布病虎红平板凝集实验操作规程
虎红平板凝集试验
虎红平板凝集试验文章目录*一、虎红平板凝集试验的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、虎红平板凝集试验的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、虎红平板凝集试验的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、虎红平板凝集试验的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、虎红平板凝集试验的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应虎红平板凝集试验的基本信息1、定义虎红平板凝集试验是用来诊断布氏杆菌病。
布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的急、慢性传染病。
因接触病畜或食用受染牛奶或奶制品而感染。
潜伏期1-3周,临床特点是缓慢起病,长期发热、多汗、虚弱、全身痛和关节痛,急性期症状多在3-6月内消退。
本病临床表现变化多端,就个别病人而言,其临床表现可以很简便,仅表现为局部脓肿,或很复杂而表现为几个脏器和系统同时受累。
羊型和猪型布鲁菌病大多较重,牛型的症状较轻,部分病例可以不发热。
国内以羊型布病最为多见,未经治疗者的自然病程为3～6个月(平均4个月),但可短仅1个月或长达数年以上。
其病程一般可为急性期和慢性期,牛型的急性期常不明显。
潜伏期7～60天,一般为2～3周,少数患者在感染后数月或1年以上发病。
实验室中受染者大多于10～50天内发病。
人类布鲁氏菌病可分为亚临床感染、急性和亚急性、慢性感染、局限性和复发感染。
2、专科分类传染病检查3、检查分类病原微生物检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹非空腹虎红平板凝集试验的正常值和临床意义1、正常值阴性2、临床意义异常结果:阳性(50%)凝集:诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。
需检测人群:感染,常发热,多汗,虚弱,全身痛者。
虎红平板凝集试验的检查过程及注意事项1、检查过程取被检血清0.03ml与抗原0.03ml相混合,于4分钟内观察结果,凡出现“+”以上反应者均为阳性。
对出现阳性反应的动物须进一步作补体结合试验, 或其他辅助诊断试验。
家畜布鲁氏菌病血清学平板试验(PAT)
家畜布鲁氏菌病血清学平板试验（PAT）一、应备有下列材料：1.受检血清：受检血清必须新鲜,无溶血现象、腐败现象、气味。
2.在实验前血清必须置于温室中，使其达到20℃左右。
3.抗原：由兽医生物药品厂生产供应。
本抗原由加热杀死的布鲁氏菌菌体经染色制备而成的淡蓝色悬浮液。
抗原本身出现凝集者应废弃。
使用前应充分振荡，并使其温度达到20℃左右。
4.阴、阳性血清：由兽医生物药品厂生产供应，本方法所用的阴、阳性血清与试管凝集试验法相同。
二、操作方法：1.备一方形洁净的玻璃板：划成25个方格，横数5格，纵数5格，每格四平方公分，第一列各格写下血清号码。
2.用0.2毫升灭菌吸管按下列剂量加受检血清于任何一行（横格）的各格中：第一格0.08毫升，第二格0.04毫升，第三格0.02毫升，第四格0.01毫升。
（如下表）血清号第一格第二格第三格第四格血清量（毫升）1 0.08 0.04 0.02 0.012 0.08 0.04 0.02 0.013 0.08 0.04 0.02 0.014 0.08 0.04 0.02 0.01由于本试验所需血清量较少，因此，在操作过程中要求严格，应尽可能减少误差，最好滴出血清前用滤纸片擦去吸管表面沾附的血清。
3.加平板反应抗原原液0.03毫升于上述各血清量中，并用牙签或细铁丝混匀，使抗原和血清推开，面积直径约2—3公分的圆形。
由血清量最少的一格（即第四格）混起，每份血清用一根牙签，用过的牙签要放固定容器中，工作完毕后集中烧毁。
若用细铁丝作混合，每份血清混匀后应用酒精棉花擦净，然后再作另一份血清的混合。
4.混合完毕，将玻璃板置于酒精灯火焰或凝集反应箱上，均匀加温，使达到30℃左右，并轻轻摇动玻板，使血清与抗原混合液呈缓慢的旋转运动，以保证充分混合。
5—8分钟内记录反应结果。
5.每次试验用1—2份已知阴性血清和1—2份阳性血清作平板凝集反应，以资对照。
6.按下列标准用加号记录反应强度“＃”出现大的凝集片或小的颗粒物，液体完全透明，即100%凝集。
布鲁氏菌抗体检测原始记录
嘉祥县疾病预防控制中心
布鲁氏菌抗体检测原始记录
编号：JXCDC /JL-146 共页第页
样品编号样品种类血清
检测项目布鲁氏菌抗体检测检测依据布病诊断标准附录WS 269-2007 试剂厂家试剂批号
设备名称生物安全柜、电热恒温培养箱试剂效期
一、虎红平板凝集试验（RBPT）：
取0.03ml被检血清，滴于洁净玻片上，然后加入虎红平板抗原0.03ml，混匀，在5分钟内判断结果。
二、试管凝集试验（SAT）：
1、取被检血清0.08ml加入第一管0.92ml的生理盐水内，混匀后，取0.5ml加入第二管中（含0.5ml生理盐水）作1:1稀释，以后各管以此类推，后一管弃去0.5ml。
血清稀释度依次为1:12.5，1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800。
2将稀释10倍的布氏菌菌液分别加入各血清管管内，每管加入0.5ml，混匀。
放37℃温箱中22小时观察结果。
最后血清的稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600。
3.菌液凝集程度的判断与同时配制的比浊管透明程度为参照，比浊管的配制方法见表1。
三、布鲁氏菌抗体检测结果：
样品编号姓名RBPT SAT滴度：1:25 1:50 1:100 1:200
检测起至时间年月日时至月日时
检测人：复核人：。
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的微生物学检测方法，主要用于检测血清中的抗体和抗原。
该试验原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象，通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
试验步骤：
1. 准备试剂和样品：将需要检测的抗原或抗体样品与相应的抗原或抗体试剂混合。
2. 在平板上滴加混合液：将混合液滴在准备好的平板上，通常是在平板上画出一条直线，然后在直线上滴加混合液。
3. 观察凝集程度：在一定时间内观察滴加的混合液是否出现凝集现象，凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。
4. 结果判断：根据凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
该试验的原理是基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
抗原是一种能够引起免疫反应的物质，通常是一种蛋白质或多糖体。
抗体是一种能够识别并结合抗原的蛋白质，通常由免疫细胞产生。
在试验中，当抗原与抗体结合时，它们会形成一个复合物，这个复
合物会在液体中形成凝集物。
凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。
通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
虎红平板凝集试验是一种简单、快速、经济的检测方法，广泛应用于临床诊断、疫苗研究和生物制品质量控制等领域。
但是，该试验也存在一些局限性，例如对于某些抗原或抗体的检测不敏感，需要结合其他检测方法进行综合分析。
虎红平板凝集试验是一种重要的微生物学检测方法，其原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
该试验具有简单、快速、经济等优点，但也存在一些局限性，需要结合其他检测方法进行综合分析。
布氏杆菌病虎红平板凝集操作流程
布氏杆菌病虎红平板凝集实验操作流程材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。
1．玻璃板、刻度吸管等。
2．布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。
操作方法1．取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成方格，并注明待检血清号码。
2．取０.２ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。
大规模检验时，可只做２个血清量，大动物用0.04ml和0.02ml，中小动物用0.08ml和0.04ml。
每检一个样品需换一只吸管。
3．每格内加布氏杆菌平板凝集抗原0.03ml，滴在血清附近，而不要与血清接触。
用牙签（或火柴杆）自血清量最小的一格起，将血清与抗原混匀，每份血清用一根牙签。
4．混合完毕，将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温，使温度达到３０℃左右。
3min～5min内记录结果。
结果判定＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全清亮透明，即100％凝集。
＋＋＋：有明显的凝集片，液体几乎完全透明，即75％凝集。
＋＋：有可见的凝集片，液体不甚透明，即50％凝集。
＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25％的凝集。
－：液体均匀混浊，即不凝集。
以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。
大动物（牛、马、骆驼等）以0.02ml出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性，0.04ml出现凝集价判为可疑。
中小动物（猪、山羊、绵羊等）以0.04ml出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清，0.08ml出现凝集价判为可疑。
注意事项1．每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。
2．加抗原前必须摇匀。
3．反应温度最好保证在30℃左右，3min～5min内判定。
如反应温度偏低，可适当延长判读时间。
4．如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集反应时，则需要用四个血清量重检。
5．平板凝集反应最好是用于初筛，如出现阳性或可疑反应，再用试管凝集反应进行复检，以定性。
6．平板凝集反应与试管凝集反应的关系。
布鲁氏菌试管凝集试验
“++++”完全凝集，上清液100%清亮 “+++” 几乎完全凝集，上清液75%清亮 “++”显著凝集，上清液50%清亮 “+” 微量凝集，液体25%清亮 “-” 无凝集，液体不清亮 确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的
凝集现象的最高血清稀释度
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诊断标准
没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是 ：
人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1：100( ++)及以上者为阳性，1：50(++)为可疑。
猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1： 50(++)及以上者为阳性，1：25(++)为可疑。
对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查， 以便进一步确定诊断。
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影响试验结果的因素及注意事项
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器材与试剂
虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂 玻片或有凹形孔的玻片、0.1ml吸管或微量 加样器、混合棒或牙签
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试验方法
在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎 红平板抗原0.03ml，充分混匀，在5分钟内 观察结果。
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(四) 结果判定
有二种方法，第一种是，出现可见的凝集反应就判为阳 性；
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作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即 稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝 集，而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝 集，这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反 应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做 几个管，多采用几个稀释度。
氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐 的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界 为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血 清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在 10~12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。
布病操作规程
布氏杆菌病操作规程
一、虎红平板凝集试验(RBPT)：
取0.03ml备检血清，滴于洁净玻片上，然后加入虎红平板抗原0.03ml，混匀；在5 min内判定结果。
用毕的玻片一并放入利器盒内84处理。
二、试管凝集试验（SAT）：
1、取被检血清0.08ml加入第一管0.92ml生理盐水内，混合后取0.5ml 加入第二管中（含0.5ml生理盐水）作1:1稀释，以后各管类推,后一管弃去0.5ml。
血清稀释度依次为1:12.5，1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800。
2、将稀释10倍的布氏菌菌液分别加入各血清管内，每管加0.5ml，混匀。
放37℃温箱中18-24 h观察结果。
最后血清稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200,1:400，1:800，1:1600。
3、菌液凝集程度的判定以同时配制的比浊管透明程度为参照，比浊管的配制方法见表1。
表1：比浊管配制
*稀释菌液是将10倍稀释的菌液再作1：1稀释。
管号稀释菌液*（ml）生理盐水（ml）透明程度
1 0 1.00 ++++
2 0.25 0.75 +++
3 0.50 0.50 ++
4 0.7
5 0.25 +
5 1.00 0 —。
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
检验方法：依据GB/T18646-2002
1、材料准备
1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
1.2受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
1.3洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。
1.4吸管或分装器，适于滴加0.03 ml。
1.5牙签或火柴杆，供搅拌用。
1.6观察结果照明用光源
2、操作方法
2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03ml。
2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03ml。
2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
3、判定
3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。
附：
阴性对照：
阳性对照：
品控中心
2013-4-22
操作流程图
为了便于观
察结果，辅
以光源照明。