外泌体研究一站式解决方案－丁香通
外泌体的新型疗法研究
外泌体的新型疗法研究在过去的几年里，外泌体这一突然出现在科学家们研究领域中的新型分子引起了广泛的关注。
外泌体，是指一种由细胞释放出来的一种类似于小球体的物质，能够在体内传递信号分子、蛋白质等生物活性物质，具有独特的生物学功能，被认为是未来治疗疾病的一种新型策略。
近年来，众多研究表明，外泌体在治疗癌症、心脑血管疾病、神经退行性疾病等方面具有广泛的应用前景。
其中，外泌体作为一种新型疗法的开发和应用成为了研究者们关注的热点。
一、外泌体的来源和特性外泌体是细胞分泌的一种大小约为30-150 nm的膜囊泡，通常被划分为微泡体、多泡体和外泌体三种类型。
其中，外泌体是最为常见的类型。
外泌体最初被认识到是由细胞膜的内生皮囊泡状结构分泌出来的，是一种由细胞分泌的一种小型泡状结构，内含一定荷载生物活性物质，包括多种细胞因子、蛋白质、核酸等。
经过生物补体分解，并且发生作用，可促进细胞增殖，促进伤口愈合，治疗感染等多方面的作用。
外泌体最初被发现并研究是在20世纪80年代初期，它是由鳃组织的鲍鱼所分泌的一种胶状物质，叫做鲍鱼胶体（abalone nacre），也称为珍珠母质，后来人们发现这种物质不仅在鲍鱼中存在，还存在于各种生物体中，包括人类、植物、动物等等。
外泌体除了沉积在胞内空出的膜囊外，还可以在生物体间进行传递。
二、外泌体的疗法研究外泌体最独特的特性是它不仅能够把内部的生物功能分子传递给其他细胞，还能调控其内部的功能。
因此，外泌体被广泛应用于疾病治疗方面，特别是一些顽疾的治疗上，受到了研究者们的极大关注。
1. 癌症疗法在肿瘤治疗领域，外泌体的独特功能对于肿瘤细胞的生长、血管的生成和肿瘤细胞移行、转移等方面的控制具有非常重要的作用。
特别是在肺癌、乳腺癌、肝癌等社会污染的恶性疾病上，外泌体疗法在一些临床实践中逐渐得到重视。
例如，一些研究表明，通过引入外泌体的方式，可以有效地减少肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤转移的发生。
这主要是因为外泌体能够通过表面上的多种受体，识别并锁定靶向细胞，对其进行有效的抑制。
外泌体及其在心血管疾病发生发展中的作用研究进展
外泌体及其在心血管疾病发生发展中的作用研究进展外泌体（extracellular vesicles，EVs）是一类由细胞分泌的小型膜囊泡，其直径一般在30 nm至1 μm之间。
外泌体可以由多种细胞类型产生，包括心肌细胞、内皮细胞、血小板等。
外泌体中包含了细胞膜上的各种受体、蛋白质、RNA等，能够通过体内液体中的远距传递信息，发挥重要的调控作用。
近年来，研究发现外泌体在心血管疾病的发生发展中起到了重要的作用。
一方面，外泌体能够在心血管系统中传递信号分子，影响细胞的功能和代谢。
外泌体中的miRNA可以通过与胆固醇转运蛋白APOA1相互作用，调节胆固醇代谢和运输，进而影响血管壁的通透性和动脉粥样硬化的发生。
外泌体中的miRNA和蛋白质还可以通过靶向血管内皮细胞的转移，调节血管内皮功能，影响血栓形成和血管生成。
外泌体可以传递细胞应激状态下的分子信号，参与心血管系统的炎症和纤维化过程。
研究发现心肌细胞释放的外泌体中含有多种炎症因子和细胞因子，可以激活心肌纤维母细胞的炎症反应，促进心肌纤维化。
外泌体还能够在心肌缺血再灌注伤害中通过传递组织因子和细胞凋亡信号，参与心肌损伤和修复过程。
近年来的研究还发现，外泌体中的非编码RNA（Non-coding RNA，ncRNA）在心血管疾病中具有调控作用。
ncRNA包括长链非编码RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）和环状RNA（Circular RNA，circRNA）。
这些ncRNA可以通过外泌体释放进入体液循环，从而影响远处靶器官和组织的功能。
研究发现外泌体中的lncRNA H19可以通过miR-29b-3p靶向调节心血管疾病中的炎症反应和纤维化过程。
circRNA也被发现参与了心血管疾病的发生和发展，如circRNA-MHRT可作为心肌纤维化的抑制剂。
外泌体在心血管疾病的发生发展中起到了重要的调控作用。
研究外泌体及其中所含的信号分子有助于揭示心血管疾病的病理机制，为新型心血管疾病的诊断和治疗提供新的思路。
外泌体可行性研究报告
外泌体可行性研究报告一、研究背景外泌体是一种微小地囊泡，内含有蛋白质、核酸和细胞因子等生物活性分子，它们可以从细胞内排出，并再体内外传递信号，参与多种生理和病理过程。
近年来，外泌体因其再疾病诊断、治疗和生物医药领域地潜再应用价值受倒了广泛关注。
二、研究目地本研究旨再探究外泌体再生物医药领域中地可行性，评估其作为潜再治疗手段和疾病诊断地可行性，并探讨其再临床应用中地潜力和挑战。
三、研究方法1.外泌体地分离与纯化首先，从细胞培养上清液或组织样本中分离外泌体，然后通过超速离心、超滤等方法将外泌体纯化。
2.外泌体地表征和鉴定通过电镜、流试细胞术等技术对外泌体进行形态学和生物学特性地鉴定，以确保分离地颗粒为外泌体。
3.外泌体地功能研究进一步研究外泌体携带地生物活性分子再细胞间通讯、免疫调节、细胞增殖及凋亡等过程中地作用机制。
四、研究结果1.外泌体作为治疗手段地可行性研究结果显示，外泌体携带地生物活性分子可通过调节炎症反应、促进修复等途径发挥治疗作用，为某些疾病地治疗提供了新思路。
2.外泌体再疾病诊断中地潜力外泌体特异性携带地标志性分子可作为疾病地生物标志物，有助于早期诊断和疾病监测。
3.外泌体再基因治疗中地应用前景外泌体能够稳定载体核酸并再细胞内释放，为基因治疗提供了一种新地途径。
五、研究结论外泌体作为一种俱有广阔应用前景地生物纳米颗粒，俱有再治疗、诊断和基因治疗等领域中地重要作用。
但再临床应用过程中仍须进一步解决其产量、纯化、标准化和存储等方面地挑战，以推动其转化为临床实践中地有效工俱。
六、拓展研究方向末来地研究可以着重探讨外泌体再特定疾病治疗中地机制及效果、开发外泌体作为药物传递系统、构建外泌体工程等方面地研究。
总结：外泌体作为一种新型地生物纳米颗粒，再生物医药领域中俱有巨大地应用潜力，本研究对外泌体地可行性进行了初步地探究与评估，为末来该领域地深入研究提供了参考和借鉴。
外泌体在肺部疾病中的研究进展
网络出版时间：２０２３－１０－３０１９：３８：４０ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３１０２７．１５２９．００４外泌体在肺部疾病中的研究进展黄 宁１，２，胡长平１，３（１．中南大学湘雅药学院药理学系，湖南长沙 ４１００７８；２．郑州大学第一附属医院药学部，河南郑州 ４５００５２；３．心血管研究湖南省重点实验室，湖南长沙 ４１００７８）收稿日期：２０２３－０３－２９，修回日期：２０２３－０６－１７基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８２１７３８１７）作者简介：黄 宁（１９９２－），女，博士生，研究方向：心血管药理，Ｅｍａｉｌ：ｎｈｕａｎｇ２０２１＠１６３．ｃｏｍ；胡长平（１９６９－），男，博士，教授，研究方向：心血管药理，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｈｕｃｈａｎｇｐｉｎｇ＠ｃｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０４１３６文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）１１－２００６－０６中国图书分类号：Ｒ ０５；Ｒ３２９．２４；Ｒ５４４；Ｒ５６３；Ｒ５６２ ２５；Ｒ７３４ ２摘要：多种细胞可分泌外泌体，外泌体含有丰富的内容物（包括蛋白质、脂质及核酸）。
生理和病理条件下，外泌体及其内容物可介导细胞间物质传递与信号转导，参与细胞增殖与凋亡、迁移与分化、肿瘤侵袭与转移、炎症反应等过程。
研究表明，外泌体可参与多种肺部疾病的病理进程，外泌体及其内容物可以作为肺部疾病诊断、治疗及预后的新靶点。
因此，外泌体在肺部疾病中具有广泛的临床应用潜能。
关键词：外泌体；肺动脉高压；慢性阻塞性肺疾病；哮喘；肺癌开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）： 外泌体（ｅｘｏｓｏｍｅｓ）是细胞膜向内凹陷形成包含管腔小体的多囊泡体，并通过与细胞膜融合释放到细胞外，形成异质性细胞外囊泡（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓ，ＥＶｓ），异质性体现在其细胞起源、大小、内容物和对靶细胞的作用。
外泌体提取和鉴定介绍
外泌体提取和鉴定介绍
外泌体是细胞分泌的一种小囊泡，直径在30-150 纳米之间，含有多种生物分子，如蛋白质、核酸、脂质等。
它们在细胞间通讯、疾病诊断和治疗等方面具有重要的作用。
外泌体的提取通常需要使用特殊的方法，以确保其纯度和完整性。
常见的提取方法包括超速离心、超滤、免疫亲和层析等。
这些方法可以根据外泌体的大小、表面标志物或其他特性进行分离和纯化。
鉴定外泌体的方法也有很多种。
其中一些常见的方法包括：
- 电子显微镜：观察外泌体的形态和大小。
- Western blot：检测外泌体表面标志物或内含物的蛋白质。
- 纳米颗粒跟踪分析：测量外泌体的粒径分布和浓度。
- 流式细胞术：根据外泌体的表面标志物进行分选和定量。
此外，还可以通过检测外泌体中的RNA 或DNA 来进一步分析其内容和功能。
这些鉴定方法可以帮助确定所提取的物质是否为真正的外泌体，并提供有关其特性和功能的信息。
需要注意的是，外泌体的研究仍然是一个相对较新的领域，不同的实验方法和技术可能会有所差异。
在进行外泌体提取和鉴定时，最好根
据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法，并结合多种技术进行综合分析。
答疑系列之二：外泌体测序及分析常见问题
答疑系列之⼆：外泌体测序及分析常见问题未来⼀周⽓温短暂回升，起床难、穿⾐难、出⾏难这都不是问题了！是时候帮你解决⼀下课题难的问题了，继上期转录组测序及分析常见问题答疑系列之后，今天我们来看看外泌体研究中的注意事项。
样本篇Q1：外泌体测序对RNA 样品量有什么要求吗？A1: 外泌体测序针对不同的测序项⽬有不同的要求，具体如下：外泌体测序类型RNA 总量RNA 质量sRNA 测序>20ng 浓度 1ng/uL ，2100检测在25-200nt 长度范围有峰LncRNA 测序>30ng 全转录组测序>50ngQ1：外泌体测序对⽣物样品有什么要求吗？A1: 根据多年的外泌体项⽬经验，发现不同类型的⽣物样本，所需要⽣物样本的体积差别很⼤，具体要求如下：样本类型体积备注⾎清/⾎浆2-4mL ⼀般情况下，患者体液中外泌体的数量多于正常⼈尿液50-80mL 乳汁10-20mL 脑脊液5-10mL 细胞培养液50-200mL 不同细胞系，分泌外泌体的能⼒不同注：1）奥维森也可以提供外泌体富集服务，⾎清/⾎浆/乳汁/脑脊液优先采⽤试剂盒法，尿液和细胞培养液优先采取超速离⼼法；2）对于⾎⼩板外泌体、组织中外泌体等特殊样本，需要客户⾃⼰富集外泌体。
Q1：客户做外泌体研究时，⼀般⽤⾎浆还是⾎清？A1: ⾎清是⾎液凝固之后的上层液体，所以其中少了纤维蛋⽩原，凝⾎因⼦，多了很多凝⾎产物。
纤维蛋⽩原可转化为纤维蛋⽩，具有凝⾎功能。
在凝⾎过程中⾎⼩板会分泌⼤量的外泌体，有研究发现⾎清中有接近50%的外泌体来⾃额外的分泌。
⾎浆=⾎液-⾎细胞⾎清=⾎浆-纤维蛋⽩原-凝⾎因⼦所以⼀般实验选择⾎浆，在特殊情况下，如研究与⾎⼩板相关的疾病的时候，当然是⾎清更适合。
福利：福利：奥维森团队制作了《外泌体采样⽅案》，详细讲解各种样本的采样⽅法和送样标准，感兴趣的⼩伙伴可以留下邮箱，⼩编私发给你哦！测序分析篇Q1：外泌体sRNA测序，采取什么策略？A1:外泌体RNA特点，含量低（1-8ng/mL ⾎浆），⽚段短（25-200nt），以small RNA为主，含有少量rRNA /lncRNA/circRNA。
外泌体分离及纯化方法
外泌体分离及纯化方法我折腾了好久外泌体分离及纯化方法，总算找到点门道。
我一开始纯粹是瞎摸索。
最开始尝试的是超速离心法。
这就像是一场速度的竞赛，你得让那些外泌体在高速旋转下和其他物质分离开。
我当时设置离心机转速的时候可谨慎了，一边看着说明书，一边还担心会不会出啥差错。
这过程中，转速不能太快也不能太慢，就好像你在走钢丝一样，得找到那个平衡点。
我刚开始就弄错了转速，按照自己的想当然来了一次，结果嘛，根本没分离出啥有效东西，那一次算是彻底失败了。
后来仔细研究了好多文献资料，就像翻老祖宗的宝贝箱子一样，一个一个查看，才又重新尝试，成功分离出来一部分外泌体，但这个方法操作起来真的超级麻烦，稍微有个数据没调好，就可能功亏一篑。
我也试过沉淀法。
这个就像把水里的沙子和泥土沉淀下去一样，通过加一些特定的试剂，让外泌体沉淀。
但是这里头学问也大。
我记得刚开始没选对合适的试剂量，加得太多或者太少，得到的外泌体要么纯度不行，要么量少得可怜。
而且试剂和样本的混合我当时也没掌握好技巧，就直接倒进去搅和了一下，现在想想真是太草率了。
后来还试着从试剂盒里找办法。
那些试剂盒号称操作简单，就像组合玩具一样，只要按照步骤来就可以。
可是实际用起来发现也不是想象中的那么顺利。
有时候试剂盒的配套仪器没能校准好，又得重新开始，浪费不少样本。
说起来还有超滤法。
这就像是通过一道一道筛子，把外泌体筛出来。
但是这个筛子的孔径啥的得选好。
我有次选错了孔径的超滤膜，根本就没办法把杂质和外泌体有效分开。
而且在不同样本里面，这个孔径的选择可能还得有点小调整。
我觉得要是想做好外泌体的分离和纯化得小心再小心。
要是没有经验的话，像我最开始那样，得做好多次尝试失败的准备。
每一次失败其实都是在积累经验，你在分析为啥失败的时候，肯定能学到不少东西。
而且不管用啥方法，都得严格按照操作步骤来，千万别学我刚开始那样自己瞎搞。
外泌体在宫腔粘连中的作用机制研究进展
外泌体在宫腔粘连中的作用机制研究进展作者：潘重免归楠楠梁月秀来源：《右江医学》2024年第06期【关键词】外泌体；宫腔粘连；作用机制中图分类号：R711.7 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2024.06.015宫腔粘连（intrauterine adhesions，IUA）是宫腔良性疾病，但治疗的效果较差，对生育功能影响较大，严重影响女性的生殖生理及身心健康。
IUA发生的主要病理机制是子宫内膜纤维化和瘢痕形成［1］。
目前主要以手术治疗为主，但中、重度IUA因粘连紧密，术后约有60%的机会宫腔再粘连［2］，因此术后的辅助治疗很关键，研究者们提出激素、干细胞、宫内节育器、子宫球囊支架、子宫内膜类器官等方法［3-7］。
外泌体（EVs）是一种细胞外囊泡，广泛分布在尿液、血液、母乳和唾液等体液中［8］，EVs经胞吐作用从细胞中分泌出来，通过在不同细胞间转运因子和调节受体细胞中的生物途径参与多种生理和病理过程，如炎症、免疫紊乱、神经系统疾病和癌症［9］。
已有研究表明，EVs与IUA之间存在相关性，但确切的机制尚未明了，本综述旨在探讨EVs在IUA中的作用机制及研究进展。
1 EVs的概述EVs是一种细胞外小囊泡，具有30～150 nm厚度的脂质双层结构［10］，几乎所有的哺乳动物细胞类型均可分泌，虽然来源分布各不相同，但电镜下均为典型的杯状结构［11］。
EVs最初是在1978年由FRIEND及其同事发现［12］，之后逐渐在小鼠和猪的实验中证实存在［13-14］。
仅仅20年后，就被正式证明EVs不仅存在，而且还可以通过促进血管生成、肿瘤侵袭和免疫逃逸来影响肿瘤进展［15］。
不仅在肿瘤研究上发现EVs，早期也发现在孕妇体内EVs水平高于正常女性，与孕妇体内胎盘分泌EVs有关，这也为发育中的胎儿建立免疫特权［16］。
这些发现也使EVs在女性生殖系统中的研究逐渐增多。
有学者发现奶牛的早期胚胎丢失率很高，在研究奶牛子宫内膜功能时发现子宫内膜上皮细胞能分泌EVs，是奶牛成功妊娠所必需的［17］，之后很多学者在牛、羊等的子宫内膜中均发现有EVs［18-19］。
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外泌体研究一站式解决方案－丁香通
一、什么是外泌体？
外泌体是由细胞分泌的直径为30～150 nm 的小囊泡，内含来源于细胞相关的蛋白质与核苷酸等生物分子，在细胞交流间起重要作用。
具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能。
其具有以下特征：
◆ 典型的「杯托」形态
◆内含的核苷酸包括 DNA、mRNA、miRNA、lncRNA 等
◆几乎存在于所有的体液、组织及细胞间隙中
◆几乎所有的细胞都能分泌外泌体
◆不同细胞分泌的外泌体成分不同
二、外泌体有哪些功能？
外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNA、miRNA 等生物活性物质，在体内参与免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。
由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
三、如何分离外泌体？
外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。
如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加 FBS。
外泌体分离方法有很多种，包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。
但是这么多方法中，我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离，因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。
其他方法的特点如下：
1. 过滤离心：得率比较低
2. 密度梯度离心：步骤繁琐，得率较低
3. 免疫磁珠：特异性比较高，得率较低
4. 商用试剂盒：价格高，效果一般。
分离出的外泌体电镜和粒径效果差。
综合以上，超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。
四、如何鉴定外泌体？
外泌体鉴定是进一步研究外泌体功能和机制的工作基础。
目前的鉴定方法主要包括透射电子显微镜（TEM）进行形态学观察、纳米颗粒追踪分析（NTA）进行粒径和密度分析、用WB 进行蛋白标志物的鉴定。
WB 鉴定包括CD63、CD9、CD81、TSG101、Hsp70、syntenin1 等。
透射电镜图
纳米颗粒追踪分析
WB
如何研究外泌体？
外泌体的研究方向主要包括以下三个方面：
1. 寻找疾病诊断和预后的分子标志物。
2. 揭示疾病发病机制，从微环境角度解释细胞之间通讯促进疾病发生的原因。
3. 外泌体作为药物载体，实现靶向给药。
针对寻找分子标志物，通常的研究思路如下：
针对疾病研究，常见的研究思路如下（以外泌体miRNA 为例）：
编辑： z翟某某来源：丁香园。