免疫组织化学检验技术.ppt
免疫检验质控PPT医学课件
内容
第一节 分析前质量控制 第二节 分析中质量控制 第三节 分析前质量控制
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概述
质量保证 是临床实验室为证明提供给患者临床诊 疗或临床实验研究数据的有效性而采取的一系列措 施，涵盖了实验室内进行检测前后的所有活动。
临床免疫学检验既有手工操作、定性或半定量的试
验，也有以各种新技术、新方法为基础的自动化仪
一、检验项目的申请 检验申请是检验流程的重要环节，其信息规范性
与完整性对后续检验流程十分重要。申请有纸质 和电子形式或两者同时使用等方式。
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（一）申请单格式和填写
按照国家相关规定，检验申请单基本信息应至少包 括：受检者唯一性标识，如姓名、性别、年龄、科 别、病房、门诊号／住院号等；临床诊断或疑似诊 断；标本类型；检验项目；送检日期（年、月、日） 及标本采集时间与标本接受时间；申请者唯一标识 （医师签字）；收费／记账以及检验号等。检验申 请单的填写内容要规范、完整，以保证为后续检验 流程提供必需的信息。
三、标本的采集、传送与保存
（一）标本的采集
对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要 注意收集时间及体位对测定结果产生的影响。如可 的松在早晨4:00～6:00之间，会有一峰值出现；生 长激素、促黄体激素 (LH)和促卵泡激素(FSH)均以 阵发性方式释放；当从卧位变为站立位时，血清中 肾素活性将出现明显增高；治疗药物的监测，应根 据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。
5．靶值或预期结果已定。
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应选用制造商提供了溯源性的产品
为保证临床免疫检测结果的可比性，针对已建立国际标准 的检测项目，应要求所选用检测系统的制造商提供溯源性 文件，即证明通过该检测系统的检测结果，通过校准品可 逐级溯源到国际参考物质(international reference material)。通常国际参考物质为一级标准品，国家标准 品则为二级标准，可溯源至一级标准，二级标准可用来维 持校准。三级标准品则通过与二级标准的比对而来，为通 常使用的商品校准品。
免疫组织化学染色技术PPT课件
1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系 统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物 质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性 结合反应的物质。抗原具有两种性能：
（1）免疫原性（immunogenicity） 指抗原分子 具有诱导机体产生免疫应答的特性。
（ 2 ） 反 应 原 性 （ reactogenicity ） 指 抗 原 分 子 与 抗体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反 应的特性。
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2. 抗原的分类
免疫学分类
完全抗原、半抗原 胸腺依赖抗原与非依赖抗原
临床分类
外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿
瘤相关抗原等 同种异型抗原：人类白细胞抗原、
血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物
等之间存在的共同抗原7
• 抗体（antibody）
1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答， B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白， 称为抗体。
间接法：是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和 性的某种分子上，检测组织或细胞内的特异性抗原物质。
间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特
异性抗体，多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠
制备的单克隆抗体。
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第二抗体是第一抗体的抗体，所以只要不同的 第一抗体均来自同一种属动物，与标记的第二抗 体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这 样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。 通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量， 可提高免疫组织化学染色的敏感度。
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尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上，组织有不同
免疫组织化学技术的原理及方法
❖单克隆抗体：针对某一抗原决定簇， 由单株淋巴细胞（克隆）所产生的 抗体
多克隆抗体与单多克隆抗体及其产生
多克隆抗体的产生
❖ 以纯化的抗原免疫动物而获得，实际上是针对多个抗原决定 簇的多个抗体组成，检测范围广。在病理诊断 中，有利划归 肿瘤的基本类型。
酶标亲和素
在AB复合物中，酶是标记 在生物素上，而后与亲和素 合成复合物。在标记的亲和 素-生物素方法中是将辣根 过氧化酶直接标记在亲和素 上，辣根过氧化酶与亲和素 间有极强的结合力，因此 LSAB法比ABC法更敏感
多聚物载体
1、 核心是一种柔韧的多聚物，它能结合一抗和酶分 子，起到载体的作用
2、 一步法多聚物载体试剂是多聚物结合特异性一抗 和辣根过氧化酶，二步法多聚物载体试剂是一种能 与二抗相联结的由HRP标记的多聚物
显示系统
辣根过氧化酶的免疫组化染色的反应过程: HRP + H2O2 →HRP·H2O2 →有色分子终末产
物+ HRP DAB（电子供体） HRP：酶 H2O2：底物 HRP·H2O2：酶·底物复合物
显示系统
免疫过氧化酶染色的多种方法中，其主要的不同点 在于显色系统的差异： ❖ 间接酶标法：利用标记于桥联抗体的酶 ❖ PAP法： 利用PAP复合物 ❖ ABC法： 利用AB复合物 ❖ LSAB法: 利用直接标记于亲和素的酶 ❖ EPOS一步法及EnVision二步法：多聚物载体
标记抗体
1、在抗体上用化学方法联接某种标记物，目的是使抗原抗体 的结合能用肉眼观察到
2、标记物种类：荧光素：异硫氰酸荧光素或罗丹明 酶：辣根过氧化酶，碱性磷酸酶 金属离子：胶体金颗粒
3、标记的方法：化学性结合将降低抗体效价及标记物的活性， 从而使染色敏感性降低
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第十三章免疫组织化学技术
第十三章免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。
第一节概述免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果。
一、标本的处理（一）标本的主要来源1.活体组织：应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中。
减少对组织标本的损伤与挤压。
2.体液、穿刺液：可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。
3.培养细胞：悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定。
（二）标本的固定与保存1.标本固定的目的：使细胞内蛋白质凝固，细胞内分解酶反应终止，以防止细胞自溶，保持细胞形态和结构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存；抑制组织中细菌的繁殖，防止组织腐败和在后续组织制备中的细胞结构和成分的改变。
标本的固定应以不损伤细胞形态，不干扰固定后抗原的识别和结合为原则。
2.固定剂的选择：蛋白质类抗原，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需除去病毒的蛋白质外壳，可使用胰蛋白酶；多糖类抗原用10%福尔马林固定或以微火加热固定；如有黏液物质存在，应用透明质酸酶等处理除去；类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂（乙醚、丙酮等）处理除去类脂。
组织标本常规固定液为中性缓冲甲醛。
3.制片方法的评价：冷冻和石蜡切片是免疫组化最常用的制片方法。
首选冷冻切片。
其操作简便，可避免石蜡切片因固定（甲醛）、脱水、浸蜡等对抗原所造成的损失，适用于不稳定的抗原。
石蜡切片是研究形态学的主要制片方法，它不但是观察组织细胞结构的理想方法，而且可用在陈旧石蜡包埋材料免疫组化的回顾性研究。
免疫组织化学检验技术
免疫组织化学检验技术免疫组织化学检验技术的发展和应用一、引言免疫组织化学检验技术是一种重要的生物医学实验技术，通过对组织样本中特定抗原的检测，可以帮助医生诊断病变组织或肿瘤类型，以及评估其分子表达水平。
本文将从免疫组织化学检验技术的基本原理、发展历程以及应用领域等方面综述相关知识。
二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术是一种建立在免疫学原理基础上的组织学检测方法。
其基本原理是通过使用专门设计的抗体与标记物的结合来检测组织样本中的特定蛋白质。
常用的标记物包括酶、荧光染料等，可以使抗原表达区域呈现显色或发光的现象，进而实现对组织中抗原的定性或定量分析。
三、免疫组织化学检验技术的发展历程免疫组织化学检验技术的发展经历了多个重要的里程碑。
早在20世纪50年代，Papst和Russell等学者首次使用抗体来检测肿瘤细胞蛋白质的表达。
从那时起，免疫组织化学检验技术逐渐成为研究和诊断领域中不可或缺的工具。
随着抗体和标记物的不断改进以及细胞和分子生物学的进展，免疫组织化学检验技术也日益完善。
四、免疫组织化学检验技术的应用领域免疫组织化学检验技术在生物医学领域中有着广泛的应用。
在肿瘤病理学中，免疫组织化学检验技术可以用来确定不同类型的肿瘤，并分析其分子表达特征。
在研究某些重要蛋白质表达与疾病关系的基础研究中，免疫组织化学检验技术可以帮助寻找新的生物标志物，促进疾病的早期诊断和治疗。
该技术还可以用于药物研发过程中的药物靶点评估、药效评估以及药物安全性评估等方面。
五、个人观点和理解免疫组织化学检验技术作为一种重要的生物医学实验技术，对于促进人类健康和疾病治疗具有重要意义。
通过使用免疫组织化学检验技术，我们可以更加准确地诊断患者的疾病类型，并对其进行个体化的治疗。
免疫组织化学检验技术还可以帮助我们深入了解蛋白质的分子机制，促进生物医学研究的进展。
总结与回顾本文主要介绍了免疫组织化学检验技术的基本原理、发展历程以及应用领域。
免疫组织化学技术
免疫组织化学技术应⽤：细胞表⾯成份的研究胶体⾦技术与冷冻蚀刻技术结合-细胞膜蛋⽩颗粒或其它膜成份进⾏精细定位电镜原位杂交技术，能够在超微⽔平上精确定出基因位点免疫胶体铁细胞化学染⾊法胶体铁是⼀种阳离⼦胶体，将抗体分⼦标记上胶体铁，通过普鲁蓝反应呈⾊，胶体铁颗粒有⼀定⼤⼩，还具有⼀定电⼦密度，可⽤在电镜和光镜⽔平的抗原定位研究。
酶免疫电镜技术酶免疫电镜技术是利⽤酶的⾼效率的催化作⽤对其底物的反应形成不同的电⼦密度，借助于电⼦显微镜观察，证明酶的存在，从⽽对抗原进⾏定位。
第六节免疫组化技术的应⽤⼀、免疫组织化学技术的临床应⽤荧光免疫组织化学技术的应⽤⾃⾝抗体的检测游离在外周⾎中的抗体固定在组织中的的抗体HEP-2细胞抗着丝粒抗体的阳性显⾊肾⼩球抗基底膜抗体的阳性显⾊细菌、病毒的快速鉴定藤黄微球菌绿⾊-活菌红⾊-死菌寄⽣⾍的检测与研究猴胚肾细胞内⼸形⾍繁殖吖啶橙染⾊绿⾊-DNA红⾊-RNA恶变组织中肿瘤抗原的检测⼈肝癌细胞吖啶橙染⾊其他：免疫荧光技术也应⽤于⾎液中B细胞和T细胞及其亚群的鉴定、特殊染⾊体的鉴定、激素和酶的局部组织定位等⽅⾯。
酶免疫组织化学技术的应⽤提⾼病理诊断准确性（HE可观察到炎性细胞浸润，ED1染⾊可观察到巨噬细胞浸润）Survivin在肝癌细胞核的表达癌基因蛋⽩的临床应⽤对肿瘤细胞增⽣程度的评价Ki67在⼩肝癌组织中的表达肿瘤转移分期判断肿瘤的靶向治疗辅助诊断免疫性疾病和感染性疾病，观察免疫复合物沉积状况⼆、免疫组织化学技术的拓展荧光激活细胞分类仪（FACS）FACS是将免疫荧光与细胞⽣物学、流体⼒学、激光和微机信息处理系统等多学科的⾼新技术融为⼀体，进⾏细胞和分⼦⽔平的基础理论与应⽤研究的⼀种先进仪器FACS原理⽰意图488nmlaser+-FluorescenceActivatedCellSortingChargedPlatesSin glecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector共聚焦显微镜技术的应⽤“细胞CT”！激光扫描共聚焦显微镜(LaserScanningConfocalMic roscope，简称LSCM)⼯作原理共轭光路使⾮焦平⾯的光线被抑制，减少了⼲扰，以及使⽤光⾊较纯的激光，所以成像分辨率更⾼增加了激光扫描部分，可连续、固定范围内⼩功率扫描，记录动态变化光学结构为共轭聚焦结构，此结构可使样品中间固定层⾯被激光扫描，通过调节参数可实现样品的多层扫描，俗称“细胞CT”⼀般荧光显微镜（左）与激光共聚焦显微镜（右）的区别LSCM应⽤⼴泛罗丹明123染细胞线粒体细胞器研究-籍特异性荧光探针。
免疫组织化学检验技术
免疫组织化学检验技术一、免疫组织化学检验技术简介免疫组织化学检验技术（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，它利用抗原-抗体的特异性结合反应，检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质。
该技术可用于疾病的诊断、病理学研究、药物靶点筛选等多个领域。
二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术的核心是抗原-抗体的特异性结合反应。
这种反应基于抗体和抗原的互补性，即抗体分子中的抗原结合部位能够与抗原分子中的互补部位结合。
在免疫组织化学检验中，将组织或细胞固定在载玻片上，然后加入特异性抗体，通过孵育反应，抗体与组织或细胞中的抗原结合。
随后加入显色剂进行显色反应，根据显色情况判断是否存在相应的抗原。
三、免疫组织化学检验技术的应用例子1.肿瘤诊断：免疫组织化学检验技术可用于肿瘤诊断，通过检测肿瘤组织中的特异性抗原，如癌胚抗原、糖类抗原等，有助于确定肿瘤的性质和分化程度。
例如，乳腺癌患者的肿瘤细胞可能表达ER、PR、HER2等基因蛋白，通过检测这些蛋白的表达情况，有助于指导治疗和判断预后。
2.感染性疾病诊断：免疫组织化学检验技术也可用于感染性疾病的诊断，例如检测病毒抗原、细菌抗原等，有助于确定感染的病原体种类。
例如，在流感病毒感染中，通过检测病毒核蛋白抗原，有助于确诊病毒感染。
3.药物靶点筛选：免疫组织化学检验技术还可用于药物靶点筛选，通过检测目标蛋白在组织或细胞中的表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。
例如，在寻找治疗肿瘤的新药时，可利用免疫组织化学技术检测肿瘤细胞中的各种蛋白表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。
四、免疫组织化学检验技术的优缺点1.优点：具有高特异性、高灵敏度、操作简便、易于定量等优点。
同时，免疫组织化学检验技术可以用于检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质，有助于深入探讨疾病的发病机制和病理过程。
2.缺点：可能会出现非特异性染色和交叉反应，影响结果的准确性。
第12章免疫组织化学技术
抗原的保存与修复
酶消化法
盐酸水解法 高压锅法
常用的抗原 暴露、修复
方法
微波法 煮沸法
抗体的处理与保存
抗体的选择： 应注意选择具有高度特异和稳定的抗体，根据需要决定采用 单克隆或多克隆抗体。 抗体的稀释： 抗原抗体反应要求有合适的比例，过量或不足均不能达到预 期结果。 抗体的保存 ： 在保存抗体时，要特别注意保持抗体的生物活性，防止抗体 蛋白质变性。
酶标记抗体免疫组织化学染色
直接法：将酶直接标记在特异性抗体上，与组织细胞内 相应的抗原进行特异性反应，形成抗原-抗体-酶复合物，最 后用酶底物显色。
间接法：将酶标记在第二抗体上，先将第一抗体（特异 性抗体）与相应的组织抗原结合，形成抗原抗体复合物，再 用第二抗体（酶标记的抗体）与复合物中的特异性抗体结合 ，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色 。
临床免疫学与免疫学检验
第十二章 免疫组织化学技术
免疫组织化学技术（immunohistochemistry technique）又 称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞 原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原 进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。
根据标记物的不同，免疫组织化学技术可分为：
第四节 免疫标记电镜技术
原理
利用高电子密度的颗粒性标记物（如胶体金、铁蛋白等 ）标记抗体，或用经免疫组织/细胞化学反应能产生高电子密 度产物者如HRP标记抗体，在电子显微镜下对抗原抗体反应 中的高电子密度标记的抗原（抗体）进行亚细胞水平定位的 技术。
相较于其他免疫组织化学技术是在光镜下进行抗原定位 ，免疫标记电镜技术在电子显微镜下的定位更为精确，可定 位至细胞膜、细胞器，在探索病因、发病机制、组织发生等 方面有其独特的优点。
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第一节 免疫组化检验技术基本知识
免疫组化全过程
一、标本制作
• 标本制作是获得良好的免疫细胞组织化学分析的保障，良好的细胞 和组织学结构将有助于抗原的准确显示和定位。
（一）标本的主要来源 主要有： ①活体组织 ②各种体液及穿刺液 ③培养细胞等
（二）标本的固定与保存
1．组织材料的固定目的
①防止组织细胞的死后变化，以保持其固有形态 ②使细胞内的蛋白质等各种抗原成份转变成不溶性 物质，以保持它原有的结构 ③使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同 的折射率，以便染色后易于鉴别和观察 ④固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，便于制片 ⑤防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构 ⑥经过固定的组织能对染料产生不同的亲和力而着 色清晰，便于辨认。
（四）切片方法的选择
二、抗原处理
（一）进行抗原的暴露和修复的原因
1.固定液的影响 2.抗体制备的影响
（二）抗原的暴露
主要采用酶消化的方法 在选择酶消化时，应针对要显示的不同的抗原成分而选用不同的 酶 在日常工作中用胰蛋白酶消化即可
（三）热诱导的抗原修复
抗原修复是以高温、高压对常规固定石蜡切片进行抗原修复以提 高抗原抗体的阳性检出率 • 微波处理法 • 水浴锅法 • 压力锅法
酶标记抗体免疫组织化学染色法 非标记抗体酶免疫组织化学染色法
二、酶标记抗体的免疫组化染色法
（一）原理 酶标记抗体的免疫组织化学染色法是借助交联剂的共价键作用
将酶直接连接在抗体（或抗抗体）上，酶标抗体（或抗抗体）与 组织内特异抗原或抗原抗体复合物反应后，通过酶对底物的催化 作用，生成不溶性有色产物并沉淀在特定位置，达到对抗原定性、 定位、定量检测的目的。
（三）阴性结果
阴性结果不能简单视为抗原不表达，由于染色方法灵敏度有高低之 分，有时可因灵敏度不够，而导致阴性反应。
（四）特异性显色和非特异性显色的鉴别
1.分布位置 特异性反应必须分布于特定抗原部位 非特异性反应无一定的分布规律
2.显色强度
特异性反应由于细胞内抗原含量不同，显色强度不一。阳性细胞的 染色常定位于细胞，并与阴性细胞间有明显间隔
4.自身对照
是指在同一标记切片上的自身组织成分的阴性背景对照。
（二）阳性结果
• 阳性细胞的显色可位于细胞膜、细胞质和细胞核 • 免疫显色强度和阳性细胞密度是定性、定量指标 • 阳性细胞的着色形态（如胞膜型、胞核型、胞质(浆)型等）及组织分
布特点（如局灶型、弥漫型、片块型等）主要是定位指标 • 哪怕只有少数细胞阳性（只要是抗原所在部位）也应视为阳性表达
（二）技术类型
1.酶桥法
用辣根过氧化物酶（HRP）免疫动物（如兔）制备抗HRP的抗体 （Ab3），经Ab2（如羊抗兔）作桥，将结合在组织抗原上的Ab1(兔 抗相应组织抗原的抗体)与Ab3连接起来，最后将HRP与Ab3结合形成 Ag-Ab1-Ab2-Ab3-HRP复合物，加底物显色
2．固定剂的选择 最佳固定剂的标准 ①最好地保持细胞和组织的形态结构 ②最大限度地保存抗原的免疫活性 3．固定方法 固定方法常用 ①浸泡法—主要适用于活检和手术标本以及其它不能进行灌注的组织 固定。 ②灌注法—适用于动物实验研究。
（三）玻片的处理
玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤之一
一般用免疫组织化学的载玻片均需涂一定的黏合剂，常用的切片黏 合剂有树脂胶、多聚赖氨酸和防脱片剂
目的是证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除 假阴性的可能。 2.阴性对照
用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果， 称阴性对照。
目的是排除假阳性。
3.阴性试剂对照
是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂（尤其是特异性抗体试剂 的有效性和可靠性）而设立的同步免疫染色对照，包括有：空白对照、 替代对照、吸收试验和抑制试验等。
第二节 酶免组织化学检验技术
• 酶免组织化学检验技术是在一定条件下，应用酶标抗体（抗原） 与组织或细胞标本中的抗原（抗体）发生反应，然后加入酶的底物， 催化底物显色，借助光镜或电镜，就可识别出标本中抗原（抗体）的 分布和性质；也可通过图像分析技术达到定量的目的。
一、标本制作
• 常用的标本有组织切片、组织印片和细胞涂片 • 酶免组织化学检验技术可分为
而非特异性染色常不限于单个细胞，常为成片的细胞 3.其他
在过大的组织块，中心固定不良也会导致非特异性显色
六、质量控制
• 质量控制是免疫组织化学检验技术取得满意结果的必要条件。 （一）试剂质量控制
抗体的质量是免疫组织化学染色成功的关键 （二）操作过程质量控制
实验操作 标本的质量控制 （三）仪器设备和器具的质量控制
三、抗体处理
• 抗体是免疫组织化学技术的首要试剂 （一）抗体的选择
具有高度特异性和稳定性的优质抗体 （二）抗体的稀释
抗原抗体反应须有适当的比例，过量或不足均不能达到预期结果 （三）抗体的合理保存
要特别注意保持抗体的生物活性
四、常用标记物
（一）荧光素 如：异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明等
（二）酶 如：辣根过氧化物酶(HRP)
（三）生物素-亲和素系统 （四）免疫金标记技术 （五）免疫铁蛋白技术
五、免疫组织化学技术的结果判断
（一）对照染色设计 为了保证免疫组织化学染色的准确性，证明和肯定
阳性结果的特异性，排除某些非特异性染色，通常需 针对第一抗体设立对照。 1.阳性对照
用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫组 织化学染色。
免疫学检验
第二十二章 免疫组织化学检验技术
• 免疫组织化学检验技术又称免疫细胞化学检验技术
---是利用标记的特异性抗体（或抗原）与组织细胞内抗原（或抗体） 进行的抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对组织和细胞抗原进行 定性、定位
免疫组化的检测原理
（二）技术类型 1.直接法
形成抗原一抗体一酶复合物 2.间接法
形成Ag-Ab1-Ab2﹡E复合物 3.酶标抗体三步染色法 为间接法的改良法
形成Ag-Ab1-Ab2﹡E-Ab3﹡E复合物
（三）方法评价
三、非标记抗体酶免疫组化染色法
（一）原理 该技术首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体
（Ab3），将酶与Ab3结合形成复合物，然后利用第二抗体（Ab2） 作桥，Ab2既可与 Ab3的Fc段结合，又可与结合在组织抗原上的第一 抗体（Ab1）的Fc段结合，经酶催化底物的显色反应，达到对抗原的 检测。