生物学基本实验技术
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2021-04-23 11:01:29)转载▼标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术根本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学根本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的根本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其根本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下〔适宜的温室度及离子强度等〕可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针〔probe〕,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的DNA或RNA片段。
根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。
固相杂交固相杂交〔solid-phase hybridization〕是将变性的DNA固定于固体基质〔硝酸纤维素膜或尼龙滤膜〕上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。
斑步杂交〔dot hybridization〕是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后参加过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。
该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永别离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。
该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。
印迹杂交〔blotting hybridization〕Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反响，用放射性自显影或酶反响显色，检测特定大小分子的含量。
植物分子生物学的研究对象和实验技术
植物分子生物学的研究对象和实验技术植物分子生物学是研究植物基因、基因表达、基因调控等方面的科学，它通过分析和解析植物基因组的结构和功能来揭示植物的生物学过程。
随着科学技术的不断发展，研究植物分子生物学的方法和实验技术也在不断更新。
本文将介绍植物分子生物学的研究对象以及一些常用的实验技术。
一、植物分子生物学的研究对象植物分子生物学主要研究的对象包括植物的基因组、基因、DNA、RNA和蛋白质等分子。
通过对这些分子的结构、功能和相互作用进行研究，可以深入了解植物的遗传特征和生物学过程。
1. 植物基因组植物基因组是指植物所有基因的集合，是植物分子生物学研究的起点和基础。
通过分析植物基因组的大小、组成、结构和功能，可以了解植物基因的数量和特征，进而揭示植物的基因组结构、进化和调控机制。
2. 植物基因植物基因是指能够编码蛋白质或功能RNA的DNA序列。
通过对植物基因的研究，可以了解植物的遗传特征、基因功能和调控机制。
此外，植物基因的突变和表达的变化还可以揭示植物的亲缘关系和适应环境的方式。
3. 植物DNA和RNA植物DNA是植物细胞中存储遗传信息的分子，植物RNA则是基因转录和表达的产物。
通过对植物DNA和RNA的序列、结构和功能的研究，可以了解植物基因的表达和调控机制，揭示基因转录、剪接、翻译等过程，以及植物的遗传变异和表型差异。
4. 植物蛋白质植物蛋白质是植物细胞中具有功能的分子，参与调控生物学过程。
通过研究植物蛋白质的结构、功能和相互作用，可以了解植物的代谢途径、信号传导和生物学功能。
二、植物分子生物学的实验技术为了研究植物分子生物学，科学家们利用多种实验技术进行研究。
下面将介绍几种常用的实验技术。
1. PCR（聚合酶链式反应）PCR是分子生物学中最常用的技术之一，它能够通过扩增DNA序列来获取足够的DNA样本进行后续实验。
在研究植物分子生物学中，PCR被广泛应用于基因克隆、基因组测序、基因表达分析以及遗传标记等方面。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
分子生物学实验基本技术训练
型 号：cheni genins 制造商：SYNGENE
（英国）
未污染
离心技术
（高速冷冻离心机）
➢离心机工作规则：
1、检查离心管是否完好，不要使用有裂缝的离心管。 即使极小的裂缝也会在离心力作用下破裂。
2、每次使用前都要检查转子中是否有别人遗留的离心 管。转子中遗留的离心管可能导致离心机不平衡。
分子生物学实验 基本技术训练
➢PCR技术 ➢电泳技术 ➢离心技术 ➢微量移液技术 ➢无菌操作技术 ➢实验记录与实验报告的书写
PCR技术
（多聚酶链式反应）
PCR是采用分子技术模拟核酸在体内的复 制，实现DNA体外扩增，以获得大量DNA片 段供研究需要。
反应过程：
❖ 94℃ 4min ❖ 94℃ 30S ❖ 50℃ 30S ❖ 72℃ 60S ❖ 72℃ 10min ❖ 4℃ 保存 ❖ End
型 号：MiniSpin 制造商：Eppendorf
（德国）
型 号：3-18K 制造商：SIGMA
（德国）
微量移液技术
➢量液操作注意问题：
（1）不能移取量程以外体积的液体，否则会损坏移液 器。
（2）吸取液体时，先推至第一档在吸取；释放液体时 ，在第一档停顿1-2s后推至终点。
（3）吸取液体时不能太快。如果不小心将液体吸入吸 液杆应报告指导老师，经清洗后方可再用。
30个循环
型 号：PTC-100 制造商：MJ Research
(美国)
电泳技术
（琼脂糖电泳）
分类：
琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 醋酸纤维膜电泳 ……
常用
➢琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶的异同
聚合方式 电泳方式
毒性 适用对象 操作要求
常见分子生物学实验方法 ppt课件
反转录合成cDNA
在冰上加入：
组成
体积
溶液A（随机引物RP）
1ul
溶液B（dNTPs)
1ul
溶液D(5*RT buffer)
4ul
溶液E（含逆转录酶、RNA酶抑制剂）1ul
1-5ug Total RNA
6ul
溶液G
7ul
1、混匀，42℃，60min;
2、95 ℃，5min，终止反应。
PCR扩增
取1支0.2ml的PCR管，在冰上加入：
如 EcoRI 识别序列:
5’ GAATTC 3’ 3’ CTTAAG 5’
限制性内切酶的特点 1. 高度特异性 2. 商业化生产 3. 反应需要Mg2+ 4. 不同的内切酶可能产生相同的末端
影响核酸限制性内切酶活性的因素
❖（1）DNA 纯度 ❖ （2）DNA甲基化的程度 ❖ （3）酶切消化反应温度 ❖ （4）DNA的分子结构 ❖ （5）限制性内切酶的缓冲液
影响连接效率的因素
A ATP 浓度 B 连接酶浓度 C 反应时间 D insert和vector的比值（载体DNA和外源DNA的分子数 比（浓度比）为1：3～1：10） E 连接温度 其中连接温度是影响连接效率的最重要的因素。
重组载体的转化
感受态细胞 (Competent cells): 经过 CaCl溶液处理的E. coli
❖ 选择载体 ❖ 获得目的基因 ❖ 目的基因与载体的重组 ❖ 重组载体的转化 ❖ 重组子的筛选与鉴定
重组质粒构建的简单流程
基因组DNA,PCR产物, cDNA (插入子)
质粒DNA (载体)
限制性酶切 (修饰 DNA 末端)
连接载体与插入片段
转化 (将重组质粒导入宿主细胞)
分子生物学的原理和实验技术
分子生物学自20世纪50年代以来经历 了飞速的发展，包括DNA双螺旋结构 的发现、基因工程的诞生、人类基因 组计划的完成等重大里程碑事件。
研究对象与内容
研究对象
分子生物学主要研究生物体内的 核酸（DNA和RNA）和蛋白质等 大分子物质。
研究内容
包括基因的结构与功能、基因表 达的调控、DNA复制与修复、 RNA的转录后加工与调控、蛋白 质的合成与功能等。
蛋白质定量与检测
利用BCA法、Bradford法等方法对蛋白质进行定量，并通过 Western blot等技术检测特定蛋白质的表达。
蛋白质相互作用研究
利用免疫共沉淀（Co-IP）、酵母双杂交等技术研究蛋白质之间的 相互作用。
细胞培养与转染技术
细胞培养
在人工环境下培养细胞，提供适 宜的营养物质和生长条件，维持
随着大数据时代的到来，生物信息学分析方法在分子生物学研究中的地位愈发重要。未 来需要发展更加高效、准确的算法和工具，以应对不断增长的数据分析需求。
THANKS
感谢观看
细胞的生长和增殖。
细胞转染
将外源DNA或RNA导入真核细 胞中，实现基因的表达或调控。 常用的转染方法包括脂质体转染
、电穿孔转染等。
细胞筛选与鉴定
利用选择性培养基、抗体筛选等 方法对转染后的细胞进行筛选和 鉴定，获得具有特定表型的细胞
株。
04
分子生物学在医学领域应用
基因诊断原理与方法
基因诊断原理
蛋白质合成与功能
转录与翻译
01
DNA中的遗传信息通过转录生成RNA，再经过翻译合成蛋白质
。
蛋白质的结构与功能
02
蛋白质的结构决定其功能，包括催化、运输、免疫等。
高中《生物学》实验类归纳
六、实验过程中常用试剂的作用、检测指标的设置及实验条件的调控1．化学物质的常用检测试剂或方法（1）淀粉——一碘液（2）还原糖一—一斐林试剂或班氏试剂（沸水浴，砖红色沉淀）（3）CO2一一—Ca（OH）2溶液或酸碱指示剂（4）乳酸一一—pH试纸（5）O2—一—带火星木条复燃（6）无O2—一—火焰熄火（7）蛋白质—一—双缩脲试剂（不加热，紫色反应）（8）染色体—一—龙胆紫溶液、醋酸洋红液（9）DNA—一—二苯胺试剂（沸水浴，蓝色反应）（10）脂肪一一一苏丹Ⅲ染液（橘黄色）或苏丹Ⅳ染液（红色）2．实验结果的显示方法（1）光合速率一—一O2释放量或C O2吸收量或淀粉产生量（2）呼吸速率一—一O2吸收量或C O2释放量或淀粉减少量（3）物质代谢途径———放射性同位素示踪法（4）细胞液浓度大小———质壁分离（5）细胞是否死亡———质壁分离、细胞质流动（6）甲状腺激素的作用———动物耗氧量，发育速度等（7）生长激素的作用———生长速度（体重变化．身高变化）（8）胰岛素的作用一一—动物活动状态（9）菌量———菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度（10）大肠杆菌———伊红一一美蓝琼脂培养基（鉴别培养基）3．实验条件的控制方法（1）增加水中氧气———泵人空气或吹气或放人绿色植物（2）减少水中氧气———容器密封或油膜覆盖或用凉开水（3）除去容器中的C O2———NaOH溶液（4）除去叶片中原有淀粉———置于黑暗环境中（饥饿处理）（5）除去叶片中叶绿素———酒精加热（6）除去光合作用对细胞呼吸的于扰———给植株遮光（7）得到单色光———棱镜色散或彩色薄膜滤光（8）血液抗凝———加入柠檬酸钠（9）线粒体提取———细胞匀浆离心（10）细胞膜提取———清水处理哺乳动物红细胞（11）骨的脱钙———盐酸溶液浸泡（12）灭菌方法———培养基用高压蒸气灭菌：接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75％酒精消毒；实验室或接种箱用甲醛蒸汽或紫外灯灭菌；整个接种过程都在实验室无菌区或酒精灯火焰旁进行。
现代分子生物学技术及实验技巧
现代分子生物学技术及实验技巧1 自由基技术自由基技术是分子生物学中的一种技术，它能够探测分子物质中的自由基浓度以及自由基的反应，从而深入研究分子物质的性质。
自由基技术采用的是自由基信号分子，通过对其进行观察或者对其进行探测和量化，可以了解分子物质的反应过程和分子物质中自由基的浓度。
2 聚合酶链式反应技术聚合酶链式反应技术是一种分子生物学技术，是一种能够进行DNA 复制的技术。
聚合酶链式反应技术可以迅速扩增DNA片段，因此被广泛应用于DNA检验、生物工程、基因工程等领域。
聚合酶链式反应技术的原理是，在适当的酶和DNA单链片段存在的条件下，通过反复进行变性、退火和扩增等步骤，将DNA片段快速扩增至数量足够进行检验。
3 基因编辑技术基因编辑技术是一种通过人工干预改变生物个体基因组序列的技术。
基因编辑技术主要应用于基因治疗、育种、制药等领域，能够快速地对基因组进行编辑，从而改变生物的基因表达及特性。
现如今，基因编辑已经成为研究生命科学、探求生命本质的一项重要技术手段。
4 蛋白结晶技术蛋白结晶技术是一项关键提取遗传工程、药物研发和生物晶体学所需的蛋白质结晶技术，是在分子生物学中应用广泛的一种实验技术。
它可用于发现新药物、解决蛋白质功能、交互和酶学机制等多方面的问题，从而促进分子生物学、药学、生物技术、医药化学等领域的发展。
蛋白结晶技术的发展，对于建立高清晰度的蛋白质立体结构图库至关重要，对于发现生命科学的秘密有重要的作用。
5 特异性溶解曲线PCR技术特异性溶解曲线PCR技术是一种在PCR扩增反应中，通过检测DNA 的特征溶解温度来区分目标DNA和异质DNA的技术。
该技术结合了不需要胶回的扩增、高诊断准确性和高速度等优点，极大地提高了实验效率。
特异性溶解曲线PCR技术的应用使DNA的扩增和监测更加精确、简单和操作高效，可以广泛地应用于生命科学研究、临床试验等领域。
生物化学与分子生物学实验技术
生物化学与分子生物学实验技术生物化学与分子生物学实验技术是现代生命科学中不可或缺的一部分。
随着科技的不断发展和生物学研究的深入，生物化学与分子生物学实验技术也不断更新和发展。
在这篇文章中，我们将分步骤介绍一些常见的生物化学与分子生物学实验技术，并探讨它们在研究中的意义。
一、DNA/RNA提取技术DNA/RNA提取技术是生物化学和分子生物学领域中最基础的实验之一。
主要用于分离和纯化DNA或RNA分子，从而进行下一步的生物学或分子生物学研究。
常用的提取方法有酚/氯仿浸提法、离心柱法等。
其中，酚/氯仿浸提法是最传统的技术，通过一系列的浸提、离心、洗涤和溶解步骤，最终得到DNA或RNA样品。
离心柱法则是一种更快捷、更方便的方法，通过离心柱的吸附剂将DNA或RNA样品捕捉下来，避免了复杂的萃取过程。
二、PCR技术PCR技术是当前分子生物学中最重要的实验技术之一。
PCR全称为“聚合酶链式反应”，是一种用于体外扩增DNA序列的方法。
PCR技术不仅可以扩增任意DNA序列，而且还可以扩增极少量的模板DNA，是分子生物学诸多实验中不可或缺的步骤之一。
PCR技术的原理是：在加入模板DNA、引物、聚合酶和缓冲液的情况下，通过温度的周期性变化，使反应液的DNA序列不断的复制出来，形成大量的DNA片段。
这些片段可以用于多种研究，如序列分析、基因突变分析等。
三、蛋白质电泳分离技术蛋白质电泳分离技术是分析蛋白质的工具之一。
该技术是利用蛋白胶的特性，将蛋白质分子进行分离。
它主要分为两种：SDS-PAGE和Native PAGE。
其中，SDS-PAGE是将蛋白质分子加入SDS缓冲液（浓度达到2%），使蛋白质负电荷，从而使蛋白质按照分子量大小进行迁移。
Native PAGE则是使用非变性缓冲液，不改变蛋白质的构象状态。
与SDS-PAGE不同的是，Native PAGE是按照蛋白质的电荷和形状特性进行分离的。
四、蛋白质免疫印迹技术蛋白质免疫印迹技术是一种用于检测蛋白质表达、定量和亚细胞定位的方法。
分子生物学实验基本技术
分子生物学实验进程
实验一 真核细胞染色体DNA的分离制备 DNA样品的纯化、定量和电泳检测 实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒转化 实验三 碱变性法小量制备质粒 DNA的限制性酶切 实验四 琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收 质粒DNA的连接和转化 实验五 真核细胞RNA的制备和逆转录PCR 实验六 Western印迹（上） 实验七 Western印迹（下） 实验八 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测 实验九 多聚酶链式反应（PCR）反应 实验十 Northern印迹 实验十一 Southern印迹 考试
1966
1972 1973 1973 1977 1977 1982 1986 2001
Finished unraveling the code; Nirenberg & Khorana
Recombinant DNA made in vitro; P. Berg DNA cloned on a plasmid; H. Boyer & S. Cohen Discovery of reverse transcriptase; H. Temin Rapid DNA sequencing; F. Sanger & W. Gilbert Discovery of split genes; Sharp, Roberts et al. Discovery of ribozymes; T. Cech & S. Altman Creation of PCR; K. Mullis et al. Human Genome Project; Venter, Collins and many others
段连接起来构成一个新的DNA分子的过程。
分子克隆（molecular cloning）：重组体分子的无性 繁殖过程。
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2010级3班 [键入文字] 1 / 23 生物学实验技术
玻璃仪器的洗涤方法很多，有机械法、化学法、物理化学法、超声波法、蒸气法等，以及这些方法之间的交替使用或结合使用。
化学试剂的品级规格 一、国产化学药品： 1、一级品：保证试剂或优级纯，标签色为绿色。试剂杂质含量最低，纯度最高，适用于精确分析及研究工作，常用来配制标准液。 2、二级品—分析纯，标签为红色。试剂纯度很高，仅次于“一级品”，适用于精确分析及研究用，有时也可用来配制标准液。 3、三级品—纯，标签为蓝色，适用于一般分析和定性试验 4、四级品—化学用，标签为蓝色，纯度低，比工业用高，只适用于一般定性检验。 国产试剂的规格及质量等级 分析纯(AR)---相当二级品 化学纯(CP)---相当于三级品 实验试剂(LR)--相当于四级品 二、英美各国的试剂规格 等级 规格符号 相当于国产规格 AR,GR,ACS,PA 一级品 CP,PUSS,LAB 二级品 LR,EP, 三级品 Pure 四级品 三、特殊规格的试剂 BR-----生物试剂，BS------生物染色素，IND----指示剂，按用途基本相同分类，不分规格等级。 FCP----层析，MAR----微量分析试剂，FMP----显微镜用，RS 、 CGS------特殊试剂，GC----气体层析，TLC-----薄层层析等。 此外有的化学试剂还有各种同分异构体如D--或L--，(-)及(+)代表实际测得的旋光方向。
试剂的配制方法
一、直接配制法 可分为以下两类 标准溶液 配制标准溶液的物质必须具备下列条件 易于制纯和烘干，试剂应符合于GR或AR品级。 易于保存，制备后的溶液浓度可长久不变。 使用中能符合反应方程式所表示的结果进行，不得有副反应产生。 2、 配制标准溶液: 上述纯品进行恒重以后，直接称取一定重量溶解在定量试剂中。 直接法配制标准溶液时，注意事项： (1)称重时根据需要，用1/1000或1/10000的天平称重。注 2010级3班 [键入文字] 2 / 23 (2)用一等容量瓶，玻璃仪器洁净干燥。 (3)溶剂应十分纯净。注 (4)凡是用有机物作标准溶液者，配好以后要加防腐剂或用防腐剂作标准溶液 (5)配制好的标准溶液，若需转移到其它容器中存放，则此容器必须是干燥过或经此标准溶液多次漱洗过的。 (6)多种标准溶液常配成浓的贮存液保存，以减少误差。 (二)一般溶液 凡不是标准溶液，但又不要求严格控制浓度条件的试剂，可直接配制： 一般以试剂瓶签上所注明的化学式作为计算组成量的依据，按照所要求的浓度进行配制。所用的天平可根据要求用粗天平或分析天平。可用二等品容量瓶。 二、间接配制法 有些不易恒重的固体试剂和含量不准的液体试剂，在配成浓度准确的标准溶液时，常采用间接配制法：即先配成大约 浓度的溶液(粗配)，再以标准溶液标定出准确浓度(精配)。 试剂应用一级品或二级品，选择合适的标定方法(中和法、沉淀法、络合物生成法、氧化还原法等)、标定物、指示剂。
常用试剂浓度表示法
一、常用试剂浓度表示法 1、比例浓度: 以溶质的重量或体积与溶液的体积比来表示的浓度。如:KI(1:5)指1gKI加水溶成5ml的溶液；HCI(1:1)指1体积的浓HCI与1体积的水配成的溶液。 2、百分比浓度: 质量/体积百分比浓度(g/ml , W/V),指100ml溶液中所含溶质的g数。如0.9％NaCI是指100ml溶液中含有0.9gNaCI。 质量百分比浓度(W/W)指100g溶液中所含溶质的g数。如98％的H2SO4是指在100gH2SO4中含有纯H2SO498g。也叫质量百分比浓度 体积百分比(ml/ml, V/V)是指100ml溶液中含 溶质的ml数。 3、摩尔浓度: 是指1000ml溶液中所含溶质的摩尔数。用符号mol表示。如1MNaOH是将40gNaOH溶于水定容至1000ml。 摩尔浓度（mol）=溶质摩尔数/溶液体积（升） 用固体试剂配制： 所需溶质的质量=摩尔浓度×体积× 摩尔质量 用液体试剂配制： 所需质量=MV1m/p或所需体积=MV1m/pd V1—配制溶液体积 m —溶质的摩尔质量 P—液体试剂的质量百分比浓度 d —液体试剂的比重 4、当量浓度：用1000ml溶液中所含 溶质的克当量数来表示的浓度称之为当量浓度，以N表示。 当量浓度=溶质的克当量数/溶液体积（升） 某酸的当量=某酸的分子量/某酸分子中可被金属置换的氢原子数 某碱的当量=某碱的分子量/某碱分子中所含的OH根数. 某盐的当量=某盐的分子量/某盐分子中金属原子数和金属价数之积 用固体试剂配:所需试剂质量=NVE N—当量浓度 V—溶液体积 E—溶质的克当量=分子量/n 2010级3班 [键入文字] 3 / 23 用液体试剂配V=NV1E/pd 5. ppm和ppb Ppm是指一百万份质量(或体积)的溶液中含有一份质量(或体积)的溶质，即10-6。 如配制20ppm的赤霉素1000ml，一般称取20mg，先用酒精溶解，再加水稀释至1000ml Ppb是指十亿分率,即10-9。 1ppm=1000ppb 二、溶液浓度的换算 摩尔浓度=1000×比重×质量百分比浓度/溶质的摩尔质量 当量浓度=1000 ×比重×质量百分比浓度/溶质的克当量 当量浓度=摩尔浓度×溶质分子中参与反应的正价(或负价)总数 质量百分浓度=当量浓度×溶质的克当量/1000 ×比重 质量百分浓度=质量/体积浓度（毫克/升）/104 ×比重 质量/体积浓度（mg/L）=104质量百分浓度
第三章 生物制片技术 【教学目标和基本要求】 掌握常用固定剂、染色剂等药品的效能及使用方法，掌握石蜡切片法各步骤的操作方法和注意事项；了解生物制片技术的主要种类，学会常见的切片法和非切片法制片技术。 【教学内容及学时分配】（6课时） 第一节 制片技术的概念及分类 第二节 石蜡切片法制片技术 第三节 植物材料的非切片制片方法 第四节 动物材料非切片制片方法 【重点与难点】 常用的固定剂、脱水剂、染色剂及其优缺点，石蜡切片法的技术流程 【教学内容的深化与拓宽】 石蜡切片法是研究动植物体结构的常用方法，在介绍该方法同时给学生介绍一些科研实例，可使学生增强实验设计和操作能力，为以后的研究工作打下基础。 【教学方式及教学过程中应注意的问题】 本章内容课堂讲授与实验教学相结合。以多媒体教学为主要教学手段， 【主要参考书目及网络资源】 《生物实验与实用技术》，赵树舜 杜在祥 主编，济南: 山东大学出版社，2005。 《现代细胞生物学技术》，徐承水 党本元 主编，青岛:青岛海洋大学出版社，1995。 【思考题】 1.分别用石蜡切片法和徒手切片法设计实验过程研究某种阳性树种叶的结构。 2.理想的固定剂应具有哪些条件？ 2010级3班 [键入文字] 4 / 23 【课时单元授课教案】 【教学内容】 第一节 制片技术的概念及分类
一、概念: 生物制片技术是动物学、植物学、组织胚胎学、病理解剖学等生物科学及医学科学研究观察组织细胞的生理、病理形态变化的一种重要方法。 二 、分类：生物制片法可分 为切片法和非切片法两种类型。 切片法就是将新鲜的材料经过特殊的处理，用刀切成薄片的过程。 主要有徒手、石蜡、冰冻、火棉胶切片法等。其基本过程大 致如下： 固定→冲洗 →脱水 →透明 →包埋 →切 片 →染色 →分化 →封片。 非切片法是用物理或化学的 方法，将生物体 组织分离成单全细胞或薄片，或将整个生物体进行封藏。 常用的非切 片法有整体装片法、压片法、滴片法、解离法、伸展法等。
第二节 石蜡切片法制片技术
一、取材：新鲜、材料、大小、部位因观察的对象不同而有所差异。 二、固定：将所要观察的新鲜材料立即投入固定剂内，借助化学药品的作用，使细胞组织的形态结构保存起来，不使其改变形态和内部物质的一种方法。 固定的作用主要是防止组织溶解和腐败凝固沉淀细胞内的物质同时又使组织硬化，增加组织硬度，使组织不易变形，有利于以后的处理。 （一）一种理想固定剂必需具备以下几个条件 1、迅速渗入组织，杀死原生质，固定其微细结构。 2、使细胞不至于因固定引起人为的改变。 3、凝固原生质后，增加细胞对各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定了的原生质变形。 4、不会改变原生质的体积。 5、增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 6、具有媒染作用和增加染色能力。 7、使组织变硬，适于切片，但又不至于使 材料太坚硬而松脆。 8、固定以后，又能有保存的作用。 （二）固定过程中的一些要求 1、充足：固定液一般为材料块的20--30倍，有些水分过 多的材料，中间还要更换1--2次新液。 2、时间：视材料的种类、性质、大小以及固定剂的种类，性质、渗透力的强弱而定。 3、 PH值：PH值较大的固定液，可增强染色能力。许多酸性固定液可溶解核质 和线粒体，但能保存染色体、核仁和 纺缍丝；而一些碱性固定液 能溶解某些材料的染色质和纺缍丝，但核仁、线 粒体可被保存。固定剂应以所观察的内容和染色剂而定。 （三）固定液的类型 单一固定液： 1、乙醇：组织保存剂，制片时的 固定剂。50%以上的乙醇都有固定作用。 酒精固定的特点是杀死快,渗透力强，可使材料变硬。用纯酒精固定时间不宜太长，否则会