动物用狂犬病疫苗研究进展
动物用狂犬病疫苗研究进展朱武洋粱国栋
【摘要Ｊ狂犬病是一种自然疫源性疾病，狂犬病病毒宿主动物的免疫状况对于预防和控制人类狂犬病的流行至关重要。随着分子生物学和免疫学的发展，动物用狂犬病疫苗，尤其是基因工程疫苗的研究取得了巨大的进展。本文将就动物用狂犬病疫苗的研究进展与应用状况作一综述。【关键词】狂犬病；疫苗
狂犬病（Ｒａｂｉｅｓ）是由狂犬病病毒（ＲａｂｉｅｓＶｉｒｕｓ，
ＲＶ）侵犯中枢神经系统（ＣｅｎｔｒａｌＮｅｕｒａｌＳｙｓｔｅｍ，ＣＮＳ）引起的人兽共患致死性脑脊髓炎，死亡率为１００％…。该病是一种自然疫源性疾病，狂犬病病毒的动物宿主包括犬只、猫等家养动物，也包括臭鼬、浣熊等多种野生动物。ＲＶ可在宿主动物之间传播与蓄积，而人类是该病毒的终末宿主。狂犬病潜伏期较长，且目前尚无有效的狂犬病治疗方法，因此疫苗是预防和控制狂犬病的有效手段，在人类与狂犬病斗争的１００多年中，疫苗对防治狂犬病发挥了重要的作用。动物用狂犬病疫苗可阻抑狂犬病病毒在其宿主动物间的播散，从理论上可截断人类狂犬病流行的传染源和传播途径。因此，加强动物狂犬病疫苗研究，研制一种安全、有效、廉价的动物用狂犬病疫苗，进而提高动物狂犬病免疫覆盖率，对于积极主动地预防和控制人类狂犬病流行意义重大。本文针对动物用狂犬病疫苗的研究进展，尤其是基因工程狂犬病疫苗的最新研究进展加以综述。１动物用狂犬病疫苗概况动物用狂犬病疫苗主要有三种，即灭活疫苗、弱毒苗和基因工程疫苗。动物用灭活苗安全、有效，但一次免疫用量较大，且价格昂贵，不适合于发展中国家，而狂犬病则主要在这些地区流行。与之相比，利用组织培养方法获得的减毒活疫苗主要用于发展中国家家养动物的免疫，是应用最广泛的动物用狂犬病疫苗。动物用减毒活疫苗主要是以狂犬病病毒Ｆｌｕｒｙ株和ＥＲＡ株为基础发展起来的。１．１Ｆｌｕｒｙ株为基础的弱毒苗制所ＤＩＯ：１０．３７０６１ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４０９２．２００９．０３．００４作者单位：１０００５２北京中国疾病预防控制中心病毒病预防控Ｆｌｕｒｙ株狂犬病病毒是由Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ等于１９４０年从狂犬病患者脑内分离到的街毒。为便于区别，
在鸡胚内传６８代以前的Ｆｌｕｒｙ株病毒称ＬＥＰ株（鸡胚低代株），高于１３６代的称ＨＥＰ株（鸡胚高代株）幢１。４０－－５０代ＬＥＰ株对犬只不致病的同时，仍保持较高的免疫原性。用ＬＥＰ株活毒以肌肉注射的方式接种犬只一次，其免疫力可保持３年，但ＬＥＰ株活疫苗还具有较强的致病性，使用ＬＥＰ株活疫苗免疫动物时，曾因毒力太强而使牛发生麻痹。ＨＥＰ株病毒脑内接种成年小鼠、家兔和狗时，已完全丧失致病力，但脑内接种后可感染乳鼠及猴。１．２ＥＲＡ株为基础的弱毒苗ＥＲＡ株狂犬病病毒是１９５３年从狗脑中分离到的街毒，因由Ｅ．ＧａｙｎｏｒＲｏｃｈｉｔｎｉｅｈｉ
Ａｂｅｌｓｅｆｈ所研
究，故定名为ＥＲＡ。该毒株又称亚拉巴马流窜犬毒（Ｓｔｒｅｅｔ，ＡｌａｂａｍａＤｕｆｆｅｒｉｎ），经地鼠肾细胞、鸡胚、牛肾和猪肾细胞培养并制成疫苗，疫苗株简称ＳＡＤ。以ＥＲＡ株为基础筛选的＆∞．Ｂｅｒｎ、ＳＡＧｌ、ＳＡＧ２、
ＳＡＤＢｌ９等疫苗株可刺激较强的粘膜免疫，适合于口服免疫。而狂犬病病毒主要宿主动物是犬只等家养动物以及野生动物，口服免疫预防是建立狂犬病免疫动物群最为可行的办法之一。因此，与Ｆｌｕｒｙ株为基础的弱毒疫苗相比，ＥＲＡ株为基础的狂犬病疫苗的研究更为广泛和透彻。１．３我国生产的弱毒苗１９８３年中国兽药监察所从国外引进ＥＲＡ毒
株，并证明该毒株对黄牛、山羊、绵羊、家兔及犬只等没有致病性。以该毒株为基础制备的活毒疫苗可用于马、牛、羊和家犬的免疫ｂＪ。ＣＴＮ株狂犬病病毒
是分离自我国山东的一株狂犬病街毒，ＣＴＮ—ｌ株是中国科学家经鼠脑传代后固定ＣＴＮ病毒后得到的二倍体细胞适应株，以４．０ｍＬ滴度大于６．０ＬＤ５０的该株病毒口服免疫４月龄以上家犬，１个月后产
万方数据垦堕塑耋堂盘查！！！！生！旦箜！！鲞筮ｉ塑！坐！翌！！鱼！型』！！翌！！丛∑ｉ翌！！ｇ￥！！！堡；！！！！坠！！鱼！丛！：！生抗体，６个月为１０４，１５个月为３４，抗体阳转率＞８０％；口服后２４、２８和７２小时，家犬口腔内未分离到病毒，表明该疫苗株安全性良好Ｈ］。ＳＲＶ９株是侯世宽等１９９５年以ＳＡＤＢｌ９为基础，通过空斑克隆和小鼠接种试验筛选获得的弱毒疫苗株，该毒株是ＳＡＤＢｌ９的中等蚀斑株，无致病性、口服免疫小鼠的保护率达１００％，而亲本株仅为２５％～３０％，不同免疫剂量对断乳和成年小鼠脑内、肌肉、皮下和口服途径接种均安全，并产生良好的免疫反应，明显优于亲本株＆ｍＢｌ９。将该疫苗株制成诱饵疫苗后，免疫１０００条犬，抗体均达到免疫保护水平Ｈ３｜。减毒活疫苗为有效地预防和控制狂犬病流行，尤其在发展中国家的流行起到了重要的作用，但减毒活苗存在回复感染的可能，有一定的安全隐患，与之相比，利用基因重组技术制备的基因工程狂犬病疫苗在保持良好免疫效果的同时，有可能解决目前狂犬病疫苗存在的安全性问题。２基因工程疫苗随着分子生物学、免疫学及狂犬病致病机理研究的深入，与传统的减毒活疫苗一样，基因工程手段已经成为获得狂犬病疫苗的重要途径，利用基因工程技术来排除狂犬病病毒固有毒性成份而保留其完整的免疫原性可望获取高效、安全和经济的动物用疫苗。２．１基因工程重组疫苗国内外对于狂犬病基因工程重组疫苗进行了深入的研究，并在预防控制狂犬病流行中发挥了一定的作用。糖蛋白和核蛋白是狂犬病病毒最主要的两个抗原蛋白，采用基因工程手段在病毒载体中表达糖蛋白基因和核蛋白基因，即可制备糖蛋白和核蛋白亚单位疫苗。２．１．１糖蛋白亚单位疫苗２．１．１．１基于痘病毒载体的糖蛋白亚单位疫苗１９８１年美国Ｗｉｓｔａｒ研究所首先克隆了ＥＲＡ株糖蛋白，并对该蛋白的核苷酸序列及氨基酸序列进行了分析，从而揭开了研制狂犬病基因工程重组疫苗的序幕［６］。１９８３年Ｙｅｌｖｅｒｔｏｎ等设计了不同长度糖蛋白的编码序列，并构建了相应的原核表达载体，转化大肠杆菌后表达出多种抗原蛋白，这些基因工程多肽虽然都不同程度与野生糖蛋白抗血清发生反应，但原核表达系统对蛋白的合成、折叠、糖基化等生物学过程有一定的影响，这些多肽结合糖蛋白抗体的能力仅为野生糖蛋白的２～３％，且免疫原性差‘７１。禽痘病毒属成员在哺乳动物体内仅发生流产性感染，但其重组体却能表达外源基因诱发保护性免疫应答而不形成感染性病毒颗粒，显示出作为载体的独特优越性。Ｃａｄｏｚ等旧１和Ｆｒｉｅｓ等旧１分别以金丝雀痘病毒为载体构建了糖蛋白的重组病毒，Ｉ期临床观察表明该重组病毒具有良好的安全性及免疫效果。１９９１年Ｔａｙｌｏｒ等也在金丝雀痘病毒中表达了狂犬病病毒ＥＲＡ株的糖蛋白基因，制备的ｖＣＰｌ６重组病毒疫苗与禽痘狂犬病重组疫苗（ｖＦＰ６）相比较，ｖＣＰｌ６在小鼠中产生的保护力较ｖＦＰ６高１００倍，而且重组糖蛋白金丝雀痘病毒在非鸟类不繁殖，但能表达糖蛋ｃａＩｔ０］，故该类糖蛋白亚单位疫苗，与痘病毒和腺病毒重组疫苗相比，具有较好抗原性和免疫保护作用的同时，其安全性也更好。２．１．１．２基于腺病毒载体的糖蛋白亚单位疫苗除痘病毒载体外，腺病毒载体也是制备狂犬病重组疫苗的常用载体。１９９０年Ｐｒｅｖｅｃ等将ＥＲＡ株糖蛋白重组于人腺病毒５型中，得到了表达狂犬病病毒糖蛋白的重组病毒ＡｄＲＧｌ，该株病毒可有效地表达狂犬病病毒糖蛋白，诱导高水平的免疫反应，并可应用于不同种属的动物¨１｜。以腺病毒为载体构建表达狂犬病高致病毒株ＣＶＳＮ２Ｃ糖蛋白基因的重组疫苗候选株ｒＡｄＧＰｃｖｓ和ｒＡｄＧＰｃｖｓ’免疫小鼠后的保护率可达７３．３％～８３．３％¨２｜。２００６年扈荣良等用犬２型腺病毒为载体表达了狂犬病病毒的糖蛋白，免疫犬只后的试验结果表明该重组病毒具有良好的免疫原性和保护效应ｕ３｜。
２．１．２核蛋白亚单位疫苗
纯化核蛋白不需去污剂处理，是目前最有希望用于人类预防狂犬病的亚单位疫苗。同时，狂犬病病毒糖蛋白具有病毒中和抗体决定簇，与病毒的感染和毒力直接相关，不同毒株的糖基化位点有所不同，但核蛋白氨基酸序列高度保守，除了可诱导机体产生非中和性抗体外，还可诱导机体产生细胞免疫Ｈ引。此外，狂犬病病毒之间核蛋白序列的同源性一般高于糖蛋白序列的同源性，核蛋白序列一致的灭活疫苗能抵抗糖蛋白氨基酸序列差异较大的致死剂量病毒的攻击¨引。因此，与糖蛋白亚单位疫苗相比，核蛋白亚单位疫苗有其独到之处。２．２ＤＮＡ疫苗
万方数据垦匾丛垂堂垄查！！！！笙！旦箜！！鲞箜！塑！璺堡翌！！垫型』婴！型！！∑ｉ翌虹！：』！堡！！！！！ｙ！！！！！塑！：！将狂犬病病毒的抗原蛋白基因在真核表达载体中克隆并表达构建了狂犬病基因疫苗，即ＤＮＡ疫苗。ＤＮＡ疫苗既有亚单位疫苗和灭活苗的安全性，又有减毒疫苗或重组疫苗的免疫应答特点，在体内抗原呈递方式与自然感染相似，可同时诱导细胞免疫和体液免疫且不受母源抗体的干扰，可生产多价或多联疫苗等优点。但与其它形式的疫苗相比，基因疫苗所能诱导的免疫水平是有限的，且ＤＮＡ疫苗对免疫动物的保护率也较低。如用表达狂犬病病毒糖蛋白的基因疫苗ｐｃＤＮＡ．ＲＧＰ和商品化的精制疫苗分别免疫小鼠，结果表明基因疫苗３次免疫的体液效果与１次精制疫苗相当；而基因疫苗２次免疫的细胞免疫效果与１次精制疫苗相当。而且ＤＮＡ疫苗和精制疫苗对小鼠的保护率分别为３０．０％和８４．６％‘１引。２．３感染性克隆苗自从Ｓｃｈｎｅｌｌ等于１９９４年首次建立狂犬病病毒反向遗传操作系统以来［６引，已成功地获得了多株狂犬病病毒感染性全长ｃＤＮＡ克隆，反向遗传技术为狂犬病疫苗研究开辟了新途径。此项技术的主要优势在于，通过嵌合、定点突变和缺失突变可实现多位点人工定向减毒，而且在ｅＤＮＡ系统中疫苗基因成分稳定，减少了传统减毒疫苗在细胞培养传代时产生回复突变的危险。Ｍｏｒｉｍｏｔｏ等以狂犬病疫苗ＳＡＤＢｌ９的非致病株ＳＮ一１０的感染性克隆为基础，用银麾蝙蝠相关街毒ＳＨＢＲＶｌ８及固定毒ＣＶＳ２４来源的ＣＶＳ－Ｎ２ｃ、ＣＶＳ－Ｂ２ｃ的ＧＰ基因取代ＳＮ．１０的Ｇ基因，构建了三种重组病毒Ｒ—ＳＨＢｌ８、ＲＮ２ｃ和Ｒ—Ｂ２ｃｍｌ。与亲本株相比其毒力显著减弱，但Ｒ—Ｎ２ｃ和Ｒ—Ｂ２ｃ接种小鼠仍有致病性。２００４年Ｓｈｏｊｉ等人在ＨＥＰ—Ｆｌｕｒｙ株病毒的感染性ｃＤＮＡ克隆的基础上，利用反向遗传学的方法得到缺乏Ｐ基因的狂犬病病毒¨引。ＨｏｓｏｋａｗａｏＭｕｔｏ等以ＲＣ－ＨＬ株的反向遗传系统为基础构建的同时表达两个糖蛋白的突变病毒ＮＰＭＧＧＬ株，其生物学特性与亲代病毒相似。增殖特性、毒力特性几乎与ＲＣ—ＨＬ株一致的同时，ＮＰＭＧＧＬ株ＧＰ的表达量是亲代病毒的１．５倍，相应的ＧＰ表达量及病毒的效价随着传代次数的增加而提高。更为重要的是，用灭活的该病毒免疫小鼠后，中和抗体分析表明该病毒具有高于ＲＣ—ＨＬ株的免疫原性¨引。３小结动物用狂犬病疫苗主要包括灭活苗、减毒活疫苗和基因工程疫苗等三种形式。在各种狂犬病疫苗之中，灭活苗安全、有效，但生产成本较高，价格昂贵，且此类疫苗用量较大，不可能大批量进口与生产，不适合发展中国家的国情。弱毒活疫苗广泛应用于世界各地，尤其是发展中国家，但弱毒苗存在潜在的回复感染问题，不宜用于家养动物。与之相比，以痘病毒和腺病毒载体为基础的狂犬病病毒重组疫苗已获准在北美和欧洲对野生动物进行大范围免疫，该类疫苗在预防野生动物狂犬病以及防止狂犬病侵入家养动物和人类两个层面均起到了显著的效果，也是这些地区有效控制狂犬病流行的主要措施之一。但痘病毒、腺病毒载体均是ＤＮＡ病毒，长期使用有可能重组到动物细胞的基因组ＤＮＡ中，带来新的生物安全问题，且此类病毒基因组结构复杂，构建重组病毒较为困难。因此，选择建立在更加合理的病毒载体基础上的基因工程重组疫苗是狂犬病疫苗研究的正确方向之一。另外，随着狂犬病病毒反向遗传学技术的发展，感染性克隆苗也是狂犬病疫苗极有前途的生产方式。
兽用狂犬病灭活疫苗(Flury株)免疫效力试验
２ ０１ ３ ． ０ ２
益康沙龙
连续观察 １ ４ ｄ ，攻 毒 后 ９ ６
ｈ内小 鼠死 亡不计 ，记 录第 ５ 天各稀 释度 小 鼠存活 数及 ５ ～ｌ ４ ｄ内的 小 鼠死 亡和 存
活 比例 ，并计算 病毒毒液 的
毒价Байду номын сангаас（ Ｌ Ｄ 。 ） 。
１ ． ２ ． ２ Ｃ Ｖ Ｓ 一 １ １株 Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ 。 测
122cvs11株tcid50测定将80冻存cvs11病毒液融解后用无血清mem营养液进行10倍系列稀释取10106共6个稀释度各同步接种96孔细胞板4孔375c02培养箱中培养48小时后以抗rv单克隆荧光抗体进行直接染色在倒置荧光显微镜下观察各孔内荧光斑孔内有1个以上荧光细胞记为无荧光细胞的孔记为并计算cvs一毒液的毒价tcidso
康 生物股份 有限公 司研 制 的
Ｆ ｌ ｕ ｒ ｙ 株） 对 本动 物免 疫 的效力 后引起的 ，导致急性致死性脑脊髓炎 ，并 以狂躁 狂 犬病 灭活 疫苗 （ 不安 、行为反常或攻击行为、进行性麻痹 和最终 进行 了测 定，现将试验结果报告如下 。 死 亡为 主要 临床 特 征 的一种人 畜 共 患传染 病ｎ 。 １ 材料与方法 狂 犬病 是迄 今 为止 人类 病死 率最 高 的 急性传 染 １ ． １ 疫苗、 血 清 狂 犬病 灭 活 疫 苗 （ Ｆ ｌ ｕ ｒ ｙ 株） ， 病 ，一旦发病 ，病死 率 高达 １ ０ ０ ％。犬 狂犬病 可 批号 ２ ０ ０ ９ ０ ０ １ 、２ ０ ０ ９ ０ ０ ２ 和２ ０ ０ ９ ０ ０ ３ ，辽宁益康 生 以被消 灭 ，北美洲 、西欧 、 日本和南美洲的许多 物股 份有 限公 司生产 ；Ｏ Ｉ Ｅ狂 犬 病 参 考 疫 苗 地 区都 已经 证 明 了这 一 点。但 犬狂 犬病 仍在 ８ Ｏ （ １ １ Ｉ Ｕ ／ ｍ１ ） ，购 自欧洲 药 品 质 量 管 理局 （ Ｅ Ｄ Ｑ Ｍ） ， 多 个 国家和 地 区广 泛分 布 ，主要 是 在发 展 中 国 批号 ０ ０ Ｓ ７ １ ８ ；标准 阳性血清 ，购 自Ｅ Ｄ Ｑ Ｍ，用 去 家 。９ ９ ％以上 的人狂犬病病例 的病 毒都来 自于犬 离 子 水 稀 释 ，贮 存 在 一 ２ ０ ℃ ， 用 前 稀 释 至 １ ２ｔ 因此 ，对犬 等家养 动物进行 免疫接种 ，是预 ０ ． ５ Ｉ Ｕ ／ ｍ ｌ ，并在 ２ ～８℃保存 。 防和控制狂犬病传播 的主要方法 。 １ ． ２ 狂犬病毒 Ｃ Ｖ Ｓ － Ｉ Ｉ 株和 Ｃ Ｖ Ｓ － ２ ４ 株 由军事兽 以五 联 疫 苗形 式 出现 的 Ｅ Ｒ Ａ （ Ｅ ｖ ｅ ｌ ｙ ｎ — Ｒ ｏ ｃ ｋ ＇ 医研究所分子流行病学实验室制备 ，辽宁益康 生 ｉ ｔ ｒ ｕ ｋ ｉ — Ａ ｂ ｅ ｌ ｓ ｅ ｔ ｈ ） 株 活 疫苗 和 Ｆ ｌ ｕ ｒ ｒ ｙ 株 活 疫苗 在我 物 制 品股 份公 司研 发 中心保存 。Ｃ Ｖ Ｓ 一 １ １ 株用 于 国应用 多年 ，在 国外应用 的弱毒活疫苗株还包括 血清 中和试验 ，Ｃ Ｖ Ｓ 一 ２ ４ 株用于攻击 免疫小 鼠。 Ｓ Ａ Ｄ Ｂ １ ９ 、Ｓ Ａ Ｇ １ 、Ｓ Ａ Ｇ ２ 等 ，但 由于这 些毒株均 １ ． ２ ． １ Ｃ Ｖ Ｓ － ２ ４ 株 小鼠Ｌ Ｄ 。 测定 将一 ８ Ｏ ℃冻 存 具有 一定的毒 力，在乳 鼠脑 内注射 后半数致死率 Ｃ Ｖ Ｓ 一 ２ ４ 毒株融化后 ，用 Ｐ Ｂ Ｓ 缓 冲液进行 ｌ ０ 倍 系 达８ ． ２ Ｌ ｏ ｇ Ｍ Ｉ Ｃ Ｌ Ｄ ／ ｍ Ｌ ４ 】 ，弱毒 疫 苗株 的 安全 性一 列稀释 ，取 １ ０ ～１ Ｏ ～ ，共 ６ 个稀 释度 ，每个稀释 直令人担忧。 度 脑 内接种 １ ０ 只ｌ ３ ～１ ６ ｇ 小 鼠，每 只 ０ ． ０ ３ ｍ ｌ ，
一例牛感染狂犬病的调查报告
健康养殖·诊疗2021.08 畜牧业环境61摘 要：狂犬病又称“疯狗病”，是由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）引起的所有温血动物和人的一种急性、进行性、几乎不可逆转的人兽共患传染病。
2020年11月27日下午，罗城县四把镇里乐村后洞屯发生一起流浪犬主动攻击人、畜，致一人一牛受伤，牛感染狂犬病。
现将该病例调查处置情况报告如下。
关键词：狂犬病；感染；调查报告1 基本情况罗城县位于河池市东部，是中国唯一的一个仫佬族自治县，民众素有吃狗肉的习俗，在河池市11个县（区）中是犬饲养量较多的县份之一，2020年全县犬的饲养量为4.3361万只，因属于老、少、边、山、穷地区，家犬的狂犬病免疫密度一般只达到75%左右，也是狂犬病的老疫区，时常有流浪犬咬伤人的现象发生。
此次疫情的发生地四把镇里乐村后洞屯共有27户，人口105人，其中有15户养犬27只，10户养牛27头。
2020年11月27日下午，一流浪犬流窜至后洞屯，先咬伤一74岁的吴氏女村民的小腿及屁股，该犬伤人后又窜到吴兰高的牛栏咬伤一头怀孕5个月约3岁的黄牛，咬伤牛的嘴唇、鼻镜等部位。
2 处置情况2.1 犬的处置该流浪犬当天被村民抓获，接报后罗城县动物疫病预防控制中心技术员到场后将其扑杀并采集犬脑样品送广西壮族自治区动物疫病预防控制中心兽医实验室、广西大学动物科学院检测，扑杀的犬就地焚烧无害化处理，对周边环境进行消毒。
经RT-PCR方法检测，两个实验室结果均为狂犬病病毒核酸阳性。
该检测结果及时通报了县人民政府及县疾病预防控制中心。
2.2 人的处置因该屯离罗城县城较远，吴氏村民被咬伤后当时只对伤口作简单的肥皂冲洗处理，当天晚上才由家人陪同赶到附近的柳城县医院处置伤口后，先打了人抗狂犬病高免疫血清，再按暴露后免疫方案打了五针狂犬病疫苗。
目前该吴氏村民无异常。
2.3 牛的处置牛被咬伤后畜主仅用酒精对伤口简单处置，经报河池市动物疫病预防控制中心领导，按要求对该牛进行单独圈养隔离观察。
荧光抗体病毒中和试验在狂犬病疫苗研制及免疫监测中的应用
荧光抗体病毒中和试验在狂犬病疫苗研制及免疫监测中的应用【摘要】狂犬病荧光抗体病毒中和试验是细胞水平的病毒中和试验，该检测方式具有较高的敏感度、特异性和重复性，是世界动物卫生组织所推荐的进行动物狂犬病中和抗体定量检测的标准方法。
目前正应用于疫苗效力监测和出入境动物抗体检疫等相关领域，并具有较好的应用效果和较为广阔的应用前景。
另外也有研究应用荧光抗体病毒中和试验尝试研制新的狂犬病疫苗，并取得了良好的成效。
【关键词】荧光抗体病毒中和试验；狂犬病；疫苗；免疫监测狂犬病是一种由狂犬病毒感染引起的烈性传染病，多以带病动物抓咬伤后感染引起。
狂犬病感染后具有较高的病死率和极强的公共危害性[1]。
控制狂犬病传播的有效途径一方面是需要做好免疫监测，同时提高有效免疫的病毒传播宿主和贮存宿主动物数量。
而快捷有效的免疫监测方法和足够的疫苗是确保做好免疫监测和提高免疫动物覆盖率的必要保障。
本文将尝试分析荧光抗体病毒中和试验在狂犬病疫苗研制及免疫监测中的应用。
1荧光抗体病毒中和试验狂犬病荧光抗体病毒中和试验是细胞水平的病毒中和试验，该检测方式具有较高的敏感度、特异性和重复性，是世界动物卫生组织所推荐的进行动物狂犬病中和抗体定量检测的标准方法。
试验主要材料需要BHK-21细胞、狂犬病毒毒株、犬源标准血清、标记狂犬病病毒单克隆抗体、培养基、胎牛血清、胰酶、双抗、倒置显微镜、荧光显微镜等。
试验方法可参照世界动物卫生组织陆生动物检测与免疫手册进行操作。
在有国际标准阳性血清对照情况下，先在96孔板上对血清进行3×、9×、27×……系列稀释，每个稀释度4个重复。
每个孔内加入100TICD狂犬病毒毒株，在37℃下放置60min，加入2×104BHK-21细胞，培养5048h，对单层细胞采用荧光标记抗体进行染色，通过标准血清和待测血清在50%细胞孔中使100%病毒中和的稀释度，计算待测血清抗体效价。
当下已有较多研究表明对该实验方式准确考试，值得推广。
我国狂犬病疫苗的历史和现状分析-重庆狂犬抗体检测分析
我国狂犬病疫苗的历史和现状分析一、我国狂犬病疫苗的历史和现状1980年以前，我国一直生产和使用羊脑制备的经石炭酸灭活的脑组织疫苗。
1965年，我国开始研制原代地鼠肾细胞培养的原液灭活疫苗，此疫苗须加入氢氧化铝作为佐剂以增加疫苗效力，1980年获生产许可证书，当时以Habel法测定疫苗效力，要求保护指数≥10000，需皮下注射14针；后改用NIH法测定效价，效价定为1．3IU/2ml，免疫程序也改为5针法。
FangtaoLin的研究显示，该疫苗注射后抗体水平高于羊脑疫苗，对确诊为狂犬病的动物致伤的暴露者有保护作用。
由于新疫苗效价仍较低且免疫失败病例频发，卫生部决定改进疫苗生产工艺，将疫苗培养的病毒原液超滤浓缩3-5倍以提高疫苗中抗原含量，使加入氢氧化铝佐剂后的疫苗效价能达到≥2．5IU的标准。
然而，单纯浓缩疫苗在提高效力的同时，由于杂质蛋白残留物含量相应增高，不良反应发生率升高且症状加重，严重不良反应发生率达5%-10%。
此后，为改进疫苗的质量特性，引入柱层析等纯化技术去除杂质蛋白，疫苗仍然添加氢氧化铝佐剂，NIH法检测效价可达2．5IU以上，达到了WHO设定的疫苗有效标准。
使用WHO推荐的通用的暴露前3针法和暴露后5针法，尽管添加氢氧化铝佐剂可以增加免疫效果，但会导致机体免疫应答缓慢，产生中和抗体延迟。
由于狂犬病疫苗主要用于暴露后免疫，疫苗诱导免疫的时效性非常重要。
2005年，国家食品药品监督管理局要求去除氢氧化铝佐剂。
临床研究显示，去佐剂疫苗的早期免疫反应明显高于佐剂疫苗，初次免疫14天中和抗体阳转率可达100%，且不良反应发生率低。
1990年以来，我国研制或引进Vero细胞为基质的纯化狂犬病疫苗大量上市，2014年，国产人二倍体细胞疫苗也批准上市，疫苗种类不断增多。
分析二、狂犬疫苗行业前景展望由于人二倍体疫苗产量低、大体积生物反应器培养人二倍体细胞难度较大等因素，二代狂犬疫苗仍为国内使用的主流狂犬疫苗。
西安市犬狂犬病免疫效果调查
西安市犬狂犬病免疫效果调查董钊，权亚玮，吴艳，白东宁（西安市动物疫病预防控制中心陕西西安710061）摘要：目的：调查了解西安市推行狂犬病强制免疫以来受免犬只的免疫状况。
方法：采集本市犬场、散养犬户的犬血清样品280份，用ELISA方法检测血清中的抗体阳性率。
结果：被检的犬血清样品中抗体阳性率为74.64％，且进口疫苗与国产疫苗免疫后的抗体阳性率分别为75%与72.52%。
结论：实行强制免疫后，犬只群体狂犬病免疫抗体水平较高，达到了农业部规定的70%的标准。
关键词：狂犬病；免疫；效果；抗体阳性率狂犬病（Rabies）是由狂犬病毒（Rabies virus, RV）引起的急性中枢神经系统表现的人兽共患传染病。
狂犬病毒主要通过破损的皮肤或黏膜侵入人体，经神经末梢上行进入中枢神经系统，临床表现主要为急性、进行性、几乎不可逆转的脑脊髓炎，以狂燥不安、行为反常、攻击行为、进行性麻痹为特征，一旦发病，死亡率达100％，是迄今为止人类病死率最高的急性传染病。
自1996年以来，我国狂犬病疫情一直持续上升，2007年达到3302例，病例数仅次于印度，居世界第二位[1]。
2009年全国24个省份的892个县(区)报告发病数2213例，报告死亡2131例[2]。
2010年全国23个省817个县（区）报告狂犬病病例为2048例[3]。
陕西省1955-2009年共报告狂犬病474例，2000年后全省疫情也均处于较低水平，但2009年骤然上升，仅此一年发病人就达26例[4]。
据西安市人大常委会内务司法委员会调查数据，全市目前已登记和收缴的犬只数量已达8万只以上。
2012年2月1日起实施《西安市限制养犬条例》，该条例规定西安市实行犬只狂犬病强制免疫制度。
西安市农业委员会申请了狂犬病疫苗专项资金，购置了国产与进口狂犬病疫苗，实现了狂犬病疫苗的完全免费发放和强制免疫，但免疫效果情况还不清楚。
因此，本调查对我市14个区县已注射免费发放疫苗的犬只采集血清样品进行检测，评价我市动物防疫部门免费供应疫苗免疫效果，以期通过此次调查研究为西安市狂犬病防控提供参考。
猪伪狂犬病的研究进展
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重复 序列 （ｅ ｎｌｒｐａ，Ｒ 与 内部重 复序 列 （ ｔ ａ ｒ— Ｔ ｒ ａ ｅｅｔ ） ｍｉ Ｔ Ｉ ｅ ｌ ｅ ｎｒ ｎ ｐ ａ， ） ｅｔＩ 组成 。对 Ｐ Ｖ基因组序列测定发现其 由 ７ Ｒ Ｒ ２个 阅读
框组成 ， 编码 ７ 可 ０种 蛋 白 ， 目前 已 发 现 和 命 名 的有 、Ｃ ｇ、 ｇ ｇ ｇ ｇ ｇ、Ｋ、Ｌ ｇ ｇ ｌ 种 糖 蛋 白。 编 码 罢 ｇ 、 Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉｇ ｇ 、Ｍ、Ｎ １ ＝ Ｅ Ｃ、 ｇ ｇ、Ｍ 和 ｇ 的基 因 为 病 毒 复 制 非 必需 的 ’Ｂ ｇ ｇ ｇ Ｇ、Ｉｇ Ｎ ｇ 、ｃ、Ｄ、Ｅ
Ｐ Ｖ只有一种血清型 ， Ｒ 但不 同毒株在毒力和生物学特性 等方面存在差异 。Ｐ Ｖ具有泛嗜性 ， Ｒ 能在多种组织培养细胞
内 增 殖 ， 产 生 明 显 的 细 胞 病 变 和 核 内 嗜 酸 性 包 涵 体 ， 中 并 其 以 兔 肾 和猪 肾细 胞 最 为 敏 感 。
Ｐ Ｖ基 因组 为 线 状 双 链 Ｄ Ａ， Ｒ Ｎ 大小 约 １０ ｂ Ｇ＋Ｃ含 量 ８ｋ ，
２ ０世 纪 ６ 代 之 前 ， 被 感 染 后 其 症 状 比较 温 和 ，在 养 猪 ０年 猪
Ｐ Ｖ属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科 ， Ｒ 猪疱疹病毒 Ｉ 型。其完整病毒粒子为圆形 ， 直径 １０～１０ｍ， ５ ８ ｎ 核衣壳 直径
为 １ ５ １０ ｍ。 囊 膜 ， 膜 表 面 有 长 约 ８ ０ ｍ 呈 放 射状 ０ ｎ 有 １ 囊 ～１ｎ 排 列 的纤 突 。 Ｐ Ｖ对 外 界环 境 的抵 抗 力较 强 ，５ ５ ｍ ｎ ８ ℃ ３ ｎ Ｒ ５ ℃ ０ ｉ 、０ ｍｉ
狂犬病病毒的研究现状及其进展
Ｇ蛋 白也 是 狂 犬 病 病 毒 唯 一 的表 面 蛋 白， 可结 合 细胞 受体 ， 导病 毒侵 入 ， 定病 介 决 毒 的致 病性 和 组织 嗜性 ， 病毒 的 主要 表面 是 抗原， 且是 Ｒ 并 Ｖ与 细胞 受体 结合 的结构 ， 因 此是 Ｒ Ｖ的 主要保 护 性抗 原 ．能诱 导 产 生 中
ｒ ｐ ａ ａ ｉ ｕ ） 分 别 为 基 因 ５和 ６型 。 ｏ ｅ ｎｂ ｔｖ ｒ ｓ
狂 犬 病 病 毒 属 弹 状 病 毒 科 （ｈ ｂ Ｒ ａ－ ｄ ｖ ｒ ｄ ｅ ，狂 犬病 病 毒 属 （ｙ ｓ ｖｒ ｓ 。 ｏ ｉ ｉａ ） Ｌ ｓ ａ ｉ ｕ ） 病 毒颗 粒一 端呈 平坦 或 略 凹状 ， 一端 为半 另
３
作 者 简 介 ： 伟 燕 （９ ０ ） 男 ， 肃 甘 谷 人 ， 张 １８～ ， 甘
助 理兽 医师 ，主要从 事动 物卫 生监督 及行 政
执 法工作 。
甘龠葛哎兽厦
的改变 ，可 以 引起 Ｇ蛋 白抗原 性 的变 化 ， 尤
２１ ０ ２年ｆ ２ ６期 总 ２）
密结 合 成核 糖 核 蛋 白 （ｉ ｏ ｕ １ ｏ ｒ ｔ ｉ ， ｒ ｂｎｃｅ ｐｏｅｎ
患者 多 因病畜 咬伤 而感 染 ，出现 以恐 水 、 畏
光 、 咽 困难 、 躁 等 为 主要 特 征 的 中枢 神 吞 狂 经 系统感 染症状 。
１ 狂 犬 病 病 毒 结 构 及 类 型
１ １ 结 构 ．
ｖｒ ｓ Ｕ Ｖ ） ｉ ｕ Ｖ ． 。血 清 Ｉ型 的疫 苗株 对其 他血 Ｄ
旋 状核 衣壳 ， 直径 约 ５ ｍ 由单链 Ｒ Ａ基 因 ０ｎ ， Ｎ
组 、 核 蛋 白 （ｕ ｌ ｏ ｒ ｔ ｉ ） 大 蛋 白 Ｎ ｃｅｐ ０ｅｎ 、 （ａ ｇ ｐ ｏ ｅ ｎ 和 磷 酸 化 蛋 白 （ｈ ｓ ｈ — Ｌｒ ｅｒ ｔｉ） Ｐ ｏｐｏ
狂犬疫苗
狂犬疫苗研究进展石家庄学院化工学院12级生物工程杨申雨20120702039摘要：狂犬病是感染中枢神经系统的一种人兽共患的急性接触性传染病，由狂犬病痛毒(Rabies Vi—rus，RV)引起，病毒粒子聚集形成胞浆内包含体，只在神经细胞胞浆和蒲肯野氏细胞里存在。
RV可分成4个血清型和2个尚待定型的病毒株。
随着RV血清型变异，目前人用和动物用狂犬病疫苗毒株已不能提供针对所有种类RV的有效保护，为了对狂犬病及其研究进展有一个全面的认识，该文主要对RV病原以及狂犬病疫苗等方面的研究进展进行了综述。
关键字：发现过程、化学结构、理化性质、接种对象、生产工艺、趋势展望发明狂犬疫苗的是著名的法国生化学家路易斯•巴斯德。
一开始，巴斯德将狂犬病毒注射到家兔的体内，让病毒经过传代，再注射到健康狗的体内，他发现：经过多次传代后，病毒的毒性大大降低。
将这种病毒注射进健康狗的体内时，狗不仅不会发病，且能对狂犬病毒产生免疫力。
这一动物实验取得成功后，巴斯德又将多次传代的狂犬病毒随兔脊髓一起取出，并进行自然干燥减毒。
然后把这种脊髓研成乳化剂，用生理盐水稀释，制成了最早的兔脑基髓制备的减毒狂犬疫苗，并在治疗人的狂犬病时取得了成功。
虽然现在科学技术不断发展，人类目前用得最多的是人用狂犬病纯化疫苗，巴斯德的疫苗早已不再使用，但是，巴斯德是第一个成功发明狂犬疫苗的人，并用他的疫苗拯救了很多狂犬病人。
一，目前，用于人和动物狂犬病预防主要使用的是常规疫苗，常规疫苗尽管安全有效，但存在一些缺点。
随着分子病毒学和疫苗学的发展，研制安全、有效、经济、使用方便的狂犬病新型疫苗已成为当前开发的活跃领域。
目前已经和正在研制开发的狂犬病新型疫苗主要有亚单位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、活载体疫苗、基因缺失疫苗、抗独特型疫苗、转基因植物可食疫苗等。
下面就近年来国内外有关方面的研究进展进行综述。
1亚单位疫苗亚单位疫苗可以分为化学亚单位疫苗和基因工程亚单位疫苗。
抗狂犬病毒中和抗体研究进展
生物技术进展２０２０年㊀第１０卷㊀第４期㊀３３９~３４４ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ㊀ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１进展评述Ｒｅｖｉｅｗｓ㊀收稿日期:２０１９￣１０￣１０ꎻ接受日期:２０２０￣０４￣２２㊀基金项目:国家自然科学基金项目(８１７０２０７２)ꎮ㊀联系方式:卞论Ｅ￣ｍａｉｌ:１２６１７２５６９２＠ｑｑ.ｃｏｍꎻ∗通信作者吴英松Ｅ￣ｍａｉｌ:ｙｉｎｇｓｏｎｇｗｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍ抗狂犬病毒中和抗体研究进展卞论ꎬ㊀林冠峰ꎬ㊀吴英松∗南方医科大学检验与生物技术学院ꎬ广州５１０５１５摘㊀要:狂犬病是一种人兽共患传染病ꎬ人和动物一旦发病后死亡率几乎百分之百ꎬ而有效的暴露后预防措施可以将死亡风险降至零ꎮ根据ＷＨＯ推荐的狂犬病暴露后预防方案ꎬ一般狂犬病暴露者需要进行疫苗注射ꎬ严重者则需在进行疫苗注射的同时注射抗狂犬病毒中和抗体ꎮ常用的中和抗体有马抗狂犬病毒免疫球蛋白和人抗狂犬病毒免疫球蛋白ꎬ然而两者都存在引起过敏反应或血液疾病的风险ꎮ人源抗狂犬病毒中和抗体则因为具有安全性高㊁成本低㊁可量产等优点有望代替免疫球蛋白用于暴露后预防ꎮ基因工程抗体技术的发展加速了抗体人源化的进程ꎮ就抗狂犬病毒中和抗体的发展历程ꎬ不同类型中和抗体的优缺点以及中和抗体的未来研究方向作了综述及展望ꎬ以期为新一代狂犬疫苗的研发提供参考ꎮ关键词:狂犬病毒ꎻ暴露后预防ꎻ中和抗体ＤＯＩ:１０.１９５８６/ｊ.２０９５￣２３４１.２０１９.００９９ＡｄｖａｎｃｅｓｏｎＡｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓＶｉｒｕｓＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＢＩＡＮＬｕｎꎬＬＩＮＧｕａｎｆｅｎｇꎬＷＵＹｉｎｇｓｏｎｇ∗ＳｃｈｏｏｌｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５ꎬＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｒａｂｉｅｓｉｓａｚｏｏｎｏｔｉｃｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅ.Ｔｈｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｒａｔｅｏｆｈｕｍａｎｓａｎｄａｎｉｍａｌｓｉｓａｌｍｏｓｔ１００％ａｆｔｅｒｏｎｓｅｔꎬａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｍｅａｓｕｒｅｓｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅｒｉｓｋｏｆｄｅａｔｈｔｏｚｅｒｏ.ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＷＨＯｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｒａｂｉｅｓｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓｐｒｏｇｒａｍꎬｇｅｎｅｒａｌｒａｂｉｅｓ￣ｅｘｐｏｓｅｄｐｅｏｐｌｅｎｅｅｄｔｏｂｅｖａｃｃｉｎａｔｅｄꎬａｎｄｉｎｓｅｖｅｒｅｃａｓｅｓꎬｔｈｅｙｍｕｓｔｂｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ.Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄａｒｅｅｑｕｉｎｅａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎａｎｄｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬｂｕｔｂｏｔｈｈａｖｅｔｈｅｒｉｓｋｏｆｃａｕｓｉｎｇａｌｌｅｒｇｉｃｒｅａｃｔｉｏｎｓｏｒｂｌｏｏｄｄｉｓｅａｓｅｓ.Ｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｒｅｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｒｅｐｌａｃｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｆｏｒｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｈｉｇｈｓａｆｅｔｙꎬｌｏｗｃｏｓｔꎬａｎｄｍａｓｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｈａｓａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆａｎｔｉｂｏｄｙｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ.Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬａｎｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬｗｈｉｃｈｗａｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｅｗｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒａｂｉｅｓｖａｃｃｉｎｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓꎻｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓꎻｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ㊀㊀狂犬病是由狂犬病毒属(Ｌｙｓｓａｖｉｒｕｓ)的嗜神经病毒引起的能感染人类和其他哺乳类动物的传染性疾病ꎬ发病后死亡率几乎百分之百ꎮ每年均有６００００人死于狂犬病ꎬ而且这个数字还在持续增长[１￣２]ꎬ但是在感染病毒与发病之间进行有效的暴露后预防可以将死亡率降低至几乎零ꎮ因此有效的狂犬病暴露后预防方法在提高狂犬病患者生存几率方面极为重要ꎮ狂犬病暴露后预防方式与暴露程度有关ꎬ狂犬病的暴露程度可分为三种:Ⅰ类暴露为接触猫狗等动物时皮肤被舔ꎬ但依然保持完整ꎬ如能确认接触的动物并未感染狂犬病毒ꎬ则不需要进行处理ꎻⅡ类暴露为皮肤被咬伤或轻微抓伤ꎬ但是并未出血ꎬ这种情况只需要主动免疫ꎬ即进行狂犬病疫苗注射ꎻⅢ类暴露为皮肤被咬. All Rights Reserved.伤或抓伤或者粘膜与已破损的皮肤被动物体液污染ꎬ这种情况则需要以暴露后预防(ｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏｓｕｒｅｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓꎬＰＥＰ)方式进行处理[３]ꎬ主要有三个步骤:①使用清水冲洗伤口ꎬ尽量避免伤口残留狂犬病毒ꎻ②采取主动免疫措施ꎬ即注射狂犬病毒灭活疫苗ꎻ③使用抗狂犬病毒中和抗体浸润注射ꎬ以达到在主动免疫产生足量抗体之前ꎬ快速及时地中和患处及体内狂犬病毒的目的ꎬ避免狂犬病毒入侵中枢神经系统ꎮ在国内就曾发生过Ⅲ类暴露后仅接种狂犬病疫苗并未注射抗狂犬病毒中和抗体而死亡的案例[４￣５]ꎬ这也证明了及时注射中和抗体在狂犬病防治中的重要性ꎮ中和抗体是Ｂ淋巴细胞产生的抗体ꎬ能够与病原微生物表面的抗原结合ꎬ从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体ꎬ防止其侵入细胞ꎮ由于中和抗体有着成本高㊁产量小等局限ꎬ难以在基层地区生产和普及ꎮ历代科学家致力于改进抗体技术并应用于中和抗体研制ꎬ提高中和抗体生产效率ꎮ中和抗体经由多抗血清㊁单克隆抗体及基因工程抗体等技术的发展历程ꎬ其研制趋于成熟ꎬ本文就抗狂犬病毒中和抗体的发展历程㊁不同类型中和抗体的优缺点以及中和抗体的未来研究期望作了综述ꎬ以期为新一代狂犬疫苗的研发提供参考ꎮ１㊀狂犬病疫苗简史作为人类历史中出现的最早的疾病之一ꎬ对于狂犬病的相关记载可以追朔至古埃及[６]ꎮ１７世纪的英文文献中以这种传染病的症状(该病的患者会过度口渴和害怕水)为其命名恐水症(ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉａ)[７￣１０]ꎮ１８８５年路易斯 巴斯德通过将狂犬病动物的脊髓进行干燥处理制备出世界上第一支用于预防狂犬病的疫苗[１１]ꎬ开启了暴露后狂犬病预防的新时代ꎮ在之后的五十年里ꎬ研究者们采用了不同的措施对巴斯德最初通过简单而粗糙的干燥方式制备出的狂犬病疫苗进行了改进ꎬ以提高安全性和治疗效果ꎮ疫苗的制造工艺发展至今ꎬ目前已处于细胞培养疫苗的时代ꎮ其中以人二倍体细胞培养狂犬病疫苗作为基准ꎬ这是一种使用人类二倍体细胞接种固定病毒后进行培养繁殖ꎬ再经过浓缩㊁灭活等步骤制成的疫苗[７]ꎮ这类疫苗治疗效果好ꎬ注射后较少产生副反应ꎬ是理想的疫苗[８]ꎮ作为第一种纯化浓缩无佐剂的冻干狂犬病疫苗ꎬ人二倍体细胞狂犬疫苗(ｈｕｍａｎｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｒａ￣ｂｉｅｓｖａｃｃｉｎｅꎬＨＤＣＶ)从１９７４年上市以来ꎬ因其较高的安全性㊁较好的免疫原性㊁极少产生副作用等优点ꎬ被评价为最理想的狂犬病疫苗ꎮ但由于ＨＤＣＶ细胞培养技术难度大㊁成本高ꎬ主要应用在发达国家ꎮ目前国内狂犬病疫苗市场占比前三的辽宁成大公司㊁宁波荣安公司和广州诺诚公司的产品也主要是以非洲绿猴肾细胞(Ｖｅｒｏ细胞)狂犬病疫苗为主ꎮ而以ＨＤＣＶ作为主要产品的成都康华公司[９]㊁辽宁迈丰公司[１０]市场占比还不足３％ꎬ这也说明ＨＤＣＶ其在发展中国家普及率较低的窘境ꎮ２㊀狂犬病毒中和抗体的功能狂犬病毒中和抗体的作用方式主要分为三种:①中和抗体能够在补体的参与作用下使病毒感染的细胞溶解破碎ꎮ当狂犬病毒在宿主体内的细胞中进行复制增殖时ꎬ细胞膜会表达病毒蛋白抗原ꎬ而这种抗原会被中和抗体识别并产生相互作用ꎬ在补体的协助下发生溶解破碎ꎻ②中和抗体会结合体内的游离病毒ꎬ这会阻断病毒进入细胞的过程ꎬ二者组成的免疫复合物也会被吞噬细胞识别并吞噬和清除ꎻ③抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用ꎬ即表达有ＩｇＧ抗体的Ｆｃ受体的ＮＫ细胞和巨噬细胞等ꎬ通过和已结合于病毒感染细胞表面的ＩｇＧ抗体Ｆｃ段结合ꎬ以此来杀伤病毒感染的靶细胞[１２]ꎮ３㊀狂犬病毒中和抗体发展历程中和抗体的发展历程大概分为三个阶段:第一代抗体的发展始于２０世纪初期ꎬ早在１８９５年ꎬＨｅｒｉｃｏｕｒｔ和Ｒｉｃｈｅｔ[１３]就通过将癌细胞注入动物体内ꎬ取其产生的抗血清ꎬ用于治疗癌症病人ꎬ即使用抗原免疫动物获取的能中和对应抗原的多抗血清ꎻ第二代抗体ꎬ即单克隆抗体ꎬ是１９７５年由Ｋöｈｌｅｒ与Ｍｉｌｓｔｅｉｎ利用杂交瘤技术制备[１４]ꎬ与第一代抗体相比ꎬ单克隆抗体由于均由同一Ｂ细胞分裂得到的子细胞产生而拥有高纯度㊁仅针对抗原单一表位㊁生产量较大等优点ꎮ但是由于单抗０４３生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.大部分来自于鼠的杂交瘤细胞ꎬ注射后会被免疫系统识别产生人抗鼠抗体从而被中和掉ꎬ导致效果锐减[１５]ꎬ同时还会引起人体产生过敏反应ꎻ第三代抗体ꎬ也就是基因工程抗体ꎬ其发展始于２０世纪８０年代中期ꎮ基因工程抗体是使用分子生物学技术对鼠源抗体进行改造ꎬ从而降低人体对其产生的免疫反应ꎬ例如使用ＤＮＡ重组技术对单克隆抗体的鼠源部分进行替换从而构建人鼠嵌合抗体ꎬ以实现鼠源单抗的人源化[１６]ꎬ甚至通过噬菌体展示技术[１７]与转基因鼠技术[１８]对抗体进行了彻底人源化处理ꎮ３.１㊀抗狂犬病毒多克隆抗体(抗血清)抗狂犬病毒多克隆抗体为第一代抗体ꎬ即通过使用抗原免疫动物获取的能中和对应抗原的多抗血清ꎮ目前常用于ＰＥＰ的抗狂犬免疫球蛋白主要为抗狂犬病马血清(ｅｑｕｉｎｅａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｉｍｍｕ￣ｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬＥＲＩＧ)和抗狂犬病人血清(ｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎꎬＨＲＩＧ)[１９]ꎮ虽然这两种免疫球蛋白都很有效ꎬ但是各自都有缺点ꎮ首先ＥＲＩＧ有着非常严重的副反应ꎬ譬如严重的过敏反应等[２０]ꎬ而且还会抑制某些疫苗诱导产生的抗体ꎮ尽管有着很多缺点ꎬＥＲＩＧ在很多发展中国家仍是供不应求[２１]ꎮ相比之下ꎬＨＲＩＧ则无副反应ꎬ但是由于ＨＲＩＧ需从免疫过的人血清中提取ꎬ而且需要供体的抗体滴度达到一定水平ꎬ因此产量有限且价格昂贵ꎮ同时由于其供体不稳定ꎬ导致其存在着血液制品有潜在致病性㊁批次间有质量差异等问题ꎮ３.２㊀鼠源抗狂犬病毒单克隆抗体为了寻找一种可以克服ＥＲＩＧ和ＨＲＩＧ缺陷的新产品ꎬ科学家们开始着眼于研制抗狂犬病毒单克隆抗体ꎮ从杂交瘤单克隆抗体技术[１３]出现以来ꎬ单克隆抗体技术发展迅猛ꎬ利用单克隆抗体技术生产的抗体拥有高特异性ꎬ能够解决多抗血清的部分缺陷ꎬ此外还拥有着高安全性㊁低成本㊁可量产等优点[２２]ꎮ在临床诊断㊁预防以及治疗等方面的应用也日益广泛ꎬ其中对治疗性单克隆抗体的研究尤为深入ꎮ但由于传统的单克隆抗体为鼠源性ꎬ易引发人体抗鼠抗体产生ꎬ甚至引发超敏反应ꎮ因此直到基因工程抗体出现后ꎬ单克隆抗体作为药物才显示出了巨大的应用前景ꎮ１９８９年Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ等[１４]利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了多株针对狂犬病毒糖蛋白(ｇｌｙｃｏ￣ｐｒｏｔｅｉｎꎬＧ蛋白)与核蛋白(ｎｕｃｌｅａｒｐｒｏｔｅｉｎꎬＮ蛋白)的鼠源单克隆抗体ꎬ将这些抗体混合使用即为单克隆抗体鸡尾酒疗法(ｃｏｃｋｔａｉｌｏｆａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓꎬＭｃＡｂ￣Ｃ)ꎬ对小鼠和地鼠进行的保护性试验证明这种方法不仅能够在被动免疫之后抵抗致死量狂犬病毒的攻击ꎬ还拥有暴露后保护作用ꎮ１９９０年Ｄｉｅｔｚｓｃｈｏｌｄ等[２３]研究证明糖蛋白是抗狂犬病毒主要的中和抗原蛋白ꎬ为之后以糖蛋白为目的蛋白制备新疫苗及抗体的研究提供了指导方向ꎬ也为现代的狂犬病预防奠定了基础ꎮ１９９１年Ｆｕ等[２４]将狂犬病毒ＥＲＡ毒株编码Ｎ蛋白基因克隆至杆状病毒中ꎬ随后在昆虫细胞中大量表达ꎬ经过亲和色谱法纯化之后制备出了３２株单克隆抗体ꎬ其中３１株能够正确识别狂犬病毒株ꎮ直到２００７年ꎬＭｕｈａｍｕｄａ等[２５]制备了数株针对狂犬病毒Ｇ蛋白的鼠源单克隆抗体ꎬ并使用动物模型验证了其对于狂犬病暴露后预防的效果ꎮ快速荧光灶抑制试验的结果显示抗体的中和效价达到１６５０~７５０００ＩＵ ｍＬ－１ꎬ能够保护７０％~１００％接种了狂犬病毒的小鼠或豚鼠ꎮ这些单克隆抗体在有效蛋白浓度及中和效价方面高于商业ＥＲＩＧ约２０００倍ꎮ３.３㊀人－鼠异源骨髓瘤杂交技术１９９１年Ｅｎｓｓｌｅ等[２６]通过ＥＢ病毒使人源Ｂ淋巴细胞实现永生化ꎬ再与小鼠骨髓瘤杂交细胞融合制备出人源化抗狂犬病毒特异性单克隆抗体ＴＷ￣１ꎬ并在之后的快速荧光灶免疫试验和体内实验中均能中和病毒及保护小鼠免受感染ꎮ２０００年Ｃｈａｍｐｉｏｎ等[２７]将接受过商品化疫苗接种的人Ｂ淋巴细胞通过人－鼠异源骨髓瘤杂交技术进行细胞融合并制备了数株人源化抗狂犬病毒单克隆抗体ꎮ虽然这种异源杂交瘤细胞能获得比较稳定的细胞克隆ꎬ但是会产生丢失抗体的情况ꎬ这个现象可能与染色体丢失有关[２８]ꎮ３.４㊀抗狂犬病毒基因工程抗体由于鼠源性的单克隆抗体对于人体来说属于异源蛋白ꎬ容易刺激免疫系统产生抗鼠抗体并对其进行清除ꎬ还极易产生超敏反应[２９]ꎬ因此很难在临床上进行应用ꎮ而人源化单克隆抗体则拥有着副反应小㊁不易产生超敏反应等优点ꎬ更有机会应用于临床治疗ꎮ基因工程抗体分为如下几种:１４３卞论ꎬ等:抗狂犬病毒中和抗体研究进展. All Rights Reserved.人鼠嵌合抗体㊁互补决定区(ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅ￣ｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎꎬＣＤＲ)移植抗体㊁完全人源性抗体㊁单链抗体㊁噬菌体抗体(表１)ꎮ３.４.１㊀人鼠嵌合抗体㊀１９８４年Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等[３０]通过获取能够分泌与已知抗原结合的特异性抗体的骨髓瘤杂交细胞系ꎬ提取其编码抗体可变区域的基因ꎬ并使用重组ＤＮＡ技术将其连接至人类免疫球蛋白恒定区域基因ꎬ创造出了有抗原结合特异性的人鼠嵌合抗体分子ꎬ这也是人类历史上第一次研究出人源化的单克隆抗体ꎮ人鼠嵌合抗体有着很多优点:①能够自由地选择抗体的亚型㊁大小㊁结构域等ꎻ②其不但保留了亲本鼠源单克隆抗体的高特异性及亲和力ꎬ而且减少了其中７０％的鼠源成分ꎻ③其中的人源Ｆｃ段能够有效地介导各种生物学效应ꎬ例如抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等ꎮ表１㊀几种基因工程抗体的优缺点Ｔａｂｌｅ１㊀Ａｄｖａｎｔａｇｅａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｏｆｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ抗体类型优点缺点人鼠嵌合抗体免疫原性降低ꎬ人抗鼠反应(ｈｕｍａｎａｎｔｉ￣ｍｏｕｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅꎬＨＡＭＲ)减少仍有诱导产生ＨＡＭＲ的可能性ＣＤＲ移植抗体免疫原性基本消除结合抗原能力下降完全人源性抗体保留亲和力和特异性ꎬ降低异源性抗体特异性和亲和力有所下降单链抗体分子量小ꎬ穿透力强ꎬ易达到靶点位置亲和力极低３.４.２㊀ＣＤＲ移植抗体㊀虽然嵌合抗体的恒定区已经改造为人源化ꎬ但是由于其可变区仍是鼠源的ꎬ因此仍会引起机体不同程度地产生人抗鼠抗体[３１]ꎮ而ＣＤＲ移植抗体则是将人抗体的互补决定区置换为鼠源性单克隆抗体的互补决定区ꎬ这种方法制作的抗体仅有极少部分仍为鼠源性ꎮ但是这种抗体与抗原的亲和力会下降ꎬ大概仅有原抗体的３０％~５０％ꎮ３.４.３㊀完全人源性抗体㊀完全人源性抗体是使用基因敲除技术敲除掉小鼠的免疫球蛋白基因ꎬ并以人免疫球蛋白基因进行取代ꎬ然后再采用抗原免疫小鼠ꎬ经过杂交瘤技术生产得到ꎮ２００７年Ｓｌｏａｎ等[３２]利用携带人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠ꎬ得到了数株具有中和活性的人源性单克隆抗体ꎬ其中的人源性抗体１７Ｃ７能够识别狂犬病毒Ｇ蛋白的构象表位ꎬ并通过建立暴露后预防小鼠模型证实该抗体能够保护仓鼠免受致死量狂犬病毒的感染ꎮ３.４.４㊀单链抗体㊀Ｆｖ片段(ｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔ)是结合抗原的最小功能片段ꎬ是由重链可变区与轻链可变区通过疏水作用结合而成ꎬ而由于其重链可变区与轻链可变区是由非共价键连接ꎬ因此其在体内很不稳定ꎮ而随着分子生物学的发展ꎬ人们利用ＤＮＡ重组技术对Ｆｖ片段进行了改进ꎬ其中研究最多的就是单链抗体ꎮ１９８８年Ｈｕｓｔｏｎ与Ｂｉｒｄ等[３３￣３４]最早制备了单链抗体(ｓｃＦｖꎬｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉ￣ｂｏｄｙ)ꎬ单链抗体是使用一条短肽将重链可变区与轻链可变区连接而成ꎬ这种肽链结构不但能够在大肠杆菌表达中更有利于基因重组操作ꎬ同时也相应地解决了Ｆｖ不够稳定的缺点ꎮ单链抗体的优点主要在于其由重链可变区与轻链可变区组成ꎬ因此保留了完整的抗原结合部位ꎮ而且由于其分子量小ꎬ仅有标准抗体的１/６左右ꎬ因此拥有较强的穿透力ꎬ能更迅速地到达靶向部位ꎮ但是相比较于天然抗体的双价结构ꎬ单链抗体是单价的ꎬ因此其亲合力有所下降ꎮ３.４.５㊀噬菌体展示技术㊀噬菌体展示技术是把外源蛋白或者多肽的ＤＮＡ序列插入至噬菌体外壳蛋白结构基因的合适位置ꎬ从而使外源基因随着外壳蛋白一同表达ꎬ同时通过噬菌体的重新组装而展示到其表面的技术ꎮ大量获取的人源基因工程抗体也因为噬菌体展示技术的出现成为可能[３５]ꎮ１９９７年Ｍｕｌｌｅｒ等[３６]通过噬菌体展示技术从分泌糖蛋白单克隆抗体的３０ＡＡ５杂交瘤细胞中分离出了能够中和狂犬病毒的单链抗体片段ꎮ２００５年Ｋｒａｍｅｒ等[３７]从接种疫苗的献血者血液中提取抗体基因ꎬ成功构建了人源抗狂犬病毒噬菌体抗体库ꎬ最终得到了２１株全长人免疫球蛋白ꎮ３.５㊀鸡尾酒单克隆抗体疗法事实上ꎬ由于狂犬病毒拥有较多基因型[３８]ꎬ２４３生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.且Ｇ蛋白序列并不保守ꎬ因此针对单一抗原表位的中和抗体并不能达到广谱疗效ꎮ因此怎样将针对不同抗原表位的中和抗体联合使用也就成为了治疗性抗狂犬病毒抗体研究的重心ꎮ早在１９８９年Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ等[３９]就将针对Ｎ蛋白与Ｇ蛋白的单克隆抗体进行联用并称之为单克隆抗体鸡尾酒疗法ꎮ２００５年Ｇｏｕｄｓｍｉｔ等[４０]把针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ号位点的ＣＲ５７中和抗体和Ⅲ号位点的ＣＲ４０９８中和抗体混合使用ꎬ中和了２６种经典毒株ꎬ证明了鸡尾酒疗法的可行性ꎮ２００９年Ｍüｌｌｅｒ等[４１]开发了一种由５种鼠源性单克隆抗体联用的鸡尾酒疗法ꎬ有望取代ＨＲＩＧ在发展中国家得到广泛使用ꎮ２０１８年Ｘｉ等[４２]使用ＣＲ５７和ＣＲ４０９８制备了一系列的单链Ｆｖ片段和亮氨酸拉链Ｆｖ片段ꎬ并使用小鼠和仓鼠模型证明了亮氨酸拉链Ｆｖ鸡尾酒疗法比单链Ｆｖ鸡尾酒拥有更好的保护效果ꎮ４ 展望虽然已经有很多关于抗狂犬病毒治疗性抗体的专利ꎬ但是至今仍没有一种治疗性抗体投放市场ꎮ目前用于暴露后预防注射的抗体仍主要为ＥＲＩＧ和ＨＲＩＧꎬ亟需一种能够量产并且拥有较好的稳定性㊁安全性和经济性的治疗性抗体投入市场ꎮ此外ꎬ已经有研究表明ꎬ血脑屏障在防治狂犬病毒方面发挥着重要作用[４３]ꎬ而狂犬病毒则可以通过维持血脑屏障的完整性来逃逸免疫[４４]ꎮ因此能否利用一些细胞因子帮助治疗性抗体穿越血脑屏障或者通过改造治疗性抗体本身使其能穿过血脑屏障ꎬ这些都是值得研究的ꎬ这也为科学家们对抗狂犬病毒抗体的研究提供了新的方向ꎮ２０１９年Ｍａｒｏｓｉ等[４５]使用免疫调节抑制剂和ＨＲＩＧ同时应用于狂犬病小鼠模型ꎬ最后证实无论是暴露前还是暴露后处理组ꎬ免疫抑制剂与ＨＲＩＧ联用处理都展现出了更高的保护效果ꎮ实验还证实了促炎症细胞因子与分子通路抑制剂可以提高小鼠模型的生存率ꎬ并且配合ＨＲＩＧ效果更好ꎮ这些研究结果说明抗狂犬病毒抗体在一些物质的协同作用下可以发挥更好的预防作用ꎬ也为狂犬病抗体研究提供了新的方向ꎮ目前已上市的抗体药物主要为针对肿瘤或自身免疫疾病方面ꎬ用于抗病毒的抗体药物仅有三种ꎬ其中用于狂犬病治疗的单抗药物仅有一种 Ｒａｂｉｓｈｉｅｌｄꎮ而由于狂犬病毒Ｇ蛋白的不保守性ꎬ单独一种抗体的使用并不能有效地进行狂犬病防治ꎮ因此ꎬ针对不同抗原表位的狂犬病抗体的研究也是未来狂犬病抗体研究的主要方向之一ꎮ总的来说ꎬ狂犬病的防治不仅要做好暴露前预防ꎬ同时要在提高暴露后预防有效性㊁延长暴露后患者存活时间等方面加强研究ꎮ科学家们也需要在这些方面更加努力ꎬ使狂犬病的防治措施更加成熟㊁有效㊁经济ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀ＦＯＯＫＳＡＲꎬＢＡＮＹＡＲＤＡＣꎬＨＯＲＴＯＮＤＬꎬｅｔａｌ..Ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｒａｂｉｅｓａｎｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｌａｎｃｅｔꎬ２０１４ꎬ３８４(９９５１):１３８９－１３９９.[２]㊀ＨＡＭＰＳＯＮＫꎬＣＯＵＤＥＶＩＬＬＥＬꎬＬＥＭＢＯＴꎬｅｔａｌ..Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇｔｈｅｇｌｏｂａｌｂｕｒｄｅｎｏｆｅｎｄｅｍｉｃｃａｎｉｎｅｒａｂｉｅｓ[Ｊ/ＯＬ].ＰＬｏＳＮｅｇｌ.Ｔｒｏｐ.Ｄｉｓ.ꎬ２０１５ꎬ９(４):ｅ３７０９[２０２０－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｎｔｄ.０００３７０９. [３]㊀ＲＵＰＰＲＥＣＨＴＣＥꎬＧＩＢＢＯＮＳＲＶ.Ｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅ.Ｐｒｏｐｈｙ￣ｌａｘｉｓａｇａｉｎｓｔｒａｂｉｅｓ[Ｊ].Ｎ.Ｅｎｇｌ.Ｊ.Ｍｅｄ.ꎬ２００４ꎬ３５１(２５):２６２６－２６３５.[４]㊀兰宁ꎬ刘我鹏.狂犬疫苗全程及反复加强免疫后患狂犬病死亡１例报告[Ｊ].中国人兽共患病杂志ꎬ１９９１(０４):１７. [５]㊀樊哲江.狂犬疫苗全程免疫后患狂犬病死亡１例报告[Ｊ].中国人兽共患病杂志ꎬ１９８９(０６):５１－５２.[６]㊀ＲＯＳＮＥＲＦ.ＲａｂｉｅｓｉｎｔｈｅＴａｌｍｕｄ[Ｊ].Ｍｅｄ.Ｈｉｓｔｏｒｙꎬ１９７４ꎬ１８(２):１９８－２００.[７]㊀ＬＥＩＶＡＲ.Ａｂｒｉｅｆｈｉｓｔｏｒｙｏｆｈｕｍａｎｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓ[Ｊ].Ｎａｔｌ.Ｃａｔｈ.Ｂｉｏｅｔｈ.Ｑｕａｒｔ.ꎬ２００６ꎬ１７０９１５５１[２０２０－６－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.５８４０/ｎｃｂｑ２００６６３２８. [８]㊀ＰＥＤＲＯＬＭꎬＥＭＩＬＹＪＷꎬＷＥＮＤＹＰꎬｅｔａｌ..Ｐｏｓｔ￣Ｍａｒｋｅｔｉｎｇｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｏｆｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｄｉｐｌｏｉｄｃｅｌｌｖａｃｃｉｎｅ(Ｉｍｏｖａｘ)ｉｎｔｈｅＶａｃｃｉｎｅＡｄｖｅｒｓｅＥｖｅｎｔＲｅｐｏｒｔｉｎｇＳｙｓｔｅｍ(ＶＡＥＲＳ)ｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓꎬ１９９０－２０１５[Ｊ].ＰＬｏＳＮｅｇｌ.Ｔｒｏｐ.Ｄｉｓ.ꎬ２０１６ꎬ１０(７):ｅ０００４８４６[２０２０－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｎｔｄ.０００４８４６.[９]㊀赵志鹏ꎬ周蓉ꎬ蔡勇ꎬ等.一种人二倍体细胞培养狂犬病毒的工艺:ＣＮ１０６８３４２３７Ａ[Ｐ].２０１７－０６－１３.[１０]㊀袁若森ꎬ姜春来ꎬ杨旭ꎬ等.一种狂犬病疫苗病毒的筛选方法㊁狂犬病疫苗的制备方法:ＣＮ１０９６６６６５３Ａ[Ｐ].２０１９－０４－２３.[１１]㊀ＣＯＮＮＨＷ.Ｌｏｕｉｓｐａｓｔｅｕｒ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１８９５ꎬ２:６０１－６１０. [１２]㊀ＮＩＣＨＯＬＡＳＪꎬＡＤＡＭＦＣꎬＡＮＴＨＯＮＹＲＦ.Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｒｅ￣ｓｐｏｎｓｅｔｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２０１０ꎬ２８(２３):３８９６－９０１.[１３]㊀郭亚军.新型抗肿瘤抗体药物的研究[Ｃ].//中国抗癌协会.第四届中国肿瘤内科大会论文集ꎬ２０１０:１４－２３. [１４]㊀ＫÖＨＬＥＲＧꎬＭＩＬＳＴＥＩＮＣ.Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ.１９７５[Ｊ].Ｊ.Ｉｍｍｕ￣ｎｏｌ.ꎬ１９９２ꎬ２４:５２４－５２６.３４３卞论ꎬ等:抗狂犬病毒中和抗体研究进展. All Rights Reserved.[１５]㊀ＮＩＳＳＩＭＡꎬＣＨＥＲＮＡＪＯＶＳＫＹＹ.Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ[Ｊ].Ｈａｎｄｂ.Ｅｘｐ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.ꎬ２００８(１８１):３－１８.[１６]㊀ＪＯＮＥＳＰＴꎬＤＥＡＲＰＨꎬＦＯＯＴＥＪꎬｅｔａｌ..Ｒｅｐｌａｃｉｎｇｔｈｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ￣ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｓｉｎａｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈｔｈｏｓｅｆｒｏｍａｍｏｕｓｅ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ１９８６ꎬ３２１(６０６９):５２２－５２５. [１７]㊀ＣＬＡＣＫＳＯＮＴꎬＨＯＯＧＥＮＢＯＯＭＨＲꎬＧＲＩＦＦＩＴＨＳＡＤꎬｅｔａｌ..Ｍａｋｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｕｓｉｎｇｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｉｅｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ１９９１ꎬ３５２(６３３６):６２４－６２８.[１８]㊀ＧＲＥＥＮＬＬꎬＨＡＲＤＹＭＣꎬＭＡＹＮＡＲＤ￣ＣＵＲＲＩＥＣＥꎬｅｔａｌ..Ａｎｔｉｇｅｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｍｉｃｅｅｎｇｉ￣ｎｅｅｒｅｄｗｉｔｈｈｕｍａｎＩｇｈｅａｖｙａｎｄｌｉｇｈｔｃｈａｉｎＹＡＣｓ[Ｊ].Ｎａｔ.Ｇｅｎｅｔ.ꎬ１９９４ꎬ７(１):１３－２１.[１９]㊀ＪＡＭＥＳＨＳ.ＲａｂｉｅｓｉｎｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｓａｎｄｒｅｍａｒｋｓｏｎｇｌｏｂａｌａｓ￣ｐｅｃｔｓ[Ｊ].Ｒｅｖ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.ꎬ１９８８(４):５８５－５９７. [２０]㊀ＷＩＬＤＥＨꎬＣＨＯＭＣＨＥＹＰꎬＰＲＡＫＯＮＧＳＲＩＳꎬｅｔａｌ..Ａｄｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｑｕｉｎｅｒａｂｉｅｓｉｍｍｕｎｅｇｏｂｕｌｉｎ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ１９８９ꎬ７(１):１０－１１.[２１]㊀ＷＩＬＤＥＨꎬＴＩＰＫＯＮＧＰꎬＫＨＡＷＰＬＯＤＰ.Ｅｃｏｎｏｍｉｃｉｓｓｕｅｓｉｎｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｒａｂｉｅｓｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].Ｊ.Ｔｒａｖｅｌ.Ｍｅｄ.ꎬ１９９９ꎬ６(４):２３８－２４２.[２２]㊀ＫＥＬＬＥＲＭＡꎬＳＴＩＥＨＭＥＲ.Ｐａｓｓｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔｙｉｎｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].Ｃｌｉｎ.Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.Ｒｅｖ.ꎬ２０００ꎬ１３(４):６０２－６１４.[２３]㊀ＤＩＥＴＺＳＣＨＯＬＤＢꎬＧＯＲＥＭꎬＣＡＳＡＬＩＰꎬｅｔａｌ..Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ[Ｊ].Ｊ.Ｖｉｒｏｌ.ꎬ１９９０ꎬ６４(６):３０８７－３０９０.[２４]㊀ＦＵＺＦꎬＤＩＥＴＺＳＣＨＯＬＤＢꎬＳＣＨＵＭＡＣＨＥＲＣＬꎬｅｔａｌ..Ｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓｉｓｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓａｓａｖａｃｃｉｎｅ[Ｊ].Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡꎬ１９９１ꎬ８８(５):２００１－２００５.[２５]㊀ＫＡＤＥＲＭꎬＳＨＡＭＰＵＲＮＭꎬＶＡＳＡＮＴＨＡＰＵＲＡＭＲ.Ｕｓｅｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇｍｕｒｉｎｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏｒａｂｉｅｓｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｉｎｐａｓｓｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙａｇａｉｎｓｔｒａｂｉｅｓ.[Ｊ].Ｈｕｍ.Ｖａｃｃｉｎ.ꎬ２００７ꎬ３(５):１９２－１９５.[２６]㊀ＥＮＳＳＬＥＫꎬＫＵＲＲＬＥＲꎬＫÖＨＬＥＲＲꎬｅｔａｌ..Ａｒａｂｉｅｓ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｈａｔｐｒｏｔｅｃｔｓｍｉｃｅａｇａｉｎｓｔｌｅｔｈａｌｒａｂｉｅｓ[Ｊ].Ｈｙｂｒｉｄｏｍａꎬ１９９１ꎬ１０(５):５４７－５５６. [２７]㊀ＣＨＡＭＰＩＯＮＪＭꎬＫＥＡＮＲＢꎬＲＵＰＰＲＥＣＨＴＣＥꎬｅｔａｌ..Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ￣ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎ￣ｔｉｂｏｄｉｅｓａｓａｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒｐｏｏｌｅｄｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｅｇｌｏｂｕｌｉｎｉｎｔｈｅｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｅｘｐｏｓｕｒｅ[Ｊ].Ｊ.Ｉｍ￣ｍｕｎｏｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ２０００ꎬ２１ꎬ２３５(１－２):８１－９０.[２８]㊀ＪＡＭＥＳＫꎬＢＥＬＬＧＴ.Ｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.Ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｐｒｏｓｐｅｃｔｓ[Ｊ].Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ１９８７ꎬ１００(１－２):５－４０.[２９]㊀ＭＡＴＴＨＩＥＵＰꎬＶＩＯＬＥＴＡＲＧ.Ｃｕｒｒｅｎｔｋｎｏｗｌｅｄｇｅａｎｄｍａｎ￣ａｇｅｍｅｎｔｏｆｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｒｅａｃｔｉｏｎｓｔｏｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ[Ｊ].Ｊ.ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.Ｐｒａｃｔ.ꎬ２０１７ꎬ５(３):６００－６０９. [３０]㊀ＭＯＲＲＩＳＯＮＳＬꎬＪＯＨＮＳＯＮＭＪꎬＨＥＲＺＥＮＢＥＲＧＬＡꎬｅｔａｌ..Ｃｈｉｍｅｒｉｃｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙｍｏｌｅｃｕｌｅｓ:ｍｏｕｓｅａｎｔｉｇｅｎ￣ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｓｗｉｔｈｈｕｍａｎｃｏｎｓｔａｎｔｒｅｇｉｏｎｄｏｍａｉｎｓ.[Ｊ].Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡꎬ１９８４ꎬ８１(２１):６８５１－６８５５.[３１]㊀ＰＡＤＬＡＮＥＡ.Ａｎａｔｏｍｙｏｆｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｍｏｌｅｃｕｌｅ[Ｊ].Ｍｏｌ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.ꎬ１９９４ꎬ３１(３):１６９－２１７.[３２]㊀ＳＵＳＡＮＥＳꎬＣＡＴＨＬＥＥＮＨꎬＷＩＬＬＩＡＭＷꎬｅｔａｌ..Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣ｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｈａｔｐｏｔｅｎｔｌｙｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓａｂｒｏａｄｐａｎｅｌｏｆｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｅｓ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２００７ꎬ２５(１５):２８００－２８１０..[３３]㊀ＨＵＳＴＯＮＪＳꎬＬＥＶＩＮＳＯＮＤꎬＭＵＤＧＥＴＴ￣ＨＵＮＴＥＲＭꎬｅｔａｌ..Ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆａｎｔｉｂｏｄｙｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓ:ｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｓｐｅ￣ｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｉｎａｎａｎｔｉ￣ｄｉｇｏｘｉｎｓｉｎｇｌｅ￣ｃｈａｉｎＦｖａｎａｌｏｇｕｅｐｒｏ￣ｄｕｃｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ[Ｊ].Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡꎬ１９８８ꎬ８５(１６):５８７９－２８８３.[３４]㊀ＢＩＲＤＲＥꎬＨＡＲＤＭＡＮＫＤꎬＪＡＣＯＢＳＯＮＪＷꎬｅｔａｌ..Ｓｉｎｇｌｅ￣ｃｈａｉｎａｎｔｉｇｅｎ￣ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ.[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９８８ꎬ２４２(４８７７):４２３－４３６.[３５]㊀ＳÖＤＥＲＬＩＮＤＥꎬＳＩＭＯＮＳＳＯＮＡＣꎬＢＯＲＲＥＢＡＥＣＫＣＡ.Ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎａｎｔｉｂｏｄｙｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ:ｄｅｓｉｇｎｏｆｐｈａｇｅｍｉｄｖｅｃｔｏｒｓａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ[Ｊ].Ｉｍｍｕｎｏｌ.Ｒｅｖ.ꎬ１９９２ꎬ１３０:１０９－１２４.[３６]㊀ＢＲＵＮＯＨＭꎬＦＬＯＲＥＮＣＥＬꎬＣＡＲＯＬＩＮＥＤꎬｅｔａｌ..Ｐｈａｇｅ￣ｄｉｓｐｌａｙｅｄａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｍｏｕｓｅｓｃＦｖｆｒａｇｍｅｎｔｓｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ[Ｊ].Ｊ.Ｖｉｒｏｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ１９９７ꎬ６７:２２１－２３３. [３７]㊀ＫＲＡＭＥＲＲＡꎬＭＡＲＩＳＳＥＮＷＥꎬＧＯＵＤＳＭＩＴＪꎬｅｔａｌ..Ｔｈｅｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｉｍｍｕｎｅｌｉｂｒａｒｉｅｓ[Ｊ].Ｅｕｒ.Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.ꎬ２００５ꎬ３５(７):２１３１－２１４５.[３８]㊀ＷＩＭＨＭＶＰꎬＲＥＩＮＡＶＨꎬＥＬＩＳＡＢＥＴＨＲＡＭＶꎬｅｔａｌ..ＥｕｒｏｐｅａｎｂａｔｌｙｓｓａｖｉｒｕｓｅｓꎬＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ.[Ｊ].Ｅｍｅｒｇ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.ꎬ２００５ꎬ１１(１２):１８５４－１８５９.[３９]㊀ＳＣＨＵＭＡＣＨＥＲＣＬꎬＤＩＥＴＺＳＣＨＯＬＤＢꎬＥＲＴＬＨＣꎬｅｔａｌ..Ｕｓｅｏｆｍｏｕｓｅａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒａｂｉｅｓ[Ｊ].Ｊ.Ｃｌｉｎ.Ｉｎｖｅｓｔ.ꎬ１９８９ꎬ８４(３):９７１－９７５.[４０]㊀ＪＡＡＰＧꎬＷＩＬＦＲＥＤＥＭꎬＷＩＬＬＩＡＭＣＷꎬｅｔａｌ..Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｎａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｈｕｍａｎｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉ￣ｒａｂｉｅｓｉｍｍｕｎｅｇｌｏｂｕｌｉｎ[Ｊ].Ｊ.Ｉｎｆｅｃｔ.Ｄｉｓ.ꎬ２００６ꎬ１９３(６):７９６－８０１.[４１]㊀ＴＨＯＭＡＳＭꎬＢＥＲＮＨＡＲＤＤꎬＨＩＬＤＥＧＵＮＤＥꎬｅｔａｌ..Ｄｅｖｅｌ￣ｏｐｍｅｎｔｏｆａｍｏｕｓｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｃｋｔａｉｌｆｏｒｐｏｓｔ￣ｅｘｐｏ￣ｓｕｒｅｒａｂｉｅｓｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓｉｎｈｕｍａｎｓ[Ｊ/ＯＬ].ＰＬｏＳＮｅｇｌ.Ｔｒｏｐ.Ｄｉｓ.ꎬ２００９ꎬ３(１１):ｅ５４２[２０２０－０６－２３].ｈｔｔｐｓ://ｄｏｉ.ｏｒｇ/１０.１３７１/ｊｏｕｒｎａｌ.ｐｎｔｄ.００００５４２.[４２]㊀ＸＩＨＬꎬＭＥＮＧＸＹꎬＧＵＴꎬｅｔａｌ..ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎａｎｄｌｅｕｃｉｎｅｚｉｐｐｅｒＦｖｆｒａｇｍｅｎｔｓｃｏｃｋｔａｉｌｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｃｋｔａｉｌ[Ｊ].Ｍｏｌ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.ꎬ２０１８ꎬ１０１:１９７－２０２.[４３]㊀ＷＡＮＧＬＨꎬＣＡＯＹＸꎬＴＡＮＧＱꎬｅｔａｌ..Ｒｏｌｅｏｆｔｈｅｂｌｏｏｄ￣ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｉｎｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＰｒｏｔｅｉｎＣｅｌｌꎬ２０１３ꎬ４(１２):９０１－９０３.[４４]㊀ＡＮＩＲＢＡＮＲꎬＣＲＡＩＧＨＤ.Ｉｍｍｕｎｅｅｖａｓｉｏｎｂｙｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｅｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｂｌｏｏｄ￣ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｉｎｔｅｇｒｉｔｙ[Ｊ].Ｊ.Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ.ꎬ２００８ꎬ１４(５):４０１－４１１.[４５]㊀ＭＡＲＯＳＩＡꎬＤＵＦＫＯＶＡＬꎬＦＯＲＲóＢꎬｅｔａｌ..Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｏｆｒａｂｉｅｓ￣ｉｎｆｅｃｔｅｄｍｉｃｅｗｉｔｈｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｐｒｏ￣ｉｎｆｌａｍｍａ￣ｔｏｒｙｈｏｓｔｒｅｓｐｏｎｓｅꎬａｎｔｉｖｉｒａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄｈｕｍａｎｒａｂｉｅｓｉｍ￣ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ.[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２０１８ꎬ３７(３３):４７２４－４７３５.４４３生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.。
对犬免疫兽用狂犬病疫苗效果的评价
均血清抗体滴度为 ２．３７５±２．０１（ＩＵ／ｍｌ），３ 免 ７ 个月后，免 疫达标率为 ２５ ％，Байду номын сангаас标犬平均血清抗体滴度为 ３．７３± ２．４８（ＩＵ／ｍｌ）。连续 ３ 次免疫后的血清抗体滴度仍然不理 想，个体差异不显著。 ３．３ Ｃ 兽用狂犬病灭活疫苗免疫效果监测结果
本组数据表明：Ｃ 兽用狂犬病灭活疫苗首次免疫注
兽医诊疗
北京市家犬，平均血清抗体滴度（ＩＵ／ｍｌ）分别为：０、１．７５、 ２．９１、２５．０６、８．５５、７．０３、５．０５、５．２ 和 ６．７。经过第三次免疫 的家犬，平均血清抗体滴度明显高于其他次数免疫的家 犬，经过 ４、５、６、８ 和 ９ 次连续免疫注射的家犬，平均血
清抗体滴度趋于平稳。 ３．４ 注射法国维克狂犬病灭活疫苗对外观健康唾液中 狂犬病毒抗原阳性犬的影响见表 ６。
基金项目： 狂犬病规范化防制技术研究与推广（２００４２４）及 ２００５ 年北京 市优秀人才资助项目 收稿日期： ２００７－ ０８－ １７
目对 ２ 种兽用狂犬病（ＥＲＡ 株）活疫苗和 ３ 种进口兽用 狂犬病灭活疫苗进行了免疫效果评价。
２ 试验材料与方法
２．１ 试验动物 ２．１．１ 小鼠 ＳＰＦ 实验小鼠（中国药品检定所、武汉生物 制品研究所提供）。 ２．１．２ 试验犬 共分 ５ 组：第一组 ３５ 只，为 Ａ 兽用狂犬 病（ＥＲＡ 株）活疫苗检测组；第二组 ２８ 只，为 Ｂ 兽用狂犬 病（ＥＲＡ 株）活疫苗检测组；第三组 ２１ 只，为 Ｃ 兽用狂犬 病灭活疫苗检测组；第四组 ８６ 只，为北京市居民的家犬在 ２００３－ ２００５ 年间免疫注射常用的进口狂犬病灭活疫苗检 测组；第五组 １０ 只，为注射法国维克狂犬病灭活疫苗对 外观健康唾液中狂犬病毒抗原阳性犬的影响检测组。