溴甲酚绿结合法
血清白蛋白测定标准操作规程
血清白蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清白蛋白测定（缩写ALB）;组合项目申请：血生化中肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2。
1标本采集2。
1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2。
1。
2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2。
1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2。
1。
5下列标本为不合格标本2。
1。
5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本,或少于0。
1ml的血清或血浆。
2。
1。
5。
2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2。
1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的.2。
1。
5。
4其他如标识涂改、标本试管破裂等.2。
2标本保存2.2。
1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清.2.2.2标本保存时间：室温(15～25℃)下可稳定一周，普通冰箱中（2～8℃）稳定一个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.3标本采集的注意事项2.3。
1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2。
3.2不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理血清中的白蛋白与溴甲酚绿在PH=4.2的条件下结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，通过在630nm处测定其吸光度可得出白蛋白的含量。
PH=4.2白蛋白 + 溴甲酚绿—-—-—-------———绿色复合物4 试剂及其他用品4.1试剂:溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品.4。
2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定14天.开盖后避免污染。
变质指示：当试剂有浊度时,表明有细菌污染，不能继续使用.4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备4.4试剂盒主要成分:缓冲液（pH 4.2）50 mmol/L，溴甲酚绿0.25 mmol/L,其中含有稳定剂与保护剂＜0.1%。
碱度的测定
碱度的测定碱度表示水样中与强酸中的氢离子结合的物质的量。
它能反映出废水在厌氧处理过程中所具有的缓冲能力。
一般常用溴甲酚绿-甲基红指示剂滴定法测定。
溴甲酚绿-甲基红指示剂滴定法：1、原理以溴甲酚绿-甲基红作指示剂滴定水样碱度时，终点由淡蓝色变为淡粉红色时，报告时终点pH值可记为4.6。
2、仪器、药品酸式滴定管、锥形瓶、滤纸、漏斗(1)溴甲酚绿-甲基红指示剂：称取100mg溴甲酚绿和20mg甲基红溶于100ml 95%乙醇中。
(2)0.1mol/L(1/2Na2S2O3)溶液：称取0.79g硫代硫酸钠溶于水中，稀释至100ml。
(3) 0.0200mol/L碳酸钠标液：称取0.53g(于250℃烘干4h)的无水碳酸钠，溶于少量无二氧化碳水中，移入500ml 容量瓶中，稀释至标线，混匀。
贮于聚乙烯瓶中，保存一周。
(4)0.0200mol/L盐酸标准溶液：取1.66ml浓盐酸定容至1000ml，以碳酸钠溶液标定。
吸取25.00ml碳酸钠标液于250ml锥形瓶中，加无二氧化碳水稀释至100ml，加入3滴甲基橙指示剂，用盐酸标液滴定至由桔黄色刚变成桔红色，记录用量V 。
计算：()Vl mol HCl 0200.000.25/⨯= 3、测定步骤：(1)取20ml 过滤水样于锥形瓶中，加入100ml 无二氧化碳水；(2)加入3滴溴甲酚绿-甲基红指示剂和1滴硫代硫酸钠溶液，用盐酸标准溶液滴定至恰好出现淡红色，记录消耗盐酸的量。
计算：()()501000/201⨯⨯⨯-=V C V V l mg 碱度 1V —试样消耗盐酸标液的体积，ml;2V —试样的体积，ml0V —空白对照消耗盐酸标液的体积，mlC —盐酸标液的浓度，mol/L50—21碳酸钙的摩尔质量碱度的测定碱度表示水样中与强酸中的氢离子结合的物质的量。
它能反映出废水在厌氧处理过程中所具有的缓冲能力。
一般常用溴甲酚绿-甲基红指示剂滴定法测定。
测定步骤：取20ml 过滤水样于锥形瓶中，加入3滴溴甲酚绿-甲基红指示剂，用0.0200mol/L 盐酸标准溶液滴定至恰好出现淡红色，记录消耗盐酸的量。
综合实验-主要肝功检测指标11检
实验三 血清蛋自质的乙酸纤维素薄膜电泳
[原理] 血清中各主要蛋白质的等电点均低于 pH8．6，在 pH8．6 的碱性缓冲液中均带有负电荷，在 电场中向正极泳动。因血清中各蛋白质的等电点不同，带电荷量的多少有差异，加之各蛋白质的 分子量大小也不一样，所以在同一电场中的电泳迁移率也就不同。带电荷多、分子量小者，泳动 较快；反之则较慢。如此可将血清蛋白按其泳动速度分成五条主要区带，从正极端起依次为白蛋 白、α1 球蛋白、α2 球蛋白、β-球蛋白及 γ-球蛋白。 以醋酸纤维素薄膜(CAM)为支持介质，电泳分离后经染色处理，可展示出清晰的蛋白质电泳 图谱。由于染色时染料与蛋白质的结合与蛋白质的量成正比，因此将各蛋白质区带剪下，分别用 一定量的 NaOH 稀溶液洗脱下来，即可进行比色，测定出各蛋白质区带的相对含量。也可用一定 的有机溶剂使 CAM 溶解制成透明膜而用光密度计进行扫描定量。 [试剂] 1．CAM 2cm X 8cm。 2．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，离子强度 0.06) 称取巴比妥 2.21g、巴比妥钠 12.36g 溶于 500ml 蒸馏水中，加热溶解，待冷却至室温 后，用蒸馏水稀释至 1000ml。 3．染色液 (1) 丽春红 S 染色液：称取丽春红 S 0.4g,三氯 醋酸 6g，用蒸馏水溶解并稀释至 100ml。 (2) 氨基黑 10B 染色液：称取氨基黑 10B 0.1g，溶于 20ml 无水乙醇中，加冰醋酸 5ml、 甘油 0.5ml，使其溶解。另取磺基水杨酸 2.5g，溶于 74.5ml 蒸馏水中。再将二液混合摇 匀。 [操作步骤]
血清白蛋白(g/L)= [注意事项]
1．BCG 是一种 pH 指示剂，变色域为 pH3．8(显黄色)～5．4(显蓝绿色)，因此控制反应液的 pH 是本法测定的关键。 2．配制 BCG 试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥珀酸盐缓冲液的校正曲 线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。 3．试剂中的 Brij—35 也可用其他表面活性剂代替，如吐温一 20 或吐温一 80，终浓度为 2ml/L 灵 敏度和线性范围不变。 4．当 60g/L 的白蛋白标准液与 BCG 结合后，溶液光径 1.0ml，在 630nm 处测定的吸光度应为 0.811± 0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。 5．蛋白质标准是一个复杂问题。实验证明，BCG 不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质 成分呈色，其中以 αl—球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白稍慢。由 于在 30s 内呈色对白蛋白特异，故 BCG 与血清混合后，在 30s 读取吸光度，可明显减少非特异性 呈色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清作标准。 [评价] 1．本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血无干扰，既可手工操作，也能自动化分析，是 目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。 2．本法线性范围为 10～60g/L,RCV＜4％。但该法与溴甲酚紫法比较，对血清白蛋白特异性稍 差。 3．血清白蛋白测定法主要有色氨酸含量法、染料结合法、电泳法、免疫化学法和电化学测定法。
实验九 血浆蛋白测定
• 清蛋白 试剂 1.琥珀酸缓冲液75mmol/L 2.溴甲酚绿 3.Brij35(30%)ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ.15mmol/L 主要性能指标 1.试剂空白吸光度A ≤0.25
2.准确性：相对偏差不超过±4% 3.重复性：变异系数≤5% 4.批间差： ≤3%
5.线性误差：10-60不超过±10% 6.校准液溯源性：校准液的溯源于ROCHE公司的 Calibrator for automated systems中清蛋白校 正血清 注意事项 1.如果样品中蛋白浓度超过60g/L用生理盐水稀释 样品，重新测定，结果乘以稀释倍数。 2.本产品在2-8度条件下储存
实验九 血浆蛋白测定
一、血清总蛋白测定
（一）凯氏定氮法（Kjeldahl method） （二）双缩脲法 （三）酚试剂法（phenol ragent method） （四）紫外分光光度法 （五）染料结合法 (六）比浊法
二、血清清蛋白测定
溴甲酚绿（bromcresol green，BCG）和 溴甲酚紫（bromcresol purple，BCP）
实验操作：
TP ： 蒸馏水 标准液 血清 试剂 空白 100μl 标准 100μl 5ml 5ml 测定
100μl 5ml
37℃，10min 540nm比色
ALB： 蒸馏水 标准液 血清 试剂 空白 20μl 标准 20μl 4ml 4ml 测定
20μl 4ml
混匀 5min 630nm比色
• 总蛋白
试剂
氢氧化钠 0.6mmol/L 酒石酸钾钠32mmol/L 碘化钾20mmol/L 硫酸铜12mmol/L
主要性能指标
1.试剂空白吸光度在546处≤0.20 2.准确性相对偏差不超过±4% 3.重复性：变异系数≤5% 4.批间差： ≤3%
BCG试剂对血清白蛋白检测影响因素的探索_
关键词：血清白蛋白；BCG试剂；吸光度；比色法
人血浆白蛋白（albumin ,ALB）是血浆含量最多的蛋白质［1］，是血浆中多种物质重要的结合物与运输蛋白，并且是维持血浆胶体渗透压的重要组分，临床上测定血清白蛋白具有重要意义[2]。因此，其检测是临床实验室的常规检测项目之一[3]，其常用检测的方法为溴甲酚绿法和溴甲酚紫法[4]。目前BCG法是临床实验室应用最广泛的一种测定清蛋白的染料结合法[5], ALB作为一种阳离子,结合阴离子染料BCG形成蓝绿色复合物,在628 nm处有吸收峰,其吸光度与ALB浓度成正比[6]。且BCG试剂是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（黄色）-5.4（蓝色）[7]，试剂的PH改变可使染料与白蛋白结合率改变。溴甲酚绿（BCG）法因其灵敏度高、操作简单、重复性好，能自动化等优点被广泛应用于临床实验室[8]。按姜旭淦主编的第2版《临床生物化学检验实验指导》可知，显色时间与PH值改变对溴甲酚绿法测定血清白蛋白结果有显著的影响。据文献显示BCG浓度对清白蛋白测定准确度也有明显的影响[9]。但目前还没有文献表明BCG试剂在室温条件下储存时间长短因素对血清白蛋白的检测结果是否有影响，为此我们设计了BCG试剂的贮存液与应用液在室温条件下储存时间对血清白蛋白测定进行探究，通过研究表明BCG试剂在室温条件下储存2年对血清白蛋白测定结果没有太大的影响。实验研究报告如下：
血清总蛋白和血清白蛋白的测定1
【注意事项】
• 1.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠 以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性； 子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘 化钾能防止两价铜离子还原 能防止两价铜离子还原。 化钾能防止两价铜离子还原。 • 2.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓 由于各种血清蛋白质的分子量不同， 由于各种血清蛋白质的分子量不同 度不宜用mol/L表示。 表示。 度不宜用 表示 • 3.高脂，黄疸及溶血标本应做血清空白对照来 高脂， 高脂 校正误差。含脂类极多的血清， 校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试 剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行 剂后会出现混浊，可用乙醚 抽提后再进行 比色。 比色。 • 4.在浓度小于 在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。 时呈良好的线性关系。 在浓度小于 时呈良好的线性关系
实验十一 血清白蛋白的测定 溴甲酚绿法） （溴甲酚绿法）
【实验目的】 实验目的】
• （1）熟悉学啊 白蛋白的测定方法（溴甲 白蛋白的测定方法（ ）熟悉学啊ing白蛋白的测定方法 酚绿法）。 酚绿法）。 • （2）掌握血清白蛋白测定和白蛋白与球蛋 ） 白的含量比（ 白的含量比（A/G）的临床意义。 ）的液； 缓冲液； 缓冲液 甘氨酸； 甘氨酸； 各种硫醇
耗费时间长； 耗费时间长；操作要严 格计时； 格计时； 颜色深浅随不同蛋白质 变化
考马斯亮蓝法 (Bradford法) 法
灵敏度最高 1～5µg ～ µ
快速 5～15分 ～ 分 钟
考马斯亮蓝染料与蛋 白质结合时， 白质结合时，其 λmax由465nm变 由 变 为595nm
【实验试剂】 实验试剂】
• 1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 溴甲酚绿（ 溴甲酚绿 ） ， 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至 溶解， 定容至1000mL。 溶解 。 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取 加水 溶解。 溶解。 • 2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH= 4.2）：分别配制 柠檬酸缓冲液（ ）：分别配制 柠檬酸缓冲液 ）： 0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按 柠檬酸和柠檬酸钠溶液， 柠檬酸和柠檬酸钠溶液 然后按12.3：7.7的体 ： 的体 积比例混合。 混合液加入NaN3 100mg。 积比例混合。每1000ml混合液加入 混合液加入 。 • 3.30%聚氧化乙烯月桂醚 聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加 聚氧化乙烯月桂醚 溶液 加 少量水， ℃水浴溶解，加水至100ml（此可用 少量水，60℃水浴溶解，加水至 （此可用Tween20或Tween-80代替 。 代替)。 或 代替 • 4.BCG应用液 BCG贮存液 贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液 应用液 贮存液 ， 柠檬酸缓冲液 也可以用Tween-20 8ml或 （pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用 也可以用 或 Tween-80 10ml代替）混合而成。 代替） 代替 混合而成。 • 5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白 标准蛋白溶液（ 称取人白蛋白1.00g，用生 标准蛋白溶液 ， 理盐水
白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)
白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成，检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法。
检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲酚绿或溴甲酚紫染料结合，上述染料对白蛋白具有高度的亲和力，通常监测染料与白蛋白结合的初速率，该速率与样品中白蛋白浓度成正比。
Leagene 白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)检测原理是在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫(Bromocresol purple ，BCP)结合生成绿色复合物，在603nm 处有吸收波，该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，求得待测样品中白蛋白浓度。
本试剂盒多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的蛋白含量测定，该法操作简单、方法特异，既可手工操作，又可采用自动分析仪检测，对血清清蛋白的特异性比BCG 法(溴甲酚绿法)要好，不易受时间和温度变化的影响。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管、小试管2、 比色杯3、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取白蛋白标准配制液或稀释液加入到白蛋白标准中，充分溶解后配制成40mg/ml 的白蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的白蛋白标准溶液应-20℃保存。
亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取白蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解白蛋白标准品的稀释液。
2、 样本处理：血清、血浆样本直接取检测。
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
编号 名称TC0567 100T Storage试剂(A): BCP 试剂 200ml 4℃ 避光试剂(B): 白蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 白蛋白标准配制液 100mlRT使用说明书1份3、白蛋白加样操作，按下表依次加入试剂：加入物(ml) 空白管标准管待测管白蛋白标准配制液0.01 −−白蛋白标准溶液(40mg/ml) −0.01 −待检样品(血清、血浆、组织匀浆液) −−0.01BCP试剂 2.0 2.0 2.04、比色杯光径，先在分光光度计以空白管调零，逐管加入BCP试剂，并立即混匀。
溴甲酚绿比色法检测γ—氨基丁酸含量
溴甲酚绿比色法检测γ—氨基丁酸含量γ-氨基丁酸（GABA）会对溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的混合液有专一性的显色反应。
显色剂溴甲酚绿、乙醛酸和琥珀酸的最适浓度分别为0.5 mg/mL、6mg/mL和4mg/mL，比例为1∶1∶1。
测定GABA最适条件4mL样品溶液，加入2mL显色剂，混匀，在618nm测定吸光度。
γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric Acid，GABA）是一种非蛋白质的天然氨基酸。
由谷氨酸（Glu）经谷氨酸脱梭酶（GAD）催化而来，是哺乳动物中枢神经系统中的重要的抑制性神经递质。
GABA有镇静安神、增强记忆、抗晒老、调节食欲、改善脂质代谢等生理功能，在食品和医药等领域有重要作用。
1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器GABA：源叶生物；溴甲酚绿：天津市风船化学试剂科技有限公司；乙醛酸：萨思化学技术有限公司；琥珀酸：天津市福晨化学试剂厂；L-谷氨酸钠：国药集团化学试剂有限公司。
紫外可见分光光度计TU-1800：北京普析通用仪器有限责任公司。
1.2 方法1.2.1 显色剂的配制配置0.5 mg/mL溴甲酚绿、6mg/mL乙醛酸、4mg/mL琥珀酸，并以比例1∶1∶1混匀。
1.2.2 最适波长的检测吸取4mg/mLGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀。
在紫外可见分光光度计检测最适波长。
1.2.3 显色条件的影响（1）溴甲酚绿浓度的影响。
分别配置0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mg/mL的溴甲酚绿溶液，与6mg/mL乙醛酸溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合为显色剂。
4mg/LGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀，618nm处测定吸光度。
（2）乙醛酸浓度的影响。
分别配置2、4、6、8、10mg/mL的乙醛酸溶液，与05mg/mL溴甲酚绿溶液，4mg/mL琥珀酸溶液以1∶1∶1的比例混合为显色剂。
4mg/LGABA标准溶液4mL，加入2mL显色剂，混匀，618nm处测定吸光度。
肝功能检查综合性实验报告(原版)
广东医学院实验报告实验题目肝功能检查（十一项）Liver Function Tests专业：医学检验组别：13 姓名：邓秋妹学号：07203090283实验日期：2010年5月27日—2010年6月10日实验类型：综合性摘要目的: 检测肝功能检查十一项指标，并对检测结果进行评价。
方法: 改良J-G法测血清总胆红素和结合胆红素。
双缩脲法测定血清总蛋白，溴甲酚绿法测定血清清蛋白。
改良赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶。
结果：测得的血清TB为5.244μmol/L，血清Bc为0.912μmol/L。
测得的血清总蛋白为48.98g/L,血清清蛋白为23.79g/L 。
测得的血清ALT为33.5卡门氏单位，血清AST为87.99卡门氏单位。
结论：患者胆红素代谢功能紊乱，蛋白质合成功能障碍，肝实质细胞损害很严重，可初步诊断为肝硬化。
AbstractObjective:Test the 11 indicators of liver function,and evaluate the results.Methods:The determination of serum TB and Bc by mod. Jendrassik and Graf’s method.The determination of serum TP by Biure and Alb by bromocresol green method.The determination of ALT and AST by Reitman - Frankel modified method.Results:The serum TB is 5.244μmol/L,and the serum Bc is 0.912μmol/L.The serum TP is 48.98g/L,and the serum Alb is 23.79g/L.The serum ALT is 33.5Carmen's unit and the AST is 87.99 Carmen's unit.Conclusion:The patient has bilirubin metabolic disorders, protein synthesis dysfunction and severe liver cell damage. And the initial diagnosis is cirrhosis.1 材料与方法1.1 材料主要试剂：血清胆红素测定试剂盒（南京建成科技有限公司）；蛋白定量（双缩脲法）试剂盒（南京建成科技有限公司）；白蛋白（溴甲酚绿法）测定试剂盒（南京建成科技有限公司）；谷丙转氨酶测定试剂盒（南京建成科技有限公司）；谷草转氨酶测定试剂盒（南京建成科技有限公司）。
血清白蛋白测定
【临床意义】
3、血清白蛋白浓度增高：常见于严重脱水所 致的血浆浓缩；
4、A/G 某些病人可同时出现白蛋白减少和 球蛋白升高的现象，严重者比值可＜1。这种 情况称为A/G比值倒置。
5、文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍， 血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏 症。
二、商品BCG试剂重复性能评价试验
血液清蛋白测定
与 重复性实验
血液清蛋白测定与重复性实验
一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验
一、BCG法测定血液清蛋白试验
1.血液清蛋白测定的临床意义 2.BCG法测定血液Alb的实验原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6.结果处理、分析（讨论）
1.血液清蛋白测定的临床意义
(2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、 X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即 通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1 自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检验 X1时，测定次数不应该做为少了一次。
(3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数两 侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是 否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另一 个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时 应该选择的99%置信水平。
天内：对低、中和高浓度，分别在上午、中 午、下午、晚上，进行m轮，每轮n次重复 测定，分别求取三种浓度的精密度数据
天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连 续监测20天以上，分别求取三种浓度的精 密度数据
3.实验材料
试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计
4.实验方法
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血清白蛋白溴甲酚绿比色法
原理：白蛋白具有与阴离子染料结合的特性。
在pH4左右，溴甲酚绿与白蛋白结合后由黄色变成绿色，绿色的深浅与白蛋白浓度成正比，因此，应用溴甲酚绿溶液可以直接比色测定血清白蛋白含量。
试剂：1、溴甲酚绿贮存液：在25ml烧杯中称入溴甲酚绿419mg，加入0.1N 氢氧化钠10ml，用玻璃棒搅拌，使溴甲酚绿完全溶解（如用溴甲酚绿钠盐，则称取432mg，用蒸馏水溶解）。
用蒸馏水将此溶液全部转注入1L容量瓶中，再加入叠氮钠100mg，最后加蒸馏水至1L刻度。
2、0.1M枸橼酸缓（柠檬酸）冲液，pH4.2：分别配制0.1M枸橼酸及0.1M 枸橼酸钠，然后按12.3：7.7的体积比例混合，每升混合液中加入叠氮钠100mg。
试测pH，如不符合要求，再在混合液中加入适量0.1M枸橼酸或0.1M枸橼酸钠以校正pH至4.2.
3、30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：称取聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）30g，加入适量蒸馏水，在约60℃水浴中使溶液，然后加蒸馏水至100ml。
4、溴甲酚绿应用液：取溴甲酚绿贮存液250ml，加0.1M、pH4.2枸橼酸钠缓冲液750ml，再加30%聚氧化乙烯月桂醚溶液8ml，混合。
以上试剂可在室温保存数月。
如不加叠氮钠则枸橼酸缓冲液和溴甲酚绿应用液应保存于冰箱中。
操作：将血清标本及标准血清用生理盐水作1/10稀释（例如血清0.20ml加生理盐水1.8ml），然后按表进行操作：
空白管标准管测定管
ul ul ul 血清标本20 标本血清40g/L 20
生理盐水20
溴甲酚绿应用液500 500 500
充分混合，室温放置10min后在1小时后用628nm处比色。
以空白管校正光密度
到0点，读取各管光密度读数
计算：测定管光密度/标准管光密度*40 g/L=血清白蛋白g/L。