处理与分析得到色谱图后，可以使用相应的色谱软件进行数据处理和分析。
可以计算峰面积、峰高、峰面积百分比等参数，以获得样品中各组分的含量。
四、常见问题与解决方法在使用液相色谱仪时，可能会遇到一些常见问题，例如峰形不对称、背景噪音、峰高不稳定等。
这时，可以根据具体情况采取相应的解决方法。
可能需要调整流速、改变流动相配比、更换柱子或调整温度等等。
《液相色谱分析法》课件
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
仪器分析 高效液相色谱法
第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱(GC)的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法，易称为现代液相色谱法。
高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。
梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。
也称为梯度淋洗。
低压梯度──又称外梯度，特点是先混合后加压。
它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统，易称为泵前混合。
高压梯度──又称内梯度，特点是先加压后混合。
它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。
两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器，经充分混合后进入色谱柱系统，是一种泵后高压混合形式。
柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。
柱外因素常指从进样口到检测器之间，除色谱柱以外的所有死时间，如进样器、连接管、检测器等的死体积，都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。
液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力，样品分子被流动相带入柱内，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。
K值大的强极性组分易被吸附，K值小的弱极性组分难被吸附，样品组分因此被分离。
液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同，有不同的分配，从而实现分离的方法。
分配系数较大的组分保留值也较大。
正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。
反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。
化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。
液相色谱质谱仪操作及原理
液相色谱质谱仪操作及原理一、液相色谱仪简介液相色谱仪，作为现代分析化学的重要工具，广泛应用于生物、医药、环境、食品等多个领域。
它根据固定相的不同，可分为液-液色谱（LLC）和液-固色谱（LSC）。
液相色谱仪主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器和信号记录系统等部分组成，具有高效、快速、灵敏等特点。
二、液相色谱仪的特点高压：液相色谱法使用液体作为流动相，为了迅速通过色谱柱，需要对载液施加高压，通常可达150～300×10^5Pa。
高速：流动相在柱内的流速远超经典色谱，一般可达1～10ml/min，因此分析时间大大缩短，通常少于1小时。
高灵敏度：液相色谱广泛采用高灵敏度的检测器，如荧光检测器，其灵敏度可达10^-11g。
此外，样品用量小，通常只需几个微升。
适应范围宽：与气相色谱法相比，液相色谱法不受试样挥发性的限制，只要试样能制成溶液，就可以进行分析。
三、液相色谱仪操作五步骤准备：准备好所需流动相并过滤、脱气，更换合适的色谱柱和定量环，配制样品标准溶液并过滤，检查仪器各部件连接情况。
开机：接通电源，依次打开检测器、输液泵等，更换流动相并排气泡，设定流速等参数。
设计参数：根据实验需求设定流速、波长等参数，启动数据采集系统，确保基线稳定后进行进样。
进样：将样品注入进样阀，进行在线工作站自动采集数据。
系统清洗：分析结束后，使用适当的溶剂清洗系统，关闭仪器。
四、液相色谱仪工作原理在液相色谱仪中，流动相被高压泵打入系统，携带样品溶液进入色谱柱。
由于各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，在移动过程中会产生速度差异，从而实现组分的分离。
分离后的组分依次从柱内流出，通过检测器时转换为电信号，记录并打印出图谱。
高效液相色谱仪主要由进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成，可根据工作原理分为吸附柱色谱法、分配柱色谱法、离子交换柱色谱法和凝胶柱色谱法等。
五、质谱仪简介及工作原理质谱仪是一种测量离子质荷比（质量-电荷比）的分析仪器，广泛应用于化学、生物学、医学等领域。
hplc高效液相色谱仪使用方法
hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。
下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。
一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。
2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。
一般要求预热时间为30分钟到1小时。
二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。
根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。
2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。
可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。
3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。
设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。
4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。
一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。
5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。
柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。
三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。
2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。
3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。
进样过程中要确保无气泡进入柱。
四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。
监控色谱图，观察峰的形状和分离度。
根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。
2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。
进行数据处理和结果分析。
五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。
2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。
柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。
3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。
液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
可以选取现有的各种走样方法或建立一个新的方法。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject 转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：
1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
液相色谱仪外标法
液相色谱仪外标法
液相色谱仪外标法是一种常用的定量分析方法，适用于分析样品中含量较低的成分。
外标法的基本原理是将已知浓度的标准溶液作为内标加入到待测样品中，然后使用液相色谱仪进行分离和检测。
通过比较待测样品中内标物质与外标物质在相同时间内通过色谱柱的保留时间差异，可以确定待测样品中待测成分的浓度。
外标法的具体步骤如下：
1. 准备标准品溶液：准备一系列已知浓度的标准品溶液，并进行浓度校准。
2. 准备待测样品：将待测样品加入到已知浓度的内标溶液中，并进行混合。
3. 进行色谱分离：使用液相色谱仪对待测样品进行分离，并检测分离得到的组分。
4. 计算浓度：根据待测样品中内标和外标物质在相同时间通过色谱柱的保留时间差异，计算待测样品中待测成分的浓度。
需要注意的是，在进行液相色谱仪外标法测定时，需要严格控制实验条件，如流速、温度等，以保证实验结果的准确性。
同时，还需要对实验数据进行统计分析，以确定待测样品中待测成分的平均浓度。
液相色谱仪操作及原理
液相色谱仪操作及原理色谱是一种分离和分析化合物的重要方法，其中液相色谱仪是常用的一种设备。
本文将介绍液相色谱仪的基本操作和工作原理。
操作步骤1.准备工作：首先，确保色谱柱已经安装在仪器中，并连接好所有管路。
检查溶剂和样品的准备情况。
2.启动仪器：打开色谱仪的电源，启动相关软件程序。
等待仪器自检完成。
3.设置参数：根据实验需要，在软件中设置流速、温度、检测波长等参数。
4.平衡系统：进行系统平衡，使得溶剂能够稳定流动，避免干扰。
5.进样样品：使用进样器将待分析的样品加入系统中，确保样品的浓度在检测范围内。
6.开始运行：点击软件上的运行按钮，开始进行实验分析。
观察色谱图谱，记录分析结果。
7.数据分析：根据色谱图谱和相应的数据，进行数据处理和结果分析。
工作原理液相色谱仪基本原理是利用物质在流动液相中的分配系数不同而实现分离。
液相色谱仪由流动相系统、分离柱、检测器和数据处理系统等组成。
1.流动相系统：包括溶剂瓶、泵和进样器等部分，用于将样品溶液以流动方式送入分离柱中。
2.分离柱：是分离样品的核心部件，根据不同化合物的亲和性和分配系数，将其分离开来。
3.检测器：用于检测流过分离柱的不同化合物，并生成相应的信号。
4.数据处理系统：将检测到的信号转换为数据图谱，方便用户进行数据分析和结果输出。
液相色谱仪通过调节流速、温度、溶剂组成等参数，实现对不同化合物的高效分离和分析。
它在药物研究、食品安全监测等领域有着广泛的应用。
结语液相色谱仪是一种重要的分析仪器，掌握其操作方法和工作原理对于科研工作者和实验人员至关重要。
通过本文的介绍，希望读者能够更好地了解液相色谱仪的基本知识，提高实验操作的效率和准确性。
液相色谱仪操作及原理
液相色谱仪操作及原理液相色谱仪（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分析技术，用于分离和测定混合物中的化合物。
它的操作原理基于样品在流经填充物时与填充物相互作用，并以不同的速度移动。
以下是液相色谱仪的操作步骤及其原理：操作步骤：1. 准备样品：将待测样品准备成溶液，并以适当的方法预处理，如稀释、萃取等。
2. 准备填充物：选择合适的填充物，并将其装填进色谱柱中。
填充物的选择根据分离物质的性质和需求。
3. 装载样品：将样品溶液使用注射器加载到色谱柱中，通常通过自动进样器进行。
4. 运行液相色谱仪：启动液相色谱仪，使流动相从色谱柱中流经。
流动相可以是不同溶剂或缓冲溶液的混合物。
流动相的选择也取决于待测物质的性质。
5. 检测和记录数据：样品分离过程中，通过检测器（如紫外可见光灯、荧光检测器、质量分析仪等）检测分离出的各组分，记录并分析检测结果。
操作原理：液相色谱仪的操作原理基于样品与填充物的相互作用以及溶剂的选择。
填充物通常是一种多孔性材料，具有大量的表面积，可与样品中的分离物质发生化学或物理相互作用。
在运行液相色谱仪时，样品中的化合物在与填充物相互作用的同时，也与流动相相互作用。
由于不同分离物质与填充物和流动相之间的相互作用不同，它们在色谱柱中的停留时间也不同。
较强的相互作用会导致较长的停留时间，而较弱的相互作用会导致较短的停留时间。
通过控制流动相的组成和流动速度，可以使待测物质在色谱柱中以不同的速率移动，从而实现样品中各成分的分离。
检测器可以检测到每个组分的浓度，进而得到分离出的组分的浓度和峰面积等信息。
根据这些信息，可以定量分析样品中各组分的含量或确定未知化合物的结构。
需要注意的是，在实际操作中，操作条件和仪器设置可能会因分析需要而有所不同。
因此，在使用液相色谱仪进行操作时，应根据具体实验要求和仪器特性进行适当调整和操作。
液相色谱仪工作原理及操作
液相色谱仪工作原理及操作液相色谱仪（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分析仪器，用于将混合物中的化合物分离，并测定各组分的含量。
液相色谱仪的工作原理主要包括样品进样、柱和固定相、流动相、检测器和数据处理等几个方面。
1. 样品进样：液相色谱仪将待测样品以固、液、气体的形式输入柱中。
常见的进样方式有自动进样器和手动进样器。
自动进样器可以自动控制固定体或液体样品的注射量和速度。
2. 柱和固定相：液相色谱仪的柱由具有一定孔径大小的粒子填充而成，柱内填充物也称为固定相。
不同的柱和固定相具有不同的分离能力和选择性。
常见的固定相有反相柱、离子交换柱、空气气化柱等。
3. 流动相：流动相是指柱中运动的溶剂，可以是液体或气体。
选择合适的流动相对于分离和计量样品至关重要。
不同样品可使用不同的溶剂系统，如水、甲醇、醋酸等。
4. 检测器：液相色谱仪多种多样的检测器可以用来检测和记录柱顶流出溶液的特性，如吸收光谱、荧光光谱、电导率、质谱等。
其中，常用的有紫外/可见光检测器（UV/VIS）和荧光检测器。
5. 数据处理：液相色谱仪通过检测器获得的信号经过放大、滤波和数据处理等操作，最终生成色谱图。
色谱图可以用来测定样品中各组分的含量、分离度和峰面积等。
操作液相色谱仪时，首先需要准备好样品溶液和运行所需的流动相，并进行必要的校准。
然后将样品通过进样器引入柱中。
设置合适的分离条件，如流速、温度、波长等，开始运行仪器。
运行结束后，通过检测器获得的信号转换成色谱图，利用数据处理软件进行数据分析和定量计算。
注：以上内容并不完整，仅涵盖了液相色谱仪的基本工作原理和操作流程，具体细节和具体仪器的操作方法还需要参考仪器的使用手册和相关文献。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2015/11/22
液相色谱仪（2）
2015/11/22
液相色谱仪（3）
2015/11/22
液相色谱仪（4）
2015/11/22
高效液相色谱仪
2015/11/22
二.概论：
㈠定义： • 以液体为流动相的色谱法称为液相色法。 用常压输送流动相的方法为经典液相色谱 法，这种色谱法的柱效能低、分离周长。 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称HPLC）是在经典 液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方 法。与经典的液相色谱法相比，高效液相 色谱法具有下列主要优点：
2015/11/22
1. 应用了颗粒极细（一般为10μm下） 规则均匀的固定相，柱效高，分离效 率高； 2. 采用高压输液泵输送流动相，流速快， 一般试样的分析需数分钟，复杂试样 分析在数十分钟内即可完成； 3. 广泛使用了高灵敏检测器，大大提高 了灵敏度。目前，已发展了多种固定 相，有多种不同的分离模式，使高效 液相色谱法的应用范围不断扩大。
固定相：化学惰性的多孔性材料 ，如聚苯乙烯凝胶、亲水凝胶 、无机多孔材料 , 是有一定孔径 的多孔性填料。 流动相： 在凝胶色谱中，流动相 的作用不是为了控制分离，而 是为了溶解样品或减小流动相 粘度。 2015/11/22
基本原理：按分子大小分离。小分子可以扩 散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢； 中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通 过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶 剂分子小，故在最后出峰。 常用的流动相为水、四腈呋喃等 可对相对分子质量在2000以上范围内的化 合 物按质量分离,如多肽、蛋白质、核酸 等。
式中Cs、Cm分别是组分在固定相和流动相中溶 质的浓度。
2015/11/22
分配系数与组分、流动相和固定相的热 力学性质有关，也与温度、压力有关。 在不同的色谱分离机制中，K有不同的概 念：吸附色谱法为吸附系数；离子交换 色谱法为选择性系数(或称交换系数)；凝 胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用 分配系数来表示。 理论塔板数(theoretical plate numberN)— —用于定量表示色谱柱的分离效率（简 称柱效）。
2015/11/22
• 化学键合色谱与液液分配色谱一样，也可分为 正相和反相色谱。 • 反相键合色谱采用非极性固定相，键合的基团 有C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基。其 中最常用的是C18，又称ODS一十八烷基硅烷 键合相。所用的流动相为极性溶剂，以水为底 溶剂,再加入有机溶剂,最常用的是甲醇-水、乙 腈-水和四腈呋喃-水。 • 正相键合色谱采用极性固定相，如氨基、腈基 等极性基团；非极性或弱极性流动相，一般为 烃类溶剂，如己烷、庚烷等。
2015/11/22
化学键合固定相的特点
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相 传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动 相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （3）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （4）有利于梯度洗脱；
2015/11/22
正相色谱法与反相色谱法比较表 • 正相色谱法 • 固定相极性 高～中 • 流动相极性 低～中
• 组分洗脱次序 极性小的先洗出
反相色谱法 中～低 中～高
极性大的先洗出
从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反 相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）
2015/11/22
3. 离子交换色 （ion-exchange chromatography）
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶 液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、 存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；
2015/11/22
2. 液-液分配色谱 （liquid- liquid partition chromatography）
固定相与流动相均为液体，流动相与固定相之间应互不相 溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界 面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到 平衡时，服从于下式：
•
2015/11/22
分离类型选择
choice of separation types
2015/11/22
基本概念和术语：
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续 信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常 色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss 曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少见 色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检 测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出 曲线(elution profile)。 基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达 到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一 般应平行于时间轴。
2015/11/22
Cs Cm
保留时间(retention time，tR)——从进样开始到某 个组分在柱后出现浓度极大值的时间。 分配系数(distribution coefficient，K)——在一定温 度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定 相与流动相中的浓度之比。
Cs K＝ Cm
Cs K= Cm
• 式中，Cs—溶质在固定相中浓度；Cm--溶质在流动相中 的浓度；在同一色谱条件下，样品中K值大的组分保留值 大；后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出 色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易 分离。
2015/11/22
基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；是 根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度 不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。
2015/11/22
噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接 触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有 气泡或色谱柱被污染所致。 漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由 于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳 定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下 来也会产生漂移。 拖尾因子(tailing factor，T)—T＝，用以衡量色谱 峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor) 或不对称因子(asymmetry factor)。《中国药典》 规定T应为0.95~1.05。T＜0.95为前延峰，T＞ 1.05为拖尾峰。
2015/11/22
液-液分配色谱固定相的液体往往容易溶解到流动 相中去，所以重现性很差，后来在此基础上发展 了一种新型固定相---化学键合固定相 。 化学键合固定相：通过化学反应将固定液（各种不同基
团）键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。在HPLC整 个应用中占80%以上。 键合固定相的载体主要是硅胶，根据在硅胶表面（具有-≡Si -- OH基团）化学反应不同可制成四种键合相： （1）硅氧碳型（ ≡Si—O—C=，硅胶与醇类发生酯化反 应）。 （2）硅碳型（ ≡Si—C= ，硅胶与卤代烷反应）。 （3）硅氮型（ ≡Si—N= ，硅胶与胺类反应）。 （4）硅氧烷型（ ≡Si —O—Si—C= ，硅胶与有机硅烷反 应）。稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广
2015/11/22
㈡.色谱法分类
• 按两相的物理状态可分为： • 气相色谱法(GC): 适用于分离挥发性化合物。有 机物质中分子量小于400的采用气相色谱法分析， 此范围的物质约占有机物质总数15%~20%. • 液相色谱法(LC): 适用于分离低挥发性或非挥发 性、热稳定性差的物质。 • 分子量为400~2000的有机物质可采用液相色谱法 分析，而分子量大于2000的则须用凝胶色谱法。
2015/11/22
按固定相性质及外形分类
• 柱色谱: 固定相装在柱管内的色谱分析法
• 纸色谱: 固定相为滤纸的色谱分析法
• 薄层色谱: 固定相压成或涂成薄膜的色谱 分析法
2015/11/22
（三）HPLC的主要分离类型和原理：
高效液相色谱法按分离机理的不同主要分为四类： 1. 液-固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography） • 固定相：固体吸附剂。如硅胶、氧化铝等，较常使用的是 5～10μm的硅胶吸附剂； • 流动相：主要是非极性的烃类（如己烷、庚烷）并加入少 量极性溶剂作缓和剂（如水、甲醇）。 • 基本原理：组分在固定相吸附剂表面对不同物质吸附能力 不同使混合物分离的；吸附力越强,保留时间越长,反之,保 留时间短,。 • 适用于分离分子质量中等 （200~1000 ）的油溶性试样或 极性较小的植物色素等组分，大多数用于非离子型化合 物，。常用于分离同分异构体不适宜于分离强极性的离子 型化和物和同系物。 • 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾（离子型化合物易 产生拖尾）；
反相色谱法（ reverse phase RPC ）：流动相的极性大于固
定液的极性。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS 柱、 C18、C8 ），代表性的流动相是甲醇-水和乙腈-水或 水的缓冲液。是当今液相色谱的最主要分离模式。 适用于分离非极性和极性较弱的化合物。为控制样品在分 析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注 意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太 高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱 落。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH应用：碱金属、碱土金属等离子混合物的分离；食品中 添加剂和污染物的分离；生物大分子如氨基酸、核酸等。
2015/11/22