高效液相注意事项

高效液相色谱仪使用注意事项

1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过3.0ml/min（制备），压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。

2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。

3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。

4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。更换时注意停泵！

5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。

6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过2天，且每次使用前都要重新抽滤。

7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。

8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。

9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液，过滤装置目前实验室只有一套，请大家一定倍加珍惜，过滤时，实验人员必须守在旁边。

10、所用水均为超纯水或市售哇哈哈用水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。

11、样品进样前，必须用色谱级溶剂溶解，再经有机滤头过滤，方可进样。

12、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。

注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。

13、戴安液相分析和制备时需更换定量环及检测池，请根据需要更换，若有疑问，请咨询负责人。

特殊柱子的使用：

1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机

溶剂。

2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。

高效液相色谱仪维护

1、保持仪器室和仪器的干净整洁，同时打开排风扇保持室内良好的通风。

2、每次开机仪器均应通过自检，否则根据说明书的要求进行处理，在任何时候出现异常情况或若遇操作人员处理不了的情况时，需及时报请相关领导批准后进行处理或请专业维修人员进行处理。

3、每次开机时，流速和柱压要逐渐增加，突然迅速增加，会使柱床受到冲击，引起紊乱，产生空隙。

4、在进样前使色谱系统充分平衡，是否平衡可由基线加以判断。

5、在进样前，检查色谱系统的各个接头，通常由此能发现是否有漏液现象。如有漏液，空气会从漏缝进入系统引起基线漂移，影响峰高和峰面积的重复性。

6、不要把柱接头上得太紧，否则易损坏接头螺纹，引起渗漏。

7、不要把柱子放在有气流的地方或直接放到阳光下，气流和阳光都会使柱子产生温度梯度造成基线漂移；如果怀疑基线漂移是由温度梯度引起的，可以设法使柱子恒温。

8、若仪器用做常规分析，样品种类有限，但分析次数很多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱寿命。

9、如果怀疑样品会污染色谱柱，可以用合适的溶剂（几百毫升）慢慢冲洗柱子过夜，第二天早晨再用流动相重新平衡柱子（约3min）。

10、在因装卸、更换、贮存等而挪动柱子时，动作要轻，不要使其受到碰撞，以免柱床因震动产生空隙或通道。

11、柱要加标签，新旧分开，不要放在温度变化很大的地方。

12、使用人在使用液相前请自觉检查好液相、进样针等相关设备的性能，如发现损坏，请使用前通知负责人。使用中出现相关损毁的，所造成的后果由当时使用人全部负责。

使用高效液相的时间安排：星期一至星期五，08:30之前必须开机，每人每次使用不超过三天，请抓紧时间，三天之后请自觉让给后面的人做，晚上通宵做实验的不做安排，严禁做液相时走走停停！

请大家按相关规定正确使用高效液相，未按规定使用的，一经发现，通报批评。