细胞组分的分离和鉴定PPT讲稿
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细胞器的分离、纯化实验ppt课件
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实验方法
玉米黄化幼苗线粒体的分别〔整个过程坚持在0-4℃ 〕
1.将玉米黄化幼苗剪下，称重每小组约5g，在冰箱中 放置1小时
2.将幼苗剪碎直接倒入研钵中以1:3(分量体积比g:ml) 比例参与离心匀浆介质，快速研磨，留意先参与少 许介质液，研碎后将余液参与
3.用双层尼龙网过滤，除去残渣。 4.取滤液在低温高速离心机伤2300rpm离心10min弃
该法的优点是：①分别效果好，可一次获得较纯颗 粒；②顺应范围广，既能分别具有沉淀系数差的颗 粒，又能分别有一定浮力密度的颗粒；③颗粒不会 积压变形，能坚持颗粒活性，并防止已构成的区带 由于对流而引起混合。
缺陷：① 离心时间较长；②需求制备梯度；③操 作严厉，不宜掌握。
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半径
方法： 两点一 线法
4. 试剂：
5.
① 线粒体离心匀浆介质。
6.
② 1%詹纳斯绿B的0.25M蔗糖溶液。
7.
③ 0.05M Tris-HCl液体 Ph=8.0
8.
④ 0.35mol/L NaCl
匀浆介质，普通为一定浓度的蔗糖溶液参与其它
9离. 子成分，可以维持亚细胞组分的浸透压。
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概述
离心机
！
制备性
分析性
普通离心机
细胞器的分别、纯化 — 细胞分级分别法
—秦川
实验目的
实验原理
实验用品
实验方法
运用范围： 1.病毒及亚细胞 组份分别 2.蛋白梯度分别 3.脂蛋白分别 4.RNA梯度沉淀 5.质粒DNA提纯
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实验目的
• 认识离心机及学习离心机的运用方法 • 学习细胞器的分别及纯化的普通原理和
方法
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实验方法
玉米黄化幼苗线粒体的分别〔整个过程坚持在0-4℃ 〕
1.将玉米黄化幼苗剪下，称重每小组约5g，在冰箱中 放置1小时
2.将幼苗剪碎直接倒入研钵中以1:3(分量体积比g:ml) 比例参与离心匀浆介质，快速研磨，留意先参与少 许介质液，研碎后将余液参与
3.用双层尼龙网过滤，除去残渣。 4.取滤液在低温高速离心机伤2300rpm离心10min弃
该法的优点是：①分别效果好，可一次获得较纯颗 粒；②顺应范围广，既能分别具有沉淀系数差的颗 粒，又能分别有一定浮力密度的颗粒；③颗粒不会 积压变形，能坚持颗粒活性，并防止已构成的区带 由于对流而引起混合。
缺陷：① 离心时间较长；②需求制备梯度；③操 作严厉，不宜掌握。
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半径
方法： 两点一 线法
4. 试剂：
5.
① 线粒体离心匀浆介质。
6.
② 1%詹纳斯绿B的0.25M蔗糖溶液。
7.
③ 0.05M Tris-HCl液体 Ph=8.0
8.
④ 0.35mol/L NaCl
匀浆介质，普通为一定浓度的蔗糖溶液参与其它
9离. 子成分，可以维持亚细胞组分的浸透压。
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概述
离心机
！
制备性
分析性
普通离心机
细胞器的分别、纯化 — 细胞分级分别法
—秦川
实验目的
实验原理
实验用品
实验方法
运用范围： 1.病毒及亚细胞 组份分别 2.蛋白梯度分别 3.脂蛋白分别 4.RNA梯度沉淀 5.质粒DNA提纯
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实验目的
• 认识离心机及学习离心机的运用方法 • 学习细胞器的分别及纯化的普通原理和
方法
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细胞器的分级分离ppt课件
• 2．简述细胞器分级分离的实验原理和主要步 骤？
• 3．实验操作中有哪些关键步骤和因素影响所得 细胞器的含量和纯度？
(4)线粒体的分离
将分离细胞核时收集的上清以10000 g 离心10 min，将上清移入1.5 ml Ep管内并置冰上或4℃冰箱 待用。沉淀用0.25 mol/L的蔗糖溶液重悬后， 10000 g离心10 min，重复1次，取沉淀。
(2)线粒体的鉴定
于洁净载玻片上滴1滴0.02％～1％的詹纳斯 绿B染液，用牙签挑取线粒体沉淀均匀涂于染液中， 染色5～10 min，盖上盖玻片，镜检。
密度梯度离心法（density gradient centrifugation） 是一定介质形成一连续或不连续的密度梯度，顶部的 细胞匀浆在重力或离心力场的作用下分层、分离。
一般先通过差速离心法将细胞器初步分离，再进 一步通过密度梯度离心法分离纯化细胞器。
细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级 分离和分析三个步骤完成。
细胞器的分级分离
[目的要求]
• 1．掌握差速离心法和密度梯度离心法的原理。 • 2．熟悉哺乳动物细胞的细胞核、线粒体分离和
纯化的实验方法。
[实验原理]
球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质 黏度和离心力。
差速离心法（differential centrifugation）是将细 胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大 颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心沉淀上清液 中的小颗粒物质，从而达到逐级分离细胞器的目的。
[实验步骤]
1．组织匀浆制备
（1）取材 将空腹12～24 h的大鼠处死。剖开腹部， 迅速取出肝脏，用预冷的生理盐水洗净血污，用 滤纸吸干。
（2）制备匀浆 称取约1～2 g左右的肝组织，用预冷 的0.25 mol/L的蔗糖溶液冲洗数次，剪碎。以预 冷的0.25 mol/L的蔗糖溶液悬浮剪碎的组织，移 入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆。匀浆完成后， 用滤网过滤，即制得肝细胞匀浆，备用。
• 3．实验操作中有哪些关键步骤和因素影响所得 细胞器的含量和纯度？
(4)线粒体的分离
将分离细胞核时收集的上清以10000 g 离心10 min，将上清移入1.5 ml Ep管内并置冰上或4℃冰箱 待用。沉淀用0.25 mol/L的蔗糖溶液重悬后， 10000 g离心10 min，重复1次，取沉淀。
(2)线粒体的鉴定
于洁净载玻片上滴1滴0.02％～1％的詹纳斯 绿B染液，用牙签挑取线粒体沉淀均匀涂于染液中， 染色5～10 min，盖上盖玻片，镜检。
密度梯度离心法（density gradient centrifugation） 是一定介质形成一连续或不连续的密度梯度，顶部的 细胞匀浆在重力或离心力场的作用下分层、分离。
一般先通过差速离心法将细胞器初步分离，再进 一步通过密度梯度离心法分离纯化细胞器。
细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级 分离和分析三个步骤完成。
细胞器的分级分离
[目的要求]
• 1．掌握差速离心法和密度梯度离心法的原理。 • 2．熟悉哺乳动物细胞的细胞核、线粒体分离和
纯化的实验方法。
[实验原理]
球形颗粒的沉降速率取决于其密度、半径、介质 黏度和离心力。
差速离心法（differential centrifugation）是将细 胞匀浆在密度均一的介质中从低速到高速离心，较大 颗粒先在低速离心时沉淀，再用高速离心沉淀上清液 中的小颗粒物质，从而达到逐级分离细胞器的目的。
[实验步骤]
1．组织匀浆制备
（1）取材 将空腹12～24 h的大鼠处死。剖开腹部， 迅速取出肝脏，用预冷的生理盐水洗净血污，用 滤纸吸干。
（2）制备匀浆 称取约1～2 g左右的肝组织，用预冷 的0.25 mol/L的蔗糖溶液冲洗数次，剪碎。以预 冷的0.25 mol/L的蔗糖溶液悬浮剪碎的组织，移 入匀浆器内，在冰浴条件下匀浆。匀浆完成后， 用滤网过滤，即制得肝细胞匀浆，备用。
实验四酵母核糖核酸的分离与组分鉴定ppt课件
实验四 酵母核糖核酸的分离 与组分鉴定（P159）
【目的】
掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法 了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方
法
【原理】
酵母核酸中RNA含量较多； 一般提取的RNA主要是rRNA，与蛋白结合在一
起形成核糖核蛋白（RNP）； RNA溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不
溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂； RNA的等电点在2.0-2.5，DNA的等电点在4.2
左右； 碱提法、盐提法 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核
糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。
【原理】
核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和 磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上 述组分的存在。 磷酸+钼酸铵 → 磷钼酸铵↓ 核糖+地衣酚试剂→ 墨绿色化合物 嘌呤碱+硝酸银→ 嘌呤银化物（白色）
【试剂和器材】
器材
研钵 刻度试管、普通试管 刻度离心管 搅拌棒 量筒、移液管、滴管 恒温水浴锅 台式离心机
【试剂和器材】
试剂
酵母片
95%乙醇
0.04mol/LNaOH 0.1mol/LAgNO3溶
溶液
液
1.5mol/LH2SO4溶 三氯化铁浓盐酸溶液
液
苔黑酚乙醇溶液
冰醋酸
定磷试剂
浓氨水
【结果与分析】
说明各试管中现象 解释原因 得出结论
【讨论与心得】
RNA提取实验过程中各操作步骤的
【目的】
掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法 了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方
法
【原理】
酵母核酸中RNA含量较多； 一般提取的RNA主要是rRNA，与蛋白结合在一
起形成核糖核蛋白（RNP）； RNA溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不
溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂； RNA的等电点在2.0-2.5，DNA的等电点在4.2
左右； 碱提法、盐提法 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核
糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。
【原理】
核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和 磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上 述组分的存在。 磷酸+钼酸铵 → 磷钼酸铵↓ 核糖+地衣酚试剂→ 墨绿色化合物 嘌呤碱+硝酸银→ 嘌呤银化物（白色）
【试剂和器材】
器材
研钵 刻度试管、普通试管 刻度离心管 搅拌棒 量筒、移液管、滴管 恒温水浴锅 台式离心机
【试剂和器材】
试剂
酵母片
95%乙醇
0.04mol/LNaOH 0.1mol/LAgNO3溶
溶液
液
1.5mol/LH2SO4溶 三氯化铁浓盐酸溶液
液
苔黑酚乙醇溶液
冰醋酸
定磷试剂
浓氨水
【结果与分析】
说明各试管中现象 解释原因 得出结论
【讨论与心得】
RNA提取实验过程中各操作步骤的
免疫细胞分离与检测 - 第二十二章免疫细胞的分离与检测( Separate and-PPT课件
第一节 免疫细胞的分离与纯化
• • • • 白细胞的分离 外周血单个核细胞的分离 淋巴细胞的纯化与亚群分离 吞噬细胞的分离
白细胞的分离
• 血中红细胞和白细胞的比例约为600～ 1000:1，两类细胞密度不同，其沉降速 度各异，通常用以下两种方法分离。
1．自然沉降法
• 是利用血细胞自然沉降率的分离方法。
• 一般采用无菌蒸馏水低渗裂解法或 0.83%氯化铵处理法。
(二)血小板的去除
• 将PBMC悬液通过离心洗涤2～3次，常可 去除PBMC中绝大部分混杂的血小板。 • 在某些疾病状态下，若外周血中血小板数 量异常增多，可采用胎牛血清(FCS)梯度离 心法去除PBMC中混杂的血小板 。
(三)单核胶、右旋糖酐、甲 基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等可使红 细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之更 易与白细胞分离。 • 此法白细胞获得率比自然沉降法高，但其 中的明胶法可使白细胞粘性增加，对实验 产生一定影响。
二、外周血单个核细胞的分离
• 外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)主要指淋巴细 胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用的 细胞群，也是进行T细胞和B细胞分离纯化 的重要环节。
• 采集外周静脉血，肝素抗凝，将含抗凝血的试管直立静置 室温30～60min后，由于红细胞沉降速率较快，可使白细 胞与之分离。上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红 细胞层上面的灰白层为白细胞。吸取富含白细胞的细胞群， 离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短 时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度 较高的白细胞悬液。
4．免疫磁珠分离法
• 包括直接法和间接法。 • 直接法是将特异性抗体与磁性微粒(平均直径小于 1.5μm)交联，形成免疫磁珠(IMB)。IMB与表达相 应膜抗原的细胞结合，用强磁场分离磁珠结合细 胞与磁珠非结合细胞，从而对特定细胞进行阳性 或阴性分选。 • 间接法是用羊(或兔)抗鼠IgG抗体(第二抗体)包被 磁性微珠，可与任何已结合鼠源性单克隆抗体(第 一抗体)的细胞发生反应，从而对细胞进行分离。
细胞的破碎与分离ppt课件
和收率高；产品的破坏最少；对pH值和温 度等外界条件要求低；不残留细胞碎片。
费用高，通用性差。 适用性：小规模的实验室研究。
43
酶法溶胞 自溶法 Autolysis
自溶作用是酶解的另一种方法，所需溶胞的酶是
由微生物本身产生的。微生物代谢过程中，大多数 都能产生一种能水解细胞壁上聚合结构的酶，以便 使生长过程进行下去。 改变微生物的环境，可诱发产生过剩的这种酶或激 发产生其他的自溶酶，以达到自溶目的。
31
JY92-II D超声波 细胞粉碎机
32
超声波法Ultrasonication
其原理可能与空化现象(cavitation phenomena)引起 的冲击波和剪切作用有关。
空穴泡由于受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产 生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性 旋涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切应力，促使 细胞液体发生流动，从而使细胞破碎。
影响因素 温度 时间 pH缓冲液浓度、细胞代谢途
径等 缺点：对不稳定的微生物，易引起所需蛋白质的变
性，自溶后细胞悬浮液粘度增大，过滤速度下降。
44
II 化学渗透法 Chemical permeation
化学法 用某些化学试剂溶解细胞壁或抽提细 胞中某些组分的方法 化学渗透法
某些化学试剂，如有机溶剂、变性剂、表面活 性剂、抗生素、金属螯合剂等，可以改变细胞 壁或膜的通透性（渗透性），从而使胞内物质 有选择地渗透出来。
细胞壁溶解酶是几种酶的复合物
39
重要微生物细胞壁的降解酶
40
外加酶法
溶菌酶能专一性地分解细胞壁上肽聚糖分子的β-1,4糖 苷键，因此主要用于细菌类细胞壁的裂解。革兰氏阳性 菌悬浮液中加入溶菌酶，很快就产生溶壁现象。但对于 革兰氏阴性菌，单独采用溶菌酶无效果，必须与螯合剂 EDTA一起使用。
费用高，通用性差。 适用性：小规模的实验室研究。
43
酶法溶胞 自溶法 Autolysis
自溶作用是酶解的另一种方法，所需溶胞的酶是
由微生物本身产生的。微生物代谢过程中，大多数 都能产生一种能水解细胞壁上聚合结构的酶，以便 使生长过程进行下去。 改变微生物的环境，可诱发产生过剩的这种酶或激 发产生其他的自溶酶，以达到自溶目的。
31
JY92-II D超声波 细胞粉碎机
32
超声波法Ultrasonication
其原理可能与空化现象(cavitation phenomena)引起 的冲击波和剪切作用有关。
空穴泡由于受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产 生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性 旋涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切应力，促使 细胞液体发生流动，从而使细胞破碎。
影响因素 温度 时间 pH缓冲液浓度、细胞代谢途
径等 缺点：对不稳定的微生物，易引起所需蛋白质的变
性，自溶后细胞悬浮液粘度增大，过滤速度下降。
44
II 化学渗透法 Chemical permeation
化学法 用某些化学试剂溶解细胞壁或抽提细 胞中某些组分的方法 化学渗透法
某些化学试剂，如有机溶剂、变性剂、表面活 性剂、抗生素、金属螯合剂等，可以改变细胞 壁或膜的通透性（渗透性），从而使胞内物质 有选择地渗透出来。
细胞壁溶解酶是几种酶的复合物
39
重要微生物细胞壁的降解酶
40
外加酶法
溶菌酶能专一性地分解细胞壁上肽聚糖分子的β-1,4糖 苷键，因此主要用于细菌类细胞壁的裂解。革兰氏阳性 菌悬浮液中加入溶菌酶，很快就产生溶壁现象。但对于 革兰氏阴性菌，单独采用溶菌酶无效果，必须与螯合剂 EDTA一起使用。
细胞产物分析技术细胞产物分离方法优秀课件
经典分离方法——液相微萃取法
与液液萃取法比较 ❖适应了绿色分析技术发展的需要（液液萃取消耗
mL 级有机溶剂，液相微萃取仅需μL 级） ❖富集倍数大，萃取效率高（富集倍数达1000 倍），
可使分析方法的灵敏度提高两个数量级以上 ❖便于与具有微量进样方法的特定仪器联用。 ❖样品溶液用量少(l~10mL 左右)
经典分离方法——液相微萃取法
单滴液相微萃取( SD-LPME)是将萃取用的有机溶 剂液滴悬挂在微量进样器的针端。同液-液萃取一 样，单滴液相微萃取也是基于分析物在不同相中分 配系数不同而达到萃取的目的。有机相液滴体积一 般为1-5微升，远远小于样品体积，所以可以达到 对待测物的富集。
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
连续流动液相微萃取法（CFME）是在直接液相 微萃取方法上改进而来。先用泵将被萃取的水溶 液充满PEEK管以及萃取单元的玻璃容器中，再将 所需体积的有机溶剂用微量注射器从玻璃容器的 注射口注射到样品水溶液中，并在针尖形成液滴 悬挂，在蠕动泵的作用下，不停流动的水溶液不 断与有机液滴接触，分析物不断被富集到微滴中， 萃取完成后将有机液滴吸回，直接进样分析。
待分离的一相称为被萃相，萃取后成为萃余相，用 做分离剂的相 称为萃取相。
经典分离方法——液-液萃取法
被萃取组分在萃取相中的溶解度要大于被萃取 相。
一般一相为水相，一相为有机相。在水相中增 加盐离子浓度可以降低有机相在水中的溶解度。
萃取应采用少量多次原则。 从水相中萃取有机物质时，单级萃取时一般选
根据悬挂液滴位置的不同可以分为直接液相微萃取 (D-LPME) 和顶空液相微萃取(HS-LPME) ；
根据操作方式的不同可以分为静态液相微萃取( SLPME) 、动态液相微萃取(D-LPME) 和连续流动 液相微萃取(CFME) ；
细胞的分离技术与细胞纯化最新优质ppt课件
? 三、等密度沉降分离法 ? 等密度沉降分离法主要根据细胞密度差异分离
细胞。
? 细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离 心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度 相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而 将不同密度的细胞或细胞器分离。
? 细胞在连续密度梯度离心介质中，受强离心 力作用下，细胞最后到达与其密度相同的分 离介质层面，并能保持平衡。
? ③溶液以2000g离心10min
? ④弃上清液，把粗提的细胞核悬浮于240ml溶 液A中，并通过4层纱布滤除粗渣。
? ⑤溶液以 2000g离心10min
? ⑥弃上清液，沉淀物悬浮于 240ml溶液中，以 2000g 离心10min
? ⑦弃上清液 ,沉淀悬浮于 190ml溶液B（2.2mol/L蔗糖， 10mmol/L Tris-HCl) 中
? 用免疫磁珠去除无关细胞使靶细胞得以纯化的 方法为阴性分离。
? 通过包被不同的抗体、配体，可进行几乎所有 细胞亚群的分离纯化。
? 该方法具有以下优点： ? ①细胞种类广；②分离纯度高达95%～99.9% ? ③细胞处理量大，可达109个细胞；④分选方式
灵活⑤细胞分离后仍保持很好的活力⑥易于获 得无菌的细胞悬液。
? 分离和纯化细胞的过程不仅仅是在原代培养 之前进行，有时候、分离和纯化细胞的过程 还贯穿在原代与传代培养的过程之中，甚至 主要依靠培养过程实现分离与纯化细胞的目 的。
? 培养物中细胞成分是否单一或者目的细胞在 培养物中的比例如何，常常是衡量某一培养 工作是否成功的重要指标。
? 根据所欲分离纯化的对象和目的不同，可采 取不同的细胞分离和纯化方法，从简单的手 工操作技术到使用自动控制的特别是电脑控 制的尖端仪器。
? 本法的优点是分离速度快，对单个细胞进 行快速定量分析与分选，分离的细胞仍保 持各种功能。
细胞器的分离纯化细胞分级分离法讲解ppt课件
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考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分
实验方案
观 察 到 的 线 粒 体 预 期 图
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考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分
实验方案
玉米黄化幼苗线粒体的分离(整个过程保持在O-4℃) 1、将玉米黄化幼苗剪下，称重每小组约取5g，在冰箱中放置l小 时。 2、将幼苗剪碎直接倒入研钵中，以l∶3(重量体积比g：m1)比例 加入离心匀浆PBS介质，快速磨碎，注意先加入少许介质液，研 碎后再将余液加入。 3、用双层尼龙网过滤，除去残渣。 4、取滤液在低温高速离心机上2300rpm离心lO分钟，弃沉淀。 5、取上清液在低温高速离心机上9950rpm离心lO分钟，弃上清。 6、所留沉淀用匀浆介质液洗涤，仍以9950rpm离心10分钟．弃上 清。 7、将所得沉淀悬浮于0.5M、PH7.2甘露醇中，置冰箱备用。 8、将制备的线粒体悬液滴于干净的载玻片上，用1％詹纳斯绿B 的0.25M蔗糖液(PH7.4)染色20分钟。 9、加盖玻片(需特别干净)。镜检最好用相差显微镜,凡线粒体均 被詹纳斯绿B染成蓝绿色颗粒，检验制备线粒体的纯度。
0.1N HCl
55ml
蒸馏水 200ml
(4) 0.35mol/l NaCl
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考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分
考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分
实验方案
观 察 到 的 线 粒 体 预 期 图
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考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分
实验方案
玉米黄化幼苗线粒体的分离(整个过程保持在O-4℃) 1、将玉米黄化幼苗剪下，称重每小组约取5g，在冰箱中放置l小 时。 2、将幼苗剪碎直接倒入研钵中，以l∶3(重量体积比g：m1)比例 加入离心匀浆PBS介质，快速磨碎，注意先加入少许介质液，研 碎后再将余液加入。 3、用双层尼龙网过滤，除去残渣。 4、取滤液在低温高速离心机上2300rpm离心lO分钟，弃沉淀。 5、取上清液在低温高速离心机上9950rpm离心lO分钟，弃上清。 6、所留沉淀用匀浆介质液洗涤，仍以9950rpm离心10分钟．弃上 清。 7、将所得沉淀悬浮于0.5M、PH7.2甘露醇中，置冰箱备用。 8、将制备的线粒体悬液滴于干净的载玻片上，用1％詹纳斯绿B 的0.25M蔗糖液(PH7.4)染色20分钟。 9、加盖玻片(需特别干净)。镜检最好用相差显微镜,凡线粒体均 被詹纳斯绿B染成蓝绿色颗粒，检验制备线粒体的纯度。
0.1N HCl
55ml
蒸馏水 200ml
(4) 0.35mol/l NaCl
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考 评 项 目 赋 标准分 ，对照 考评内 容和考 评办法 对考评 项目进 行考评 ，评出 各考评 项目的 考评实 际得分 ，考评 类目下 各考评 项目考 评实际 得分之 和为该 考评类 目的考 评实际 得分