蝴蝶兰的组织培养[1]
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展刘亮,易自力3,蒋建雄,彭筱娜,黄丽芳 (湖南农业大学细胞工程实验室,湖南长沙410128)摘要 从蝴蝶兰(phalaenopsis)的组织培养及诱变育种两个方面进行了探讨。
就当前蝴蝶兰外植体的选择、培养基的选择、原球茎增殖、生根壮苗、炼苗移栽化学诱变几个方面作了详细的讨论。
关键词 蝴蝶兰;组织培养;诱变育种中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)27-08451-02R esearch P rogress in the Tissue Culture and Mutation B reeding of Phalaenopsis spp.LIU Liang et al (Cell Engineer Lab of Hunan Agriculture University,Changsha,Hunan410128)Abstract T he research progress in the tissue culture and mutation breeding of Phalaenopsis,including the effect of ex plants,m edium,multiplication of protocorm2like b ody,m eth od of rooting and seedling strengthening,transplantation and chem om orph osis and s o on,was discussed,in order to provide in for2 m ation for this field.K ey w ords Phalaenopsis spp.;T issue culture;Mutation breeding 蝴蝶兰(phalaenop sis)为兰科蝴蝶兰属兰花,原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地[1]。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
蝴蝶兰组织培养研究进展
蝴蝶兰组织培养研究进展摘要通过不同培养基、不同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述,为蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。
关键词蝴蝶兰;组织培养;研究进展蝴蝶兰(Phalaenopsis)属热带或亚热带的兰科植物,深受人们的喜爱,研究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意义[1]。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式,目前主要有3条途径:一是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽,获得再生植株[2];二是从离体器官诱导产生原球茎(Protocorm like-body,以下简称PLB),通过原球茎的增殖、分化获得再生植株,即原球茎再生途径[3,4];三是通过离体器官诱导产生丛生芽,通过培养丛生芽获得再生植株,即器官再生途径[4-7]。
1无菌播种再生途径蝴蝶兰经人工授粉可获得种子,但种子个体极其微小,结构简单,没有胚乳,只有1层极薄的种皮,通常在自然状态下很难萌发,需经组织培养无菌播种才能获得植株。
在蝴蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉,生长4～6个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。
由于蒴果内种子数量达几千万之多,1个蒴果便可繁殖出成千上万的植株[8]。
通过无菌播种人工培养,能够在短期内获得大量幼小植株,是现阶段经济有效的快速繁殖方法,也是工厂化育苗的重要途径。
种子无菌播种10d后胚明显膨大,呈鹅黄色,陆续变成绿色,约1个月的时间形成原球茎)。
随后,原球体拉长,同时原球体上伴随着长出白色根毛状物,接着在顶端生长点处长出芽鞘,芽鞘不断长大,形成第1片鞘叶。
至2个月时,于第1片鞘叶对面长出第2片鞘叶,随着鞘叶的生长,2～3个月的时间在2片鞘叶之间长出真叶。
最后,转移到新的培养基上形成再生植株[8-10]。
魏翠华等[9]研究发现,添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、原球体形成以及叶片的生长具有促进作用,水解乳蛋白对种子萌发有抑制作用,比较光照和黑暗2种培养条件,种子萌发无明显差异。
章玉平等[10]研究表明,外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用,天然物质如苹果汁、香蕉汁、胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。
蝴蝶兰组织培养技术
不同外植体对蝴蝶兰原球茎诱导率的影响
二、原球茎途径
培养基： 原球茎诱导培养基：包括MS、1 /2MS、VW、B5、KC、 花宝及其改良型等,由于蝴蝶兰品种差异及外植体来源
T
不同导致不同品种及外植体对最适培养基的选择有所不 同。 原球茎增殖培养基：改良KC和1/2MS的培养基最佳。
二、原球茎途径
激素：
编号
培养基
Code
Medium
1
MS+NAA0.50 mg/L+6-BA2.00 mg/L
2
MS+NAA1.00 mg/L+6-BA2.00 mg/L
3
MS+NAA2.00 mg/L+6-BA2.00 mg/L
4
MS+NAA0.50 mg/L+6-BA3.00 mg/L
5
MS+NAA1.00 mg/L+6-BA3.00 mg/L
蝴蝶兰组织培养技术
班级：13级园艺班 学生：杨惠、杨颖霖、柯壮
LOGO
蝴蝶兰
兰科蝴蝶兰属，原产亚热带 雨林地区。其气根露在叶片周 围，既有吸收空气中养分的作 用，还有生长光合作用。新春 时节，从叶腋中抽出长长的花 梗，并开出形如蝴蝶飞舞般的 花朵，深受人们青睐，有“洋 兰王后”之称。分布在马来西 亚、印度尼西亚，及中国台湾 等地。
6
MS+NAA2.00 mg/L+6-BA3.00 mg/L
7
MS+NAA0.50 mg/L+KT0.10 mg/L
8
MS+NAA1.00 mg/L+KT0.10 mg/L
9
MS+NAA2.00 mg/L+KT0.10 mg/L
蝴蝶兰的组培
后”之美誉。
蝴蝶兰属的拉丁学名是由Phala（蛾蝶）和Opsis（模样） 组成，意指花外形似蛾蝶。该属植物约有4个原生种，主要 分布在南北纬度23度之间，从喜马拉雅山经印度、缅甸、 中国南部、马来西亚、菲律宾、澳大利亚和新几内亚。我 国云南南部、西藏南部、广东南部、海南和台湾一线为该 属植物的最北分布界限。
生根与炼苗：
1、生根： MS+IAA0.5 70多天 后，具4～5条根 的 小苗，可出瓶种植。 2、炼苗：置于室温 7～10d后，打开瓶 盖2天，取出小苗假 植于水苔上。
商业化生产
参考文献：
[1]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京:中国林业 出版社,1997.
[2]孙可群,张应麟.花卉及观赏树木栽培手册[M].北京:中国林 业出版社,1985. [3]王华芳.花卉无土栽培[M].北京:金盾出版社,1997. [4]李浚明.植物组织培养教程[M].北京:中国农业出版社,1992. [5]郭凤昌,朱宪宸.菊花组织培养育苗技术[J].北方园艺,1998. [6]王荣钦.外植体部位、激素浓度对卡特兰、蝴蝶兰圆球茎形 成和增殖的影响[J].福建热作科技,2000. [7]谭文澄.观赏植物组织培育技术[M].北京:中国林业出版 社,2001.
培养：
1、选材与消毒:75%酒精30S，0.1%升汞5min ①种子 ： MS+BA0.5㎎/L +NAA0.1㎎/L+3%蔗糖。 60天。 ②花梗：1/2MS+BA5.0㎎/L +NAA0.5㎎/L培养基。 培养4周左右。 2、初代培养 ①种子： MS+BA5.0㎎/L 培养基上。60天，4cm高 实生苗 ②花梗：MS+BA5.0㎎/L 培养基上。4w苞叶处丛生 小芽
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨首先是无菌培养技术。
无菌培养是蝴蝶兰组织培养的基础步骤，能够有效控制外界的微生物对植物的污染。
在无菌环境中进行组织培养必须具备一定的操作技巧和设备。
在培养基制备过程中，需要对培养基进行高压蒸汽消毒或滤过过滤，以确保培养基的无菌性。
在组织培养过程中还需采取一系列无菌操作，如组织的消毒处理、转移时避免接触空气等。
其次是组织愈伤与再生技术。
组织愈伤是指植物组织在应激或外界刺激作用下出现非正常的增殖现象。
对于蝴蝶兰来说，组织愈伤与再生是进行组织培养的关键步骤。
在组织愈伤培养中，可以通过调节培养基中的激素类型与浓度，促使愈伤组织的形成。
而后续的再生过程则需要恰当的培养基配方和培养条件来促进愈伤组织进一步分化为叶片、茎或芽等。
激素配方也是蝴蝶兰组织培养中的一个重要环节。
激素是促使组织发生增殖与分化的关键因子，合理配方的激素能够提高培养效果。
在蝴蝶兰组织培养中，通常会使用生长素（如NAA、IAA等）和细胞分裂素（如BA、KT等）来促进愈伤组织的生长和分化。
但需要注意的是，过量使用激素会导致愈伤组织过度生长、变异等问题，因此需要根据实际情况进行激素配方，以达到最佳效果。
最后是质壁分离技术。
质壁分离技术是蝴蝶兰组织培养中分离不同种类细胞的重要手段。
通过质壁分离可以获得纯种植物的组织或细胞，进行遗传改良和基因工程研究。
在蝴蝶兰的质壁分离过程中，需要先进行组织消毒处理，然后通过特定的酶解剂或物理方法分离细胞的质壁。
质壁分离技术的成功与否直接影响到培养后续的成活率和生长发育情况。
蝴蝶兰组织培养的关键技术包括无菌培养、组织愈伤与再生、激素配方以及质壁分离等。
这些关键技术的掌握对于蝴蝶兰的高效培养和研究具有重要意义。
未来的研究需要进一步深入探讨和改进这些技术，以促进蝴蝶兰组织培养技术的发展与应用。
简述蝴蝶兰的组织培养方法
简述蝴蝶兰的组织培养方法蝴蝶兰是一种极具有形象性和色彩鲜明的植物，其种类繁多，吸引着众多花友的青睐。
蝴蝶兰培植简单易行，其组织培养也十分容易，而且效果卓著。
本文就简述蝴蝶兰的组织培养方法，以期帮助花友们更好地养护蝴蝶兰。
一、选择合适的蝴蝶兰蝴蝶兰的种类及其色彩繁多，首先应根据自己的需求与喜好，在花店等地选择合适的蝴蝶兰。
蝴蝶兰应当处于正常生长状态，花朵特别是花瓣均匀、紧实，根系及叶片绿润有光泽，没有病虫害。
二、组织培养1.行插穗在蝴蝶兰培养开始前，需要将其插穗。
插穗使蝴蝶兰的根系较为疏松，利于植物的延伸生长。
将蝴蝶兰插入潮湿的细沙中，则可为植株提供良好的水分分布，促进蝴蝶兰的生长发育。
2.理肥料施用植物有两种基础营养元素，即氮元素和磷元素。
在蝴蝶兰培养过程中，需要为植株施加肥料，以满足其生长所需。
氮元素主要可利用于叶片的生长，而磷元素则可利用于花朵的发育。
3.湿管理蝴蝶兰生长所需的温湿数值较为丰富，其适宜的温湿应当保持在温度15度至25度，湿度为60%至70%之间。
其中，温度应当尽量高，以有利于蝴蝶兰的发育，而湿度则应当保持适中，以防止出现病害的发生。
3.照蝴蝶兰喜欢充足而柔和的光照环境，所以应尽可能地将蝴蝶兰移至开窗处，使其能够接受到丰富的太阳辐射，以帮助植物供能发育。
在白天，应保持植株所处的窗口敞开，以让花朵能够更好地吸收阳光。
4.分补充蝴蝶兰容易受到水分缺乏的影响，因此组织培养过程中，应定期给植株补充水分，最好是在上午和傍晚时段为植物浇水，以保证植株的温湿度，使植株继续保持良好的生长状态。
五、结束语以上就是蝴蝶兰的组织培养方法，相信只要秉持着耐心及遵循以上方法，便可以让蝴蝶兰更好地长出更美丽的花朵，为室外环境带来绚丽多彩的视觉享受，让花友们体验独特的植物魅力。
蝴蝶兰组培增殖培养的方法
蝴蝶兰组培增殖培养的方法蝴蝶兰（Phalaenopsis）是一种受欢迎的花卉，组培增殖培养是繁殖蝴蝶兰的一种有效方法。
以下是一般的蝴蝶兰组培增殖培养的步骤：1.原植株的选择：选择健康、无病虫害的母株作为组培的原材料。
确保母株的组织状态良好，这对于组培成功至关重要。
2.材料消毒：对用于组培的材料，如培养基、器皿等进行彻底的消毒。
这可以通过高温蒸汽灭菌或化学消毒方法来实现。
3.原植株的消毒：将选定的母株进行表面消毒，通常使用漂白剂或其他合适的消毒剂来处理。
这有助于消除植物表面的细菌和真菌。
4.分离组织：从母株中分离出适当的组织，通常是茎的无菌端。
这个过程需要在无菌条件下进行，以避免外界微生物的污染。
5.培养基的配制：配制适用于蝴蝶兰组培的培养基，确保其中包含足够的营养元素、植物生长激素和其他必要的组分。
6.培养基接种：将分离出的蝴蝶兰组织放置在培养基中，确保每个组织片段都有足够的培养基供其生长。
7.培养条件的控制：维持适宜的温度、湿度和光照条件，这是组培蝴蝶兰成功生长的关键因素。
8.培养基的定期更换：定期更换培养基，以确保组培过程中的植物组织得到充足的营养，并防止过多的积累物质。
9.生根和分化：在适当的时候，蝴蝶兰的组织会开始生根和分化，形成新的植株。
这通常需要在培养基中添加适当的植物生长激素。
10.移栽到土壤中：一旦组培植物生长到足够的大小，可以将其移栽到适宜的土壤中，继续进行生长和开花。
11.定期监测和管理：对组培植物进行定期的观察和监测，确保其健康状况，必要时采取适当的管理措施。
在进行蝴蝶兰组培增殖培养时，保持无菌条件和合适的环境是至关重要的。
此外，了解植物生长激素的使用和培养基成分的影响对于成功进行组培培养也是非常重要的。
整个过程需要耐心和细致的操作，以确保蝴蝶兰在组培中获得良好的生长和繁殖。
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下列培养基中________无机盐的浓度最低。
A MS培养基；
B B5培养基；
C White培养基；
N6培养基
下列不属于大量元素的盐是____
A NH4NO3；
B KNO3；
C ZnSO4.7H2O；
D MgSO4.7H2O
愈伤组织诱导、增殖及（）是一个连续的过程。
A．根的形成
B．分裂
C．分化
愈伤组织诱导、增殖及（）是一个连续的过程。
A．根的形成
B．分裂
C．分化
对生根培养不起作用的激素是:___________.
A GA
B IAA;
C NAA;
D IBA
植物离体培养中培养基的pH范围应该控制在( ).
A,5.5-6.0
B,4.0-7.0
C,7.0
高温灭菌后。
培养基的pH会_________。
A 降低
B 升高
C 不变
D 不能确定
培养室里的湿度一般保持在_________
A 30～40%；
B 50～60%；
C 70～80%；
D 80～90%
下列（）不是细胞分裂素。
A、2，4—D
B、6—BA
C、ZT
D、KT
在原生质体的培养中，渗透稳定剂的作用是
A 稳定原生质体的形态而不使其被破坏
B 支持作用
C 提供营养
D 调节PH值
用植物组织培养技术可以培养或生产出（）。
A、次生代谢产物
B、无病毒植物
C、人工种子
D、A，B，C均可
脱落酸（ABA）需要用_________法灭菌。
A 灼烧灭菌；
B 干热灭菌；
C 过滤灭菌
D高压湿热灭菌
同一植株下列__ _____部位病毒的含量最低。
A 叶肉细胞；
B 茎尖生长点细胞
C 茎节细胞；
表皮细胞
,配制( )溶液时应先用10%的HCl溶解,再加蒸馏水定容.
A 2,4-D
B 6-BA
C,GA3
D,IAA
合适的外植体可诱导产生（）愈伤组织，对以后建立悬浮细胞系可以起到事半功倍的效果。
A．褐化
B．坚硬
C．疏松易碎
D．水渍状
2.培养的丛生苗过密,生长弱,可能的原因有______
A、光照过强
B、琼脂过高
C、生长素过高
D、分裂素过高
植物体细胞胚胎间接发生方式是指体细胞胚从（）或悬浮细胞，有时也从已形成的体细胞胚的一组细胞中发育而成。
A．愈伤组织
B.叶片
C 茎尖分生组织
C 幼
．植物组织培养的培养基，其数量多至几十种。
其中应用最广泛的是
_________ 培养基
A、N6
B、SH
C、B5
D、MS
赤霉素（GA）需要用_________法灭菌。
A 灼烧灭菌；
B 干热灭菌；
C 过滤灭菌
D高压湿热灭菌
在进行花药和花粉培养时,最适宜的花粉发育时期是( ).
A,成熟花粉粒;
B,单核花粉期;
C,二核花粉期;
D,三核花粉期
能打破种子休眠，促进种子、块茎、鳞茎、体细胞胚等提前萌发的激素是：
A GA；
B IAA；
C NAA；
D ZT
White培养基的特点是
A、高浓度无机盐
B、低浓度无机盐
C、高浓度的铵根离子
诱导试管苗生根时，培养基的调整应：
A、加大盐的浓度
B、加大蔗糖浓度
C、加大分裂素的浓度
D、加大生长素的浓度
下列实验中可能获得三倍体植株的是（）
A 小麦的茎尖培养；
B番茄花药培养；
C玉米胚乳培养；
D玉米花粉培养
离体培养中容易出现的三大问题是:污染,褐变和( )现象.
A,死亡
B,老化
C,黄化
D,玻璃化
对生根培养不起作用的激素是：（）
A GA；
B IAA；
C NAA；
D IBA
植物组织培养属于( )范畴
A,蛋白质工程
B,基因工程
C,微生物工程
D,细胞工程
现有一种培养基为：MS+BA2+NAA0.1，请说出下列判断正确的是。
A、这是一种生根培养基
B、这是一种生芽培养基
C、这是一种诱导愈伤组织的培养基
D、上述3种都不对
下面哪个不是常见的自然无性繁殖方法
A扦插；
B嫁接；
C组培快繁；
D播种
不能人工诱导原生质体融合的方法是_________。
A、无机盐诱导
B、电融合、
C、PEG试剂、
D、重压
1．MS培养基配方中规定：NH4NO3、KNO3和MgSO4 . 7H2O的量分别为1650mg/L、1900mg/L和370 mg/L，现在要将这三种物质配成1个母液（先用少量蒸馏水分别溶解，然后依次混合，再加蒸馏水定容至 1000ml，配成50倍液），那么这三种物质应分别称取____________g
A、 165、195和 37
B、0.165、0.195和 0.37
C、 82.5、95 和18.5
D、825、950 和185
第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________：
A Morel；
B Haberland；
C Schleiden；
D White
水稻花药培养诱导愈伤组织过程中常用_________培养基。
A、N6
B、B5
C、 MS
D、White
配制铁盐母液时,浓缩了200倍保存在1升容量瓶内,当制作10升培养基时,
应取用铁盐母液( )ml
A,50
B,100
C 20
D500
褐变现象是由于引起的。
A、细胞分裂素浓度偏高
B、多酚的氧化
C、琼脂浓度偏低
D、温度偏低
下列不属于生长素类的植物激素是_________.
A BA
B NAA
C IBA
D 2,4-D
下列实验中不可能获得单倍体植株的是_ _
A 水稻茎尖培养；
B草莓花药培养；
C玉米叶片培养
D 油菜小孢子培养
植物组织培养的特点是( )
A.培养条件可以人为控制
B.繁殖系数大，培养周期短
C.管理方便，有利于实现工厂化生产和自动化控制
D.成本较低
下列具有细胞全能性的细胞是：_________。
A 成熟的导管细胞；
B 幼嫩的组织细胞；
C 愈伤组织细胞
D 番茄的受精合子
高温易被破坏分解的植物激素是_________。
A IAA；
B GA；
C NAA；
D Zt
下列不属于生长素类的植物生长调节物质是_________。
A Kt；
B TDZ
C 2,4-D
D NAA
活性炭在组织培养中的作用有_________。
A吸附有毒物质
B减少褐变，防止玻璃化
C创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；
D增加培养基中的养分
下列属于微量元素的盐是_
A NH4NO3；
B KI；
C ZnSO4.7H2O；
D CuSO4.5H2O
植物组织培养可用于:_____________.
A 快速繁殖;
B 脱除病毒;
C 育种;
D种质保存
茎尖培养脱毒的原理是_____
A、病毒主要是通过维管束来传播的
B、茎尖维管束尚未形成
C、病毒主要是通过胞间连丝来传播的
D、茎尖中病毒浓度最低
影响培养基凝固程度因素有_________。
A 琼脂的质量好坏；
B 高压灭菌的时间；
C 高压灭菌的温度；
D 培养基的PH
一般来说,光照强度较强,幼苗容易徒长,而光照强度较弱幼苗生长的粗壮.
正确错误
脱毒处理后的植株可以不进行病毒鉴定而直接应用于生产.
正确错误
微量元素主要有：铁、铜、锌、锰、钼、硼、碘、钴、氯、钠等。
正确错误
胚状体的形成必须先诱导愈伤组织，然后从愈伤组织分化胚状体，否则不能获得胚状体
正确错误。