糖原磷酸化酶 a(GPa)活性检测试剂盒说明书 微量法
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。
产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
组织及血液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2130规格：50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。
产品说明：ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。
ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100-0.5μmol/mL标准品---100上清液100---试剂一200200200200试剂二200200200200混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三600600600600上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算：1.按蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
辅酶 II NADP(H)含量检测试剂盒说明书
辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒（微量法货号：BC1105规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体10 mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂四A粉剂×1支-20℃保存试剂四B液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体30 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体50 mL×1瓶2-8℃保存NADP标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入4mL蒸馏水充分混匀，溶解后4℃保存2-8周。
2、试剂四：临用前将试剂四A溶解到试剂四B中，溶解后加入5mL蒸馏水，分装保存，避免反复冻融，-20℃保存4周。
3、NADP标准品：临用前加入1.27 mL 蒸馏水，即5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
4、NADPH标准品：临用前加入1.2 mL 蒸馏水，即5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
产品说明：辅酶Ⅱ NADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和NADPH 含量测定可以计算NADP（NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。
NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH 含量。
乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）含量测定试剂盒说明书
乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）含量测定试剂盒说明书货号：MS2106 规格：100管/96样乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）含量测定试剂盒说明书微量法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。
在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。
糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。
此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
测定原理：苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。
柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。
利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
自备实验用品及仪器：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂三：液体10uL×1支，4℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂五：液体30mL×1瓶，4℃保存。
工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.23 m L），将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定96样）；加样前置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴锅中预热30 min；现配现用；乙酰辅酶A的提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性检测试剂盒说明书 微量法
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2195规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入2mL双蒸水充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入2mL双蒸水充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂六原液：液体10μL×1支，4℃保存；试剂六稀释液：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂七：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入5mL双蒸水，用不完的试剂可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂六工作液的配制：将试剂六原液：试剂六稀释液=1μL:329μL稀释，用多少配多少。
产品说明：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（EC4.1.1.31）广泛存在于植物和微生物中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，同时也是C4植物和CAM植物固定CO2的关键酶，对三羧酸循环的运转起重要调节作用。
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算PEPC活性。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心20min。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。
现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)试剂盒说明书
货号：MS2205 规格：100管/96样3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3 二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化 1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体×1 支，4℃保存；样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热10分钟；现配现用。
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase ,UGP )试剂盒说明书
货号：MS3603-100 规格：100管/96样尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucosepyrophosphosphprylase ，UGP ）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后 -20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。
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糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号：BC3345
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体16mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；
产品说明：
糖原磷酸化酶（Glycogenphosphorylase，GP，EC2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子
从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6-糖苷
键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两
种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。
未添加激活剂时，GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶
和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映GPa
活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进
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行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂4℃可保存一周；
3、试剂三的配制：临用前在试剂三管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃可保存一周；
4、试剂四的配制：临用前在试剂四管中加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃可保存一周；
5、将工作液、试剂三和试剂四置于37℃预热5分钟；
6、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂三、10μL试剂四、10μL蒸馏水和160μL工作
液，立即混匀，记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
三、GPa活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa（nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T
=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa（nmol/min/g鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T
=643×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，
1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本
蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算
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单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa（nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T
=1286×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GPa（nmol/min/g鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T
=1286×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，
0.05cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样
本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。