蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种广受欢迎的花卉，其美丽的花朵和特殊的香气吸引了许多人的喜爱。
在现代花卉产业中，蝴蝶兰的组织培养技术已经得到了广泛的应用，成为了繁育和生产优质蝴蝶兰的重要手段。
本文将探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术，包括材料准备、消毒与无菌技术、培养基配方、激素处理、光照和温度控制等方面，旨在为蝴蝶兰组织培养提供更多的经验和技术指导。
一、材料准备蝴蝶兰组织培养的材料准备包括培养基、植物组织和器皿等。
培养基的配制是组织培养的关键，通常包括基本培养基、植物生长调节剂、维生素和其他添加剂。
基本培养基可以选择MS培养基、WPM培养基等，其中MS培养基是最为常用的一种。
植物生长调节剂一般包括生长素、细胞分裂素等，可以促进植物幼芽的生长和分化。
在材料准备阶段，需要严格按照配方比例进行称量和混合，确保培养基的质量和稳定性。
植物组织的准备是指从蝴蝶兰植株中获取适宜的组织，并进行无菌处理。
通常可以选择茎尖、叶片或花序等组织作为培养材料，要求组织样品新鲜健康、无病虫害，并在无菌条件下进行操作。
器皿的准备包括试管、培养瓶、培养皿等，需要进行高压蒸汽消毒和紫外线照射，以确保器皿内部的无菌环境。
二、消毒与无菌技术消毒与无菌技术是蝴蝶兰组织培养过程中至关重要的一环。
在培养基、植物组织和器皿的准备过程中，必须保持严格的无菌操作，以避免外源微生物的污染。
常用的消毒方法包括高压蒸汽消毒、紫外线照射和化学消毒剂处理等。
高压蒸汽消毒是最常用的无菌处理方法，通过高温高压的蒸汽可以有效杀灭器皿表面的微生物。
紫外线照射则是利用紫外线的杀菌作用来对器皿和工作台面进行消毒处理。
化学消毒剂主要包括过氧化氢、乙醇、漂白粉等，它们可以在无菌条件下对实验器皿和操作场所进行处理，消灭潜在的细菌和真菌。
还需要配备无菌工作台、无菌手套、口罩和无菌操作衣等个人防护装备，确保操作人员和操作环境的无菌状态。
三、培养基配方培养基中还需要添加维生素、氨基酸、糖类和微量元素等，以提供植物生长和代谢所需的营养物质。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
蝴蝶兰组织培养研究
蝴蝶兰组织培养研究本文以蝴蝶兰满天红品种为研究材料,以花梗和叶片为外植体,通过对消毒方法、培养基种类、激素浓度、褐化现象等的研究,建立了一套通过蝴蝶兰组织培养快速繁殖的有效途径。
主要结论如下：(1)蝴蝶兰花梗灭菌的最佳处理方法为用0.1%升汞消毒13分钟或15分钟,成功率达到85%以上；叶片最佳消毒处理的方法为：预处理后0.1%升汞灭菌13分钟,灭菌成功率达97.7%。
(2)采用正交试验设计,结果表明最适宜蝴蝶兰花梗诱导的培养基配方为MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA(3.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+PH(5.6)；叶片诱导的最佳组合为：MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA (5.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+pH(5.0)。
(3)植物激素对蝴蝶兰类原球茎的实验研究表明,诱导蝴蝶兰原球茎的最佳激素组合为：6-BA(3.0mg·L-1)、NAA(0.5mg·L-1)和pH=5.4或6-BA(3.0mg·L-1)、 NAA(1.0mg·L-1)和pH=5.6.(4)植物激素组合对蝴蝶兰生根率的影响较小,差异性不显著(P>0.05)但不同激素组合对促进蝴蝶兰生根数及根长影响较大,更有利于生根,经方差分析,差异性均达到显著性水平(P<0.05)。
适宜蝴蝶兰根培养的培养基最佳配方为：1/2MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0-1.5 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7.5g·L-1,pH=5.4-5.6。
(5)本实验采用的蝴蝶兰满天红品种,发现在蝴蝶兰花梗芽诱导的较优基本培养基为：MS基本培养基,诱导率为77.8%,高于1/2MS基本培养基(77.3%)；叶片诱导的培养基为MS和1/2MS,考虑到苗的后续生长状况以及MS培养基的褐化现象较严重,而且1/2MS培养基更能节约成本,故选择1/2MS培养基为叶片萌发的培养基。
蝴蝶兰组织培养技术研究
蝴蝶兰组织培养技术研究蝴蝶兰组织培养技术研究一、实验目的1.能够正确选取外植体，并最其进行前处理2.能够有效防止外植体褐变的发生。
3.能够正确进行继代培养与壮苗正根培养。
4.能够利用无菌播种方式进行种子繁殖。
5.培养团队精神、责任心和科学的思维能力。
二、实验原理随着植物组织培养技术在植物快繁上的应用，近年来，对蝴蝶兰组织培养研究较多的是用胚、幼叶、茎尖和根尖、花梗腋芽等多种器官为外植体进行组织培养研究，由于所选外植体材料各异，难度也有高低，虽然有些技术已经用于大规模工厂化生产，但仍面临一些困难，有待于进一步探索和完善。
根据目前蝴蝶兰的发展状况，本文将在以花梗侧芽、茎尖、叶片为外植体材料进行组织快繁技术上作深入的探讨和研究。
三、实验仪器及试剂花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L 增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/L + KT1.0 mg/L + NAA0.5 mg/L + 椰乳10 %。
生根培养基为1/ 2MS + BA1. 5 mg/L +NAA0.3 mg/L + 80 g/L 香蕉泥诱导培养基为1/3MS+NAA0.5~1.0毫克/升+6-BA3.0~5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖30克/升+琼脂6克/升，或KC+NAA1.0毫克/升+6-BA5.0毫克/升+椰乳15%+蔗糖20克/升+琼脂6克/升柠檬酸300毫克/升以上培养基p H 均为5.6四、实验步骤与方法（一）花梗腋芽和顶芽组织培养快速繁殖技术蝴蝶兰为总状花序，通常由花梗基部算起在第4或至第7节才会分化花朵。
除最基部一节外，剥开位于该节位以上各节的苞片都可看到腋芽，近顶端的节含有未完全分化的花原始体，花轴基部的芽往往为休眠芽，常具有苞片覆盖，连同花序的顶端，都是花梗腋芽组织培养的好材料。
1．花梗腋芽的培养途径对花梗腋芽有两条培养途径，一是切取带腋芽的花梗茎段培养；二是不带花梗组织剥取茎尖生长点培养。
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰，兰科蝴蝶兰属植物，属热带、亚热带气生兰。
原产于菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚和我国台湾等地，其株型美观、花形奇特似蝶、枝叶繁茂，花朵硕大、花色鲜艳、花期持久，观赏价值极高，在热带兰中素有“兰花皇后”的美誉，有较高的观赏和经济价值，深受国内外花卉市场的欢迎。
但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖。
其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。
而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。
蝴蝶兰快速繁殖的途径主要是利用无菌播种和利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分化丛生芽。
蝴蝶兰组培快繁的影响因素1.无菌播种途径蝴蝶兰种子的胚发育不完全，不易发芽，用人工合成的培养基促使种子无菌萌发，可以得到较高发芽率。
种子培养过程中使用的培养基有KC、MS、花宝等，其中改良KC 培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基。
对不同无菌播种方法包括撒播法、涂布法、稀释法进行了比较，结果表明稀释法较好，种子分布均匀，利用率高，明显减少转接次数，且原球茎发育健壮整齐【1】。
果龄采收期也影响着无菌播种效果。
也可采用无菌播种途径快繁蝴蝶兰，能够在短期内获得大量幼小植株，且技术简单、成本较低，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗的重要途径【2】。
但由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系，因此后代变异率高，除了少数自花系列较稳定以外，难以形成品质均一的大规模栽培品种。
因此，在采用无菌播种进行蝴蝶兰种苗生产时，要对父母本进行严格的选择，以确保后代性状的尽可能一致。
2.类原球茎途径原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象，通过离体器官诱导原球茎快繁法获得试管苗基本一致，增殖系数较高，变异性较少，适合大规模繁殖，是兰花组培快繁的一个主要形式。
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨蝴蝶兰是一种重要的观赏兰花，由于其美丽的花朵和长时间的观赏期，受到了广大植物爱好者的热爱。
蝴蝶兰的培养对于保证其优质的品种和良好的观赏效果至关重要。
为了探讨蝴蝶兰组织培养的关键技术，本文将从组织培养的基本原理、组织培养的步骤和关键技术三个方面进行讨论。
了解蝴蝶兰组织培养的基本原理对于掌握关键技术非常重要。
组织培养是指将植物体的一部分组织或细胞分离出来，在无菌条件下进行培养和生长。
组织培养的基本原理是通过培养基提供合适的营养条件，使组织或细胞继续生长，从而实现组织增殖、植株再生或种间杂交等目标。
蝴蝶兰的组织培养主要是通过离体培养技术，即将花茎的组织或顶端的芽分离出来单独培养。
蝴蝶兰组织培养的步骤包括材料准备、组织分离、组织培养和生根移栽等。
要选择健康的母株作为材料，并在采集组织前进行杀菌处理，确保无菌条件。
然后，分离出芽和花茎，并通过酶解法或机械分离法得到单个的芽或花茎组织。
接下来，将组织放置在适宜的培养基上进行培养，培养基中应含有适宜的植物激素和营养物质。
在生根培养基上进行生根并移栽到土壤中继续生长。
蝴蝶兰组织培养的关键技术包括材料选择、无菌技术、培养基的配方和光照控制等。
材料的选择非常重要，应选择健康的母株作为材料，并确保无病虫害。
无菌技术是蝴蝶兰组织培养成功的基础，需要在无菌操作台上进行并进行严格的无菌操作，避免外部微生物对培养物的污染。
培养基的配方也是关键，需要根据不同的培养目标调整植物激素和营养物质的浓度，以促进组织增殖或植株再生。
适当的光照控制也是蝴蝶兰组织培养的关键，适宜的光照可以促进植物的绿色素合成和光合作用，有利于组织的生长和发育。
蝴蝶兰组织培养是一项繁琐的工作，需要熟练的无菌技术和合理的培养基配方。
只有掌握了基本原理和关键技术，才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
通过不断的探索和实践，相信蝴蝶兰组织培养技术会得到进一步的发展和完善。
蝴蝶兰组织培养技术研究进展
蝴蝶兰组织培养技术研究进展摘要：蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，本文综述了蝴蝶兰的原球茎诱导增殖培养，并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。
关键词：蝴蝶兰;原球茎;组织培养蝴蝶兰是兰科蝶属植物，花形奇特，色彩艳丽，花期持久，一般2～3个月，最长可达半年，适于家庭摆设或作切花用于花篮、花束等。
但蝴蝶兰很难用传统的方式进行无性繁殖。
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。
原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象。
原球茎的发生途径可以由花梗节段、幼叶、根段、茎尖等部位直接产生，也可以通过诱导愈伤组织，再从愈伤组织诱导原球茎产生。
不同外植体原球茎的诱导，其特点及培养基的选择也不同。
本文就蝴蝶兰原球茎诱导增殖培养的研究现状进行综述。
1 外植体的选择外植体的来源是决定外植体能否培养成功的重要因素，不同品种、不同器官之间的分化程度和能力存在差别，因此，在进行组织培养时必须选择合适的外植体进行无菌操作才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
常用于蝴蝶兰组织培养的外植体有茎尖、根、叶片和花梗芽。
1.1 茎尖茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体，较容易诱导培养，是成功率较高的部位。
利用蝴蝶兰的茎尖诱导出类原球茎，再由类原球茎分化成苗。
这种培养的突出问题在于蝴蝶兰为单茎性植株，剥取茎尖就损坏了母株本身，而蝴蝶兰茎极短，操作困难，易污染。
但茎尖培养的优点是比较容易获取类原球茎或愈伤组织，因为茎尖分生组织细胞的生理年龄小，易于脱分化和分化，同时，操作细致还能达到脱毒效果，获得无病毒苗。
1.2 根尖蝴蝶兰根为外植体诱导原球茎的诱导率相对较低。
以蝴蝶兰新发生的根尖段切成0.5～0.8 cm接种到培养基上，遮光处理4～5 d，14d后可形成愈伤组织。
将蝴蝶兰根平放在培养基上经过约50 d的培养后，根尖顶端可长出原球茎，其诱导率在75％左右，而根尖分生区以外的根段上却诱导不出原球茎。
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨
蝴蝶兰组织培养关键技术探讨首先是无菌培养技术。
无菌培养是蝴蝶兰组织培养的基础步骤，能够有效控制外界的微生物对植物的污染。
在无菌环境中进行组织培养必须具备一定的操作技巧和设备。
在培养基制备过程中，需要对培养基进行高压蒸汽消毒或滤过过滤，以确保培养基的无菌性。
在组织培养过程中还需采取一系列无菌操作，如组织的消毒处理、转移时避免接触空气等。
其次是组织愈伤与再生技术。
组织愈伤是指植物组织在应激或外界刺激作用下出现非正常的增殖现象。
对于蝴蝶兰来说，组织愈伤与再生是进行组织培养的关键步骤。
在组织愈伤培养中，可以通过调节培养基中的激素类型与浓度，促使愈伤组织的形成。
而后续的再生过程则需要恰当的培养基配方和培养条件来促进愈伤组织进一步分化为叶片、茎或芽等。
激素配方也是蝴蝶兰组织培养中的一个重要环节。
激素是促使组织发生增殖与分化的关键因子，合理配方的激素能够提高培养效果。
在蝴蝶兰组织培养中，通常会使用生长素（如NAA、IAA等）和细胞分裂素（如BA、KT等）来促进愈伤组织的生长和分化。
但需要注意的是，过量使用激素会导致愈伤组织过度生长、变异等问题，因此需要根据实际情况进行激素配方，以达到最佳效果。
最后是质壁分离技术。
质壁分离技术是蝴蝶兰组织培养中分离不同种类细胞的重要手段。
通过质壁分离可以获得纯种植物的组织或细胞，进行遗传改良和基因工程研究。
在蝴蝶兰的质壁分离过程中，需要先进行组织消毒处理，然后通过特定的酶解剂或物理方法分离细胞的质壁。
质壁分离技术的成功与否直接影响到培养后续的成活率和生长发育情况。
蝴蝶兰组织培养的关键技术包括无菌培养、组织愈伤与再生、激素配方以及质壁分离等。
这些关键技术的掌握对于蝴蝶兰的高效培养和研究具有重要意义。
未来的研究需要进一步深入探讨和改进这些技术，以促进蝴蝶兰组织培养技术的发展与应用。
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收稿日期:2002-10-08文章编号:1008-9632(2003)03-0019-03蝴蝶兰的组织培养研究秦 凡,周吉源(华中师范大学生命科学学院,武汉 430079)摘 要:探讨蝴蝶兰的组织培养技术和方法。
实验表明:改良型M 1培养基诱导原球茎有良好的效果,M 1+BA 5.0mg/L 对花梗芽的诱导最合适,M 1+BA3.0mg/L 对茎尖诱导原球茎最合适。
降低分裂素浓度后,原球茎可以分化成完整植株,壮苗阶段以改良型M 2+BA 0.1mg/L +NAA 0.5mg/L 效果较佳。
移栽基质选用水苔,成活率高。
关键词:蝴蝶兰;组织培养;原球茎中图分类号:Q943.1文献标识码:A 蝴蝶兰[phalaenopsis]为兰科蝴蝶兰属植物,它是一种热带气生兰,俗称“洋兰”。
蝴蝶兰花型似蝴蝶,形态美妙、色彩丰富、花期长,在热带兰中素有“兰花皇后”之美称[1],是近年来在国际花卉市场上最受欢迎的洋兰。
蝴蝶兰是单茎气生兰,植株极少发育侧枝,因此对其进行常规的无性繁殖,以及依靠种子萌发进行繁殖,增殖速度极慢,难以满足市场要求,而组织培养是进行大量繁殖的最有效手段。
目前我国进行蝴蝶兰组织培养研究,大多集中在台湾地区以及沿海地区,华中地区少见关于蝴蝶兰组织培养、移栽的报道。
本实验室根据华中地区的气候特点,开展了蝴蝶兰组织培养、移栽等方面的研究,现报道如下:1 材料、方法111 材料:供试材料取自湖北省林业局花卉大市场二年生成花,取其花梗和幼茎,其中花梗为45天以前的全部幼嫩花序。
112 灭菌:将花梗从母体切下,再将花梗切成带芽的小段,同时将茎上面叶子和茎下面根部分别切去,留带茎尖的茎段约1cm 。
首先将花梗段,茎段分别放入5%漂白粉溶液中漂洗20分钟,最后放入0.1%升汞溶液和75%酒精溶液中消毒备用。
113 培养基:M 1、M 2、M 3三种基本培养基。
附加活性炭0.2%,蔗糖2.0%,琼脂0.7%,pH 值调至5.0～5.5。
不同的培养阶段附加不同种类和浓度的植物激素。
然后配制分装,经高压灭菌25分钟后备用[4]。
114 光照、温度:散射光照,25℃左右。
115 移栽基质:采用水苔作为移栽基质,装盆前所有基质均经高压灭菌。
2 结果分析211 灭菌时间将进行漂洗后的花梗腋芽段和茎段分别剥离出腋芽和茎尖。
然后放入到0.1%的升汞溶液中消毒,再放入75%的酒精溶液中进行灭菌处理。
其时间见表1表1 0.1%升汞溶液消毒灭菌时间及效率外植体246时间8(分)10111213腋 芽90%70%55%25%15%5%33茎 尖80%60%20%3333 注:污染比=污染数/接种总数3死亡75%酒精消毒灭菌时间及效率外植体24时间6(秒)81012腋 芽100%90%50%20%5%3茎 尖80%60%333 注:污染比=污染数/接种总数3死亡91 上表可知茎尖以0.1%升汞6～8分钟,酒精6秒为最佳;而花梗以0.1%升汞10～11分钟,酒精10秒为最佳。
212 以茎尖、花梗芽为外植体诱导21211 培养基的选择由于蝴蝶兰外植体接种后易褐变,因此培养基的选择是关键部分,为了找到诱导原球茎较好的培养基,我们试用了3种基本培养基(主要是无机盐含量不同)即:M1、M2、M3[2]。
在这三种基本培养基中分别加BA3. 0mg/L,每种接3瓶,每瓶放入4～6个花梗芽置于散射光,温度25℃左右,培养1个月左右,三种培养基都能使花梗腋芽萌发。
但不同培养基诱导效果不同(表2)。
表2 培养基对花梗腋芽萌发率培养基20培养时间30(天)406080M1010%30%73%40% M208%25%51%55% M308%25%38%25% 注:萌发率=营养芽数/腋芽总数×100% 从表2可以看出不同培养基对花梗腋芽诱导作用各不相同,M1效果最好,最高达73%,M3的诱导最差为38%。
本实验用蝴蝶兰茎尖为材料所得结果相似。
因此,M1培养基有利于茎尖,花梗腋芽的诱导。
21212 花梗腋芽的诱导将带腋芽的花梗植于M1培养基上,附加不同浓度BA诱导花梗腋芽的萌发,其中BA浓度为0、1、2、3、4、5、6(mg/L)7种浓度梯度每处理三瓶共用花梗芽15个, 1个半月后统计其萌发率(表3)。
表3 不同浓度BA对花梗腋芽的萌发率BA0123456(mg/L)005%52%74%85%53% 注:萌发率=营养芽数/腋芽总数×100% 由表3可知BA在浓度为5mg/L时效果最好,然后随浓度升高降低。
萌发后的营养芽2～3周培养能长出2叶幼苗,经过壮苗、生根等阶段培养即可长成试管苗。
其无根苗去叶取其茎尖,通过茎尖诱导原球茎可进行大量繁殖。
21213 茎尖产生原球茎的诱导表4 各种激素对茎尖原球茎诱导率激素接种数(个)原球茎数(个)诱导率M11200M1+BA31010100%M1+BA510880%M1+BA611545%M1+BA5+NAA.510981%M1+BA5+NAA110330%M1+BA5+2.4D.51000M1+BA5+2.4D11000M1+NAA.51000M1+NAA1.01100M1+2.4D.51000M1+2.4D1.01200通过茎尖进行原球茎的诱导关键在激素调节。
众所周知,激素是植物组织培养的重要组成部分,为了确定较佳的激素,作者配制一组BA、NAA以及224D组合,用于茎尖原球茎诱导,其中BA浓度为0、3.0mg/L、5.0mg/L、6.0mg/L4个梯度,NAA、224D都为0.5mg/L、1mg/L两个梯度,均以M1为培养基,每个处理2瓶共用茎尖10个左右,2个月后统计原球茎数(表4)。
由表4可知:M1,M1+NAA、M1+224D系列均不能诱导原球茎。
而茎尖诱导以M1+BA3.0为最佳浓度。
当BA浓度达到6mg/L时出现褐化死亡,这可能与高浓度BA刺激多酚氧化酶作用[7、8]。
213 原球茎的继代培养将初代培养所得到的原球茎可以在初代相同的培养基上继代增殖,但是BA的浓度以2.0mg/L时最佳,原球茎的增殖系数2个月内能达到4倍以上,原球茎增殖后转接到新鲜培养基就会陆续出芽,形成从生芽,从而诱导出苗。
214 壮苗与生根将继代得到的小苗转入到各种壮苗生根M1、M2、M3培养基上,以M2为最佳,激素浓度以BA0.1mg/L+ 0.5mg/LNAA组合较佳[8]。
02215 炼苗与移栽21511 炼苗当蝴蝶兰试管苗长至2～3cm高,具有3～4片叶时,打开封口膜在室温下炼苗一周,方法采用金玻方法,出瓶时洗净根部培养基在0.1%的(K M n O4)高锰酸钾溶液中泡5min后风干叶面上水分,然后用高温灭菌的水草,经过清水浸泡数小时,挤干水分后将幼苗根包住,栽于塑料盘中,不要立即浇水,可一周后开始浇水。
武汉地区一般情况下,夏季每天浇一次,而春、秋、冬隔天一次为好,温度应保持在20℃以上,温度达80%左右。
苗移栽一个月后用花宝系列肥,结合浇水进行叶面施肥,2个月后即可上大盆。
21512 大苗栽培及管理2151211 温度光照 由于蝴蝶兰主要分布于热带低海拔地区,栽培对温度要求比较严格,最适栽培温度为白天25℃～28℃,夜间18℃～20℃在这样环境中,蝴蝶兰处于长期长生状态,因此,武汉地区从每年5月～11月都可进行大规模的大苗栽培。
蝴蝶兰不适于强烈阳光下生长,在强阳光下要用遮阳网遮蔽阳光,冬季可少遮些。
2151212 栽培基质及方法基质选用水苔作基质的盆栽法,主要适用多孔塑料盆,盆高最好小于直径,盆下部用小块泡沫填充以利排水,上面用水苔填充,将小苗栽植于盆中,切不可压得太紧,以防烂根。
2151213 施肥及花期管理蝴蝶兰在温度适宜条件下生长迅速,全部都可以生长,因此,它需肥量比其它兰花稍多,主要以液肥为主,春天适当少施,夏秋多施,促进其生长,每周1次液肥,主要用花宝5号1000倍液,春节前1个月左右改用含磷、钾元素高的花宝3号1000倍液喷施。
蝴蝶兰形成花茎主要受温度影响,短日照、低温利于花茎形成及生长,武汉地区每年春节前后,基本适合蝴蝶兰开花期生长,但注意夜间温度一定要控制在18℃以上,并且不能一直低温,否则会延迟花期。
3 讨论311 蝴蝶兰的快繁技术,近年来在我国沿海地区进行实验报道,但文章有限,本文通过选择不同的培养基及激素组合结合武汉地区气候环境对试管苗的培育及移栽进行尝试,这对蝴蝶兰这种花卉推广有一定意义。
312 切取花梗对母株影响很小,是比较理想的外植体来源。
利用花梗不仅达到快繁目的,而且还可避免伤害母株,母株通过肥、温度控制,又可产生新花梗,也不会影响成株砚花等不良后果。
313 蝴蝶兰的组织培养过程中,由于兰科植物易褐化[1],因此,培养基的无机盐成分特别关键,我们通过不断研究配制两种培养基(M1、M2)对蝴蝶兰组织培养较适合。
参考文献:[1]谭文澄,等.观赏植物组织培养技术[M].北京:中国林业出版社,1991,247～253.[2]加古舜治,主编.教育园艺植物的器官与组织培养[M],郑州:河南科学技术出版社,1992,202～206.[3]金 波,等.养兰与赏兰[M].北京:农村读物出版社,2000.[4]李浚明.植物组织培养教程[M].北京:中国农业大学出版社,1992,39.[5]郑宗坤.长春花碱的提取方法[J].生物技术,11(6):12～13.[6]周吉源,戴均贵.不同植物生长调节物质对华黄芪愈伤组织形成及器官发生的效应[J].华中师大学报,1997,31(1):80. [7]王永明.君子兰组织培养初探[J].中国园林,1985,1:47～48.A study on tissue culure of PhalaenopsisQIN Fan,ZHOU Ji-yuan(C ollege of Life Science Central China Normal University,Wuhan430079,China)Abstract:The preliminary results of tissue culture of Phalaenopsis were reported.The results showed that M1medium has the positive effects on inducing the P LB(protocorm-like body).The best suitable medium for P LB inducement form stem opex was m odified medium M1+BA5.0mg/L.The best suitable medium for bud inducement form rachis was m odified medium M1+ BA5.0mg/L.The P LB may differentiate into plants after the reducing of the cytokinin.At the prime stage the M2medium supplemented with BA0.1mg/L and NAA0.5mg/L juice performed well.The optimal transplantation medium is water plant and the survival rate reach high.K ey w ords:Phalaenopsis;tissue culture;protocom-like body12。