主要荧光素一览表教学内容
主要荧光素一览表 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 （1）荧光素类 Fluorescein 标准荧光素（Reference standard）之一,在其基础上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物。 Fluorescein适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线，有相对高的荧光吸收，较好的荧光产率以及良好的水溶性。标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。
与其他荧光素类衍生物一样，Fluorescein具有光淬灭率高，pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。 主要应用于聚焦激光扫描微阵列（Confocal laser scanning microscopy）和流式细胞计应用（Flow cytometry）。
FITC 异硫氰酸荧光素，Fluorescein isothiocyanate，是荧光素衍生物的一种，5-FITC较6-FITC更经常使用。
FITC的异硫氰酸基能与氨基反应，可用于标记氨基修饰DNA，一旦形成，产物极为稳定。适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线，Abs/Em=492/519nm（pH=9.0）。与蛋白的结合力也强。
FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。在水中易变坏，不能长久保存。 FITC-Oligo 广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序；FITC也经常被用于蛋白电泳检测（即使是毛细管电泳）和荧光能量激发转移测试。
FAM 羧基荧光素，Carboxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，5-FAM较6-FAM更经常使用。 Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester，即5-FAM（NHS）广泛存在于荧光标记试剂盒。 与FITC相比，FAM与氨基反应更快，产物也更稳定，但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。 FAM也适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线，Abs/Em=492/518nm（pH=9.0），具有荧光素衍生物的普遍特性，在水中稳定。 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 5-FAM主要应用于DNA自动测序中，标记其中的d/ddCTP（PE公司），也经常用于PCR产物定量，核酸探针等。
TET 四氯荧光素，Tetrachloro fluorescein，是荧光素衍生物的一种。 TET以及HEX均是在FAM基础上加以改进的，氯原子使FAM的Abs与Em值都产生一定的红移，并在一定程度上减弱了pH敏感性。TET也适用于Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=521/536nm 。
TET，HEX，FAM和TAMRA可配合用于DNA自动测序中，其中TET用于标记d/ddATP，HEX用于标记d/ddGTP或d/ddATP（PE公司）
HEX 六氯荧光素，Hexachloro fluorescein，是荧光素衍生物的一种。 适用于Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=535/556nm。（请参见TET介绍）
JOE 羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素，Carboxy-4',5'-dichloro-2'，7'-dimethoxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，6-JOE更被广泛使用。
JOE荧光产量高，pH敏感性弱，适合于标记蛋白。6-JOE也适合于Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=520/548（pH=9.0）
常用于DNA自动测序，标记d/ddATP，也经常被用于进行电泳检测与PCR产物定量。 （2）罗丹明类（Rhodamine dye） R 110 标准荧光素（Reference standard）之一,在其基础上进行结构改造,即可产生一系列罗丹明类衍生物。
与Fluorescein类衍生物相比，罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的pH敏感性 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭，故大多数不适宜用于标记蛋白。
R110被用于DNA自动测序。 TAMRA 全称羧基四甲基罗丹明，即Carboxytetramethylrhodamine，是罗丹明类荧光素衍生物，6- TAMRA被广泛使用。
TAMRA是少数几个能用于标记蛋白的，6- TAMRA适用于Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=547/573nm（Ph=8.0），6-TAMRA（NHS）常用于荧光标记试剂盒中。
6- TAMRA主要用于DNA自动测序中。 Texas Red Texas Red是一个长波长荧光素,与Fluorescein几乎没有波谱重叠,只适合于Ar-Kr Laser的568nm光谱线或He-Ne Laser的594光谱线,比Tetramethylrhodamine和LissamineTM Rhodamine B波长更长，荧光量更高。
Texas Red在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Third labels)。 （3）BODIPY类 BODIPY类荧光素是由分子探针公司开发，以用来替代那些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高，pH敏感性低（无离子变化），光稳定性强以及发射波谱窄的优点，故BODIPY类荧光素已被广泛用于核酸，，脂肪酸，磷脂以及各种受体。同时，由于在电泳过程中对序列片段影响小，故已被逐渐用于DNA自动测序。但相对而言, BODIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.
BODIPY FL可代替Fluorescein BODIPY R6G可代替Rhodamine 6G BODIPY TMR可代替Tetramethylrhodamine BODIPY TR可代替Texas Red 这些BODIPY类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱特征，能共用同样的光过滤器与激发光源，但更具优点。
（4）其他荧光素 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 Cascade blue Cascade blue是在芘 (pyrene)结构基础上改造得来的,即sulfonated pyrene,它是一种短波长紫外激发荧光素,与另一种常用的紫外荧光素Aminocoumarin相比,Cascade blue的Em与Fluorescein有更小的光谱重叠,有更高的荧光吸收和更大的荧光产量. Cascade blue在376nm处存在第二个吸收峰,水中不稳定。
Cascade blue 主要用于标记蛋白,作为极性示踪子(polar tracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标记核酸和葡聚糖。Aminocoumarin
一种短波长紫外激发荧光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin, 红移现象明显,比Cascade blue有更长的发射波长,肉眼观察明显，更适用于confocal。
表1：主要荧光激发光源 Excitation source Principal spectrum lines（nm） Mercury-arc Lamp 366,405,436,546,578 Xenon-arc Lamp 250-1000(continous) Tungsten-halogen Lamp 350-1000(continous) Cr:LiSAF Laser 430 Helium-cadmium Laser 325,442 Argon-ion Laser 488,514 Nd:YAG Laser 532 Helium-neon Laser 543,594,633 Krypton-ion Laser 568,647
表2：主要荧光素一览表
Dye Abs/Em Max (nm) Notes Acridine orange 500/526 green fluorescence bound to DNA, and red shift to ~650 upon association with RNA, useful for flow cytometry.
FAM 492/518 Most widely used green fluorescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argon-ion laser, prone to photobleaching, pH sensitive between pH 5-8,is widely used for automated DNA sequencing 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 FITC 494/519 Subject to argon-ion laser, widespread use for hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRET HEX 535/556 pH insensitive, used for automated DNA sequencing
JOE 520/548 Intermediate-wavelength spectra, important dye for automated DNA sequencing.
Lissamine rhodamine B 570/590 Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanning microscope.easier to label
protein than TMR.
Pyrene 340/378 Excimer:470 Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission,used in protein comformation and oxygen sensors.
ROX 570/590 spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used in automated DNA sequencing. TET 521/536 pH insensitive, used for automated DNA sequencing Tetramethyl rhodamine 555/580 pH insensitive , photostable,Widely used for automated DNA sequencing
荧(发)光颜料
荧(发)光颜料荧光颜料是一类在光激发后可发出荧光的有机颜料，用于激发的光源可以是紫外光也可以是日光。
这种颜料发光，在黑暗中不能持续。
以钙、钡、镁、镉等的氧化物、硫化物、硅酸盐、钨酸盐为主要成分的发荧光的不溶或难溶于溶剂的颜料，加上少量的助熔剂和微量的活化剂配成的混合物，经煅烧而成。
荧光的颜色随着活化剂的性质和发光颜料的成分而定。
如硫化锌荧光颜料中加入硫化镉，用银作活化剂的由蓝色转移至红色部分。
用铜为活化剂的由绿色转移至红色部分。
常用于制造荧光涂料及塑料。
受日光激发的荧光颜料俗称荧光粉，它是由水溶性荧光染料溶于树脂中制成的颜料。
这类染料主要是碱性染料，如碱性嫩黄O (C.I. 碱性黄2)、碱性玫瑰精(C.I.碱性紫10)等，也有个别的酸性染料也可用于此目的。
具体的制法是：将染料溶于三聚氰胺-对甲苯磺酰胺-甲醛的混合物中，经聚合成树脂后染料被包含于该树脂中，将干燥的树脂磨成细粉就得到日光型的荧光颜料。
其特点是色光异常艳丽，但耐晒、耐热牢度较差。
受紫外光激发的荧光颜料大多是水不溶性有机化合物，如分散荧光黄FFL (C. I. 分散黄124)、分散荧光黄D (C. I. 分散黄11)、分散荧光黄S (C. I. 溶剂黄98)、分散荧光红S (C. I. 分散红303)等。
这类荧光颜料自身的颜色并不十分鲜艳，只有当以低浓度溶解于底物中才呈现出耀眼的荧光。
根据荧光发射的原理，肉眼可见的荧光颜料其色谱为黄、橙、红。
市场上出售的蓝、绿色荧光颜料实际上在蓝、绿色颜料添加荧光增白剂后复配成的。
荧光颜料主要用于塑料、油墨、涂料、文教用品中以提高装饰效果，近来也用于制作太阳能聚集材料。
荧光现象荧光现象是一个光致发光的过程。
在这个过程中，紫外或可见光波段内的短波长电磁波被吸收之后，以长波长电磁波的形式被释放出来。
后者通常落在可见光范围内，与常规反射的光叠加，因而显现耀眼的荧光颜色。
分子结构(1) 通常荧光颜料分子内含有发射荧光的基团，如羰基、氮氮双键、碳氮双键等。
荧光培训教案
荧光培训教案时间： 2月14日-2月23日地点：总化验室会议室培训人：杨海军王海涛培训对象：各班组质量调度、荧光配料工程师、荧光分析员、简易分析人员、散装及各生产线取样人员。
培训方式：统一进行理论学习及实际操作培训，学习结束统一考核。
目的和意义：为了进一步提高控制组人员的业务素质，统一操作手法，希望通过此次培训使大家更加热爱自己的岗位，自己的本职工作，为化验室及公司作出自己最大的贡献。
今天培训的内容主要是荧光分析的主要仪器设备的工作原理及常见故障的分析和解决办法，希望大家认真听，在岗的人员提高自己的认识，增强自己的水平，不是本岗位的进一步了解咱们化验室的工作和这些仪器设备的基本知识，增长自己的知识面。
一、荧光仪1、工作原理：何为X光荧光？有些物质吸收了比紫外线光波长度短很多的X射线后，发出波长比所吸收的X射线的波长稍长的射线（二次射线），这种X射线被称为X光荧光。
它是一种电磁波。
它的特性是它的高能量，这就是他能穿透固体材料的原因，这是其他射线所不能比拟的。
2、（操作）首先开机过程：（1）.将墙壁荧光仪电源空气开关送电；（2）.开启ups电源（on按键），同时开启水冷机；（3）.开启荧光仪低压及电脑并进入SuperQ Manager程序；（4）.进入Measure & Analyse，需要输入的用户及密码都是S；（5）.点击界面左上角左侧样杯状标志（测量样品）。
（6）.点界面左上角左侧“常规分析测量”。
（7）.点击“系统”里面的“谱仪状态”，选择左上角手动状态（manual）；（8）.开启荧光仪高压（钥匙）；（9） .在谱仪状态表里升高压，初始电压及电流为20kV 10mA,先升电压后升电流，每次升10千伏或10毫安，直到升到50kV 40mA；（10）.选择分析曲线，输入样品名后准备分析。
关机顺序（与开机顺序相反）：在谱仪状态里降电压及电流，先降电流后降电压，降到20kV 10mA后关闭高压钥匙，关闭低压。
常用各种指示剂
荧光指示剂
Fluorescent Indicators
滴定和确定浑浊液体和有色液体的pH可以使用荧光指示剂。
在滴定过程中荧光色变不受液体颜色和其透明度的影响,因此常被选用。
荧光指示剂
Fluorescent Indicators
混合酸碱指示剂
Acid-base Mixed Indicators
注：混合酸碱指示剂要保存在深色瓶中。
吸附指示剂
Adsorption Indicators
吸附指示剂是一类有机染料，用于沉淀法滴定。
当它被吸附在胶粒表面后，可能是由于形成了某种化合物而导致指示剂分子结构的变化，从而引起颜色的变化。
在沉淀滴定中，可以利用它的此种性质来指示滴定的终点。
吸附指示剂可分为两大类：一类是酸性染料，如荧光黄及其衍生物，它们是有机弱酸，能解离出指示剂阴离子；另一类是碱性染料，如甲基紫等，它们是有机弱碱，能解离出指示剂阳离子。
吸附指示剂
氧化还原指示剂
Redox Indicators
氧化还原指示剂用于氧化还原法容量分析。
下表列出一些在教学和工作中经常使用的部分氧化还原指示剂。
氧化还原指示剂
Redox Indicators
酸碱指示剂
络合指示剂
Complexing Indicators
在络合滴定中，通常都是利用一种能与金属离子生成有色配合物的显色剂来指示滴定过程中金属离子浓度的变化，此种显色剂称为金属离子指示剂，简称金属指示剂，即络合指示剂。
络合指示剂
Complexing Indicators。
大学仪器分析教学课件(分子荧光与磷光分析法)
analysis
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一、仪器结构流程
测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品 池、双单色器系统、检测器。
特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程如图：
单色器：选择激发光波长 的第一单色器和选择发射 光(测量)波长的第二单色 器； 光源：氙灯和高压汞灯 样品池：石英 检测器：光电倍增管。
三、磷光分析法及应用
与荧光相比，磷光具有两个特点
（1）磷光辐射的波长比荧光长
（2）磷光的寿命比荧光长
1.磷光强度与磷光物质浓度的关系
当磷光物质浓度很小时，磷光强度Ip与磷光物质浓度c之 间的关系式为
Ip=2.3φpI0εbc 式中：φp为磷光效率，I0为激发光的强度，ε磷光物质的摩尔 吸收系数，b为试样池的光程。
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7、磷光分析法的应用
磷光分析法在无机化合物的测定中应用 较少，它主要用于测定有机化合物。 (1).稠环芳烃分析
采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和 杂环化合物（致癌物质）；见表
(2).农药、生物碱、植物生长激素的分析 (3).药物分析
见表
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（2）胶束增稳的溶液室温磷光法 当向溶液中加入适量的表面活性剂，形成胶
束，由于胶束的多相性，改变了磷光团的微 环境和定向的约束力，从而强烈影响了磷光 团的物理性质，减小了内转化和碰撞能量损 失等非辐射去活化过程的趋势，明显增加了 三重态的稳定性，从而可以实现在溶液中测 量室温磷光。
第四章 分子发光分析法
molecular luminescence
第十三章-荧光分析法PPT课件
当两个电子激发态之间的能量相差较小以至其振动能级有重叠 时，受激分子由高电子能级转移至低电子能级的过程。
.
6
荧光和磷光产生示意图
关于荧光
荧光的产生需经历两个过程：
吸收 发射
第一激发单重态的最低振动能级
振动驰豫 内部能量转换
.
8
例题
1. 所谓荧光，即某些物质经入射光照射后， 吸收了入射光的能量，从而辐射出比入射 光： A 波长长的光线 B 波长短的光线 C 能量大的光线 D 频率高的光线
.
24
三、影响荧光强度的外部因素
温度 溶剂 酸度 散射光
学习目的: 提高荧光分析的灵敏度和选择性
.
25
1 溶剂对荧光的影响
萘在下列哪种溶剂中的荧光强度最强？ A 1－氯丙烷 B 1－溴丙烷 C 1－碘丙烷 D 1，2－二氯丙烷
1. 一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增强而长移， 荧光强度也增强。
OH N
C H2
芴φf 1.0
O N Mg1/2
.
21
（三）分子的刚性和共平面性
CH3
SO3Na
N
CH3 CH3
SO3NaN CH3
H CCH
H CC H
结论：在相同的长共轭分子中，分子的刚性和共 平面性越强，荧光效率越大，荧光波长长移
（四）取代基效应
给电子基团 －NH2、 －OH、－OCH3、－NHR、－NR2荧 光效率提高、荧光波长长移
•
• • • •
cx
cs
.
34
二、定量分析方法
2、比例法（对照法）
Fs F0 KCs
FxF0KCx
Cx
Fx Fs
第5章荧光分析法与化学发光分析法.
10-10~10-12
透射光
90°
1
2
15
5.1.2 影响荧光强度的因素
1．荧光效率与荧光产生的条件 2．影响荧光强度的结构因素 3．影响荧光强度的外部因素
16
(1)荧光效率
激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发 光的光子数之比，常用φf表示：
发射荧光的光子数
f 吸收激发光的光子数 φf (0~1) φf 大的有荧光发射
2
特点
荧光分析法：灵敏度高、选择性好 化学发光分析法：灵敏度高；线性范围宽；分析
速度快；仪器设备简单，不需要光源及单色器 等；没有散射光及杂散光等引起的背景值。
3
5.1 荧光分析法
5.1.1 基本原理 5.1.2 影响荧光强度的因素 5.1.3 荧光分光光度计 5.1.4 分析方法 5.1.5 应用示例
17
（2）产生荧光的必备条件
强紫外-可见吸收 一定的荧光效率
π→π*跃迁 强吸收带 n →π*跃迁 弱吸收带
存在共轭的π→π*跃迁， φf高，荧光强度大。
18
2．影响荧光强度的结构因素
(1)共轭效应 (2)分子的刚性与共平面性 (3)取代基效应
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(1)共轭效应
绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂 环，因为芳香环或杂环分子具有长共轭的 π→π*跃迁。π电子共轭程度越大，荧光强度 （荧光效率）越大，而荧光波长也长移。
化学发光分析主要用于定量分析。 1．化学发光强度与反应物浓度的关系
IC（ l t）＝ ClddcAt
55
2．常用发光试剂
（1）鲁米诺类 （2）光泽精类 （3）钌(Ⅱ)-联吡啶配合物 （4）其它化学发光试剂565.2.5 应用与示例
硫黄素t荧光实验步骤-概述说明以及解释
硫黄素t荧光实验步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述硫黄素是一种广泛应用于荧光实验中的物质。
它具有强烈的荧光特性，因此被广泛用于荧光检测、荧光标记以及生物荧光影像等领域。
本文将介绍硫黄素荧光实验的步骤与操作。
在这个实验中，我们将首先准备实验所需的材料，包括硫黄素及其溶液配制所需的溶剂。
接着，我们将根据一定比例，配制硫黄素溶液。
接下来，我们将设置好实验装置，确保实验的正常进行。
最后，我们将进行荧光强度的测量，并根据实验结果进行结果分析。
通过进行该实验，我们旨在探究硫黄素的荧光特性以及其相关应用。
这些实验步骤将帮助我们更好地理解硫黄素的荧光机制，并为今后在各个领域中更精确地应用硫黄素荧光提供参考和依据。
接下来的章节将详细介绍实验步骤以及操作过程。
我们将从准备实验材料开始，然后介绍硫黄素溶液的配制方法。
随后，我们将详细阐述实验装置的设置，并展示荧光强度的测量方法。
最后，我们将根据实验结果对荧光实验进行结果分析并进行结论总结。
通过本篇文章的阅读，读者可以系统地了解硫黄素荧光实验的步骤和操作要点，以便在实践中更好地应用硫黄素的荧光特性。
本文旨在为读者提供实验指导，帮助读者更好地开展硫黄素荧光实验并深入了解其应用领域。
文章结构部分的内容可以按照以下方式编写：1.2 文章结构本文将按照以下结构进行叙述和呈现：第一部分是引言，包括了概述、文章结构和目的的阐述。
通过引言，读者可以了解到本文的主要内容和目标，以及阅读本文的动机和意义。
第二部分是正文，包括了实验步骤和实验操作两个子部分。
首先，我们将介绍实验步骤，包括准备实验材料和配制硫黄素溶液。
这一部分将详细说明进行该实验所需的材料列表，并提供具体的操作步骤和注意事项。
接下来是实验操作部分，包括设置实验装置和测量荧光强度两个子部分。
在设置实验装置部分，我们将介绍如何正确搭建实验装置以确保实验的准确性和可靠性。
而在测量荧光强度部分，我们将详细说明如何进行荧光强度的测量和记录，以及需要注意的实验细节。
吉天原子荧光T培训资料PPT学习教案
形成原子蒸气 在激发光源的激发下使基态原子跃迁到激发态，释放
能量发出原子荧光 原子荧光被光电倍增管接收，将光信号转化成电信号，
经过仪器及软件处理，得出最终结果
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氢化物原子荧光法
1、原#43;H+=H3BO3+Na++8H*+Em+ =EHn+H2(气体） 式中Em+代表待测元素，EHn为气态
氢化物（m可以等于或不等于n）。
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3、氢化物元素的价态
元素
As
Sb
Bi
Se
Te
Ge
Pb
Sn
价态
3+ 3+ 3+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+
原子化器温度不同于原子化温度（即氩氢 火焰温度），氩氢火焰温度大约在780℃左 右。
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6.原子化器高度
原子荧光光度计的原子化器高度是指原子化器顶端到透镜中 心水平线的垂直距离。其指示的高度数值越大，原子化器高 度越低，氩氢火焰的位置越低，见下图：
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分析试剂的配制
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水中主要元素的检测分析
Pb 水样20ml+0.5ml盐酸→定容至25ml
载流：2%盐酸 还原剂：8X： 2%KBH4+0.5%NaOH+1%铁氰化钾
9X： 1%KBH4+0.5%NaOH+1%铁氰化钾
PS：铅对酸度的要求比较苛刻，尽量保持 废液的PH值在8左右
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第五章 荧光光谱法 PPT课件
荧光光谱和吸收光谱的“镜象对称”关系
蒽的乙醇溶液的荧光光谱（右）和吸收光谱（左）
CH2CH CH2
100000 80000
Counts
369
431
O
C
N
3b
C
O
60000 40000 20000 0 300
OC2H5
350
400
450
500
550
600
Wavelength (nm)
从图可看出激发光谱同荧光光谱大致成
二、产生荧光的过程和条件
荧光物质产生荧光的过程可以分为这样四个步骤：
1、处于基态最低振动能级的荧光物质分子受到紫外线的照射，吸收 了和它所具有的特征频率相一致的光线，跃迁到第一电子激发态的各 个振动能级；
2、被激发到第一电子激发态的各个振动能级的分子，通过无辐射跃 迅降落到第一电子激发态的最低振动能级；
吸收光谱和荧光光谱能级跃迁示意图
3 2 1 V=0 吸光 无辐射 3 2 1 V=0 系间窜跃 吸光 荧光 磷光 热激活 T1 迟滞荧光 3 2 1 V=0 S0 S1 S2
大多数的分子在吸收了光而被激发至第一或以上的电子激发态的各个振 动能级之后，通常急剧降落至第一电子激发态的最低振动能级，在达一 过程中它们和同类分子或其它分子碰撞而消耗了相当于这些能级之间的 能量，因而不发出光，即无辐射跃迁。 由第一电子激发态的最低振动能级继续往下降落至基态的各个不同振动 能级时，则以光的形式发出，所产生的光即是荧光．
一、荧光的产生
如果使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所产生的的荧光 通过单色器而照射于探测器上，移动单色器至各种不同波长并由探测 器测得荧光强度，然后以荧光强度对照着荧光波长所绘成的曲线称为 该荧光物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。 荧光光谱表示在该物质所产生的荧光中各种不同波长组分的比较强度。
荧光 基础知识
•
混合物的分析测定（同步扫描）
光度分析之不足
Not a universal technique - not many molecules fluoresce 并非一种通用技术，不太多的分子能发荧光 Requires more expertise / understanding 需要更多的专门技术和知识 Relative technique 相对分析技术
降低入射光束散射干扰（瑞利散射，拉曼散射）的办法：
– 调整激发波长 – 发射光束加滤光片 – 减出空白
影响荧光定量的因素
– 样品处理带来的发光，如指纹 – 溶解的杂质带来的发光
• 玻璃容器 • 试剂杂质
– 细菌生长带来的发光 – 一般实验室污染造成的发光
高浓度下的“Inner Filter” Effect
• 浓度：荧光与溶液浓度只在很稀的情况下才成立。溶液太浓，由于激发光束 和发射光束都产生吸收，造成非线性。 • 氧分子的荧光淬灭。如果溶剂没有除气时。 • 光解作用。激发光束与样品溶液发射光解（褪色）反应。 • 样品混合物的光谱重叠，激发、发射的谱带重叠。调节狭缝宽度。 • 污染：玻璃容器，移液管等。 • 较小的环境效应：重原子效应，杂质淬灭，粘度。
激发波长固定，对发射 波长进行扫描
1、形状与激发 波长无关 2、和吸收光谱 成镜像关系
荧光强度v发射波长
Int
Detector
Emission scan
发射光谱/荧光光谱
激发波长不影响发射光谱的形状 激发强度影响发射光谱的强度
同步扫描光谱
激发和发射波长都做扫描
Source Monochro mator excitation Sample
荧光定量基础
F ( I 0 I ) (1 e