抗生素效价计算过程

Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1

USP Cyli nder-plate assay

美国药典 管碟法---（标准曲线法）

1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：

首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ）,分别为S1、S2、S3 S4和S5,其中S3 为中间浓度。除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不 相连的三个分别加入Si （ i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3o 待检样 品（Unknown 加样方式如Si ，具体放置方法如下图1:

图1：标准及样品管碟放置方式图例

Replicate1

Replicate2

Replicate3

Standard Standard Standard Standard Unknown

2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例:

F表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果:

表2:抗生素效价检测测量结果表

备注：Zonel、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值;

Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值;

U1表示待测样品1。

进行初始计算：

对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si 和U1 直径的平均值。

例如：

=(,,,……)9个数据的平均值

=(,,,……)9个数据的平均值

变异性的适用性检查：

然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差(包括标准对照和样品的)，进而计算出其相对标准偏差值(RSD该值应不超过10%。

例如：

标准偏差=s,...,

相对标准偏差% = *100

进行平板间的差异校正：

计算公式如下。

X C = X S - （X R - P）

X C =标准品平均值的校正值

X S =原始的标准品的平均值

X R =对照值的平均值

P =校正值 例如：

建立标准曲线：

标准曲线由计算的标准品平均值的校正值 Xc 和标准品浓度值的对数值构成。 （使用适宜的计算软件或手动计算）（注意----可以使用自然对数或底数为10 的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果） 例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。

表3：标准曲线数据表

图4：线形回归结果

标准曲线 ：Z = [* ln(C)] +

抗生素效价标准曲线

_mj^

直圈菌抑正校

乙=校正抑菌圈大小c=浓度

R 2

=

待测样品效价：估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值

（三个平板的）。用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。

［注意-~另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S3的对数值在估计效价的回归线中进行校正］。在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值L U。

L u = （Z - a）/b

a = 回归线的截距

b = 回归线的斜率

要得知待测样品的效价，取L u的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。

例如：

待测样品校正值（表 2 中） =

待测样品效价的In值：L u = - / =

待测样品效价值：c u = = 待测样品效价与对照中间浓度的百分比为：*100% = %