2012SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验目的1.掌握垂直电泳槽的基本操作过程。
2.熟悉SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
实验原理SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以根据蛋白质分子所带电荷的差异和分子大小的不同产生的不同迁移率，从而将蛋白分离成若干条带。
在催化剂过硫酸铵（APS）和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（TEMED）的作用下，丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N′-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）聚合交联形成具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
SDS是一种阴离子表面活性剂，能与蛋白分子结合形成复合物，使蛋白所带的负电荷远远超过其原有的电荷，从而掩盖了各种蛋白分子间原本的电荷差异。
因此，电泳时的迁移率不再受蛋白原有电荷和分子形状的影响。
实验器材垂直电泳槽、电泳仪、移液器、移液器吸头、烧杯等。
实验试剂30%（29∶1）Arc-Bis溶液、分离胶缓冲液（pH8.8）、浓缩胶缓冲液（pH6.8）、TEMED、10%APS、5×蛋白电泳缓冲液、10×蛋白上样缓冲液、蛋白标准液、考马斯亮蓝R-250染色液、考马斯亮蓝脱色液等。
实验操作（1）配制SDS聚丙烯酰胺凝胶：将制胶的凹型玻璃与平玻璃固定在制胶夹板上，确保不漏水后按以下配方配制12%的分离胶。
30%（29∶1）Arc-Bis溶液3ml分离胶缓冲液（pH8.8） 1.95mlH2O 2.55ml10%APS 75μlTEMED 30μl（2）混匀分离胶后，尽快灌至两块玻璃板的间隙中，在距离较短玻璃板2～3cm处停止灌胶，同时加入1～2ml的去离子水覆盖凝胶，室温静置10～20min。
（3）分离胶聚合后倒去水层，用滤纸把剩余水分吸干，按以下配方配制4%的浓缩胶。
30%（29∶1）Arc-Bis溶液650μl浓缩胶缓冲液（pH6.8） 1.3mlH2O 3ml10%APS 50μlTEMED 18μl（4）混匀后将浓缩胶灌注至已聚合的分离胶上，当灌注至与较短玻璃板顶端相齐时，立即插入梳子，同时避免产生气泡。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳准备
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验准备1、A溶液（30%丙烯酰胺保存液）4c 保存丙烯酰胺7.3g + N,N’—甲叉双丙烯酰胺bis 0.2g，蒸馏水定容到25ml 2、B溶液（1.5 M Tris—HCl pH8.8）4c 保存Tris Base 4.55g+0.1g SDS,蒸馏水定容到25ml3、C溶液（0.5M Tris—HCl Ph6.8）4c保存Tris Base 1.525g +0.1g SDS,蒸馏水定容到25ml4、D溶液（10%过硫酸铵）4c保存0.1g 过硫酸铵溶液1ml蒸馏水中5、SDS—PAGE (电极缓冲液常温)Tris Base 3.0g +SDS 1.0g +甘氨酸14.4g，蒸馏水定容到1000ml6、BPB溶液（处理试样，比例为BPB：试样=8:200）4c保存溴酚蓝1mg +甘油0.1ml +蒸馏水0.9ml7、1）试样处理液4c保存SDS 0.1g +C溶液1ml +甘油2ml，用蒸馏水定容到10ml2）缓冲液Tris Base 3.0g +SDS 1.0g +甘氨酸14.4g，蒸馏水定容到1000ml（40%NOH指40NOH溶液100ml水中）8、染色液常温保存考马斯亮蓝R250 0.5g +甲醇150ml +乙酸50ml ，蒸馏水定容到500ml 9、脱色液甲醇300ml +乙酸100ml +蒸馏水600ml电泳中各试剂的作用1、a SDS：阴离子去污剂作为变性剂和助溶剂能断裂分子内与分子间氢键使分子去折叠，破坏分子的二、三级结构。
2、b 强还原剂能破坏残基之间的二硫键样品和凝胶中加入a、b使蛋白质分子解聚，形成带负电荷的蛋白质—SDS 胶束，其所带电荷量大大超过原蛋白质分子原有的电荷量。
消除不同分子间原有电荷差异3、过硫酸铵：引发剂4、TEMED(四甲基乙二胺)：增速剂分离胶浓度分子量范围5% 80—400KDa7.5% 40—200KDa10% 20—130KDa12.5% 14—80KDa15% 10—60KDa分离胶的配制：（分离胶配制前先加水避免过快凝结）5% 7.5% 10% 12.5% 15% 20% 4.5%（浓缩）A 3 4.5 6 7.5 9 12 0.9B 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 —C ———————————— 1.5D 0.08 0.08 0.08 0.08 0.06 0.06 0.02 TEMED 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 纯水10.5 9 7．5 6 4.5 1.5 3.6注：1）试样处理液：样品（体积）=1:1 染色液:(样品+试样处理液)=2:100 2）先将内胆放入外槽再加样品3）缓冲液加到挡板处4）煮2—3min。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳基本原理
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
医学院 生化教研室
什么是电泳？电泳为何能分离混合物？
电泳是指带电粒子在电场的作用下，向着与其电性 相反的电极移动的现象。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的 技术。
电泳的应用 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等 2. 分析某种物质的纯度及分子量
电泳用于分离物质的原理：
H3C/
\CH3
·TEMED催化AP生成硫酸自由基： S2O82－ → 2SO4·¯
·硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体长链
B单is将体单长体链长在链交间联连剂成Bi网s的状作结用构下：彼此交联聚合形成三维网状凝胶
•聚合反应受各种因素的影响，如系统中催化剂和加速剂的 浓度、pH、温度、分子氧和杂质都会影响凝胶的聚合过程。
（1）以生物大分子为例：
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
NH2
COO-
COOH
Байду номын сангаас
╱ + H+ ╱
Pr ←————→ Pr
╲ + OH- ╲
NH3+
NH3+
PH>PI
PH=PI
PH<PI
(2)带电颗粒在电场作用下所受的力：
电场力 F=QE
阻力 F’=6πrηυ
当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动:
电渗作用：
电渗：在电场作用下液体对固体支持物相对移动的现象。
以纸电泳为例:
正极
－－－－－－－－ ＋＋＋＋＋＋＋＋
负极 表面带负电荷
带正电荷的水层携带粒子向 负极移动
如果样品原本是移向负极的，则泳动的速度加快； 如果样品原本是移向正极的，则泳动的速度减慢。
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告.
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告.
实验目的：通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分离蛋白质并测定分子量。
实验原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种分离蛋白质的标准方法，可对不同来源和大小的蛋白质进行分离和鉴定。
在本实验中，通过将蛋白质溶解于含有SDS和2-巯基乙醇等条件下的试样缓冲液中，以使蛋白质带有几乎相同的负电荷，通过电泳使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中以大小不同的分子量在电场作用下移动，最终被染色，进行分离鉴定。
实验步骤：
1.准备实验材料：SDS-PAGE电泳装置、试样缓冲液、聚丙烯酰胺凝胶、蛋白质样品、电泳缓冲液等。
2.制备SDS-PAGE电泳凝胶：按照说明书，将聚丙烯酰胺凝胶拆封并放置在实验室温度下一段时间，使其柔软。
3.制备电泳缓冲液：按照说明书，取适量的Tris、glycine和SDS等物质，配制电泳缓冲液，使其达到所需浓度。
4.制备试样缓冲液：按照说明书，取适量的Tris、SDS和2-巯基乙醇等物质，配制试样缓冲液。
5.制备样品：取适量的蛋白质样品，在试样缓冲液中煮沸一段时间，使蛋白质分子展开。
6.装样：将制备好的样品加入聚丙烯酰胺凝胶电泳装置样品槽中。
7.电泳：按照说明书，调整电泳缓冲液pH值和电泳电压等条件，开启电泳装置，进行电泳操作。
8.染色：将电泳板取出，进行荧光染色或银染色法。
9.图像处理：使用图像分析系统或其他软件，进行蛋白质条带的分析和图像处理。
实验结果：经过SDS-PAGE电泳后，样品中的蛋白质在凝胶中呈现出大小不同的分子量条带，通过荧光染色或银染色可以清晰地看到分离的蛋白质条带。
根据蛋白质的分子量大小，可以判断样品中含有哪些蛋白质。
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术，它是以电荷和大小为基础对蛋白质进行分离的方法。
本文将介绍十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理、步骤、优点和应用。
一、原理十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种非常规的凝胶电泳技术，它利用十二烷基硫酸钠（SDS）将蛋白质分子进行线性化，并使其带负电荷，从而使所有的蛋白质分子在电场中移动速度相同，只受到分子大小的限制。
这种方法可以将蛋白质按照分子大小分离开来，从而实现蛋白质的定量和鉴定。
二、步骤1、制备凝胶：将聚丙烯酰胺单体和交联剂混合，加入TEMED和过硫酸铵，混合均匀后倒入凝胶板中，静置凝固。
2、制备样品：将待测蛋白质样品加入SDS试剂中，使其线性化，并加入还原剂使其还原成硫氢化物。
3、装载样品：将制备好的样品加入凝胶孔中，待样品进入凝胶后施加电场。
4、电泳：将凝胶浸入电泳缓冲液中，施加电场，使蛋白质分子运动到电极上，形成特定的蛋白质条带。
5、染色：将凝胶浸入染色液中，使蛋白质条带显色。
6、成像：将染色后的凝胶进行成像和分析。
三、优点1、能够分离出不同分子量的蛋白质。
2、分离效率高，准确度高。
3、可以同时分析多个样品。
4、操作简单，成本低。
四、应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛应用于蛋白质分离、鉴定和定量等方面，如：1、研究蛋白质表达及其功能。
2、检测蛋白质的异常，如疾病标志物。
3、分析蛋白质的结构和功能。
4、制备蛋白质纯化。
5、鉴定蛋白质。
总之，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术，具有分离效率高、准确度高、操作简单、成本低等优点，广泛应用于蛋白质分离、鉴定和定量等方面。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS－聚丙烯酰胺凝胶 电泳分离血清蛋白质
一、பைடு நூலகம்的要求
1.学习电泳原理和技术
2.掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的工作原
理和操作方法
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联
剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂四甲基乙二胺 (TEMED)和催化剂过硫酸铵((NH4)2S2O8 ，AP) 的作用 下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支
持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
TEMED(加速剂)
Acr(单体)+Bis(交联剂)
AP(催化剂)
凝胶
聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构，具有 电荷效应、分子筛效应。
电荷效应（电泳物所带电荷的差异性） 分子筛效应（凝胶的网状结构及电泳物的 大小形状不同所致） PAGE同时还具有浓缩效应与体系的不连续性。
四、 操作步骤
固定玻板
制备分离胶 制备浓缩胶 加样 电泳
染色和脱色
1.安装夹心式垂直板电泳槽
安装好后，在长玻璃板下端与硅胶模框
交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂糖。其目 的是封住空隙，凝固后的琼脂糖中应避免有 气泡。
2、配制凝胶
7.5%分离胶 （10ml） DDW 30%Acr-Bis 4.85 2.5 3%浓缩胶 （5ml） 3.16 0.5
6 .染色与脱色
电泳结束后，取下凝胶模，卸下胶框，用小 刀或镊子撬开短玻璃板，从凝胶板上切下左上 角作为加样标记。加入染色液染色1-2 h，再用 脱色液脱色，直至蛋白质区带清晰。
将楔子插进，将底部插紧
插入梳子
加缓冲液
加 样
电泳
剥胶
五、实验结果
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理及步骤
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳目的要求（1）学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。
（2）掌握SDS-PAGE测定蛋白质分子量的操作方法。
原理SDS-PAGE是PAGE是一种特殊形式，SDS是带负电荷的阴离子去污剂。
用SDS-PAGE 测定蛋白质分子量时，蛋白质需经样品溶解液处理。
在样品溶解液中含有巯基乙醇及SDS，各种蛋白质样品在巯基乙醇作用下，还原成单链，再进一步与SDS结合形成带大量负电荷的SDS-蛋白质复合物。
因此各种蛋白质分子在SDS-PAGE中，只能按其分子量大小而分离。
SDS-PAGE有连续体系（b）及不连续体系两种(d)，这两种体系有各自的样品溶解液及缓冲液，但加样方式，电泳过程及固定、染色与脱色方法完全相同。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳。
这种凝胶是以丙烯酰胺单体（Acrylamide，简写为Acr）和交联剂N，N'-甲叉双丙烯酰胺（N,N'-Methylena Bisacrylamide，简写为Bis）在催化剂的作用下聚合而成的。
Acr 和Bis 在它们单独存在或混合在一起时是稳定的，且具有神经毒性，操作时应避免接触皮肤。
但在具有自由基团体系时，它们聚合。
引发产生自由基团的方法有两种，即化学法和光化学法。
化学聚合的引发剂是过硫酸铵(NH4)2S2O3（Ammonium persulfate，简写为Ap），催化剂是N，N，N',N'-四甲基乙二胺（Tetramethylenediamine，简写为TEMED）。
在催化剂TEMED的作用下，由过硫酸铵（Ap）形成的自由基又使单体形成自由基，从而引起聚合作用。
TEMED 在低pH 时失效，会使聚合作用延迟；冷却也可使聚合速度变慢；一些金属抑制聚合；分子氧阻止链的延长，防碍聚合作用。
这些因素在实际操作时都应予以控制。
光聚合以光敏感物核黄素（即V B2）作为催化剂，在痕量氧存在下，核黄素经光解形成无色基，无色基被氧再氧化成自由基，从而引起聚合作用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准操作规程(12%胶)
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准操作规程（12%胶，）1电泳各试剂的配制1.1凝胶贮液：Acrylamide/Bis (30%T，%C)——为聚丙烯酰胺取丙烯酰胺acrylamide g、双丙烯酰胺N′N′-bis-methylene-acrylamide g至100mL量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀，过滤。
4℃避光储存。
即10%的过硫酸铵 10%APS（临用现配）称取过硫酸铵（ammonium persulfate）100 mg，加1mL去离子水溶解。
Tris-HCl，pH称取Tris base g 于量瓶中，加去离子水80mL，用HCl 调节pH ，再加去离子水至总体积100mL。
4℃储存。
%（w/v）溴酚蓝：溴酚蓝，去离子水定容至100mL。
Tris-HCl，pH ：称取Tris （三羟甲基氨基甲烷）6 g 于量瓶中，加去离子水60mL，用HCl 调节pH ，再加去离子水至总体积100mL。
4℃储存。
10%（w/v）SDS：称取10g SDS至100ml量瓶中，加90ml去离子水，缓慢搅拌至溶解，再加去离子水至刻度。
凝胶配制按下表比例配制凝胶分离胶及浓缩胶按上表比例配好后，均需脱气15 min。
临灌胶前，往分离胶中加入100 μl 10%APS及10 μl TEMED；往浓缩胶中加入100 μl 10%APS及20 μl TEMED（各试剂按比例增减）。
其中：TEMED为催化剂10×电极缓冲液，pH称取Tris base g、Glycine（甘氨酸） 144 g、SDS g于1000 mL量瓶中，溶解，加去离子水至刻度，不调pH。
4℃储存。
临用前，取出放至室温，10倍稀释，混匀，即为电极缓冲液。
样品溶解液S去离子水；0.5M Tris-HCl，pH ；glycerol （甘油）10% (w/v) SDS%（w/v）溴酚蓝总体积为 mL。
室温储存。
临用前加50 μlβ-巯基乙醇（β-Mercaptoethanol）于950 μl样品缓冲中，即为样品溶解液。
(完整版)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告
分子生物学实验报告实验名称:SDS・聚丙烯酰胺凝胶电泳班级：生工XXX姓名：XXX同组人：XXX学号：XXXX日期:XXXXSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1引言SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是LI前分离蛋白质亚基并测定其分子量的常用方法，为检测电泳后凝胶中的蛋口质，一般使用考马斯壳蓝（CBB）染色⑴。
本次实验的LI的在于学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质的操作技术。
2材料和方法2.1实验原理2.1.1聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理2」.1」性能聚丙烯醸胺凝胶的机械性能好，有弹性，透明，相对地化学稳定，对pH和温度变化比较稳定，在很多溶剂中不溶，是非离子型的，没有吸附和电渗作用。
通过改变浓度和交联度，可以控制孔径在广泛的范圉内变动，并且制备凝胶的重复性好。
由于纯度高和不溶性，因此还适于少量样品的制备，不致污染样品。
2.1.1.2制备原理聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺（Acr）和交联剂屮义双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合而成。
聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化系统有化学聚合和光聚合两种。
本实验是用化学聚合。
化学聚合的催化剂通常多采用过硫酸钱（AP）或过硫酸钾，此外还需要一种脂肪族叔胺作加速剂，最有效的加速剂是N,N,N：N・四中基乙二胺（TEMED）。
在叔胺的催化下，曲过硫酸鞍形成氧的自由基，后者乂使单体形成自由基，从而引发聚合反应。
叔胺要处于自曲碱基状态下才有效, 所以在低pH时，常会延长聚合时间；分子氧阻止链的延长，妨碍聚合作用；一些金属也能抑制聚合；冷却可以使聚合速度变慢。
通常控制这些因素使聚合在1 小时内完成，以便使凝胶的性质稳定。
聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统，即只有分离胶的连续系统和有浓缩胶与分离胶的不连续系统，不连续系统中最典型、国内外均广泛使用的是著名的Ornstein-Davis高pH碱性不连续系统，其浓缩胶丙烯酰胺浓度为4%, pH = 6.8,分离胶的丙烯酰胺浓度为12.5%, pH二&8。