血小板计数的参考方法
《诊断学》 第二节 血小板检测
第二节血小板检测血小板以其数量（血小板计数、血小板平均容积和血小板分布宽度）和功能（黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等）参与初期止血过程。
一、筛检试验（一）血小板计数见本篇第二章。
（二）血块收缩试验【原理】血块收缩试验（clot retraction test，CRT）是在富含血小板的血浆中加入Ca2＋和凝血酶，使血浆凝固形成凝块。
血小板收缩蛋白使血小板伸出伪足，伪足前端连接到纤维蛋白束上。
当伪足向心性收缩，使纤维蛋白网眼缩小，检测析出血清的容积可反映血小板血块收缩能力。
【参考值】①凝块法：血块收缩率（％）=[血清（ml）／全血（ml）×（100％-Hct％）]×10-0％，参考值：65．8％±11．0％。
②血块收缩时间（h）：2h开始收缩，18～24h完全收缩。
【临床意义】1．减低（<40％）见于特发性血小板减少性紫癜（ITP）、血小板增多症、血小板无力症、红细胞增多症、低（无）纤维蛋白原血症（hypo（a）fibrinogenmia）、多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）、原发性巨球蛋白血症（primarymacroglobtr1inemia）等。
2．增高见于先天性和获得性因子Ⅷ缺陷症等。
二、诊断试验（一）血小板相关免疫球蛋白测定【原理】血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin，PAIg）包括PAIgG、PAIgM、PAIgA，现以PAIgG 测定为例叙述。
将人抗IgG抗体包被在酶标反应板孔内，加入受检血小板破碎液，再加入酶标记的抗人IgG抗体，与结合在板上的PAIgG 相结合，最后加入底物显色，颜色深浅与血小板破碎液中的PAIgG的量成正相关。
受检者所测得的吸光度（A值）可从标准曲线中计算出血小板破碎液中的PAIgG含量。
近来用流式细胞术（FCM）和免疫荧光显微术测定日趋增多。
【参考值】ELISA法：PAIgG为0～78．8ng／107血小板；PAIgM为0～7．0ng／107血小板；PAIgA为0～2．0ng／107血小板；FCM：一般<10％（应建立本实验室的参考值）。
检验科血常规五分类标准
检验科血常规五分类标准摘要：血常规检验是临床常用的检验项目之一，通过测试血液中各类细胞的数量和形态，可以提供有关人体血液功能、机能和病理状态的重要信息。
本文将对血常规检验的五分类标准进行详细解析，包括红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数和血细胞比容。
一、红细胞计数红细胞计数是指在单位体积内的红细胞数量。
正常成年男性红细胞计数参考值为（4.3-5.8）× 10^12/L，成年女性参考值为（3.5-5.0）× 10^12/L。
高于正常范围可能是骨髓增生异常或其他疾病的表现，低于正常范围可能是贫血的表现。
二、白细胞计数白细胞计数是指在单位体积内的白细胞数量。
正常白细胞计数参考值为（4.0-10.0）× 10^9/L。
高于正常范围可能是感染、炎症、白血病等疾病的表现，低于正常范围可能是某些化疗药物的副作用或其他疾病的表现。
三、血红蛋白浓度血红蛋白浓度是指单位体积内的血红蛋白含量。
正常血红蛋白浓度参考值为（110-150）g/L。
高于正常范围可能是慢性骨髓增生性疾病或其他疾病的表现，低于正常范围可能是贫血或出血疾病的表现。
四、血小板计数血小板计数是指在单位体积内的血小板数量。
正常血小板计数参考值为（100-300）× 10^9/L。
高于正常范围可能是炎症、感染或骨髓造血异常的表现，低于正常范围可能是出血性疾病的表现。
五、血细胞比容血细胞比容是指单位体积内红细胞所占的比例。
正常血细胞比容参考值为（37-47）%。
高于正常范围可能是红细胞增多症的表现，低于正常范围可能是失血或贫血的表现。
结论：血常规检验是临床上常用的检验方法之一，通过对红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数和血细胞比容的测试，可以获取有关人体血液情况的重要信息。
根据相应的参考范围，可以判断患者是否存在贫血、感染、炎症等疾病，并为医生提供更准确的诊断依据。
关键词：血常规、红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、血细胞比容。
血小板计数的参考方法
血小板计数的参考方法1、范围本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。
本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。
2、规范性引用文件国际血液学标准化委员会（ICSH）-2001血小板计数的参考方法3、定义参考方法（Referencemethod）一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。
医学教|育网搜集整理若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。
参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。
4、总则4.1本标准采用间接法计数血小板（Platelet，PLT）。
即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞（Redbloodcell，RBC）和PLT的比值，同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。
4.2为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。
5、血小板计数参考方法的原理首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。
溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度，用流式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的位置，以检测出RBC和PLT的比值。
用RBC的计数值除以RBC/PLT的比值计算出PLT计数值。
6、血标本6.1用合乎要求的塑料注射器或真空采血系统采集健康人的静脉血标本。
6.2标本的收集要求使用EDTA二钾为抗凝剂，抗凝剂的浓度为3.7至5.4umol/ml血（1.5～2.2mg/ml血）。
6.3盛有标本的试管应有足够的剩余空间以便于血标本的混匀操作。
6.4标本中不能有肉眼可见的溶血或小凝块。
6.5标本置于18℃～22℃室温条件下，取血后4小时之内完成检测。
6.6为了保证RBC和PLT分布的均一性，在预稀释和加标记抗体前动作轻柔地将采血管反复颠倒，充分混匀标本。
血小板
页
形态改变
病理性幼稚型血小板
☆体积较大，呈圆形，胞膜无丝状“树突”伸出， 胞质蓝色，颗粒缺乏，为未成熟巨核细胞所脱落；
☆正常人见不到。
☆↑：见于特发性和反应性血小板病。
☆当骨髓巨核细胞增生时，尤其在特发性血小板减 少性紫癜出现PLT减少危象和粒细胞性白血病时， 可以见到大量蓝色和巨大的血小扳。
形态改变
方法学评价
优点：重复性好，准确性高，能同时提供血小板 缺点：仪器不能区分PLT与其他类似大小的物
质，如：RBC碎片、WBC碎片、灰尘等
杂物。因此，有时仍需目视法做校正，
因而国外仍然将目视法（特别是相差显
微镜法）作为参考方法。
目视计数法
目 视 显 微 镜 计 数 法 普 通 显 微 镜 法 直接法
ACD保养液
【质量保证】
原则：避免血小板被激活、破坏，杂物污染。
1.检测前 （1）采血是否顺利：采血时血流不畅可导致血小 板破坏，使血小板计数假性降低； （2）选用的抗凝剂是否合适：肝素抗凝不能用于 血小板计数；EDTA-2K抗凝血标本取血后1h内 结果不稳定，少数患者可引起血小板聚集； （3）储存时间是否适当：标本保存于室温，低温 可激活血小板，储存时间过久可导致PLT计数 偏低。
Plt计数
血小板计数（目视计数法）
•原 理：
P P P P P
• 与白细胞计数基 本相同。 • 不同点：计数中 央大方格内5个 中方格的Plt数。
Plt计数
血小板计数（目视计数法）
• 国内最常用的血小板直接计数法: • 1、草酸铵溶血法（首选） • 2、复方尿素溶血法 （次选） • 无论是自动血液细胞分析仪法或显微镜计 数法，多以草酸铵溶血法作为参考方法， 国内将其作为首选方法。
血小板计算公式
血小板计算公式血小板计算公式是通过测量血液中的血小板数目来评估一个人的血小板功能和疾病状态的一种方法。
血小板是人体中的一种细小的细胞碎片，主要起到止血和血栓形成的作用。
正常的血小板计数范围通常在150-450 × 10^9/L之间。
血小板计算公式的基本原理是通过测量血小板在显微镜下的数量来估算患者的总血小板数。
这种测量方法简便快捷，可以帮助医生更准确地判断患者的血小板状况和疾病风险。
血小板计算公式的计算公式如下：血小板计数（计算）= 平均每个小方格中的血小板数× 10 × 显微镜倍数× 血液稀释倍数其中，平均每个小方格中的血小板数是指在显微镜下观察到的血小板数目的平均值。
显微镜倍数是指使用显微镜观察血液标本时所使用的放大倍数。
血液稀释倍数是指将血液标本与药液稀释后的倍数。
现在，让我们详细了解一下每个参数的具体含义。
首先，平均每个小方格中的血小板数是通过在显微镜下观察到的血小板数目计算得出的。
在仔细观察血液标本时，我们可以清晰地看到许多小方格，每个小方格内有多个血小板。
通过统计多个小方格内的血小板数目，求得平均数，可以更准确地得到每个小方格中的血小板数。
其次，显微镜倍数是指使用显微镜观察血液标本时所使用的放大倍数。
不同的显微镜具有不同的放大倍数，而不同的放大倍数会影响到我们观察到的血小板数目。
因此，在进行血小板计算时，需要根据所使用的显微镜倍数进行相应的调整。
最后，血液稀释倍数是指将血液标本与药液稀释后的倍数。
稀释血液标本可以帮助我们更清晰地观察到血小板，从而提高计算的准确性。
在计算时，我们需要考虑到血液稀释倍数对最终的计算结果的影响。
通过使用血小板计算公式，医生可以更加准确地评估患者的血小板功能和疾病状态。
根据不同的计算结果，医生可以及时采取相应的治疗措施，以降低患者的血小板病风险。
同时，血小板计算公式也可以为科学研究提供重要参考数据，帮助科研人员深入探索血小板相关的疾病机制。
血小板计数参考方法
血小板计数参考方法血小板计数是衡量一个人血液中血小板数量的一个重要指标。
血小板是血液中的细胞片段，主要功能是在凝血过程中起到重要的作用。
正常血小板计数范围可以根据不同的性别、年龄和健康状况而有所不同。
以下是一些常见的血小板计数参考方法。
1.血常规检查：血常规检查是最常用的测量血小板计数的方法之一、这种方法通过机器自动计数血液中的血小板数量，并以每立方毫升血液中的计数来表示。
正常血小板计数范围通常为150,000-450,000个/微升。
2.骨髓检查：骨髓检查是通过从骨髓中取样来验证和评估血小板计数的方法之一、这种方法可以进一步了解血小板的生成和释放情况，帮助医生确定是否存在任何骨髓异常导致血小板计数增加或减少的原因。
3.血脂检测：血脂检测是通过测量患者血液中的胆固醇和脂蛋白水平来评估血小板计数的方法之一、高血脂症的患者往往有较高的血小板计数，因为血脂异常可以导致血小板活化和聚集。
4.家族史：有些遗传病和疾病会导致血小板计数异常。
了解患者的家族史可以帮助医生确定是否存在潜在的遗传因素导致血小板计数的变化。
5.疾病病史：一些疾病和病症会导致血小板计数异常。
例如，白血病、骨髓纤维化和自身免疫性血小板减少性紫癜等疾病通常伴随着血小板计数的减少。
另一方面，感染、炎症和创伤可能导致血小板计数升高。
6.生活方式和饮食：生活方式和饮食也可能影响血小板计数。
抽烟、饮酒、使用一些药物和摄入不平衡的饮食可能会导致血小板计数异常。
总之，血小板计数是评估一个人血液系统健康状况的重要指标之一、通过血常规检查、骨髓检查、血脂检查、家族史和疾病病史等方法，可以对血小板计数进行评估，并帮助医生确定是否存在任何潜在的异常或疾病。
对于血小板计数异常的患者，及时的诊断和治疗非常重要，以维持血液系统的正常功能和健康。
血小板检查
南华大学 University of South China
南华大学 University of South China
南华大学 University of South China
31，血小板直方图异常（血小板聚集引起的除外），应该涂片镜检。 32，有不成熟粒细胞（仪器图像判断），且为首次检查时，应该涂片镜检。 33，有不成熟粒细胞（仪器图像判断）， 34，有核左移的图像（仪器图像判断或者提示），应该执行实验室SOP。 35，有异型（变异）淋巴细胞图像（仪器提示有异淋），且为首淋），以前证实过结果，但是 WBC阳性差值失败，应该涂片镜检（希望专家能解释一下本条规则---译者）。 37，有原始细胞图像（仪器提示有原始细胞），且为首次检查时，应该涂片镜检 。 38，有原始细胞图像（仪器提示有原始细胞），以前证实过结果，差值通过或者 对WBC有阴性差值，且在3-7天内检查，应该执行实验室SOP。
南华大学 University of South China
经验教训：
1、初次到本院检查，血小板<50X109/L的，不管机器是否报“聚集”， 必须进行目测血小板检查。用的就是临检操作规程上的目测方法。看看 有没有聚集，没有聚集就可以发送了。 2、主要仪器报“聚集”，需要重点关注。 2.1此时需进行目测血小板，计数盘中血小板聚集成团，不能计数。 2.2马上通知病人用枸橼酸抗凝管采血，进行全血细胞分析，一般情况 下血小板计数恢复正常。 2.3告知病人以后做血常规不能用“紫管”，要用“蓝管”。
坏红细胞。 高铁氰化钾：不能完全破坏红细胞。 复方碘：不破坏红细胞，易长菌，已淘汰。
血小板计数临床意义
血小板计数临床意义
参考范围：(100～300)×109/L
临床意义
1.血小板减少
(1)血小板生成减少再障、急性白血病、骨髓转移瘤、骨髓纤维化。
(2)血小板破坏过多特发性(自身免疫性)血小板减少性紫癜、脾
功能亢进、体外循环。
(3)血小板分布异常脾肿大、各种原因引起的血液稀释。
(4)其他疾病弥散性血管内凝血、阵发性睡眠血红蛋白尿症、某
些感染(如伤寒、黑热病、麻疹、出血热多尿期前、传染性单核细胞增
多症、粟粒性结核和败血症)、出血性疾病(如血友病、坏血病、阻塞
性黄疸、过敏性紫癜)。
(5)用药药物中毒或过敏引起。
如甲砜霉素有骨髓抑制作用，可
引起血小板减少;抗血小板药噻氯匹定、阿司匹林也可引起血小板减少;应用某些抗肿瘤药、抗生素、磺胺药、细胞毒性药可引起血小板减少。
2.血小板增多
(1)疾病见于原发性血小板增多症、慢性粒细胞性白血病、真性
红细胞增多症、多发性骨髓瘤、骨髓增生病、类白血病反应、霍奇金病、恶性肿瘤早期、溃疡性结肠炎等。
(2)创伤急性失血性贫血，脾摘除术后、骨折、出血后，可见一过性血小板增多。
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WS 中华人民共和国卫生行业标准
WS/T 244—2005
___________________________________________________
血小板计数的参考方法
Reference method for platelet counting
2005-5-16发布2005-12-1实施
___________________________________________________________中华人民共和国卫生部发布
WS/T 244-2005
前言
为了保证血小板的计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。
本标准从2005年5月16日起实施。
本标准由卫生部医政司提出。
本标准起草单位：卫生部临床检验中心
本标准主要起草人：彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。
本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。
中华人民共和国卫生行业标准
血小板计数的参考方法WS/T 244—2005 Reference method for platelet counting
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1 范围
本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。
本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。
2 规范性引用文件
国际血液学标准化委员会（ICSH）-2001 血小板计数的参考方法
3 定义
参考方法（Reference method）
一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。
若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。
参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。
4 总则
4．1本标准采用间接法计数血小板（Platelet，PLT）。
即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞（Red blood cell，RBC）和PLT的比值，同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。
4. 2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。
5 血小板计数参考方法的原理
首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。
溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度，用流式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的
位置，以检测出RBC和PLT的比值。
用RBC的计数值除以RBC/PLT的比值计算出PLT计数值。
6血标本
6．1 用合乎要求的塑料注射器或真空采血系统采集健康人的静脉血标本。
6．2 标本的收集要求使用EDTA二钾为抗凝剂，抗凝剂的浓度为3.7至5.4 umol/ml血（1.5~2.2 mg/ml 血）。
6．3 盛有标本的试管应有足够的剩余空间以便于血标本的混匀操作。
6．4标本中不能有肉眼可见的溶血或小凝块。
6．5 标本置于18℃~22℃室温条件下，取血后4小时之内完成检测。
6．6 为了保证RBC和PLT分布的均一性，在预稀释和加标记抗体前动作轻柔地将采血管反复颠倒，充分混匀标本。
勿使用混匀器对标本进行混匀。
7 容器和器皿
为避免血小板黏附于储存容器或稀释器皿上，在标本检测的整个过程中必须使用聚丙烯或聚苯乙烯容器，不得使用玻璃容器和器皿。
8仪器的性能
8．1使用流式细胞仪，通过前向角散射光和荧光强度来检测PLT和RBC。
仪器在检测异硫氰酸荧光素标记的直径为2μm的球形颗粒时必须有足够的敏感度。
8．2用半自动、单通道、阻抗原理的细胞计数仪检测RBC，仪器小孔管的直径为80~100μm，小孔的长度为直径的70%至100%，计数过程中吸入稀释标本体积的准确度在1%以内（溯源至国家或国际计量标准）。
9试剂
9．1 稀释液：用磷酸盐缓冲液（PBS）作为稀释液，浓度为0.01mol/L，pH值7.2~7.4，含0.1%的牛血清白蛋白（BSA），配制方法如下：
9.1.1将1.15g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4；化学分析纯，；分子量为142.0）加到约750ml去离子水或蒸馏水中并使之溶解。
9.1.2向210mg磷酸二氢钾(KH2PO4 ；化学分析纯，分子量为136.1)，8.0g氯化钠（NaCl；化学分析纯，分子量为58.44），200mg氯化钾（KCl；化学分析纯，分子量为74.55）和1.0 g BSA的混合物中加入去离子水或蒸馏水至1000ml。
保存于4℃~8℃条件下。
9.1.3用低附着性的平均孔径在0.20~0.25μm之间的滤膜过滤。
9．2 染液：使用异硫氰酸荧光素标记的CD41和CD61抗体，这两种抗体可以与
血小板膜糖蛋白Ⅱ
b /Ⅲ
a
复合物结合，用于检测血小板。
实验室应确认该批号抗体是否能得到足够的染上荧光的血小板。
抗体应能得到足够高的血小板的荧光信号以便通过log FL1(528nm处的荧光强度)对log FS (前向角散射光)的图形分析，将血小板从噪声、碎片和RBC中分辨出来。
10 检测过程
10.1用加样器加5μl充分混匀（至少轻柔颠倒标本管8次）的血标本于100μl 已过滤的PBS-BSA稀释液中。
10.2加5μl CD41抗体和5μl CD61抗体染液，在室温18℃~22℃、避光条件下放置15分钟。
10.315分钟后，加4.85ml PBS-BSA稀释液制备成1:1000的稀释标本，轻轻颠倒混匀以保证PLT和RBC充分混匀。
10.4用流式细胞仪检测时，应至少检测5000个信号，其中PLT应多于1000。
流式细胞仪的设定必须保证每秒计数少于3000个信号。
如果同时收集到RBC散射光的信号和血小板的荧光信号应被视为RBC-PLT重叠，计数结果将被分别计入RBC和PLT。
直方图或点图均可被采用，但推荐使用点图。
检测过程中推荐使用正向置换移液器。
11 RBC浓度的计数法
据中华人民共和国卫生行业标准WS/T XXX-2003：红细胞和白细胞计数的参考方法。
12 血小板计数值的确定
使用流式细胞仪确定RBC/PLT的比值
R=RBC/PLT
用RBC数除以R值得到PLT计数值
13 重叠
一旦设定了理想的检测条件，则不须再次进行重叠计数的校准。
14 不精密度
血小板检测结果的不精密度（CV）要求≤3%。
编制说明
制定本标准的依据是国际血液学标准化委员会（ICSH）颁布的文件《血小板计数的参考方法》。
在制订本标准的过程中，以书面形式征求了专家意见并召开了专家研讨会，根据专家意见对本标准进行了修改。
本标准的制订对于在我国直接建立血小板计数的国际标准，保证血小板计数检测结果的溯源性具有重要意义。
意见汇总处理表。