蝴蝶兰无菌播种与组织培养研究进展

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蝴蝶兰组培的研究进展研究论文

蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰，兰科蝴蝶兰属植物，属热带、亚热带气生兰。

原产于菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚和我国台湾等地，其株型美观、花形奇特似蝶、枝叶繁茂，花朵硕大、花色鲜艳、花期持久，观赏价值极高，在热带兰中素有“兰花皇后”的美誉，有较高的观赏和经济价值，深受国内外花卉市场的欢迎。

但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖。

其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。

而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。

蝴蝶兰快速繁殖的途径主要是利用无菌播种和利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分化丛生芽。

蝴蝶兰组培快繁的影响因素1.无菌播种途径蝴蝶兰种子的胚发育不完全，不易发芽，用人工合成的培养基促使种子无菌萌发，可以得到较高发芽率。

种子培养过程中使用的培养基有KC、MS、花宝等，其中改良KC 培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基。

对不同无菌播种方法包括撒播法、涂布法、稀释法进行了比较，结果表明稀释法较好，种子分布均匀，利用率高，明显减少转接次数，且原球茎发育健壮整齐【1】。

果龄采收期也影响着无菌播种效果。

也可采用无菌播种途径快繁蝴蝶兰，能够在短期内获得大量幼小植株，且技术简单、成本较低，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗的重要途径【2】。

但由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系，因此后代变异率高，除了少数自花系列较稳定以外，难以形成品质均一的大规模栽培品种。

因此，在采用无菌播种进行蝴蝶兰种苗生产时，要对父母本进行严格的选择，以确保后代性状的尽可能一致。

2.类原球茎途径原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象，通过离体器官诱导原球茎快繁法获得试管苗基本一致，增殖系数较高，变异性较少，适合大规模繁殖，是兰花组培快繁的一个主要形式。

近年来，国内外学者对蝴蝶兰的组织培养技术进行了大量研究，蝴蝶兰组织培养诱导原球茎的外植体有茎尖、叶片、花梗腋芽、花梗节间切段等诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁。

蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展

蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展刘亮,易自力3,蒋建雄,彭筱娜,黄丽芳　(湖南农业大学细胞工程实验室,湖南长沙410128)摘要　从蝴蝶兰(phalaenopsis)的组织培养及诱变育种两个方面进行了探讨。

就当前蝴蝶兰外植体的选择、培养基的选择、原球茎增殖、生根壮苗、炼苗移栽化学诱变几个方面作了详细的讨论。

关键词　蝴蝶兰;组织培养;诱变育种中图分类号　Q943.1 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2007)27-08451-02R esearch P rogress in the Tissue Culture and Mutation B reeding of Phalaenopsis spp.LIU Liang et al　(Cell Engineer Lab of Hunan Agriculture University,Changsha,Hunan410128)Abstract　T he research progress in the tissue culture and mutation breeding of Phalaenopsis,including the effect of ex plants,m edium,multiplication of protocorm2like b ody,m eth od of rooting and seedling strengthening,transplantation and chem om orph osis and s o on,was discussed,in order to provide in for2 m ation for this field.K ey w ords　Phalaenopsis spp.;T issue culture;Mutation breeding 蝴蝶兰(phalaenop sis)为兰科蝴蝶兰属兰花,原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地[1]。

蝴蝶兰的组织培养研究

蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。

试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。

MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。

2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L-1最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。

MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。

3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。

另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L-1能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。

MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。

J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .10.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。

用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。

添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。

对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。

5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。

《蝴蝶兰组织培养》课件

引入基因工程技术
利用基因工程技术对蝴蝶兰进行遗传改良，提高其抗逆性和生长速度。
优化培养条件
通过控制培养温度、光照、湿度等环境因素，促进蝴蝶兰组织培养的快速生长。
自动化与智能化技术应用
引入自动化与智能化技术，实现蝴蝶兰组织培养过程的精准控制和高效管理。
蝴蝶兰组织培养在花卉产业中的应用前景
快速繁殖优良品种
利用蝴蝶兰组织培养技术快速繁殖优良品种，满足市场需求。
培育新品种
利用蝴蝶兰组织培养技术进行新品种的培育，提高花卉产业的竞争力。
01 02 03 04
保护濒危品种
通过蝴蝶兰组织培养技术保存濒危品种的遗传资源，防止其灭绝。
延长花期
通过蝴蝶兰组织培养技术调控花期，满足节日和庆典等特殊场合的需求。
外植体选择
选择健康、无病虫害的蝴蝶兰植株作为外植体来源，通常使用花梗、叶片等作为外植体。
VS
外植体处理
对外植体进行消毒处理，去除表面微生物，保证无菌条件，为后续培养打下基础。
蝴蝶兰愈伤组织的诱导与培养
愈伤组织诱导
将经过处理的外植体接种在愈伤组织诱导培养基上，在适宜的温度和光照条件下诱导出愈伤组织。
蝴蝶兰组织培养的应用前景
蝴蝶兰组织培养技术不仅可用于快速繁殖和种质保存，还可应用于基因工程和细胞工程等领域。
通过基因编辑技术，可以改良蝴蝶兰的性状，提高其抗逆性和适应性。同时，细胞培养可用于生产具有药用价值的次生代谢产物。
02
蝴蝶兰组织培养技术流程
Chapter
蝴蝶兰外植体的选择与处理
实验操作步骤与注意事项
01
步骤二：外植体切割与接种
02
用无菌水冲洗消毒后的材料，用无菌滤纸吸干水分。

蝴蝶兰组织培养研究进展

蝴蝶兰组织培养研究进展摘要通过不同培养基、不同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述,为蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。

关键词蝴蝶兰;组织培养;研究进展蝴蝶兰(Phalaenopsis)属热带或亚热带的兰科植物,深受人们的喜爱,研究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意义[1]。

组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式,目前主要有3条途径:一是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽,获得再生植株[2];二是从离体器官诱导产生原球茎(Protocorm like-body,以下简称PLB),通过原球茎的增殖、分化获得再生植株,即原球茎再生途径[3,4];三是通过离体器官诱导产生丛生芽,通过培养丛生芽获得再生植株,即器官再生途径[4-7]。

1无菌播种再生途径蝴蝶兰经人工授粉可获得种子,但种子个体极其微小,结构简单,没有胚乳,只有1层极薄的种皮,通常在自然状态下很难萌发,需经组织培养无菌播种才能获得植株。

在蝴蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉,生长4～6个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。

由于蒴果内种子数量达几千万之多,1个蒴果便可繁殖出成千上万的植株[8]。

通过无菌播种人工培养,能够在短期内获得大量幼小植株,是现阶段经济有效的快速繁殖方法,也是工厂化育苗的重要途径。

种子无菌播种10d后胚明显膨大,呈鹅黄色,陆续变成绿色,约1个月的时间形成原球茎)。

随后,原球体拉长,同时原球体上伴随着长出白色根毛状物,接着在顶端生长点处长出芽鞘,芽鞘不断长大,形成第1片鞘叶。

至2个月时,于第1片鞘叶对面长出第2片鞘叶,随着鞘叶的生长,2～3个月的时间在2片鞘叶之间长出真叶。

最后,转移到新的培养基上形成再生植株[8-10]。

魏翠华等[9]研究发现,添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、原球体形成以及叶片的生长具有促进作用,水解乳蛋白对种子萌发有抑制作用,比较光照和黑暗2种培养条件,种子萌发无明显差异。

章玉平等[10]研究表明,外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用,天然物质如苹果汁、香蕉汁、胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。

蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究进展

［ 9］
#" 原球茎增殖研究
原球茎繁殖（ KLMNMOML? < )PQR SMTU ）是兰花植物组织培养的特有现象，是其组培快繁的主要形式。通常情况下从兰花成苗的叶片和根等成熟组织很难进行脱分化形成原球茎，而以兰花的茎尖分生组织为外植体可以诱导原球茎。但因茎尖深埋于叶丛之中，易被污染，成功率低，而且会牺牲母株，一般先取花梗侧芽，经常规消毒后接种于 /0 D 8 < => ( # 8?@ ; A 培养基上，在较高温度（ "7 # (’% ）下待侧芽萌发成花梗苗，再取其组织诱导原球茎。这样既可以避免对母株造成损失，又可以免去消毒这一环节，诱导分化的成功率高。目前以蝴蝶兰的叶片、根尖、茎尖、茎段等为外植体诱导原球茎已获得成功，但培养基及培养效果有差异。 # , !" 外植体的选择 #, !, !" 叶片诱导原球茎F " 早在 &V97 年日本的田中道
［ 9+ ］度（大于 +8 7 /0 1 2）会出现褐化死亡。袁全国等在
, )’ 附加浓度为 - . * /0 1 2 时诱导的原球茎最多、速度最快，而 &’’ 对叶片诱导原球茎无明显作用，低浓度 3， 4 ,5 （ 6 78 * /0 1 2）可促进愈伤组织形成、但抑制原
［ 97］球茎分化。杨美纯等研究认为 + , )’ 是决定叶片原
但因无菌播种方法为有性繁殖其获得的植株与母株基因型不同分离现象严重有可能出现大量劣质种苗而造成损失所以在选择母本进行杂交时应特别注意尽量了解亲本的遗传规律增加无菌播种后代性状的预见性减少市场风险
广东农业科学! *%%& 年第 , 期!

蝴蝶兰组织培养技术研究进展

蝴蝶兰组织培养技术研究进展摘要：蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。

组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，本文综述了蝴蝶兰的原球茎诱导增殖培养，并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。

关键词：蝴蝶兰;原球茎;组织培养蝴蝶兰是兰科蝶属植物，花形奇特，色彩艳丽，花期持久，一般2～3个月，最长可达半年，适于家庭摆设或作切花用于花篮、花束等。

但蝴蝶兰很难用传统的方式进行无性繁殖。

蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。

原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象。

原球茎的发生途径可以由花梗节段、幼叶、根段、茎尖等部位直接产生，也可以通过诱导愈伤组织，再从愈伤组织诱导原球茎产生。

不同外植体原球茎的诱导，其特点及培养基的选择也不同。

本文就蝴蝶兰原球茎诱导增殖培养的研究现状进行综述。

1 外植体的选择外植体的来源是决定外植体能否培养成功的重要因素，不同品种、不同器官之间的分化程度和能力存在差别，因此，在进行组织培养时必须选择合适的外植体进行无菌操作才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。

常用于蝴蝶兰组织培养的外植体有茎尖、根、叶片和花梗芽。

1.1 茎尖茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体，较容易诱导培养，是成功率较高的部位。

利用蝴蝶兰的茎尖诱导出类原球茎，再由类原球茎分化成苗。

这种培养的突出问题在于蝴蝶兰为单茎性植株，剥取茎尖就损坏了母株本身，而蝴蝶兰茎极短，操作困难，易污染。

但茎尖培养的优点是比较容易获取类原球茎或愈伤组织，因为茎尖分生组织细胞的生理年龄小，易于脱分化和分化，同时，操作细致还能达到脱毒效果，获得无病毒苗。

1.2 根尖蝴蝶兰根为外植体诱导原球茎的诱导率相对较低。

以蝴蝶兰新发生的根尖段切成0.5～0.8 cm接种到培养基上，遮光处理4～5 d，14d后可形成愈伤组织。

将蝴蝶兰根平放在培养基上经过约50 d的培养后，根尖顶端可长出原球茎，其诱导率在75％左右，而根尖分生区以外的根段上却诱导不出原球茎。

蝴蝶兰组培研究进展

蝴蝶兰组培研究进展张丹桂201310010125集贤创新实验131班蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)为兰科多年生附生草本，花形态优美似蝶，枝叶繁茂，花期持久，观赏价值极高，在热带素有“兰花皇后”的美誉。

蝴蝶兰是目前兰科植物中栽培最广泛的种类之一，同时也是室内绿化美化的新型观赏花卉，国内外市场对其需求量越来越大。

但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖；其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。

而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。

本文概述了近年来蝴蝶兰的组织培养与快繁技术的研究进展。

外植体繁殖途径糊蝶兰组培的过程一般分为外植体的诱导、继代增殖、壮苗、生根、健化移栽5个阶段。

目前，国内外蝴蝶兰组培研究主要集中在外植体的选择、基本培养基选择、植物激素种类和配比浓度、褐变防治措施等方面。

1.外植体选择及培养方法关于糊蝶兰组培外植体选择方面的报道较多，不同外植体各有优缺点。

常见的用作组培的外植体有种子（曾宋君,彭晓明,张京丽,等.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖[J].武汉植物学研究,2000,18(4):344- 346. 章玉平,刘成运,胡鸿钧,等.蝴蝶兰无菌萌发技术的研究[J].武汉植物学研究,2004,22(1):82- 86.）、叶片（李成慧,蔡斌,单丽丽,等.应用正交设计法探讨蝴蝶兰叶片类原球茎的诱导[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版),2004,25(2):76- 78.）、花梗节间（鲁雪华,郭文杰,徐立晖,等.蝴蝶兰花梗节间段培养繁殖的初步研究[J].园艺学报,2002,29(5):491- 492. 刘福林,李淑萍.蝴蝶兰花梗的组织培养和植株再生[J].商丘师范学院学报,2001,17(6):98- 99.）、根尖（曾宋君,彭晓明,张京丽,等.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖[J].武汉植物学研究,2000,18(4):344- 346.）、花梗腋芽（刘林,李淑兰.温度、节位和BA 对蝴蝶兰花茎腋芽生长的影响[J].北方园艺,2003(5):50- 51.）等。

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［５张雷，２］杨志合分离胡萝ｈ体细胞培根发育相关基因［］自然科学Ｊ．
进展，０２１（）：６－６．２０，２３２１２５
［５ＴｏａｏｄｒＳｌ —ｈｅｃＮｂａｏｓｕｔｎａｖｒａｌｐ１］ｈｍｓｅｅ．ｏｄｐａＤＡｌｒｒｃｎｔｃｏ，ｅｓｔｅ．Ｒｉｓｉｙｒｉｉａ
ｐｅｓｄｉｏｅ［］Ｐａｔｌｉｌ１９３：０－１．ｒｓｅｆｗｒＪ．ｌｎｏ，９８，６９９９５ｎｌＭｏＢ［９马月萍，思兰．Ｎ２］戴ｍＲＡ差别显示技术及其在植物基因研究中的应用［］北京林业大学学报，０３２（Ｊ．２０，５２）：１８．８—４
ｈｂｉｉｔｎ：ｔｏｒｇｎｒｔｇｄｆｒｎｔｌｇｌｔｄｏｓｕ－ｙｒｄｚｉａｍｅｈｄｆｅｅａｉｉｅｅｉｌｒｕａｅｒｔｓｅａｏｏｎｆａｙｅｉ
ｓｐｃｃｅＮｒｅａｄｌｒｒｓＪ．ｒｃＮｔＡａｃＵＡ，ｅｅｉＤＡｐｏｉａｉ［］ＰｏａｃｄＳｉＳｉｆｂｎｂｅ
［６罗志勇，２］陆秋恒，刘水平，人参植物皂苷生物合成相关新基因的筛等．
选与鉴定［］生物化学与生物物理学报，Ｏ，（）：４５７Ｊ．２３３６５－６．Ｏ５５［７］２崔凯荣，邢更生，秦琳，利用ｍＲＡ差别显示技术分析枸杞体细等．Ｎ