蝴蝶兰组织培养
蝴蝶兰组织培养技术毕业论文
毕业论文（设计）学生姓名:指导教师：专业名称: 园林技术所在系部：园林系2010年 3 月 9 日辽宁林业职业技术学院毕业论文评审书蝴蝶兰品种组织培养技术摘要：被誉为“洋兰王后"的蝴蝶兰，几年来一直都处于花卉销售的首位，一直受到花迷们的青睐。
近年来除了盆花,还大量被用作切花材料，切花中除我们常见的插花用途之外，还是制作胸花的好材料，在开会庆典场合备受瞩目，至于用来制作新娘捧花，也是目前国内流行的新风潮，深受广大消费者的好评，这就使得高品质的蝴蝶兰需求量逐年增加。
但目前由于专业性培育蝴蝶兰的整体水品不是很高，关键的生产环节技术薄弱,造成蝴蝶兰生产成本较高繁殖系数偏低,工业化生产效率不高，许多名贵品种短缺，品质较低,且市场售价较高。
因此建立和完善蝴蝶兰组培快繁技术是解决这一问题的关键环节。
本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素，并提出了相应的对策，为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。
关键词：蝴蝶兰；快繁技术；养殖;褐变目录前言……………………………………………………………………………………………第一章蝴蝶兰的生态习性…………………………………………………第二章蝴蝶兰的快速繁殖技术…………………………………………………2.1茎尖培养…………………………………………………2。
2蝴蝶蝶兰的诱导培养基为ＶＷ、ＫＣ、ＭＳ、ＢＫ……………………………2。
3叶片培养…………………………………………………2.4花梗腋培养…………………………………………………2。
5根尖培养…………………………………………………2.6 原球茎的继代培养与育苗…………………………………………………第三章蝴蝶兰的栽培管理…………………………………………………3.1栽培介质…………………………………………………3.2温度……………………………3。
3浇水………………………………………………………………………3.4光照……………………………………………………………………3。
蝴蝶兰的组织培养概述
农技服务园艺作物·55·2017，34（24）蝴蝶兰的组织培养概述卢 舒，林浩群（揭阳市农业科学研究所，广东 揭阳 522000）作者简介：卢舒（1988.7-），女，广东省揭阳人，初级农艺师，主要从事农艺工作，研究方向：农作物新品种技术研究。
［摘要］本文从蝴蝶兰外植体选择、培养基、激素和添加物的选择、原球茎的增殖与生根壮苗等几方面概述了蝴蝶兰的组织培养技术的研究进展，为其组培技术研究提供参考。
［关键词］蝴蝶兰；农业；组织培养；快速繁殖蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite Rchb. F.)为兰科蝴蝶兰属，由于它的花形较为优美、色彩多样且鲜丽、花期较长而享有“兰花皇后”的美誉，观赏价值和经济价值都很高，是世界上四大最具商业价值观赏热带兰的其中一个。
蝴蝶兰为单茎性气生兰，较少侧芽生成，再生能力不高，不利于一般的分株繁殖；且无胚乳的种子在自然环境中难以萌发，难以满足市场的大量需求。
农业科研工作者一直在探索蝴蝶兰优质种苗快速繁殖的方法，其中应用植物组织培养技术进行快速繁殖已经成为蝴蝶兰种苗繁殖最好的方法。
组织培养方法可以缩短繁育周期，获得大量成株，还可以保持种质优良性状。
本文从外植体选择、培养基、激素和添加物的选择、原球茎的增殖与生根壮苗等几方面概述了蝴蝶兰的组织培养的研究进展，以期为蝴蝶兰的生产发展提供有益的信息。
１外植体的选择 对外植体培养成功与否的其中一个主要影响因素就是外植体的来源，花梗芽、叶片、茎尖和根等都是蝴蝶兰组织培养中经常利用的诱导原球茎的外植体。
由于组织培养的分化能力和分化程度与品种、选取的器官有关，所以要成功地进行蝴蝶兰组织培养就要选择合适的外植体进行无菌操作。
1.1花梗芽蝴蝶兰花梗芽是最佳的组培培养外植体，具有易取材、易消毒、对母株损伤小、诱导率高等优点。
从蝴蝶兰产生花梗到花谢期间，绿色的花梗都可以取材，一般越嫩的花梗诱导出的原球茎生长状况越好。
蝴蝶兰组培生产堤防事项
2023-11-08•蝴蝶兰组培生产概述•蝴蝶兰组培生产的基本流程•蝴蝶兰组培生产的堤防事项•蝴蝶兰组培生产的常见问题与解决方案•蝴蝶兰组培生产的未来发展趋势与展望目录01蝴蝶兰组培生产概述蝴蝶兰是兰科蝴蝶兰属的一种植物，其花朵形状独特，色彩鲜艳，具有很高的观赏价值。
蝴蝶兰原产于热带雨林地区，喜欢温暖湿润的环境，不耐寒，需要较高的空气湿度和半阴的光照条件。
蝴蝶兰的生物学特性产的一种方法。
培养基的优化、继代培养和生根培养等环节。
产业。
通过组培生产，可以实现蝴蝶兰的全年供应，提高花卉市场的品种多样性。
此外，蝴蝶兰的组培生产还有助于保护珍稀野生资源和进行植物新品种的培育。
蝴蝶兰的组培生产在花卉产业中具有重要的地位，其繁殖速度快、周期短，可以满足市场对蝴蝶兰的大量需求。
02蝴蝶兰组培生产的基本流程确定培养基配方根据蝴蝶兰的品种和生长阶段，选择适宜的培养基配方。
常用的培养基配方有MS、1/2 MS、VW等。
制备培养基按照选定的配方，称取适量的琼脂、糖、激素等成分，加入蒸馏水，加热至琼脂溶化，然后调节pH值至适宜的范围。
培养基的制备选择健康、无病虫害的蝴蝶兰植株作为外植体，如叶片、茎段、花梗等。
选择外植体将外植体表面清洗干净，然后进行消毒处理，以杀死表面的细菌和真菌。
常用的消毒剂有升汞、酒精等。
外植体消毒外植体的选择与处理在超净工作台上进行无菌接种操作，确保无菌环境。
无菌环境将消毒好的外植体切割成适宜的大小，然后接种到培养基上。
接种时要避免交叉污染，每个瓶内只接种一种外植体。
接种操作将接种好的培养瓶放置在恒温培养箱内，保持适宜的温度、湿度和光照条件。
一般而言，适宜的温度为25℃左右，光照强度为2000-3000勒克斯。
培养条件无菌接种与培养经过一段时间的培养后，外植体上的组织会逐渐生长扩大，需要进行继代培养以维持其生长。
继代培养与增殖继代培养蝴蝶兰的增殖途径包括腋芽增殖、丛生芽增殖和根尖增殖等。
不同的增殖途径具有不同的特点和适用范围。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
不同培养基成分对蝴蝶兰组织培养褐化的影响
不同培养基成分对蝴蝶兰组织培养褐化的影响●冯 宁（青州市花卉高科技博览园管理委员会 山东 青州 262500）摘要：蝴蝶兰，又被称为蝶兰，属于蝴蝶兰属附生兰类，是一种根部裸露在空气中吸收养分供自身生长的附生兰科植物，还是闻名的切花种类，深受欢迎，栽培范围相对广泛。
尽管近年来国内外对蝴蝶兰组培进行相关研究，但还局限于外植体和激素选择方面上，并没有对褐化问题进行系统研究和分析。
本实验从蝴蝶兰组织培养研究方面切入，通过对培养基配方调整和分析，观察得出不同培养基成分对蝴蝶兰组培苗褐化调控的影响程度，为其今后相关研究发展提供参考。
关键词：蝴蝶兰；组织培养；褐化蝴蝶兰花色相对艳丽，有 “兰中皇后”的美誉，不但拥有较强的观赏价值，经济价值也愈发突出，因此，不管是在国外花卉市场还是国内市场都十分受欢迎。
受其自身特性影响，蝴蝶兰几乎在自然条件下无法分株繁殖，并且如果种子发育不完全，萌发将很难进行，因此组织培养开始成为其最主要的繁殖方式。
在对蝴蝶兰进行组织培养时，因组培材料被切断，体内的酚类物质会与氧结合形成褐色的醌类物质，即组培届所说的“褐化”。
“褐化”物质——醌类与蝴蝶兰组织中蛋白质发生化学反应，不仅影响蝴蝶兰花梗的萌芽率，还严重影响组培苗后期生长及成品苗的开花质量和性状稳定。
因此，本文对培养基影响因素进行分析，以期抑制褐化产生，提升培养质量。
1 实验材料与方法本实验选取蝴蝶兰花梗作为实验材料。
1.1 取材选择芽体饱满、无病虫害的花梗，将其剪下，去除花蕾和开放的花朵。
将花梗用洗洁精清洗干净后，用流水冲洗2h以上。
1.2 外植体消毒与接种在超净工作台中将花梗切成3～4cm的小段，每段要带有1个芽。
然后用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗2～3次后，再用0.1%的升汞溶液浸泡15min左右，随后用无菌水冲洗5～6次。
将消毒后的花梗放在灭菌后的滤纸上，吸干水分，将两端被药蚀的伤口部位切掉，然后按照腋芽在花梗上的着生位置将花梗段进行分类，接种到培养基中。
蝴蝶兰组织培养研究进展
蝴蝶兰组织培养研究进展摘要通过不同培养基、不同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述,为蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。
关键词蝴蝶兰;组织培养;研究进展蝴蝶兰(Phalaenopsis)属热带或亚热带的兰科植物,深受人们的喜爱,研究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意义[1]。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式,目前主要有3条途径:一是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽,获得再生植株[2];二是从离体器官诱导产生原球茎(Protocorm like-body,以下简称PLB),通过原球茎的增殖、分化获得再生植株,即原球茎再生途径[3,4];三是通过离体器官诱导产生丛生芽,通过培养丛生芽获得再生植株,即器官再生途径[4-7]。
1无菌播种再生途径蝴蝶兰经人工授粉可获得种子,但种子个体极其微小,结构简单,没有胚乳,只有1层极薄的种皮,通常在自然状态下很难萌发,需经组织培养无菌播种才能获得植株。
在蝴蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉,生长4～6个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。
由于蒴果内种子数量达几千万之多,1个蒴果便可繁殖出成千上万的植株[8]。
通过无菌播种人工培养,能够在短期内获得大量幼小植株,是现阶段经济有效的快速繁殖方法,也是工厂化育苗的重要途径。
种子无菌播种10d后胚明显膨大,呈鹅黄色,陆续变成绿色,约1个月的时间形成原球茎)。
随后,原球体拉长,同时原球体上伴随着长出白色根毛状物,接着在顶端生长点处长出芽鞘,芽鞘不断长大,形成第1片鞘叶。
至2个月时,于第1片鞘叶对面长出第2片鞘叶,随着鞘叶的生长,2～3个月的时间在2片鞘叶之间长出真叶。
最后,转移到新的培养基上形成再生植株[8-10]。
魏翠华等[9]研究发现,添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、原球体形成以及叶片的生长具有促进作用,水解乳蛋白对种子萌发有抑制作用,比较光照和黑暗2种培养条件,种子萌发无明显差异。
章玉平等[10]研究表明,外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用,天然物质如苹果汁、香蕉汁、胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。
蝴蝶兰的组织培养技术
１ ． 原 球 茎 的 诱 导 。 幼 叶 切 成 ５ ５ ｍ 见方 的 小 块 和 １ｒ ．２ ２ 将 ｘｍ ０ｍ ａ
长 根 尖 。平 放 或 按 极 性 接 种 以 ＭＳ为 基 本 培 养 基 ．添 加 激 素
ＮＡＡ１ ／ 和 不 同 的 浓 度 Ｂ （ ｍｇＬ、ｍｇＬ、ｍｇＩ、 ｍｓＬ、 ｍｇＬ Ａ ２ ／ ４ ／ ６ ／ ８ ／
重 到 ４ ％。而根 尖 没 有 诱 导 出 原球 茎 。可见 生 长 龄 为 １ｄ幼 叶 ７ ４ 最 有 利 于原 球 茎 的产 生 。还 发 现 在 同 一 叶 片 上 。 基 部 的 切 块 叶
较 叶 中和 叶尖 的切 块 诱 导 率 高 。对 于 比较 小 的 幼 叶 ． 切 割 时 未
ｌｍｇ ） 比 的诱 导 培 养 基 上 ． 设 置 散 射 光 和 ２０ １ 两 种 作 Ｏ ／ 配 Ｌ 并 ０ ０ｘ
比较 ， 瓶接 种 一 个 ， 处 理 ｌ 每 每 ０瓶 ， 复 ３次 。培养 ２个 月 后 观 重 察统 计 不同 外植 体在 不 同培养 基 中原 球茎 的诱 导 率及 生 长情 况 。
１１ 实 验 材 料 ．
将 增 殖 培 养 所 得 到 的 蝴 蝶 兰 小 苗 转 接 到 各 种 生 根 培 养 基
（ 表 ４， 见 ） 每处 理 ｌ Ｏ瓶 ， 瓶 ３株 ， 复 ３次 。培 养 ３ ｄ后 统 计 每 重 ０
苗 的 生长 情 况 和 生 根 率 、 均 生 根 率 。 平 生 根 培 养 基 中 加 入 ０３ － ％的 活性 碳 ＋ 糖 ３ ｇ ＋ 脂 ７ ｍ。 蔗 ０／ 琼 Ｌ ｇ
培养 条 件 均 为 ２ ℃ ， 照 时 间 １ ｈ， 照 强 度 ２ ０ ｌ。 ５ 光 ６ 光 ０ ０ｘ
蝴蝶兰的丛生芽组织培养技术
报告内容
• • • • • 1.实验背景 2.可行性分析 3.材料方法 4·实验结果分析 5.总结
• 可行性分析
• 1.实验操作简单，所要使用的仪
器也不复杂。 • 2.蝴蝶兰来源比较广，如果想使 用品种好的，可以去西部兰花基 地购买。 • 3.有动手做实验的基础。 • 4.本学期上过的细胞工程有涉及 到这类实验的内容，课堂上也看 过类似的视频，所以都有理论基 础。
取样与消毒 剪取蝴蝶兰未开花粗壮的花 梗，首先用流水冲洗30min。 然后在超净工作台上进行以 下操作：先用 75％酒精浸泡几秒钟．接着 用0．1％氯化高汞(加吐温) 消毒10 -15 min，再用无菌 水冲洗5遍后，取出将 花梗切成长约2 cm带腋芽的 切段。
• •
丛生芽的诱导 将带腋芽的切段( cm)基部向下插 将带腋芽的切段(约2 cm)基部向下插 MS培养基上 比较不同浓度6 培养基上， 在MS培养基上，比较不同浓度6BA(0． BA(0．0、1．0、3．0、5．0、 )mg／ 对丛生芽诱导的影响。 7．0 )mg／L对丛生芽诱导的影响。观 察并统计诱导天数、 察并统计诱导天数、诱导出丛生芽的 个数以及诱导率． 个数以及诱导率． • 对试验结果进行方差分析 丛生芽的增殖 (1)不同浓度的 不同浓度的6-BA对丛生芽增殖的影响。 对丛生芽增殖的影响。 不同浓度的 对丛生芽增殖的影响 将启动的丛生芽转至MS培养基上．比较不 培养基上． 将启动的丛生芽转至 培养基上 同浓度6-BA 同浓度 (0．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 12．0 mr,／L)对丛生芽增殖的影响。培养 对丛生芽增殖的影响。 ． ／ 对丛生芽增殖的影响 培养2 个月后观察并统计蝴蝶兰丛生芽 的增殖个数、增殖率和生长情况。 的增殖个数、增殖率和生长情况。对试验结 果进行方差分析。 果进行方差分析。
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㈡试管苗茎尖的培养
材料: 材料 试管苗茎尖0.3mm左右 左右 试管苗茎尖
培养基:MS+BA 3～6mg/l+椰乳 培养基 ～ 椰乳 温度: 温度 光强: 光强: 25～28℃ ～ ℃ 光照时间8～ 光照时间8～10h/d
14d后茎尖膨大，呈浅绿色半球状，3个月后，可诱 后茎尖膨大，呈目九
蝴蝶兰的组织培养与快繁技术
教学内容
教学目标 工作任务 实践操作 问题探究 知识拓展 项目实践 作 业
教学目标
教学终极目标
会蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖的技术方法和流程。 会蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖的技术方法和流程。
促 成 目 标
能熟练进行蝴蝶兰花梗侧芽的消毒和培养 能进行原球茎诱导、继代、 能进行原球茎诱导、继代、生根与炼苗
三、胚状体发生的方式：
体细胞胚胎发生的方式有直接、间接两种： 体细胞胚胎发生的方式有直接、间接两种： ①从培养中的器官、组织、细胞或原生质体直接分化 从培养中的器官、组织、 成胚，中间不经过愈伤组织阶段。 成胚，中间不经过愈伤组织阶段。 ②外植体首先发生脱分化，然后由愈伤组织细胞分化 外植体首先发生脱分化， 为胚。后者较为常见。 为胚。后者较为常见。 间接发生方式一般要 胚胎发生丛与胚状体发育两个过程。 两个过程 有胚胎发生丛与胚状体发育两个过程。胚胎发 生丛是指细胞质浓、体积小常常聚集丛生、 生丛是指细胞质浓、体积小常常聚集丛生、且 是指细胞质浓 高度分化的一些愈伤组织细胞。 高度分化的一些愈伤组织细胞。
Comparison of moncot and dicot and gymnosperm somatic embryos A. Somatic embryo of orchardgrass growing from an embryogenic callus: coleoptile and notch B. Somatic embryo of grape growing from an embryogenic callus: two flattened cotyledons and subtending hypocotyl C. Somatic embryo of Norway spruce: multiple cotyledons and elongated hypocotyl.
MS+BA0.5㎎ +NAA0.1㎎/L+3%蔗糖 60天 蔗糖。 ①种子 ： MS+BA0.5㎎/L +NAA0.1㎎/L+3%蔗糖。60天。 +NAA0.5㎎/L培养基 培养基。 ②花梗：1/2MS+BA5.0㎎/L +NAA0.5㎎/L培养基。4周 花梗：1/2MS+BA5.0㎎
2、初代培养 、
项目介绍
蝴蝶兰：兰科，蝴蝶兰属； 蝴蝶兰：兰科，蝴蝶兰属；别 名：蝶兰，拉丁名： 蝶兰，拉丁名： Phalaenopsis amabilis 蝴蝶兰是单茎性附生兰，茎短， 蝴蝶兰是单茎性附生兰，茎短， 叶大，花茎一至数枚，花大， 叶大，花茎一至数枚，花大，因 花形似蝶得名。其花姿优美， 花形似蝶得名。其花姿优美，颜 色华丽，为热带兰中的珍品， 色华丽，为热带兰中的珍品，有 “兰中皇后”之美誉。 兰中皇后”之美誉。
胚状体 概念：体细胞胚或花粉胚是指在植物组织培 养中起源于1个非合子细胞，经过胚胎发生和 胚胎发育过程形成的胚状结构，通称胚体。
二、体细胞胚的发生过程：
⑴胚性愈伤组织诱导； 胚性愈伤组织诱导； 体胚诱导； ⑵体胚诱导； 体胚早期分化发育； ⑶体胚早期分化发育； 体胚成熟； ⑷体胚成熟； 体胚再生。 ⑸体胚再生。
合子经过短期的休眠后进行不均等分裂， 合子经过短期的休眠后进行不均等分裂，产生一个较大的 基细胞和一个较小的顶端细胞。 基细胞和一个较小的顶端细胞。 顶端细胞经若干次分裂后形成原胚，再依次经过球形期、 顶端细胞经若干次分裂后形成原胚，再依次经过球形期、 心形期、鱼雷形期和成熟期最终成为成熟胚. 心形期、鱼雷形期和成熟期最终成为成熟胚.
如何选择蝴蝶兰外植体？ 如何选择蝴蝶兰外植体？
蝴蝶兰进行组织培养快速繁殖常用的外植体主要 有茎尖、茎段、叶片、根尖、根段、花梗腋芽、 有茎尖、茎段、叶片、根尖、根段、花梗腋芽、花梗 节间切段、幼胚、种子等。 节间切段、幼胚、种子等。各个外植体培养成功的难 易程度不同，诱导率不同， 易程度不同，诱导率不同，适于的诱导培养的途径不 同。
蝴蝶兰属热带气生兰植物，原生种有 多种 多种， 蝴蝶兰属热带气生兰植物，原生种有70多种， 原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚等地。 原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚等地。蝴 蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽， 蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，花似 蝴蝶，色泽丰富，形态美妙，花期长达 个月 个月， 蝴蝶，色泽丰富，形态美妙，花期长达3-4个月， 深受各国人民欢迎。 深受各国人民欢迎。
什么是胚状体的发生？ 什么是胚状体的发生？
一、概念： 概念： 1、胚胎发生: 胚的发育过程。 胚胎发生: 胚的发育过程。 2、体细胞胚胎或胚状体，简称体胚。 体细胞胚胎或胚状体，简称体胚。 在植物组织培养中起源于一个非合子细胞， 在植物组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎 发生、发育过程形成双极性的胚状结构。 发生、发育过程形成双极性的胚状结构。 含义： 含义： ①不同于合子胚，它不是两性细胞融合的产物； 不同于合子胚，它不是两性细胞融合的产物； 不同于孤雌胚或孤雄胚，它不是无融合生殖的产物； ②不同于孤雌胚或孤雄胚，它不是无融合生殖的产物； 不同于组培中器官发生途径形成的茎芽和根； ③不同于组培中器官发生途径形成的茎芽和根； 它是一个与合子胚的发育过程相似、具有双极性的胚状结构。 ④它是一个与合子胚的发育过程相似、具有双极性的胚状结构。
蝴蝶兰种子的无菌培养
实践操作
材料选择和消毒 生根培养
花梗消毒和接种
花梗侧芽培养
壮苗培养
初代培养 诱导原球茎
继代增殖
㈠花梗侧芽的消毒与培养
自来水冲洗，洗衣粉液浸泡 ～ 自来水冲洗，洗衣粉液浸泡5～7min，自来水反复洗 ，
外植体的选择→预处理→灭菌→接种
↓
75%酒精 浸泡 酒精 浸泡30s左右，0.1%升汞消毒 ～20min，无菌水冲 左右， 升汞消毒10～ 左右 升汞消毒 ， 洗3次 次
什么是原球茎？ 什么是原球茎？
原球茎最初是兰花种子发芽过程中的一种形态学 构造。种子萌发初期不出现胚根， 构造。种子萌发初期不出现胚根，而是原胚的萌动 和膨大，种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状， 和膨大，种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状， 称作原球茎。以后原球茎顶端产生突起， 称作原球茎。以后原球茎顶端产生突起，出现鳞片 状叶原基，形成子叶。也可理解为缩短的、呈珠粒 叶原基，形成子叶。也可理解为缩短的、 状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官。 状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官。
①种子： MS+BA5.0㎎/L 培养基上。60天，4cm高实生苗 种子： ㎎ 培养基上。 天 高实生苗 ②花梗：MS+BA5.0㎎/L 培养基上。4w苞叶处丛生小芽 花梗： ㎎ 培养基上。 苞叶处丛生小芽
3、继代培养与育苗 、 将原球茎切成数块转移到新鲜的初代培养基 椰乳、 上，附加15%椰乳、 0.5㎎/L +LAA6.0㎎/L 附加 椰乳 ㎎ ㎎ 腺嘌呤。 腺嘌呤。 4、试管苗的移栽与管理技术 、 试管苗的出瓶移栽技术与大花蕙兰相同。 试管苗的出瓶移栽技术与大花蕙兰相同。
蝴蝶兰属的拉丁学名是由Phala（蛾蝶）和Opsis（模样）组 （蛾蝶） 蝴蝶兰属的拉丁学名是由 （模样） 意指花外形似蛾蝶 该属植物约有4个原生种 花外形似蛾蝶。 个原生种， 成，意指花外形似蛾蝶。该属植物约有 个原生种，主要分布 在南北纬度23度之间 从喜马拉雅山经印度、缅甸、 度之间， 在南北纬度 度之间，从喜马拉雅山经印度、缅甸、中国南 马来西亚、菲律宾、澳大利亚和新几内亚。 部、马来西亚、菲律宾、澳大利亚和新几内亚。我国云南南 部、西藏南部、广东南部、海南和台湾一线为该属植物的最 西藏南部、广东南部、 北分布界限。 北分布界限。
培养基:MS+BA 3-5mg/l+胰蛋白胨 胰蛋白胨2g+椰乳 椰乳30g+糖 培养基 胰蛋白胨 椰乳 糖 35g+琼脂 琼脂12g/L，pH=5.0-5.4 琼脂 ， 温度:25～ ℃ 光照10～ 温度 ～28℃；光照 ～12h；光强 ；光强1500～2000lx。 ～ 。
培养
1、选材与消毒:75%酒精30S，0.1%升汞5min 选材与消毒:75%酒精30S，0.1%升汞5min :75%酒精30S 升汞
蝴蝶兰
工作任务
任务1 任务 任务2 任务 任务3 任务
由蝴蝶兰花梗诱导腋芽 对初代培养物诱导形成原球茎 对试管苗进行试管内生根培养 对生根苗进行驯化和移栽
任务4 任务
蝴蝶兰的繁殖
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株上极少发育侧枝， 蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株上极少发育侧枝， 单茎性气生兰 比其他种类的兰花更难于进行常规无性繁殖。组织培 比其他种类的兰花更难于进行常规无性繁殖。 难于进行常规无性繁殖 养是建立蝴蝶兰快速繁殖无性系的重要手段。 养是建立蝴蝶兰快速繁殖无性系的重要手段。
㈣生根与炼苗
生根： 生根：MS+IAA0.5 70多 多 天后， 天后，具4～5条根 的小 ～ 条根 苗，可出瓶种植。 可出瓶种植。 炼苗：置于室温7～ 炼苗：置于室温7～10 d后，打开瓶盖 天，取 后 打开瓶盖2天 出小苗假植于水苔上。 出小苗假植于水苔上。
商业化生产
问题探究
1．如何选择蝴蝶兰外植体？ ．如何选择蝴蝶兰外植体？ 2．什么是原球茎？ ．什么是原球茎？ 3．什么是胚状体的发生？ ．什么是胚状体的发生？ 4．什么是人工种子？ ．什么是人工种子？
蝴蝶兰花梗组织培养
蝴蝶兰腋芽萌发
MS+BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+苹果汁 80g/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L+活性炭1g/L 为好。 培养条件：25℃，600lx，pH5.4~5.6