葡萄球菌属检验
球菌的培养与鉴定(实验)
链球菌属
（一）菌落特征（血琼脂平板） • 肺炎链球菌
– 灰色，较小， α溶血，“脐窝”状凹陷，有荚膜菌株可 成粘液样
• 化脓性链球菌（A群）
– 灰白色，较小，半透明，无/有光泽，周围有较大的β 溶血环
• 无乳链球菌（B群）
– 灰白色，较A群大，平坦，有光泽，不透明，周围有狭 窄的β溶血环
蕈糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 甘露糖
四、操作步骤
（2）肺炎链球菌
Optochin敏感试验 胆汁溶菌试验（有对照）
（3）化脓性链球菌与无乳链球菌
杆菌肽敏感试验 CAMP试验
四、操作步骤
（4）粪肠球菌
触酶试验 65g/LNaCl 胆汁-七叶苷试验 精氨酸双水解酶试验（有对照管） 甘露醇 山梨醇 阿拉伯糖 棉子糖
球菌的培养与鉴定
苏州大学附属第二医院 刘婷婷
1
实验目的
2
实验内容
3
实验材料
4
操作步骤
5
实验结果
一、实验目的
• 掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属的 菌落特点、染色形态及鉴别实验；
• 了解其它球菌的菌落特点、染色形态及鉴 别。
二、实验内容
葡萄球菌属
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
链球菌属
肺炎链球菌 化脓性链球菌 无乳链球菌
3 结果
在两种细菌划线交界处出现箭头状透明溶血环区 为阳性，否则为阴性。
CAMP试验
链球菌属
2、肺炎链球菌
Optochin敏感试验：＋ 胆汁溶菌试验：＋ 荚膜肿胀试验：＋ 分解菊糖
Optochin敏感试验
1 原理
Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制 细菌生长，故肺炎链球菌对其敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性及检测技术
谢谢观看！
此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
检测与诊断
标本采集
采自不同感染部位的各种标本，包括血液、脑脊液、穿刺液；痰液、脓液、创伤分 泌物、尿液、粪便和呕吐物等。
直接涂片镜检
直接涂片检查在正常情况下呈无菌状态的体液标本如血液、脑脊液、穿刺液等，若有 检出革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽胞、荚膜，直径0.5-1μm的球菌。即具有 重要的临床价值。
显色培养基A计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（血浆凝固酶试验，目标菌落血浆凝固酶试验为阳 性）。 显色培养基B计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（滴加1 mol/L盐酸，目标菌落有透明圈）。
鉴别实验
一、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用 是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。 血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的 纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产 生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转 化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。 具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺 血和坏死 b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌 体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关
实验 葡萄球菌属和链球
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
1.葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
2.链球菌
肺炎链球菌
3.肠球菌
三步骤和方法
革兰氏阳 性球菌鉴 定流程
1 触酶 2 O/F 3胆盐溶菌
4凝固酶
5新生霉素
6杆菌肽
7CAMP 四
（二）鉴定相关试验
1.触酶试验
2.凝固酶试验
3.甘露醇发酵试验
原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸， 使培养基由紫色变为黄色。
4.新生霉素敏感性
5. Optochin敏感试验
原理： Optochin可抑制肺炎链球菌的生长。 结果判定：抑菌圈直径≥14mm为阳性。反 之阴性。
6. 胆汁七叶苷实验
方法：待测菌接种胆汁-七叶苷琼脂培养基， 35度孵育18-24h。 结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变 色为阴性。
实验 葡萄球菌属、链球菌属 和肠球菌属的培养和鉴定
临床病原生物学教研室
一目的要求
1. 熟悉葡萄球菌、链球菌和肠球菌的菌落 特点、菌体形态及染色性。 2. 掌握葡萄球菌、链球菌和肠球菌的分离 培养、鉴定方法和常用鉴定实验。
二器材和试剂
1.菌种 金葡、表葡、腐生，甲、乙、丙链 、肺链和肠球菌等。 2.培养基 普通培养基、血平板等。 3.试剂 3%过氧化氢、去氧胆酸钠、新鲜血 浆和细菌微量生化培养管等。 4.其他 新生霉素、杆菌肽 、Optochin纸片、 生理盐水、载玻片等。
7. 65g/LNaCL生长试验
方法：将肠球菌接种于高盐肉汤培养基中， 孵育18-24h。 结果：有细菌生长为阳性，不生长为阴性。
四注意事项
1.触酶试验不宜用血平板上的菌落，会出现 假阳性，陈旧培养物会丢失触酶活性而又出 现假阴性。因此每次试验应做阴(链球菌)阳 (金葡)对照。 2.凝固酶试验玻片法应注意控制好时间， 10S内观察结果，且必须制备浓厚的菌悬液。
细菌鉴定册
真菌酵母样真菌生化编码TH-15C·鉴定系统细菌名称Candida albicansl.白色念珠菌1·Cr.1aurentii 罗伦隐球菌ea.albieans2 白色念珠菌2 Cr.neofomans 新型隐球菌Ca..boidinii .鲍狄尼念珠菌Cr.terreUs 地生隐球菌&.cife.rrii 西弗念珠菌Cr.uniguttulatus 指甲隐球菌Ca.colliculosa 软念珠菌Geot6chum capitatum 头状地霉Ca.dubliniensis 督贝里念珠菌Ge.penicillamm 帚状地霉Ca.famata 法码念珠菌Hansenula polymorpha 多形汉逊酵母Ca.glabrata 光滑念珠菌,Kloeckera spp .克勒克氏酵母种类Ca.guilliermondii 季也蒙念珠菌(高里氏)Pichia ohmeri 噢么毕赤酵母Ca.kefyr 高加索乳念珠菌Prototheca wickerhamii 威克原壁酵母Ca.krusei/inconspicua克柔氏/平常念珠菌Rhglutinis 粘红红色酵母Ca.1usitaniae 葡萄牙念珠菌Rh.mucilaginosal 胶粘红酵母1Ca.ma_g oliae 木篮念珠菌Rh.mucilaginosa2 胶粘红酵母2Ca.norvegensis 挪威念珠菌Rh.minuta 小红酵母.Ca.parapsilosis 近平滑念珠菌(副秃发) Saccharomyces cerevisiael酿酒酵母1Ca.pellicuk~a 产膜念珠菌- Sa.cerevisiae2 酿酒酵母2Ca.rugosa 皱落念珠菌(皱褶) Sporobolomyces salmonicolor赭色掷孢酵母Ca.sphaeficai 球形念珠菌1 Trichospron.asahii 阿萨丝孢酵母Ca.sphaerica2 球形念珠菌2 Tr.inkin 因凯丝孢酵母Ca.tropi~alis 热带念珠菌Tr.mucoides 似粘丝孢酵母Ca.utilis (效用念珠菌)Ca.zeylanoides 桶形念珠菌(廷沫) .Cr.albidus 白色隐球菌Cr.humicolus 土生隐球菌酵母样真菌生化编码鉴定系列TH-15C使用说明一、检验程序:(一)形态致病性酵母样真菌系一群呈酵母样菌落的单细胞芽生真菌。
金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定
金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定1 金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococ-cus），革兰阳性菌，有“嗜肉菌”的别称，是人类化脓感染中最重要的致原菌”，也是评价食品卫生安全的重要指标之一。
“测量不确定度”术语，在20世纪70年代初开始逐渐在测量领域广泛应用），目前CNAS、APLAC、EURACHEM/EA都有微生物领域的有关测量不确定度政策。
CNAS-CL07：20l1《测量不确定度的要求》8.2中规定，检测实验室应有能力对每一项有数值要求的测量结果进行测量不确定度评估。
本文依据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，对1份样品的15次重复测量结果作不确定度评定。
2数学模型和不确定度来源2.1不确定度评定原理测量不确定度：根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数。
由多个分量组成，其中一些分量由可用测量列结果的统计分布估算，并用实验标准差表征。
另一些分量则可用基于经验或其他信息的假定概率分布估算，也可用标准差表征。
2.2数学模型A=T/m式中，A——样品中金黄色葡萄球菌MPN数；T——某一稀释度被确认的金黄色葡萄球菌阳性管数；m——被确认阳性管对应的样品重量，g。
因为典型菌落确认（血浆凝固酶试验）为定性试验，所以在数学模型中不予考虑。
2.3不确定度分量的来源测量中可能导致不确定度的来源一般有：取样、样品量、样品种类，目标微生物在样品中分布、样品中含有的微生物数量水平、样品稳定性、信比稀释、读数等”。
和一般测量相比较，样品中微生物测量的结果特点是发散性极大，因此本文对金黄色葡萄球菌MPN计数法结果不确定度评定中，着重从检测仪器设备和检测结果重复性两方面考虑。
3不确定度评定3.1样品称量过程中产生的不确定度（B类不确定度）u rel（m）本实验按照GB4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》要求，无菌条件操作。
病原性球菌及检验
病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。
G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性，分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。
在20%CO2环境中，有利于毒力产生。
最适温度37℃，最适PH7.4。
DNA中G+C含量：30-39%。
1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。
金黄色葡萄球菌
禁忌：尚不明确
请检单
品名 开塞露 批号 141003
规格/包装规 格 批准文号
检查单位 请检目的 备注
10ml/瓶
国药准字 H44023815
数量
请检日期
资料来源：2010年版《中国药典》第二部附录 XI J 微生物限度检查法P107
局部给药制剂的途径和剂型
★不经胃肠道给药的剂型
（1）注射给药 如静脉注射、肌内注射、皮下注射和皮内注 射等。
（2）呼吸道给药 如吸入剂、喷雾剂、气雾剂等。
（3）皮肤给药 如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、糊剂、 贴剂等。 （4）粘膜给药 如滴眼剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂、栓 剂、膜剂等。一般把直肠给药也归于粘膜给药一类，如灌肠 剂、栓剂、直肠用胶囊栓等。
甘露醇高盐琼脂平板
纯培养
营养琼脂斜面
培养温度： 36±1℃ 培养时间：24~72h
革兰氏染色镜检
血浆凝固酶试验
报告
供 试 液 的 制 备
用量筒量取无菌水 90ml于空瓶中
取样品10ml加入
供 试 液Байду номын сангаас
用玻璃棒搅拌，使 混合均匀
增菌
供试液 缓冲液 培养温度：36±1℃ 培养时间：18~24h 必要时可延至48h 阴性对照应无菌生长 营养 肉汤 营养 肉汤 营养 肉汤
英文名称：Glyceine
汉语拼音：Kaisailu
Enema
成份：本品每支含主要成份甘油52.8-58.3%。
辅料为：纯化水 性状：本品为无色、澄清的粘稠液体 作用类别：本品为缓解泻药类非处方药药品 适应症：用于便秘
葡萄球菌属
反应“D Test” – 阴性
无诱导： msrA-介导的 红霉素耐药
可诱导： 克林霉素耐药 (erm-介导)
在检测mecA阳性株时为什么头孢 西丁纸片的结果比苯唑西林纸片 结果好 ?
在头孢西丁存在时，mecA 的表达水平比采 用苯唑西林高。
对加替沙葡萄球菌星和左氧氟沙 星的新的折点
目前市售系统尚未改变 ; 最低浓度一般为 2 g/ml.
包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规
规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 规定常规测试报告的抗生素 不同的药判定标准不同 不同的菌判定标准也不同
CLSI/NCCLS M100-S15
革兰阳性菌
添加…
苯唑西林试验和报告 …还添加 mecA 和PBP2a 试验
敏感性: “R” 阳性菌株数/mecA 阳性的菌株数x100
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a =mecA*
99% 99%
98% 100%
特异性: “S” 阳性的菌株数/mecA 阴性的菌株数x100
苯唑 MIC =苯唑纸片<西叮纸片= PBP2a < mecA*
61% 67% 96% 94%**
菌名 金黄
结合凝 游离 固酶 凝固
酶
＋
＋
ＰＤ Ｖ ＹＮ Ｐ ＲＡ
－＋ ＋
鸟氨酸 脱羧酶
－
中间 － 施氏 ＋ 路邓 ＋
＋ ＋＋ － － － ＋＋ ＋ － － ＋－ ＋ ＋
５ 凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别 表皮葡萄球菌对新生霉素敏感 腐生葡萄球菌对新生霉素耐药
常见的凝固阴性葡萄球菌生物学特性
菌名
表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 溶血葡萄球菌 华纳葡萄球菌 解糖葡萄球菌
6.金黄色葡萄球菌GB 4789.10-2016解析
定性检测——平板划线分离
菌落形态：白色或者金黄色菌落 ，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱 纤维羊血
注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌；
二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。
定性检测——血浆凝固酶鉴定试验
• 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h； 0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃ 培养6h； 每半小时观察； 同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228) • 阳性现象：试管倾斜或倒置时，呈现凝块，即凝固 注意点： 现象， 1，必须每半小时观察； 或凝固 体积大于原体积的一半。 2，陈旧培养物（培养超过18-24h）或生长不良
平板计数法——计算
平板计数Байду номын сангаас——计算
• d)某一稀释度平板的菌落大于200且有典型 菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，其 平板上的菌落数不在20~200之间，按以下公 式，计数该稀释度平板上的典型菌落。 T=AB/Cd
其中 T-----样品中金黄色葡萄球菌菌落数 A-----某一稀释度典型菌落总数 B-----某一稀释度凝固酶阳性菌落数 C-----某一稀释度用于凝固酶试验的菌落数
B1----第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数 B2----第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数 C1----第一稀释度（低稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
C2----第二稀释度（高稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
1.1------计算系数
d--------稀释因子（第一稀释度）
• 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉 素）
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
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1
．概述
葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌， 包括金黄色葡萄球菌、 表皮葡萄球菌、 腐生葡
萄球菌、 中间型葡萄球菌等 35 个种，17 个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病 葡萄球菌。
2.
标本类型
血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3.
鉴定
3.1
形态与染色 革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。
3.2
培养特性 金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分
菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡 萄球菌在血琼脂平板上菌落
为白色或柠檬色，多数不溶血。
3.3
生化反应 金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇， 不分解棉子
糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和 DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。
3.4
鉴别要点
3.4.1
本菌属特征 革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在 血琼脂平板
上菌落呈金黄色或白色， DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。
3.4.2 与微球菌属的鉴别 葡萄球菌属葡萄糖 O/F
试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为 主，菌体较
小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。
3.4.3 与链球菌属的鉴别 葡萄球菌属 O/F
试验为发酵型， 触酶试验阳性， 链球菌属葡
萄糖 O/F 试验为氧化型，触酶试验阴性。
3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表 1
。
表 1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验
菌名 凝固 溶血
硝酸 盐 海藻 糖 半乳糖
苷酶
酶
触酶
金黄色葡萄球菌金黄色亚
种
+ + + + + -
金黄色葡萄球菌厌氧亚种
+ - + - - -
施氏葡萄球菌聚集亚种
+ + + + - ND
中间葡萄球菌
+ + d + + +
海豚葡萄球菌
+ + + +
ND
S.lutrae + + + + + +
猪葡萄球菌
d + - + + -
注：“+”为 90%以上菌株为阳性，“- ”为 90%以上菌株为阴性，“d”为 11%-89%阳性，
“ND” 为无资料。
3.5
操作步骤
3.5.1
涂片、染色 观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
3.5.2
触酶试验 参见《触酶试验标准操作规程》 。
3.5.3
凝固酶试验 参见《凝固酶试验标准操作规程》 。
3.5.4
鉴定 从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴 定。
4.
药敏
参见《药物敏感性试验标准操作规程》及 CLSI M100-S20 最新版本文件。
5.
质量控制
参见《质量管理程序》 。
6.
检验结果解释与分析
6.1
由于葡萄球菌分布广泛， 从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时， 将其定为致病菌 时应慎
重。应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系 统根据生化图谱进
行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。 溶血性葡萄球菌从泌尿感染病
人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被 视为致病菌。
6.2 甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRS）A
对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。 如果
检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和 ?- 内酰胺药 /?- 内
酰胺酶抑制剂类抗生素， 对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。 若 葡萄球菌属对四环素敏
感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药， 而对多西环素和米诺环素敏感。临
床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗 3-4 日后，原来 敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄
球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类
耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“ D”试验以检测克林霉素
诱导性耐药，根据“ D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。
7.
临床意义
葡萄球菌属在自然界分布很广。存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致 病性。金
黄色葡萄球菌主要引起局部组织的化脓性感染（疖、痈和创伤感染） 、菌血症、心 内膜炎等全身感
染等，也可引起骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎和深部脓肿等。腐生葡萄球 菌引起尿道感染、前列腺
炎、外伤和菌血症等。溶血葡萄球菌引起心内膜炎、菌血症、腹 膜炎、尿道感染、外伤、骨折和关节
炎等。
MRSA 的治疗：轻度感染可选用 SMZ-TMP
和喹诺酮类，严重全身感染选用万古霉素或其 他糖肽
类药物。
8.
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