谷氨酸分子量及解离常数测定
氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。
一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。
4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3苯酚：需重蒸馏。
4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
氨基酸
氨基酸解离常数列表：缩写中文译名支链分子量等电点羧基解离常数氨基解离常数 Pkr(R) R基Gly G 甘氨酸亲水性75.07 6.06 2.35 9.78 -HAla A 丙氨酸疏水性89.09 6.11 2.35 9.87 -CH3Val V 缬氨酸疏水性117.15 6.00 2.39 9.74 -CH-(CH3)2Leu L 亮氨酸疏水性131.17 6.01 2.33 9.74 -CH2-CH(CH3)2Ile I 异亮氨酸疏水性131.17 6.05 2.32 9.76 -CH(CH3)-CH2-CH3 Phe F 苯丙氨酸疏水性165.19 5.49 2.20 9.31 -CH2-C6H5Trp W 色氨酸疏水性204.23 5.89 2.46 9.41 -C8NH6Tyr Y 酪氨酸疏水性181.19 5.64 2.20 9.21 10.46 -CH2-C6H4-OH Asp D 天冬氨酸酸性133.10 2.85 1.99 9.90 3.90 -CH2-COOHAsn N 天冬酰胺亲水性 132.12 5.41 2.14 8.72 -CH2-CONH2Glu E 谷氨酸酸性147.13 3.15 2.10 9.47 4.07 -(CH2)2-COOHLys K 赖氨酸碱性146.19 9. 60 2.16 9.06 10.54 -(CH2)4-NH2 Gln Q 谷氨酰胺亲水性 146.15 5.65 2.17 9.13 -(CH2)2-CONH2Met M 甲硫氨酸疏水性 149.21 5.74 2.13 9.28 -(CH2)-S-CH3Ser S 丝氨酸亲水性105.09 5.68 2.19 9.21 -CH2-OHThr T 苏氨酸亲水性119.12 5.60 2.09 9.10 -CH(CH3)-OHCys C 半胱氨酸亲水性121.16 5.05 1.92 10.70 8.37 -CH2-SHPro P 脯氨酸疏水性115.13 6.30 1.95 10.64 -C3H6根据侧链基团的极性1、非极性氨基酸（疏水氨基酸）8种：丙氨酸（Ala）缬氨酸（Val）亮氨酸（Leu）异亮氨酸（Ile）脯氨酸（Pro）苯丙氨酸（Phe）色氨酸（Trp）蛋氨酸（Met）2、极性氨基酸（亲水氨基酸）：1）极性不带电荷：7种：甘氨酸（Gly）丝氨酸（Ser）苏氨酸（Thr）半胱氨酸（Cys）酪氨酸（Tyr）天冬酰胺（Asn）谷氨酰胺（Gln）2）极性带正电荷的氨基酸（碱性氨基酸） 3种：赖氨酸（Lys）精氨酸（Arg）组氨酸（His）3）极性带负电荷的氨基酸（酸性氨基酸） 2种：天冬氨酸（Asp）谷氨酸（Glu）根据氨基酸分子的化学结构1、脂肪族氨基酸：丙、缬、亮、异亮、蛋、天冬、谷、赖、精、甘、丝、苏、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺2、芳香族氨基酸：苯丙氨酸、酪氨酸3、杂环族氨基酸：组氨酸、色氨酸4、杂环亚氨基酸：脯氨酸丙氨酸缬氨酸亮氨酸异亮氨酸甲硫氨酸脯氨酸。
各种酸在水中的解离常数
各种酸在水中的解离常数序号 (No.) 名称(Name) 化学式(Chemical formula) Ka pKa1 偏铝酸HAlO2 ×10-132 亚砷酸H3AsO3 ×10-103 砷酸H3AsO4 ×10-3 (K1)×10-7 (K 2)×10-12 (K3)4 硼酸H3BO3 ×10-10 (K1)×10-13 (K2)×10-14 (K3)5 次溴酸HBrO ×10-96 氢氰酸HCN ×10-107 碳酸H2CO3 ×10-7 (K1)×10-11(K2)8 次氯酸HClO ×10-89 氢氟酸HF ×10-410 锗酸H2GeO3 ×10-9 (K1)×10-13 (K2)11 高碘酸HIO4 ×10-212 亚硝酸HNO2 ×10-413 次磷酸H3PO2 ×10-214 亚磷酸H3PO3 ×10-2 (K1)×10-7 (K2)15 磷酸H3PO4 ×10-3 (K1)×10-8 (K2)×10-13 (K3)16 焦磷酸H4P2O7 ×10-2 (K1)×10-3 (K2)×10-7 (K3)×10-10 (K4)17 氢硫酸H2S ×10-7 (K1)×10-15 (K2)18 亚硫酸H2SO3 ×10-2 (K1)×10-8 (K2)19 硫酸H2SO4 ×103 (K1)×10-2 (K2)20 硫代硫酸H2S2O3 ×10-1 (K1)×10-2 (K2)21 氢硒酸H2Se ×10-4 (K1)×10-11(K2)22 亚硒酸H2SeO3 ×10-3 (K1)×10-7 (K2)23 硒酸H2SeO4 1×103 (K1)×10-2 (K2)24 硅酸H2SiO3 ×10-10 (K1)×10-12 (K2)25 亚碲酸H2TeO3 ×10-3 (K1)×10-8 (K2)序号(No.) 名称(Name) 化学式(Chemical formula) Ka pKa1 甲酸HCOOH ×10-42 乙酸CH3COOH ×10-53 乙醇酸CH2(OH)COOH ×10-44 草酸(COOH)2 ×10-2(K1)×10-5(K2)5 甘氨酸CH2(NH2)COOH ×10-106 一氯乙酸CH2ClCOOH ×10-37 二氯乙酸CHCl2COOH ×10-28 三氯乙酸CCl3COOH ×10-19 丙酸CH3CH2COOH ×10-510 丙烯酸CH2═CHCOOH ×10-511 乳酸(丙醇酸) CH3CHOHCOOH ×10-412 丙二酸HOCOCH2COOH ×10-3(K1)×10-6(K2)13 2-丙炔酸HC≡CCOOH×10-214 甘油酸HOCH2CHOHCOOH ×10-415 丙酮酸CH3COCOOH ×10-316 a-丙胺酸CH3CHNH2COOH ×10-1017 b-丙胺酸CH2NH2CH2COOH ×10-1118 正丁酸CH3(CH2)2COOH ×10-519 异丁酸(CH3)2CHCOOH ×10-520 3-丁烯酸CH2═CHCH2COOH ×10-521 异丁烯酸CH2═C(CH2)COOH ×10-522 反丁烯二酸(富马酸) HOCOCH═CHCOOH ×10-4(K1)×10-5(K2)23 顺丁烯二酸(马来酸) HOCOCH═CHCOOH ×10-2(K1)×10-7(K2)24 酒石酸HOCOCH(OH)CH(OH)COOH ×10-3(K1)×10-5(K2)25 正戊酸CH3(CH2)3COOH ×10-526 异戊酸(CH3)2CHCH2COOH ×10-527 2-戊烯酸CH3CH2CH═CHCOOH ×10-528 3-戊烯酸CH3CH═CHCH2COOH ×10-529 4-戊烯酸CH2═CHCH2CH2COOH ×10-530 戊二酸HOCO(CH2)3COOH ×10-4(K1)×10-7(K2)31 谷氨酸HOCOCH2CH2CH(NH2)COOH ×10-3(K1)×10-5(K2)×10-10 (K3)32 正己酸CH3(CH2)4COOH ×10-533 异己酸(CH3)2CH(CH2)3—COOH ×10-534 (E)-2-己烯酸H(CH2)3CH═CHCOOH ×10-535 (E)-3-己烯酸CH3CH2CH═CHCH2COOH ×10-536 己二酸HOCOCH2CH2CH2CH2COOH ×10-5(K1)×10-6(K2)37 柠檬酸HOCOCH2C(OH)(COOH)CH2COOH ×10-4(K1)×10-5(K2)×10-7(K3)38 苯酚C6H5OH ×10-1039 邻苯二酚(o)C6H4(OH)2 ×10-10×10-1340 间苯二酚(m)C6H4(OH)2 ×10-10(K1)×10-12(K2)41 对苯二酚(p)C6H4(OH)2 ×10-1042 2,4,6-三硝基苯酚2,4,6-(NO2)3C6H2OH ×10-143 葡萄糖酸CH2OH(CHOH)4COOH ×10-444 苯甲酸C6H5COOH ×10-545 水杨酸C6H4(OH)COOH ×10-3(K1)×10-13(K2)46 邻硝基苯甲酸(o)NO2C6H4COOH ×10-347 间硝基苯甲酸(m)NO2C6H4COOH ×10-448 对硝基苯甲酸(p)NO2C6H4COOH ×10-449 邻苯二甲酸(o)C6H4(COOH)2 ×10-3(K1)×10-6(K2)50 间苯二甲酸(m)C6H4(COOH)2 ×10-4(K1)×10-5(K2)51 对苯二甲酸(p)C6H4(COOH)2 ×10-4(K1)×10-5(K2)52 1,3,5-苯三甲酸C6H3(COOH)3 ×10-3(K1)×10-5(K2)×10-6(K3)53 苯基六羧酸C6(COOH)6 ×10-1(K1)×10-3(K2)×10-4(K3)×10-6(K4)×10-7(K5)×10-8(K6)54 癸二酸HOOC(CH2)8COOH ×10-5(K1)×10-6(K2)55 乙二胺四乙酸(EDTA) CH2—N(CH2COOH)2 ∣ CH2—N(CH2COOH)2 ×10-2(K1)×10-3(K2)×10-7(K3)×10-11(K4)。
谷氨酸——精选推荐
⾕氨酸⾕氨酸发酵综述⾕氨酸（glutamic acid）化学式为C5H9O4N，是⼀种酸性氨基酸，化学名称为α-氨基戊⼆酸，是20种常见α-氨基酸之⼀。
⾕氨酸为⽆⾊晶体，结晶状态是稳定的，微溶于⽔但溶于盐酸溶液，密度为1.538（kg/m3），等电点为3.22，⾕氨酸有左旋体，右旋体，和外消旋体。
⾕氨酸的解离常数：pK’1(COOH)为2.19，pK’2(NH3+)为4.25(γ-COOH),pK’3为9.67（NH3+）。
⾕氨酸是⾮必需氨基酸的⼀种，⼤量存在与⾕类中，⾕氨酸有鲜味，⾕氨酸钠是味精的主要成分，⽤于增加⾷物的鲜味。
正⽂：⼀：⾕氨酸发酵在⾕氨酸发酵中，改变细胞膜的通透性，使⾕氨酸不断地排到细胞外⾯，就会⼤量⽣成⾕氨酸。
研究表明，影响细胞膜通透性的主要因素是细胞膜中的磷脂含量。
因此，对⾕氨酸产⽣菌的选育，往往从控制磷脂的合成或使细胞膜受损伤⼊⼿，如⽣物素缺陷型菌种的选育。
⽣物素是不饱和脂肪酸合成过程中所需的⼄酰CoA的辅酶。
⽣物素缺陷型菌种因不能合成⽣物素，从⽽抑制了不饱和脂肪酸的合成。
⽽不饱和脂肪酸是磷脂的组成成分之⼀。
因此，磷脂的合成量也相应减少，这就会导致细胞膜结构不完整，提⾼细胞膜对⾕氨酸的通透性。
1，⾕氨酸发酵是典型的代谢控制发酵，环境条件对⾕氨酸发酵具有重要的影响，控制最适宜的环境条件是提⾼发酵产率的重要条件。
（1）碳源⽬前使⽤的⾕氨酸⽣产菌均不能利⽤淀粉只能利⽤葡萄糖和果糖等。
在⼀定的范围内，⾕氨酸产量随葡萄糖浓度的增加⽽增加，但若葡萄糖浓度过⾼，由于渗透压⼒⼤对菌体⽣长很不利，⾕氨酸对糖的转化率降低。
国内⾕氨酸发酵糖浓度为125—150g/L，但⼀般采⽤流加糖⼯艺。
（2）氮源常见⽆机氮源：尿素，液氮，碳酸氢铵。
常见有机氮源：⽟⽶浆，⾖浓，糖蜜。
当氮源的浓度过低时回事菌体细胞营养过度贫乏，形成“⽣理饥饿”，影响菌体繁殖和代谢，导致产酸率低。
随着⽟⽶浆的浓度增⾼，菌体⼤量增殖使⾕氨酸⾮积累型细胞增多，同时⼜因⽣物素过量是代谢合成磷脂增多，导致细胞膜增厚不利于⾕氨酸的分泌造成⾕氨酸产量下降。
氨基酸序列 相对分子量
氨基酸序列的相对分子量是根据序列中各个氨基酸的分子量进行计算的。
每种氨基酸都有一个特定的分子量，这个值是由该氨基酸的化学结构决定的。
要计算氨基酸序列的相对分子量，你需要将序列中每个氨基酸的分子量加在一起。
例如，考虑一个简单的氨基酸序列“Met-Gly-Glu”（甲硫氨酸-甘氨酸-谷氨酸）。
甲硫氨酸（Met）的分子量约为149.21，甘氨酸（Gly）的分子量约为75.07，谷氨酸（Glu）的分子量约为147.13。
因此，这个氨基酸序列的相对分子量将是149.21 + 75.07 + 147.13 = 371.41。
然而，值得注意的是，在实际的生物学研究中，通常不会直接计算氨基酸序列的相对分子量，而是会关注其他更复杂的属性，如蛋白质的三维结构、功能域、翻译后修饰等。
相对分子量更多地是在化学合成或某些特定的实验条件下才会被重视。
此外，氨基酸序列的相对分子量与蛋白质的相对分子量（通常称为分子量）不同。
蛋白质的分子量是指整个蛋白质分子的质量，而不仅仅是其氨基酸序列的质量。
蛋白质分子量通常通过质谱等实验方法测定，而不是通过计算氨基酸序列的分子量来得出。
发酵过程中谷氨酸含量的测定
发酵过程中谷氨酸含量的测定发酵过程中谷氨酸含量的测定 [适用对象] 生物工程专业 [实验学时] 8学时一、实验目的了解华勃氏呼吸仪的使用方法，熟悉用华勃氏呼吸仪测定谷氨酸含量。
二、实验原理发酵液中谷氨酸含量的测定，普遍使用华勃氏呼吸仪，利用专一性较高的大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶，在一定温度(37?)、一定pH值(4.8,5.0)和固定容积下，使L-谷氨酸脱羧生成二氧化碳。
通过测量反应系统中气体压力的升高，可计算出反应生成的二氧化碳的体积，然后换算成试样中谷氨酸的含量。
三、仪器设备华氏呼吸仪，1毫升移液管，检压管，反应瓶。
四、相关知识点大量形成谷氨酸是生产的目的，目前均采用华勃氏呼吸仪测定法。
一般从发酵12小时开始，每隔2-4小时测定一次。
五、实验步骤(一)检压管及反应瓶的准备将标定完反应瓶常数的检压管及反应瓶磨砂口上的高真空油脂用毛边纸擦试干净，再用棉花用少量二甲苯擦一次，用自来水清洗净后再用稀洗液浸泡约3小时，用自来水洗净，蒸馏水淋洗2次，去水后低温烘干。
在检压管下端按上一干净的短橡皮管，橡皮管末端用玻璃珠塞住。
小心将检压管固定在金属板上，在橡皮管内注入检压液。
打开三通活塞，旋动螺旋压板，检压液应能上升到最高刻度处，液柱必须连续，不能有气泡，两边高度应一致。
(二)发酵液的稀释本法要求试样含谷氨酸0.05,0.15,，否则反应生成二氧化碳太多，压力升高太大以致超过检压管刻度而无法读数。
一般发酵终了发酵液含谷氨酸6,8,，故应稀释50倍:吸取发酵液2mL，注入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀即可。
(三)加液分别吸取上述发酵稀释液1mL，pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液0.2mL和蒸馏水1.0mL，置入反应瓶主室，另吸取0.3mL 2,大肠杆菌谷氨酸脱羧酶液置于反应瓶侧室内，使总体积为2(5mL。
主侧二室瓶口均以活塞脂涂沫，旋紧瓶塞，将反应瓶用小弹簧紧固在检压管上，将检压计装在仪器的恒温水浴振荡上(四)预热将仪器的电源接通，调节水浴温度为37?，打开三通活塞，旋动螺旋压板，调节液面高度达250mm以上，开启振荡;使在37?水浴中平衡约10分钟。
谷氨酸(Glu)检测
谷氨酸（Glu）检测
谷氨酸（Glutamic acid, Glu），又称麸氨酸，是一种酸性氨基酸，分子内含两个羧基。
大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。
谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。
L-谷氨酸主要用于生产味精、香料，以及用作代盐剂、营养增补剂和生化试剂等。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测谷氨酸的含量变化。
此外，我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务，以满足您的不同需求。
HPLC和LC-MS测定谷氨酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 谷氨酸含量信息。
谷氨酸（Glu）含量检测试剂盒说明书（WST 法）
谷氨酸（Glu ）含量检测试剂盒说明书（WST 法）可见分光光度法货号：BC5210规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体70mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体2.5mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶-20℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体12mL×1瓶2-8℃保存标准液液体0.5 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前取1瓶加入18mL 试剂一充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、试剂四：临用前取1支加入1.2 mL 试剂二充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；3、标准品液：10 μmol /mL 谷氨酸标准品。
产品说明：Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。
此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。
谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和NH 4+，在1-mPMS 作用下，WST-1可与NADH 反应，产生水溶性formazan ，计算谷氨酸含量。
Glutamate+NAD 2-Oxoglutrate+NH 4++NADH （450nm ）技术指标：最低检出限：0.009 μmol/mL 线性范围： 0.019-0.3125 μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌、细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次），10000g，常温离心10min，取上清待测。
dl-谷氨酸氢谱,
dl-谷氨酸氢谱,
谷氨酸（Glutamate）是一种氨基酸，其分子式为C₅H₉NO₄，分子量为147.13。
谷氨酸具有两个离子化的羧基，可以失去一个质子成为谷氨酸阴离子（谷氨酸负离子）。
其氢谱可以通过核磁共振（NMR）技术来研究。
根据谷氨酸的分子结构，其氢谱中有许多不同的质子，分别位于不同的化学位移（Chemical Shift）位置。
常见的谷氨酸氢
谱峰包括α-氢（Alpha hydrogen）、β-氢（Beta hydrogen）、
γ-氢（Gamma hydrogen）和酰基羟氢（Acyl hydrogens）等。
谷氨酸的氢谱可以提供谷氨酸分子结构的信息，例如不同质子的化学位移和相对强度可以用来确定谷氨酸的分子结构和连接方式。
同时，氢谱还可以提供谷氨酸的相对含量信息，从而用于定量分析。
需要注意的是，谷氨酸的氢谱可能会受到外界因素的影响，如溶剂效应、温度等。
因此，在进行谷氨酸的氢谱测定时，需要控制好实验条件，以确保结果的准确性和可靠性。
谷氨酸的检测方法
谷氨酸的检测方法
谷氨酸是一种非必需氨基酸，广泛存在于生物体内。
以下是常用的谷氨酸检测方法：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法使用高效液相色谱仪来分离和定量谷氨酸。
样品经过前处理后，通过色谱柱进行分离，然后使用紫外检测器检测谷氨酸的峰面积或峰高度，与标准曲线进行定量分析。
2. 毛细管电泳法（CE）：毛细管电泳是一种高效的分离和测定方法，可以用于谷氨酸的分离和定量。
样品经过前处理后，通过毛细管进行电泳分离，然后使用紫外检测器检测谷氨酸的峰高度或峰面积，与标准曲线进行定量分析。
3. 酶促法：谷氨酸可以通过酶促反应转化为其他物质，然后测定转化物的浓度来间接测定谷氨酸的浓度。
常用的酶促反应包括谷氨酸脱氢酶法、谷氨酸氨基转移酶法等。
4. 免疫测定法：免疫测定法利用特异性抗体与谷氨酸结合，形成抗原-抗体复合物，通过测定复合物的反应强度来定量谷氨酸。
常用的免疫测定法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法等。
这些方法各有优缺点，具体选择哪种方法取决于实验要求、设备条件和样品性质等因素。
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3.谷氨酸得分子量计算
根据已知条件有如下关系：
谷氨酸分子量==g/moL=143.43g/moL
4.结果比较
将作图和结果计算得到的实验结果填入下表，得：
第一化学计量点（V终点）
12．00mL
-----
第二化学计量点（V终点2=V终点1）
24．00mL
-----
0.5V终点
6．00mL
-----
1.5V终点
3.谷氨酸标准溶液（6.9536g/L）
4.pH复合电极一只
5.系列标准缓冲溶液
6.25ml移液管1只
7.100ml玻璃烧杯1只
实验步骤：
1.滴定前准备
按照仪器要求，安装pHS-3CW型酸度计，接上pH复合电极，将酸度计温度调至15℃，再用系列标准溶液将酸度计校正，用蒸馏水冲洗干净pH复合电极后用酸性缓冲液将酸度计定位于4.00。然后再冲洗干净pH复合电极，对谷氨酸标准溶液进行测定。
25.00mL
25.50mL
26.00mL
26.50mL
27.00mL
27.50mL
pH
11.13
11.29
11.46
11.67
11.82
11.96
12.07
表1
实验数据处理：
1.滴定曲线绘制
根据表1结果可绘制如下图形：
纵坐标：pH值横坐标：NaOH体积
通过作图得V终点=12.00 pKa1=pH0.5终点=4.11 pKa2=pH1.5终点=10.09
2.滴定过程中pH测定
取1个洁净干燥100ml玻璃烧杯，用移液管准确移25.00ml谷氨酸标准溶液。将烧杯置于磁力搅拌器上，开动搅拌器，插入pH复合电极，按下pHS-2型酸度计读数按钮，按照下表滴加NaOH标准溶液，读取不同滴定体积时所对应的pH值。
NaOH标准溶液体积读数
0.00mL
0.50mL
1.00mL
pH复合电极由玻璃电极和饱和甘汞电极复合而成，玻璃电极属于以玻璃薄膜作为敏感膜的一类离子选择电极，可对溶液中的氢离子产生选择性响应，其电极电位与被测H+浓度之间符合能斯特关系，可运用于H+浓度或溶液酸度值的测定。
本实验采用pH复合电极，利用酸度计测定溶液酸度值，电池组成如下：
Ag│AgCl（s），内参比溶液│玻璃膜│待测溶液‖KCl（饱和），Hg2Cl2（s）│Hg
3.此次实验，使我们巩固了一些必要的基本操作，我们都一致认为在今后的实验过程中要继续严格操作实验步骤，认真计算。
18．00mL
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谷氨酸分子量计算值（g/L）
144.87
理论值=147.13
谷氨酸pKa1
4.11
谷氨酸pKa1=4.20
谷氨酸pKa2
10.09
谷氨酸pKa2=9.59
表2
实验讨论：
1.本次实验，我们又再次复习了二元弱酸的解离平衡过程，加深了对滴定终点的判定和理论计算；
2.通过实验，我们得到的实验结果和理论值有一点偏差，根据我们小组讨论，怀疑我们在滴定的过程中，取谷氨酸标准溶液时取多了，或者是NaOH用量没有严格控制；
pH
10.03
10.09
10.17
10.23
10.30
10.37
10.43
NaOH标准溶液体积读数
21.00mL
21.50mL
22.00mL
22.50mL
23.00mL
23.50mL
24.00mL
pH
10.50
10.58
10.65
10.74
10.83
10.89
11.00
NaOH标准溶液体积读数
24.50mL
9.30
NaOH标准溶液体积读数
14.00mL
14.50mL
15.00mL
15.50mL
16.00mL
16.50mL
17.00mL
pH
9.44
9.56
9.68
9.ห้องสมุดไป่ตู้5
9.81
9.88
9.96
NaOH标准溶液体积读数
17.50mL
18.00mL
18.50mL
19.00mL
19.50mL
20.00mL
20.50mL
1.50mL
2.00mL
2.5mL
3.00mL
pH
3.00
3.12
3,24
3.35
3.46
3.55
3.46
NaOH标准溶液体积读数
3.50mL
4.00mL
4.50mL
5.00mL
5.50mL
6.00mL
6.50mL
pH
3.73
3.81
3.89
3.96
4.04
4.11
4.18
NaOH标准溶液体积读数
7.00mL
在构成的电池中，饱和甘汞电极的电极电位保持不变，玻璃电极的电极电位（电池电动势）仅随着待测溶液中的氢离子浓度变化而变化，可表示如下：
E=K+lg[H+]=K-pH
谷氨酸是分子内含两个羧基的二元酸，其第二解离常数很小，因此采用一般滴定分析不容易观察到滴定突跃。在谷氨酸与NaOH溶液的滴定过程中，随着NaOH的不断加入，溶液中的H+浓度不断变化，由此引起溶液的酸度值（电机电动势）也不断变化，达到滴定化学计量点附近时，将产生H+浓度的突跃，从而可以根据溶液的酸度值变化确定第一化学计量点，以此为依据，可推算谷氨酸与NaOH溶液滴定的第二化学计量点（V终点2=2V终点1），并可根据反应摩尔比求出谷氨酸分子量。谷氨酸在水溶液中的离解平衡：
H2A=HA-+H+Ka1==6.31×10-5…………①
HA-=A2-+H+K= =2.57×10-10
从中可以看出，当滴定进行到化学计量点的一半（即0.5V终点）时，溶液中[H2A]=[HA-]，代入①，则Ka1=[H+]，即pKa1=pH
实验仪器与试剂：
1.pHS-3CW型酸度计
2.NaOH标准溶液（0.1000mol/L）
7.50mL
8.00mL
8.50mL
9.00mL
9.50mL
10.00mL
pH
4.26
4.35
4.43
4.53
4.64
4.75
4.89
NaOH标准溶液体积读数
10.50mL
11.00mL
11.50mL
12.00mL
12.50mL
13.00
13.50mL
pH
5.06
5.28
5.78
8.06
8.75
9.07
实验报告：谷氨酸分子量及解离常数测定
实验者：XXX实验合作者：XXX
日期：2012-3-6
实验目的：
1掌握酸碱滴定管的基本操作要求；
2掌握移液管的正确使用方法；
3掌握标准缓冲溶液在测定溶液酸度上的运用；
4掌握电位滴定曲线的绘制及滴定终点的确定方法；
5掌握电位滴定在测定物质物理常数上的运用。
实验原理：