巨噬细胞进展(LFL)武大免疫室罗凤玲
巨噬细胞在抗体存在下可发挥ADCC作用,参与肿瘤免疫和抗病 毒免疫。
介导炎症反应
巨噬细胞是一类重要的炎症细胞，具有趋化作用，可定向转移 至炎症部位集中，加强局部炎症反应，杀灭、清除炎症部位的 病原体及异物等
巨噬细胞分泌IL-1（内源性致热源），作用于体温调节中枢， 引起发热，进一步加强全身和局部的炎症。
单核巨噬细胞的分化成熟
巨噬细胞的表面受体
病原体突破上皮屏障进 入宿主体组织后，首遇的 天然免疫细胞因素是巨噬 细胞，巨噬细胞除有Fc 和补体受体外，尚有多种 能直接与某些病原体结合 的表面受体。
(1) 甘露糖受体(MANNOSE RECEPTOR,MR): 存在于所有组织 巨噬细胞上，血中单核细胞无， 通过多糖识别区与病原体表面含 甘露糖或岩藻糖结构相结合，随 后吞入，MR在消除细菌、酵母菌 和某些原虫中有重要作用。
（5）其他：CD14通过血清中LBPERN RECOGNITION RECEPTOR)
定义：一类主要表达于天然免疫细胞表面、非克隆性分布、可识别一种或 多种PAMP的识别分子。 PRR的生物学特征：
* 较少多样性； * 非克隆性表达:同一类型细胞（如巨噬细胞）表达的PRR具有相同的特异 性。 * 介导快速的生物学反应，无需细胞增殖。 几类重要的PRR：MBL、甘露糖受体、清道夫受体、TOLL样受体
杀死的病原体进一步由蛋白酶、核酸酶、酯酶等降解、消 化，不能被消化的残渣排至吞噬细胞外。
吞噬作用是动物机体在细菌性感染中的一种重要防御机制， 吞噬作用是多形核白细胞和单核或巨噬细胞等少数几种细胞 的独特功能。 吞饮作用是机体内所有细胞都有的正常功能。吞饮时，细胞 膜发生折叠，包围黏附在细胞上的液滴或颗粒，形成空泡而 向胞浆中移动。吞饮过程可能是细胞摄取营养物的一种手段。
中性粒细胞
neutrophils
单核细胞 monocyte
巨噬细胞 macrophage 小胶质细胞、库普弗细胞、破骨细胞
Neutrophil: 12-15 m 3-5 lobule nucleus
Blood Monocyte: 10-15 m Activated tissue M
巨噬细胞
• 寿命长，达数月 • 体大多形性 • 胞浆富含溶酶体 • MHC-I/II和多种粘附分子 • 多种受体
（3）“清道夫”受体：识别衰老、损伤和变性的自身细胞所暴 露出来的磷脂，也可识别LPS和磷壁酸等细菌壁成分，参与巨 噬细胞对病原体的识别和对衰老细胞和凋亡细胞的清除。
（4）调理受体：单核巨噬细胞通过起表面的IgG FC受体和 补体受体，结合被IgG、补体包被的病原体，促进巨噬细胞 的吞噬作用及调理作用。
巨噬细胞的生物学功能
巨噬细胞参与非特异性免疫和特异性免疫。在非特异性免 疫中，主要通过吞噬作用杀灭和清除病原体和异物，并介导炎症 反应；在特异性免疫中，主要发挥免疫调节及抗原递呈功能。 1、吞噬和杀伤作用 2、介导炎症反应 3、免疫调节功能 4、加工和递呈抗原
吞噬和杀伤作用
巨噬细胞可经受体介导吞噬异物，杀伤和清除细菌、病毒及损 伤、衰老的红细胞 ，故又有清道夫(SCAVENGER)之称;
• 经典活化 • II型活化
经典细胞的活化需要两个信号
• 第一是必需的细胞因子IFN-γ，它可以诱导巨噬细胞活化， 但在只有IFN-γ而无第二信号的情况下，不能使巨噬细胞活 化； • 第二个信号是肿瘤坏死因子（TNF）或TNF诱导剂。外 源性的TNF 可以作为第二信号，但在生理上第二信号通常是 由Toll 样受体的配体诱导巨噬细胞，自身产生内源性的TNF。
Phagocytosis
Phagocyte Activation
吞噬作用的后果
（1）完全吞噬 病原体在吞噬溶酶体中被杀灭和消化，未消化的残渣被排出胞外。 （2）不完全吞噬 只被吞噬却不被杀死，对机体不利 （3）组织损伤 吞噬过程中释放的多种水解酶能造成邻近组织损伤和炎症反应
巨噬细胞的活化
受过刺激或免疫致敏过的巨噬细胞与定居的巨噬细胞不同。 活化后的巨噬细胞具有较强的促炎症和细胞毒能力，而静 止巨噬细胞杀菌活性有限。
(2) Toll样受体(Toll-like receptor, TLR): 因其胞外区 与果蝇的Toll蛋白同源而得名，目前已发现有11种Toll样受 体。
Toll 分子的发现与命名：Toll分子最初是作为建立早期果蝇胚胎背侧－ 腹侧轴途径中的关键成员而发现的，发现Toll基因的缺失导致所有杂 合子果蝇胚胎不能孵化。
Phagocytosis
• 巨噬细胞通过其表面PRR识别病原体表面的PAMP 当PRR与PAMP结合后，巨噬细胞膜在肌动蛋白细胞骨架 的介导下发生变形运动，包绕病原体或病原体感染的靶细 胞形成吞噬小体(PHAGOSOME) 吞噬小体再与胞浆中的溶酶体融合，形成吞噬溶酶体 (PHAGOLYSOSOME)，进而将病原体或靶细胞消化，杀伤病 原体。
病原相关分子模式(PAMP)示意图
天然免疫识别模式—— 病原相关分子模式
天然免疫系统成分可识别自己与异己，仅对病原体应答，其识别病原相 关分子模式具以下特征：
1.病原相关分子只由病原微生物产生, 宿主细胞不产生。例如，脂多糖仅由 细菌产生，其相应的受体识别脂多糖，因此警告宿主感染微生物。
2.被天然免疫系统所识别的这些结构往往对微生物的生存或致病性势必不 可少的。
• 九十年代初，Stein等把这种由IL-4和糖皮质激素介导的巨噬细胞激活定 义为单核巨噬细胞的替代激活途径.
• 1998年，Kodelja等克隆出替代激活巨噬细胞的特异性标记物，替代巨噬 细胞激活相关CC生化因子-1(Alternative macrophage activationassociated CC-chemokine-1,AMAC-1)的基因，从而最后明确了单核巨 噬细胞替代激活的概念。
①ROIS (反应性氧中间物)系统
在巨噬作用激发下，通过呼吸爆发，激活细胞膜上的还原 性辅酶I和还原性辅酶II，使分子氧活化，生成超氧阴离子、 过氧化氢、单态氧等，组成具有杀菌作用的系统。 这些物质具有很强的氧化作用和细胞毒作用，可有效杀伤 病原微生物。
②RNIS (反应性氮中间物)系统
巨噬细胞活化产生的诱导型一氧化氮合成酶，在还原型辅 酶II和四氢生物蝶呤的作用下，催化L-精氨酸和氧分子生 成胍氨酸和一氧化氮 一氧化氮对细菌和肿瘤细胞具有毒性作用。
TLR1:
分布于各类免疫细胞；
TLR2、TLR4、TLR5:分布于除T、B、NK外的免疫细胞；
TLR3:
表达于幼稚的树突状细胞；
TLR6-9:
广泛表达于多种细胞；
TLR10:
表达于淋巴样组织中和脾脏细胞。
TLR的配体 ：
不同TLR识别的配体不同：
● TLR4：革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)，热休克蛋白(HSP) ● TLR2：脂蛋白，脂多肽，脂壁酸(LTA) ，阿拉伯甘聚糖(LAM)及 酵母多糖等 ● TLR5：鞭毛蛋白 ● TLR3：病毒复制的中间产物dsRNA ● TLR9：细菌的CpGDNA
巨噬细胞研究进展
武汉大学基础医学院免疫系 罗凤玲
What do you know about the macrophages?
• 巨噬细胞来源与功能 • 巨噬细胞分型 • 巨噬细胞与疾病 • 巨噬细胞检测
吞噬细胞 phagocytes
单核巨噬细胞（系统）
Mononuclear phagocyte system
TOLL样受体结构特点:
1. 所有TOLL同源分子都是I型跨膜蛋白， 2. 胞膜外区均有18∼31个富含亮氨酸的重复序列
（Leu-rich repeat, LRR） 3. 胞膜内区均有一TOLL/IL-1R同源区(TIR)
组织分布表达:
TOLL表达于所有的淋巴组织中，在外周血白细胞中表达水平
最高，单核、巨噬细胞、B细胞、Ｔ细胞及树突状细胞都表达 TLR MRNA。此外，脂肪细胞、小肠上皮细胞和皮肤内皮细胞 也表达TLR, TLR是防御微生物侵入的“哨兵” 。
• 末梢血中的单核细胞（monocytes）落户于组织之后成为巨 噬细胞（macrophage），执行“清道夫”的功能----清除死亡 细胞碎片和异物抗原，通常将单核细胞和巨噬细胞统称为单核 巨噬细胞。
• 在病原微生物入侵时，局部组织中的巨噬细胞被活化并吞噬， 消灭“来犯之敌”。
• 巨噬细胞还能够将所吞噬的外来抗原进行有效处理，将其中 的抗原肽递呈给T淋巴细胞。
3.病原相关分子为宿主天然免疫细胞泛特异性识别的分子基础，是由一群 或一类微生物所共同具有的恒定的结构。例如，脂多糖是所有革兰氏阴 性菌细胞壁的结构，因此，脂多糖受体可以识别任何革兰氏阴性菌感染。
巨噬细胞吞噬过程
（1）趋化 （2）接触 （3）吞入 吞噬：形成吞噬体
吞饮：形成吞饮体 （4）杀灭与消化——形成吞噬溶酶体
膜型PRR
甘露糖受体：特异性识别微生 物细胞壁糖蛋白和糖脂末端的 甘露糖和岩藻糖残基，介导吞 噬细胞吞噬。 清道夫受体：识别并与细菌细 胞壁某些组分结合，有效地清 除血循环中的细菌。
分泌型PRR：
甘露聚糖结合凝集素 （MBL）
*属于肝脏合成的急性期反应蛋 白
*识别并结合G-/G+菌、酵母菌、 某些病毒等表面的甘露糖
（2）非依氧杀菌机制 不需分子氧参加
①酸性的作用 杀菌、抑菌；为各种水解酶提供了最适作用条件 ②溶酶体酶和杀菌性蛋白的作用 直接对细菌发挥杀伤、消化或分解作用
ROS: reactive oxygen species NO: nitric oxide NADPH: nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
II型活化
• 与经典活化一样，II型活化也需两个信号。 • 第一个是FcRs的配体，FcRs受体与配体的结合必须与细 胞因子产生的刺激信号相偶联，这些刺激信号即是巨噬细胞 II型活化所需的第二信号。
流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征
流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速分析单个细胞的多参数特性的强大技术。
该技术通过标记特异性抗体与细胞表面或内部抗原的结合，结合流式细胞仪的高通量分析能力，使我们能够精确测量细胞群体的表型特征。
在生物医学研究中，流式细胞术广泛应用于细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、信号转导等多个领域。
本文旨在利用流式细胞术分析佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）诱导人急性单核细胞白血病细胞系THP-1分化为巨噬细胞的表型特征。
我们将通过流式细胞术检测分化过程中细胞表面标志物的表达变化，如CDCD68等，以及细胞内分子如肿瘤坏死因子TNF-α、白介素IL-1β等的表达情况，从而全面揭示PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞分化的分子机制。
通过本文的研究，我们期望能够为深入理解巨噬细胞分化过程中的分子事件提供新的视角，并为开发针对巨噬细胞相关疾病的治疗策略提供理论依据。
本文还将探讨流式细胞术在细胞分化研究中的应用价值，以期为生物医学领域的研究人员提供有益的参考。
二、材料与方法1 细胞系：人单核细胞系THP-1，购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。
2 试剂：佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA），购自Sigma-Aldrich公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素双抗，购自Gibco公司；流式细胞术抗体，包括但不限于CDCDHLA-DR等，购自BD Biosciences或eBioscience公司。
3 仪器：流式细胞仪（如FACS Canto II，BD Biosciences）；二氧化碳培养箱；离心机；倒置显微镜。
1 细胞培养：THP-1细胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素双抗的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2的条件下培养。
Wnt 、β-Catenin通路促进替代活化型巨噬细胞的激活将加重肾纤维化
在BMM中，IL-4或TGFβ1刺激的巨噬细胞M2极化被ICG-001处理显着抑制。 我们还从小鼠分离的BMM以诱导β-catenin蛋白基因缺失， β-catenin在BMM 中的消除可以阻止IL-4或TGFβ1刺激的巨噬细胞M2极化。
为了探讨β-catenin调节巨噬细胞M2极化的机制，我们检测了两种细 胞类型中STAT3在Y705的磷酸化。
为了探讨STAT3激活在Wnt3a加重巨噬细胞M2极化中的作用，我们用STAT3抑制剂 Stattic处理BMMs。结果表明，Stattic可以很大程度上抑制STAT3磷酸化和IL-4或 TGFβ1加Wnt3a诱导的巨噬细胞M2极化，表明STAT3激活促进巨噬细胞M2极化的 关键作用。
因此，可以得出结论，Wnt3a通过上调STAT3表达和活化来加剧IL-4-或TGFβ1诱导 的巨噬细胞M2极化。
Wnt信号传导被分为经典和非经典信号通路，取决于β-catenin是否被激 活。对于经典的Wnt信号通路，β-catenin在激活后积累在细胞质中，然 后转移到细胞核中，结合细胞因子并刺激参与组织纤维形成的靶基因的 转录。
Wnt / β-catenin激活可以防止小鼠肾小管细胞死亡和AKI。然而，足细胞 或肾小管细胞中Wnt / β-catenin的异常激活可能加重蛋白尿，肾功能不 全和肾纤维化。此外，β-catenin可以调节髓系细胞的运动性和粘附性， 这有助于皮肤损伤后间充质细胞的积累。因此，有人推测在肾纤维化中， Wnt / β-catenin活化可能促进巨噬细胞迁移并促进其累积。最近据报道， β-catenin相关信号在肺部髓系细胞中的激活导致肺泡巨噬细胞亚型的分 化，其拮抗肺纤维化的消退。强制表达β-catenin变体能够促进巨噬细胞 分化。在这方面，Wnt / β-catenin信号可能调节巨噬细胞的积累和活化 并加重CKD中的肾纤维化。
中药饮片鹿血晶对巨噬细胞的免疫调节作用研究
doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.07.009中药饮片鹿血晶对巨噬细胞的免疫调节作用研究①李京蔓 潘宇晨② 夏晓雨 李 丹③ 窦 环 侯亚义③ (南京大学医学院,南京210093) 中图分类号 R932 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2020)07⁃0810⁃05①本文为中央高校基本科研业务费专项资金(021*********)和江苏省 六大人才高峰”高层次人才项目(YY⁃021)㊂②共同第一作者㊂③南京大学生命科学学院,南京210093㊂作者简介:李京蔓,女,在读硕士,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,就读于南京大学生命科学学院,南京210093,E⁃mail:2718075809@㊂通讯作者及指导教师:窦 环,女,博士,高级工程师,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,E⁃mail:douhuan @㊂侯亚义,男,博士,教授,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,E⁃mail:yayihou @㊂[摘 要] 目的:探讨鹿血晶(DBC)对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制㊂方法:CCK⁃8法检测细胞活力;流式细胞术及免疫荧光法检测巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力;qRT⁃PCR 法检测炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的mRNA 表达水平;ELISA 法检测培养基上清中iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6含量;Western blot 法检测转染NF⁃κB 信号通路蛋白表达㊂结果:鹿血晶能够提高LPS 刺激下的RAW 264.7细胞活力(P <0.05);鹿血晶能抑制LPS 刺激下RAW 264.7细胞的炎症因子表达和释放(P <0.05);鹿血晶能够抑制LPS 刺激下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK⁃α/β和磷酸化P65蛋白的表达;鹿血晶促进RAW 264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力(P <0.05)㊂结论:鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF⁃κB 信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂[关键词] 鹿血晶;巨噬细胞;免疫调节Immunoregulating effects of deer blood crystal on macrophagesLI Jing⁃Man ,PAN Yu⁃Chen ,XIA Xiao⁃Yu ,LI Dan ,DOU Huan ,HOU Ya⁃Yi .Nanjing University Medical School ,Nanjing 210093,China[Abstract ] Objective :To investigate the immunoregulating effect of deer blood crystal(DBC)on mouse macrophage line RAW264.7and to explore the possible mechanism.Methods :CCK⁃8assay was used to detect cell viability.Flow cytometry and immunofluo⁃rescence were used to detect the phagocytic index.qRT⁃PCR assay was used to detect the mRNA level of inflammatory cytokines iNOS,IL⁃1β,IL⁃6,ELISA assay was used to detect the contents of iNOS,IL⁃1β,IL⁃6in the supernatant of the culture medium.Western blot was used to detect the expression of protein in the NF⁃κB signaling pathway.Results :The cell viability of RAW 264.7cells with LPS stimulation was increased by DBC (P <0.05).The expression and release levels of inflammatory cytokines in DBC+LPS group were sig⁃nificantly lower than those in the LPS group (P <0.05).The expression of phospho⁃IKK⁃α/βand phospho⁃P65protein in DB+LPS group was lower than that in LPS group.The phagocytic ability of RAW 264.7cells against E.coli increased after DBCtreatment.Conclusion :DBC enhances the ability of macrophages to engulf E.coli,and inhibits macrophages releasing inflammatory factors induced by LPS via NF⁃κB signaling pathway without affecting cell viability.[Key words ] Deer blood crystal;Macrophages;Immunoregulation 自古以来,我们中国人就重视养生保健㊂宋元时期,以动物乳汁㊁血液为代表的液体补品开始流行,贵族间盛行喝鹿血, 养巨鹿日刺其血和酒以饮”㊂清朝皇帝喝鹿血,将其作为壮阳㊁养生补品来服用㊂鹿血晶系鹿血经炮制加工干燥后制得的产品㊂鹿血泛指鹿科动物梅花鹿和马鹿的血液,其主要化学成分包括蛋白质㊁氨基酸㊁酶类㊁维生素㊁脂肪酸及激素类等物质[1,2]㊂近年来的研究表明,鹿制品如鹿血㊁鹿角盘等具有延缓衰老㊁抗疲劳㊁增强免疫力㊁抗氧化㊁消炎镇静等功能[3,4]㊂固有免疫系统是机体低于外界病原体的有力屏障[5],巨噬细胞作为一种重要的固有免疫细胞,能够通过释放炎症因子,杀伤外来病原体并将其吞噬,保护机体免遭侵害[6]㊂对巨噬细胞的免疫功能进行适当调节能够帮助机体抵抗疾病[7]㊂本文旨在研究鹿血晶对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制,为鹿血晶作为保健中药材的应用提供科学依据㊂1 材料与方法1.1 材料 RAW264.7细胞系购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库;鹿血晶冻干粉来自苏州红冠庄国药股份有限公司(批号:S1810012);DMEM高糖培养基㊁青霉素㊁链霉素及FBS均购自美国Gibco;CCK⁃8试剂购自日本DOJINDO;一氧化氮检测试剂盒购自上海碧云天;IL⁃1βELISA检测试剂盒购自北京达科为生物技术有限公司;IL⁃6 ELISA检测试剂盒购自南京福麦斯生物技术有限公司;磷酸化IKK⁃α/β及磷酸化P65抗体均购自美国CST;GAPDH抗体购自美国Proteintech;FITC荧光素购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;反转录试剂购自南京诺唯赞生物科技有限公司㊂1.2 方法1.2.1 细胞培养 在生物安全柜中,将RAW 264.7细胞接种于直径60mm细胞培养皿中,加入3ml含10%FBS㊁1%双抗的DMEM培养基,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养,贴壁生长㊂每1~2d 换一次液,细胞数大于1×107ml-1时按1∶5或1∶6传代一次,使细胞保持圆整㊁透亮的形态,取对数生长期细胞用于实验㊂1.2.2 鹿血晶水溶液的制备 向20ml去离子水中加入1g鹿血晶冻干粉末,充分混匀后于37℃水浴加热至无明显颗粒状物质存在㊂再次混匀后用200目尼龙滤布过滤掉不溶物,滤液在超净台内用0.22μm孔径的滤器过滤,得到无菌鹿血晶水溶液㊂1.2.3 CCK⁃8实验 使用终浓度为0㊁31.25㊁62.5㊁125㊁250㊁500㊁1000㊁2000㊁4000μg/ml的鹿血晶水溶液处理RAW264.7细胞,1h后加入LPS (100ng/ml)刺激,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养㊂24h后,弃去上清,每孔加入10μl CCK⁃8试剂和90μl DMEM培养基,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养,至颜色变为橙黄色㊂放入酶标仪,于450nm 波长下测定吸光度A450,细胞活力计算方式为:细胞活力(%)=[A450(加药)-A450(空白)]/[A450 (空白对照)-A450(空白)]×100%㊂1.2.4 qRT⁃PCR实验 将RAW264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为50%~ 60%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS使终浓度为100ng/ml,培养24h后,Trizol法提取总RNA㊂RNA用适量DEPC水溶解,Nanodrop测定RNA浓度和纯度,依据反转录试剂说明书将其反转录成cDNA,程序为50℃15min㊁85℃5s㊁4℃∞㊂qRT⁃PCR实验操作如下:(1)10μl qRT⁃PCR反应体系:5μl cDNA㊁4μl PowerUp SYBR Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific)㊁1μl引物(正义链0.5μl㊁反义链0.5μl)㊂(2)qRT⁃PCR反应程序(采用三步法):①预变性:55℃2min㊁95℃10min;②循环40次,72℃时收集信号:95℃30s㊁60℃30s㊁72℃30s;③熔解曲线:95℃15s㊁60℃30s㊁95℃15s;采用Applied BioSystems7300 Sequence Detection System进行检测并分析,以GAPDH为内参,根据各个基因的Ct值结果,以2-ΔΔCt法计算,得到目的基因的相对表达量㊂1.2.5 一氧化氮检测和ELISA实验 将RAW 264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为50%~60%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS 使终浓度为100ng/ml㊂培养24h后,收集培养基, 7500g离心5min,小心吸取上清到新EP管中,依照试剂盒说明书对培养基上清中的一氧化氮㊁IL⁃1β和IL⁃6含量进行检测㊂1.2.6 Western blot实验 将RAW264.7细胞接种于6孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为80%~ 90%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS使终浓度为100ng/ml,培养30min后,提取总蛋白㊂上样20μl 于10%聚丙烯酰胺凝胶(SDS⁃PAGE),以80V恒压电泳,待溴酚蓝指示剂跑出浓缩胶后加压至120V,直到溴酚蓝泳出分离胶下缘㊂350mA恒流冰浴转移2h㊂将转膜后的PVDF膜放入5%BSA封闭液中低速摇床封闭2h㊂用洗膜缓冲液(tris buffered saline tween,TBST)高速摇床洗膜15min,连续4次㊂制作孵育袋,加入5%BSA稀释的一抗液,4℃低速摇床孵一抗过夜㊂用TBST洗膜4次后,浸泡于5% BSA稀释的二抗液,低速摇床孵二抗2h㊂用TBST 洗膜4次后,曝光仪曝光㊁拍照㊁软件分析图像㊂1.2.7 大肠杆菌吞噬实验 将RAW264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为70%~80%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为500μg/ml,培养1h后,每孔加入5×107个FITC标记的大肠杆菌,共同培育6h㊂收集细胞进行流式细胞术检测,用FITC的平均荧光强度(MFI)表示吞菌能力的大小,或固定㊁制片,于荧光共聚焦显微镜下观察㊁拍照㊂1.3 统计学处理 所有数据采用GraphPad Prism5 Demo(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA,USA)进行分析,以x±s表示㊂ANOVA和unpaired t⁃tests用于分析统计学意义,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 鹿血晶提高炎症状态下RAW 264.7细胞的细胞活力 使用不同浓度的鹿血晶处理RAW264.7细胞,而后加入LPS(100ng /ml)进行刺激,24h 后通过CCK⁃8法进行检测,结果如图1所示㊂与LPS 组相比,鹿血晶不会损伤炎症状态下巨噬细胞的细胞活力,且125~4000μg /ml 浓度范围内的鹿血晶对其活力均有明显提高㊂结果表明,一定浓度的鹿血晶能够提高LPS 刺激下的RAW 264.7细胞活力㊂2.2 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞炎症因子mRNA 的表达 通过qRT⁃PCR 实验检测鹿血晶对LPS 刺激下RAW 264.7细胞炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的mRNA 表达水平的影响,结果如图2所示㊂与LPS 组相比,低(250μg/ml)㊁中(500μg/ml)㊁高(1000μg /ml)三个浓度的鹿血晶水溶液均能够明显抑制LPS 诱导的RAW 264.7细胞中iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6表达水平的上调,且呈剂量依赖性㊂结图1 鹿血晶对RAW 264.7细胞活力的影响Fig.1 Effects of deer blood crystal on viability of RAW264.7cellsNote:**.P <0.01,***.P <0.001.图2 鹿血晶对RAW 264.7细胞内炎症因子表达的影响Fig.2 Effects of deer blood crystal on inflammatory cytokines expression of RAW 264.7cellsNote:*.P <0.05,**.P <0.01,***.P <0.001.果表明,鹿血晶能够抑制LPS 刺激下巨噬细胞炎症因子的表达㊂2.3 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞炎症因子的释放 收集鹿血晶和LPS 共同处理后RAW 264.7细胞的培养基上清,通过ELISA 实验检测鹿血晶对RAW 264.7细胞炎症因子一氧化氮(NO)㊁IL⁃1β㊁IL⁃6释放量的影响,结果如图3所示㊂与LPS 相比,低(250μg /ml )㊁中(500μg /ml )㊁高(1000μg /ml)三个浓度的鹿血晶水溶液均能够明显抑制RAW 264.7细胞在LPS 诱导下NO 和IL⁃6的释放,且呈剂量依赖性,但对IL⁃1β无明显作用㊂结果表明,鹿血晶能够抑制LPS 刺激下巨噬细胞炎症因子的释放㊂2.4 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞NF⁃κB 信号通路的活化 通过Western blot 实验检测鹿血晶对炎症状态下RAW 264.7细胞内NF⁃κB 信号通路蛋白表达的影响,结果如图4所示㊂与LPS 组相比,鹿血晶能够明显降低炎症状态下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK⁃α/β和磷酸化P65蛋白的表达,说明鹿血晶能够抑制LPS 引起的NF⁃κB信号通路图3 鹿血晶对RAW 264.7细胞内炎症因子释放的影响Fig.3 Effects of deer blood crystal on inflammatory cytokines release of RAW 264.7cellsNote:**.P <0.01,***.P <0.001.图4 鹿血晶对RAW 264.7细胞内NF⁃κB 相关蛋白表达的影响Fig.4 Effects of deer blood crystal on NF⁃κB⁃relatedproteins expression in RAW 264.7cellsNote:*.P <0.05,**.P <0.01,***.P <0.001.图5 鹿血晶对RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌能力的影响Fig.5 Effect of deer blood crystal on ability of RAW 264.7cells to phagocytose E.coliNote:**.P<0.01.的活化㊂结果表明,鹿血晶通过NF⁃κB信号通路影响巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂2.5 鹿血晶能够促进RAW264.7细胞对细菌的吞噬作用 利用500μg/ml鹿血晶预处理RAW264.7细胞后,加入标记FITC荧光素的大肠杆菌刺激,6h 后通过流式细胞术检测RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的能力,结果如图5A所示㊂与未加入鹿血晶而仅仅加入大肠杆菌刺激的E.coli组相比,鹿血晶能够明显提高RAW264.7细胞内FITC的平均荧光强度㊂免疫荧光试验得到了同样的结果,如图5B 所示㊂结果表明,鹿血晶能够提高巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力㊂3 讨论鹿血晶系鹿血经炮制加工干燥后制得的产品㊂鹿血具有抗衰老㊁补气补血㊁调节免疫㊁促进伤口愈合等功效[3,4]㊂本次研究,我们证明了一定浓度范围内的鹿血晶不会降低炎症状态下巨噬细胞系RAW264.7的细胞活力,甚至能够提高其细胞活力㊂这说明鹿血晶作为一种保健品,适量服用不会对身体产生毒性,具体服用剂量还需要通过动物实验以及药代动力学研究获得㊂巨噬细胞作为一种重要的固有免疫细胞,能够通过释放炎症因子,杀伤外来病原体并将其吞噬,保护机体免遭侵害[6]㊂免疫力低下的人如婴幼儿㊁老年人等更容易受到病原体的感染[8,9]㊂通过检测RAW264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力发现,鹿血晶能够促进巨噬细胞吞噬大肠杆菌,这意味着鹿血晶能够提高巨噬细胞的免疫防御能力㊂炎症是一把双刃剑,可控的炎症有利于抵御外来病原体的入侵,但持续的炎症往往会造成组织损伤㊁伤口无法愈合㊁发热,甚至演化成癌症[10,11]㊂因此,炎症发生与炎症消散之间需要建立微妙的平衡,必要时需要药物辅助㊂巨噬细胞是炎症的重要参与者,其过度激活会造成持续的炎症㊂本次研究中发现,鹿血晶能够显著抑制LPS诱导的炎症状态下RAW264.7细胞炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的表达与释放,说明鹿血晶具有抑炎作用㊂NF⁃κB信号通路是介导免疫细胞参与炎症反应的重要通路,它的活化能够引起免疫细胞产生和释放炎症因子[12,13]㊂Western blot实验结果表明,鹿血晶能够抑制炎症状态下RAW264.7细胞内的NF⁃κB信号的活化,说明鹿血晶能够通过抑制巨噬细胞NF⁃κB信号通路的活化从而发挥抑炎作用㊂综上,鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF⁃κB信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂参考文献:[1] Bah CS,Bekhit Ael D,Carne A,et position and biologicalactivities of slaughterhouse blood from red deer,sheep,pig and cattle[J].J Sci Food Agric,2016,96(1):79⁃89.[2] Bah CS,Carne A,McConnell MA,et al.Production of bioactivepeptide hydrolysates from deer,sheep,pig and cattle red blood cell fractions using plant and fungal protease preparations[J].Food Chem,2016,202:458⁃466.[3] Wu F,Li H,Jin L,et al.Deer antler base as a traditional Chinesemedicine:a review of its traditional uses,chemistry and pharmacology[J].J Ethnopharmacol,2013,145(2):403⁃415.[4] Huo YS,Huo H,Zhang J.The contribution of deer velvet antlerresearch to the modern biological medicine[J].Chin J IntegrMed,2014,20(10):723⁃728.[5] Chen S,Bonifati S,Qin Z.SAMHD1suppresses innate immuneresponses to viral infections and inflammatory stimuli by inhibitingthe NF⁃κB and interferon pathways[J].Proc Natl Acad Sci U SA,2018,115(16):E3798⁃E3807.[6] Artyomov MN,Sergushichev A,Schilling JD.Integrating immuno⁃metabolism and macrophage diversity[J].Semin Immunol,2016, 28(5):417⁃424.[7] 张海丽,游雷鸣,刘 慧,等.汉黄芩素对LPS和ATP联合诱导的巨噬细胞炎症反应的抑制作用[J].中国免疫学杂志,2019,35(9):1059⁃1063.Zhang HL,You LM,Liu H,et al.Wogonin⁃mediated inhibition of LPS and ATP⁃induced inflammation in mouse macrophages[J].Chin J Immunol,2019,35(9):1059⁃1063.[8] Plunkett A,Tong J.Sepsis in children[J].BMJ,2015,350:h3017.[9] Rowe TA,McKoy JM.Sepsis in older adults[J].Infect Dis ClinNorth Am,2017,31(4):731⁃742.[10] Murray PJ.Macrophage polarization[J].Annu Rev Physiol,2017,79:541⁃566.[11] Knipper JA,Ding X,Eming SA.Diabetes impedes the epigeneticswitch of macrophages into repair mode[J].Immunity,2019,51(2):199⁃201.[12] Mann M,Mehta A,Zhao JL,et al.An NF⁃κB⁃microRNAregulatory network tunes macrophage inflammatory responses[J].Nat Commun,2017,8(1):851.[13] 欧思琳,李茹冰.NF⁃κB在动脉粥样硬化疾病中的研究进展[J].中国免疫学杂志,2018,34(7):1095⁃1101.Ou SL,Li RB.Research progress of mechanism of NF⁃κB in ath⁃erosclerosis[J].Chin J Immunol,2018,34(7):1095⁃1101.[收稿2019⁃10⁃23 修回2019⁃12⁃28](编辑 刘格格)(上接第809页)[15] 赵凌杰,张蓓蓓.改善病情抗风湿药对类风湿关节炎患者血脂谱的影响[J].中国免疫学杂志,2018,34(4):636⁃641.Zhao LJ,Zhang BB.The effect of anti⁃rheumatism drugs on bloodlipid profile in patients with rheumatoid arthritis[J].Chin JImmunol,2018,34(4):636⁃641.[16] 董文哲,刘 健,忻 凌,等.雷公藤不同剂型改善类风湿关节炎患者免疫炎症指标的数据挖掘分析[J].免疫学杂志,2018,34(10):894⁃899,905.Dong WZ,Liu J,Xin L,et al.Data mining analysis of differentdosage forms of Tripterygium wilfordii to improve immuneinflammation in patients with rheumatoid arthritis[J].JImmunol,2018,34(10):894⁃899,905.[17] 曹玉冰.黄芪甲苷的药理作用及其机制的研究进展[J].现代药物与临床,2017,32(5):954⁃960.Cao YB.Advances in pharmacological action and mechanism ofastragaloside A[J].Modern Med Clin,2017,32(5):954⁃960.[18] 方秀桐,莫可元.蜈蚣的药理研究进展[J].中国医药指南,2015,13(18):32⁃34.Fang XT,Mo KY.Pharmacological research progress of centipede[J].Chin Med Guide,2015,13(18):32⁃34.[19] 刘 健,纵瑞凯,许 霞,等.基于新安医学理论的中药新风胶囊治疗类风湿关节炎的研究[J].风湿病与关节炎,2014,3(11):5⁃10,14.Liu J,Zong RK,Xu Xia,et al.Study on Xinfeng Capsule in thetreatment of rheumatoid arthritis based on Xin′an medical theory[J].Rheumatism Arthritis,2014,3(11):5⁃10,14. [20] 刘 健,陈瑞莲,朱怀敏,等.新风胶囊对类风湿关节炎贫血的疗效及机制研究[J].中国临床保健杂志,2010,13(3):225⁃229.Liu J,Chen RL,Zhu HM,et al.Study on the efficacy andmechanism of Xinfeng Capsule on rheumatoid arthritis and anemia[J].Chin J Clin Health,2010,13(3):225⁃229.[21] 刘 健,徐桂琴.新风胶囊治疗类风湿关节炎临床疗效的系统评价[J].中医药临床杂志,2011,23(6):502⁃508.Liu J,Xu GQ.Systematic evaluation of the clinical efficacy ofXinfeng capsule in the treatment of rheumatoid arthritis[J].JClin Chin Med,2011,23(6):502⁃508.[22] 林明方.大数据环境下关联规则挖掘研究[J].自动化与仪器仪表,2017,(6):36⁃37,40.Lin MF.Research on association rule mining in big dataenvironment[J].Autom Instrum,2017,(6):36⁃37,40. [23] 王爱平,王占凤,陶嗣干,等.数据挖掘中常用关联规则挖掘算法[J].计算机技术与发展,2010,20(4):105⁃108.Wang AP,Wang ZF,Tao SG,et al.Association rule miningalgorithms commonly used in data mining[J].Computer TechnolDev,2010,20(4):105⁃108.[24] 高铸烨,徐浩,陈可冀,等.用随机行走模型评价生脉注射液治疗冠心病的临床疗效[J].中西医结合学报,2008,6(9):902⁃906.Gao ZY,Xu H,Chen KJ.et al.Random walk model was used toevaluate the clinical efficacy of Shengmai injection in thetreatment of coronary heart disease[J].J Chin Integr Med,2008,6(9):902⁃906.[25] 郭锦晨,刘 健,忻 凌,等.基于随机行走模型评价芙蓉膏外敷联合中药内服对活动期类风湿关节炎患者炎症指标的影响[J].中国免疫学杂志,2018,34(6):854⁃860.Guo JC,Liu J,Xin L,et al.Evaluation of the effect of Furongointment combined with oral administration of traditional Chinesemedicine on inflammatory markers in patients with activerheumatoid arthritis based on random walk model[J].Chin JImmunol,2018,34(6):854⁃860.[收稿2019⁃01⁃31 修回2019⁃03⁃15](编辑 张晓舟)。
巨噬细胞极化及其信号通路的研究进展
巨噬细胞极化及其信号通路的研究进展杨正弦; 王涛; 苗春木【期刊名称】《《检验医学与临床》》【年(卷),期】2019(016)015【总页数】4页(P2252-2255)【关键词】巨噬细胞极化; 经典活化; 替代性活化; 信号通路【作者】杨正弦; 王涛; 苗春木【作者单位】重庆市綦江区中医院普外科重庆401420; 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010【正文语种】中文【中图分类】R329.28机体内巨噬细胞来源广泛，由血液中的单核细胞、骨髓中的造血干细胞和胸腺内的早期T淋巴细胞分化而来，其中血液中的单核细胞穿出血管进入结缔组织分化形成巨噬细胞是最主要的途径。
巨噬细胞分布于全身组织，具有组织特异性，包括存在于肝组织中的KCs(Kuppfer细胞)、肺组织中的肺泡巨噬细胞、脑组织中的小胶质细胞、脂肪组织中的脂肪组织巨噬细胞、骨组织中的破骨细胞和腹腔中的腹腔巨噬细胞等。
巨噬细胞作为机体固有免疫的重要组成部分，具有吞噬和杀灭病原微生物、处理并提呈抗原、介导特异性免疫应答、清除衰老细胞、修复损伤的功能，同时也是维持自身代谢稳定的关键因素[1]。
巨噬细胞还具有在炎症因子诱导下分化异常的特点，称之为巨噬细胞的极化。
巨噬细胞的极化所涉及的诱导因子、信号通路、转录因子相互交叉，极为复杂，且在特殊条件下巨噬细胞极化的两个极端可以相互转化，构成了一种动态变化的过程。
1 巨噬细胞极化的特点1.1 巨噬细胞的M1型、M2型极化巨噬细胞的极化可分为两个极端，即经典活化(M1型)和替代性活化(M2型)。
目前在构建巨噬细胞极化模型时，多通过使用细菌脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞构建巨噬细胞M1型极化的细胞模型，而白细胞介素-4(IL-4)刺激巨噬细胞则可使巨噬细胞分化为M2型巨噬细胞[2]。
处于休眠状态下的巨噬细胞在干扰素-γ(IFN-γ)和LPS刺激下极化为M1型巨噬细胞，产生包括IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)在内的促炎因子和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、C-C motif 趋化因子2-4(CCL2-4)、C-X-C motif 趋化因子配体8-11(CXCL8-11)等趋化因子，介导强烈的炎性反应和Th1免疫应答。
巨噬细胞的极化及其调控的信号分子和转录因子_鲁宏伟
［8 ］ 核细胞可以转变为调节性亚群以抑制 T 细胞反应 。 但是，
进行了定义并分为以下 3 个表型： 经典活化巨噬细胞（ classically activated macrophages，CAM，等同于 M1 型巨噬细胞） 、 替代性活化巨噬细胞（ alternative activated macrophages，AAM， 相当于 M2a 型巨噬细胞） 、调节性巨噬细胞（ regulatory macrophages，ＲMs，相当于 M2b / c 型巨噬细胞） 。 Mosser 等认为巨
自噬在巨噬细胞极化中的作用研究进展
附属第九人民医院( 北院) 内分泌科,上海 201900 [ 作者简介] 孔祥歆(1989 - ) ,女,硕士研究生.
( ROS) 和诱导型一氧化氮合成酶( iNOS) ,并分泌单核细胞 趋化蛋白 1( MCP鄄1) 、IL鄄8 等趋化因子吸引 Th1 淋巴细胞,促 进强烈的 Th1 免疫反应。 M2 型巨噬细胞还可被细分由 IL鄄4 或 IL鄄13 诱导的 M2a 型,免疫复合物诱导的 M2b 型及 IL鄄10、 TGF鄄茁 或糖皮质激素等诱导的 M2c 型[15] 。 M2 型巨噬细胞
NF鄄资B 在药理或基因水平抑制自噬,可以解除 NF鄄资B 激 活,并使已经极化为 M2 型的巨噬细胞产生高水平的 M1 型 细胞因子。 近来有研究[24 - 25] 证明,肝癌细胞来源的 Toll 样 受体 2 相关配体可以使 RELA 泛素化,在巨噬细胞内形成可 被聚集体样结构 SQSTM1 / p62 介导的自噬分解,通过选择性 的自噬控制 RELA / NF鄄资Bp65,使巨 噬 细 胞 向 M2 亚 型 方 向 极。 这些研究特别指出,NF鄄资B 在巨噬细胞极化中的作用是 由 SQSTM1 / p62 介导的选择性自噬所控制的。 在病原体感 染或肿瘤存在的情况下,通过 LPS 等病原体相关分子模式 ( PAMP) 借 TLR4 或 IL鄄1 信 号 可 激 活 IKK 复 合 物, 通 过 STAT1 和 NF鄄资B 两条关键炎症信号通路调节巨噬细胞的 M1 活化。 而另有研究[26] 发现 NF鄄资B 通路活化不仅参与炎症发 展,也在炎症 消 退 和 诱 导 巨 噬 细 胞 凋 亡 中 发 挥 作 用, NF鄄资B 通路活化剂 IKK 能直接抑制 STAT1 活性,并且可促进肿瘤 相关巨噬细胞向 M2 极化。 然而,NF鄄资B 在调节巨噬细胞极 化和功能中的作用是复杂的,并且巨噬细胞极化和功能本身
《雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用》
《雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用》一、引言膀胱癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。
近年来，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤进展中的作用受到了广泛关注。
其中，Nrf2（核因子E2相关因子2）信号通路在调节巨噬细胞功能方面发挥着重要作用。
雷帕霉素作为一种重要的免疫调节药物，被证实能够通过激活Nrf2信号通路来增强肿瘤相关巨噬细胞的功能。
本文旨在探讨雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用。
二、文献综述（一）膀胱癌与肿瘤相关巨噬细胞膀胱癌的发生与肿瘤微环境中的免疫细胞密切相关，其中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤进展中发挥着重要作用。
TAMs 能够分泌多种生长因子、细胞因子和酶类等，促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。
（二）Nrf2信号通路与巨噬细胞功能Nrf2信号通路是一种重要的抗氧化和抗炎信号通路，能够调节巨噬细胞的极化和功能。
在巨噬细胞中，Nrf2能够通过调控抗氧化酶和抗炎因子的表达，从而发挥抗氧化和抗炎作用。
此外，Nrf2还能够促进巨噬细胞的极化，使其向M2型转化，进一步增强其抗肿瘤功能。
（三）雷帕霉素与Nrf2信号通路的关联雷帕霉素是一种免疫调节药物，能够通过抑制mTORC1（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1）来发挥其作用。
近年来研究发现，雷帕霉素能够激活Nrf2信号通路，从而调节巨噬细胞的功能。
三、研究内容（一）实验设计本研究采用体外和体内实验相结合的方法，探究雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用。
首先，通过体外实验观察雷帕霉素对巨噬细胞中Nrf2信号通路的影响；然后，通过体内实验观察雷帕霉素对膀胱癌肿瘤生长和转移的影响及其与巨噬细胞的关系。
（二）实验方法与结果1. 体外实验：采用巨噬细胞系作为研究对象，观察雷帕霉素对巨噬细胞中Nrf2信号通路的影响。
结果显示，雷帕霉素能够显著激活Nrf2信号通路，促进巨噬细胞的极化和功能增强。
巨噬细胞在动脉粥样硬化中作用的研究进展
巨噬细胞在动脉粥样硬化中作用的研究进展黄影;朱丽华【期刊名称】《实用心脑肺血管病杂志》【年(卷),期】2017(025)005【摘要】Atherosclerosis (AS)is the main pathological basis of cardiovascular disease,macrophages,lymphocytes,vascular endothelial cells and smooth muscle cells play important roles in the genesis and development of AS.In recent years,researches about role of macrophage autophagy and miRNA in regulating activity of macrophages in the genesis and development of AS are common.This paper reviews the progress on the role of macrophages in AS.%动脉粥样硬化(AS)是心血管疾病的主要病理基础,而巨噬细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞等在AS的发生发展过程中发挥着重要作用.近年来,关于巨噬细胞自噬及miRNA对巨噬细胞的活性调节作用等在AS发生发展过程中作用的研究报道较多.本文主要综述了巨噬细胞在AS中作用的研究进展.【总页数】4页(P1-4)【作者】黄影;朱丽华【作者单位】430060湖北省武汉市,武汉大学人民医院心内科;430060湖北省武汉市,武汉大学心血管病研究所【正文语种】中文【中图分类】R543.5【相关文献】1.巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中作用的研究进展 [J], 密泗宇;周影;王静巧;童茂清;陈晓敏2.巨噬细胞极化在冠状动脉粥样硬化发生发展中的作用研究进展 [J], 孟董超;王东;宋娟;卢彦珍3.巨噬细胞在动脉粥样硬化及血管炎症中作用的研究进展 [J], 代长良;田野4.巨噬细胞自噬在系统性红斑狼疮早发动脉粥样硬化中作用的研究进展 [J], 莫海露;莫汉有5.动脉粥样硬化中巨噬细胞介导胞葬作用的研究进展 [J], 廖思聪;于杨;王大新;秦树存因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术分析PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞的表型特征
流式细胞术分析PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞的表型特征彭卓颖;李想;丛喆;薛婧【摘要】目的用流式细胞术明确单独使用PMA诱导THP-1细胞分化而来的巨噬细胞的分化情况.方法首先用PMA刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,再分别使用LPS、IFN-γ和IL-6将细胞诱导为M1型巨噬细胞,用IL-4、IL-13和IL-6将细胞诱导为M2型巨噬细胞.显微镜下观察三种细胞的形态学改变,并用流式细胞术检测各细胞主要CD分子表达的差异.结果当THP-1分化为巨噬细胞后变为贴壁生长,细胞形态呈较规则的圆形或椭圆形;M1和M2细胞形态不规则,细胞突起较明显,细胞颗粒度较大.巨噬细胞表面与抗原提呈功能相关的CD分子的表达均较低,大部分呈阴性;而M1和M2细胞表面这些CD分子的表达均较高.结论单独使用PMA刺激THP-1细胞所分化而来的巨噬细胞抗原提呈能力较弱,基本处于静息状态.%Objective To identify the characteristics of the subtype of PMA-induced THP-1 macrophages by flow cytometry analysis. Methods THP-1 monocytic cells differentiate into macrophages promoted by PMA, then induced into M1 and M2 by adding different cytokines, such as LPS,IL-6 and IFN-γ for THP-1-M1, IL-4,IL-13 and IL-6 for THP-1-M2. Morphology of cells were observed under a microscope and the expression of CD14, CD68, CD16, CD80, CD86, CD163, CD206, CD209, CD83, CD1a, CD11c, HLA-DR were detected by flow cytometry. Results The macrophages stimulated by PMA became adherent;THP-1-M1 and THP-1-M2 lost their spherical morphology, appeared more irregular with many obvious projections. The expression of CD83, CD1a, CD11c, HLA-DR which had the function ofantigen presenting on the surface of THP-1-Mφwere very low, and most of them were negative, but those of THP-1-M1 and THP-1-M2 were very high. Conclusions The macrophages differentiated from THP-1 stimulated by PMA are weak in antigen presenting function.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)010【总页数】7页(P10-15,22)【关键词】THP-1;巨噬细胞;佛波酯;流式细胞术【作者】彭卓颖;李想;丛喆;薛婧【作者单位】北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021【正文语种】中文【中图分类】R-33巨噬细胞(macrophage，Mφ)是一类由血液中单核细胞分化而来的固有免疫细胞，在机体免疫反应中发挥重要作用[1]。
肿瘤相关巨噬细胞的研究进展和临床应用
肿瘤相关巨噬细胞的研究进展和临床应用李佳妮;王卓;孙瑞;杨勇【摘要】Macrophage which surrounds tumor cells is termed tumor associated macrophage(TAM). TAM takes part in tumorinitiation,invasion,metastasis and suppression of anti - tumor immune response. The amount of TAM,to a certain de-gree,can predict the prognosis of cancer patients. So far,some new medicine had been used in clinical treatment targeting TAM.%浸润在肿瘤细胞周围的巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。
肿瘤相关巨噬细胞能够促进肿瘤发生、侵袭与转移、及抑制机体抗肿瘤免疫等。
肿瘤相关巨噬细胞的数量在一定程度上可作为判断肿瘤患者预后的指标。
目前，已有一些针对肿瘤相关巨噬细胞实现抗肿瘤作用的新药在临床投入使用。
【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2016(035)004【总页数】3页(P237-239)【关键词】肿瘤相关巨噬细胞;肿瘤微环境;分子机制;临床应用【作者】李佳妮;王卓;孙瑞;杨勇【作者单位】中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198【正文语种】中文【中图分类】R730.3肿瘤相关巨噬细胞（Tumor associated macrophage，简称TAM）是泛指在肿瘤发生过程中浸润于肿瘤并影响其发展转归的巨噬细胞［1－2］。