人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
dd小鼠干细胞因子肥大细胞生长因子(SCFMGF)酶联免疫分
小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子（SCF/MGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.00156pmol/ml–0.1pmol/ml最低检测限：0.0004pmol/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠SCF/MGF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中SCF/MGF含量。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述干细胞因子（stem cell factor，SCF）又称肥大细胞生长因子（mast cell growth factor，MGF），最初是从Buffalo大鼠肝细胞系中cDNA克隆成功，在小鼠MGF基因位于第10号染色体SL 基因，是C-kit的配体（C-kit ligand，KL），因此也称之造血生长因子KL。
SCF主要由肝细胞产生。
人和小鼠SCF分别由248和220个氨基酸组成，约有80％同源性。
SCF可以可溶性和膜结合两种形式存在，可能与SCF mRNA剪接或蛋白酶切割位点不同有关。
在体内SCF以非共价相连同源二聚体形式存在，单体分子量约31kDa，单体中含有4个半胱氨酸残基，形成分子内二硫键。
糖基对SCF生物学活性并非必需。
SCF受体即是C-kit，成熟SCF 受体分子由953个氨基酸组成,其中胞膜外区497个氨基酸，属免疫球蛋白超家族成员，组成5个Ig样的结构域，与M-CSFR、PDGFR有较高的同源性；穿膜区由23个疏水性氨基酸组成；胞浆区433个氨基酸，含有酪氨酸激酶和自身磷酸化的结构域。
SCFR表达于多种干细胞、集落形成细胞和肥大细胞等。
注射用重组人粒细胞集落刺激因子G-csf详细说明书与重点
注射用重组人粒细胞集落刺激因子英文名：Recombinant Human Granulocyte Colony Stimulating Factor for Injection汉语拼音：Zhu She Yong Chong Zu Ren Li Xi Bao Ji Luo Ci Ji Yin Zi【性状】本药为含有174个氨基酸的糖蛋白（分子量约20，000道尔顿），此糖蛋白由来源于人口腔底细胞mRNA的粒细胞集落刺激因子cDNA导入中华仓鼠卵巢细胞后产生。
本药除活性成分外尚含有下列添加物：L-精氨酸10 mg，L-苯丙氨酸10 mg，L-蛋氨酸1 mg，单十二酸聚氧乙烯山梨聚糖0.1 mg，D-甘露醇25 mg。
本药为白色粉末或块状，装于无色透明小瓶中（冻干粉针剂）。
pH值为6.0-7.5。
本药附带溶解液，每安瓿中装有注射用水(日本药局方)1 mL。
用附带溶解液溶解后的渗透压约为1-2（对生理盐水的比）。
【适应症】1.骨髓移植时促进中性粒细胞数的增加。
2.预防抗肿瘤化疗药物引起的中性粒细胞减少症及缩短中性粒细胞减少症的持续期间：实体瘤；急性淋巴细胞白血病。
3.骨髓增生异常综合征的中性粒细胞减少症。
4.再生障碍性贫血的中性粒细胞减少症。
5.先天性及原发性中性粒细胞减少症。
6.免疫抑制治疗（肾移植）继发的中性粒细胞减少症。
【规格】50ug/支100ug/支250ug/支【用法用量】1.骨髓移植时促进中性粒细胞数的增加成年患者及小儿患者：通常，在骨髓移植后次日至第5天后开始。
静脉点滴，5ug/kg，每日1次。
2.预防抗肿瘤化疗药物引起的中性粒细胞减少症及缩短中性粒细胞减少症的持续期间实体瘤（成年患者及小儿患者）：通常，在抗肿瘤化疗药物给药结束后次日开始。
皮下注射2ug/kg，每日1次。
由于潜血等原因导致皮下注射困难时，可静脉注射（含静脉点滴）5ug/kg，每日1次。
急性淋巴细胞白血病（成年患者及小儿患者）：通常，在抗肿瘤化疗药物给药结束后次日开始。
人C反应蛋白CRP酶联免疫分析试剂盒使用方法
人C-反应蛋白(CRP)酶联免疫分析试剂盒使用方法检测范围：96T30μg/L -800μg/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中C-反应蛋白(CRP)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人C-反应蛋白(CRP)水平。
用纯化的人C-反应蛋白(CRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入C-反应蛋白(CRP)，再与HRP标记的C-反应蛋白(CRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的C-反应蛋白(CRP)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中C-反应蛋白(CRP)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
人巨噬细胞炎症蛋白2ELISA操作方法试剂盒使用说明书
人巨噬细胞炎症蛋白2ELISA操作方法试剂盒使用说明书检测范围：96T15pg/ml-400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）水平。
用纯化的人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2），再与HRP标记的巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
单核-巨噬细胞集落刺激因子
单核－巨噬细胞集落刺激因子
（一）粒细胞集落刺激因子
粒细胞集落刺激因子（G-CSF）是由单核－巨噬细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞全成的多肽，分子量为19kD。
G-CSF能刺激骨髓粒细胞前体，使之分化增殖为成熟粒细胞的集落。
G-CSF还能作用于完全成熟的终末粒细胞，提高中性粒细胞的吞噬能力，促进超氧化物的产生。
临床上G-CSF可用于各种中性粒细胞减少症的治疗。
G-CSF作为肿瘤化疗的辅助制剂，在化疗前的适当时机给予，可使髓性白细胞进入细胞周期，对大剂量化疗药物的治疗更敏感；在化疗中或化疗结束后给予，可以缩短骨髓抑制期。
（二）单核－巨噬细胞集落刺激因子
单核－巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）是一种40kD的多肽，主要来源于单核－巨噬细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞。
其功能主要是刺激骨髓单核－巨噬细胞的前体细胞，使之分化成熟，形成单核细胞集落。
M-CSF可刺激骨髓内单核－巨噬细胞集落的形成，后者又能分泌G-CSF和GM-CSF等，形成一个逐渐放大的细胞因子网络；同时可促进骨髓生成中性粒细胞，使细胞数量增加的同时，细胞功能也增强。
M-CSF 亦能作用于终末细胞，增强厉熟单核－巨噬细胞的功能。
M-CSF具有较强的造血作用，已试用于肿瘤化疗后多种血细胞减少症，可以加速化疗所致的中性粒和血小板减少的恢复，而且副作用减轻。
M-CSF还能增加单核细胞对多中白血病细胞株的反应性，因此已试用于治疗前白血病状态的骨髓异型性征候群。
小鼠集落刺激因子(CSF)酶联免疫分析
小鼠集落刺激因子(CSF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T50ng/L – 1200ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中集落刺激因子(CSF)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠集落刺激因子(CSF)水平。
用纯化的小鼠集落刺激因子(CSF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入集落刺激因子(CSF)，再与HRP标记的集落刺激因子(CSF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的集落刺激因子(CSF)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠集落刺激因子(CSF)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺 激因子 hGM-CSF(P Pichia)
仅供科研使用，不能应用于人体
技术咨询电话：400-600-0940
说明：
本产品由真核表达系统（P. Pichia ）重组表达制备，由127个氨基酸残基组成的单链糖蛋白，经SDS-PAGE检 测，分子量为26～32 kDa之间。rHGM-CSF和天然的HGM-CSF不同，在23位点上有一个Arg对Leu的替换，另外在 糖配基上可能也有所不同。
质量控制：
生物学活性：人TF-1细胞剂量依赖性增殖实验测定 ED50 小于 0.2 ng/ml, 相当于比活性为5.0 x 106 IU/ mg。 纯度： 由以下方法测定纯度大于95.0%：
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺 激因子 hGM-CSF(P. Pichia)
SinoBio目录号：C040
近岸蛋白质科技有限公司
地址：上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路720号2号楼 电话：021-50798060 邮箱：product@
背景：
GM-CSF最初被定义为一种可以维持粒-巨噬细胞祖细胞体外集落培养的生长因子。它可以由多种不同类型的 细胞（包括活化T细胞，B细胞，巨噬细胞，肥大细胞，内皮细胞和成纤维细胞等）产生，并对免疫细胞因子和炎 性刺激等作出应答。除了粒-巨噬细胞祖细胞外，GM-CSF也是红系祖细胞，巨核系祖细胞和嗜酸细胞祖细胞的生 长因子。在成熟的造血细胞，单核/巨噬细胞和嗜酸细胞中，GM-CSF是一个存活因子，可以激活这些细胞的效应子 功能。有研究表明，在非造血细胞中GM-CSF也有一定的功能，它可以诱导人内皮细胞的迁移和增殖。另外，GMCSF还可以激活很多癌细胞系包括骨样肉瘤细胞系，癌细胞系以及腺癌细胞系的增殖。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ复溶：
建议将冻干rHGM-CSF 溶解在灭菌超纯水（18MΩ-cm）中，浓度不低于100μg/ml，以待进一步稀释至工作浓 度。
高效大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E04570r检测范围： 1.56 pg/ml- 100 pg/ml最低检测限：0.39 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠GM-CSF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期： 6 个月预期应用：ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中GM-CSF 含量。
说明试剂盒保存：-20 C（较长时间不用时）；2-8 C（频繁使用时）。
浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗GM-CSF 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗GM-CSF 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的GM-CSF 呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96 孔）。
2.标准品（Standard ）：2瓶（冻干品）。
样品稀释液(Sample Diluent )： 1 20ml/瓶。
x3.4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent ) : 1 10ml/瓶5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent ) : 1为Oml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody ) : 1 x 120 湖/ (1: 100)。
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin ) : 1x 120喷(1：100)。
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人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人M-CSF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中M-CSF 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）又称为集落刺激因子-1（CSF-1），是造血系统重要的细胞因子。
M-CSF主要调节单核-巨噬细胞系细胞的生长、增殖和分化。
多种细胞均可产生M-CSF，包括成纤维细胞、子宫内膜中分泌型上皮细胞、骨髓基质细胞、脑星状细胞、成骨细胞；LPS等激活的巨噬细胞、B细胞、T细胞和内皮细胞等；此外，多种肿瘤细胞如原粒细胞性白血病、淋巴母细胞性白血病、肺腺癌细胞、乳腺癌和卵巢癌等。
人和小鼠天然M-CSF为糖蛋白，由二硫键连接的同源双体，分子量40～90kDa。
人M-CSF前体长度554～256个氨基酸不等，均有32个氨基酸的信号肽和23个氨基酸的穿膜部分。
膜结合型M-CSF表达在单层培养的成纤维细胞，可刺激表达M-CSF受体的巨噬细胞的粘附和增殖。
成熟M-CSF分子靠近N端150氨基酸在与M-CSF受体结合中起关键作用，人和小鼠M-CSF分子这个区域结构高度保守，其同源性达80％。
人和小鼠M-CSF基因定位于5对染色体，与GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-13和酸性FGF基因密切连锁。
M-CSF受体为高亲和力，表达于循环的单核细胞和组织巨噬细胞以及胎盘滋养层细胞。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗M-CSF抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗M-CSF抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的M-CSF呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。
稀释的过程中，应做好详细的记录。
最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释1000 pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，15.6pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制500pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1000pg/ml的上述标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。