无患子提取物对Fusarium sp.发酵产脂肪酶的影响及其双水相萃取分离
第30卷第6期 2O11年11月 食品与生物技术学报
Journal of Food Science and Bi0technology Vo1.30 NO.6
NOV. 2()11
文章编号:1673—1689(2011)06—0928—06 无患子提取物对Fusarium sp.发酵产脂肪酶的 影响及其双水相萃取分离
张海蓉 , (1.江南大学工业生物技 苏淮安223001)
蔡宇杰 , 廖祥儒 术教育部重点实验室,江苏 , 张峰 , 张
无锡214122;2.江苏汉 大兵。 邦科技有限公司,江
摘 要:研究了表面活性剂对Fusarium sp.的发酵产脂肪酶的影响。结果表明,添加无惠子提取 物的酶活为最高,说明无患子提取物是最佳的的表面活性剂,并且确定提取无患子提取物的液固 比为6:1(mL:g)时酶活达到最高。粗酶液经(NH ) SO 沉淀后进行双水相萃取分离,结果表 明,采用质量浓度为3O g/dL的PEG(M 4000)和质量浓度为20 g/dI 的NaHe P()4时纯化系数F 和萃取率sf达到最高;经过双水相萃取后,该脂肪酶的纯化倍数可以达到7.92,回收率为 48.3O 关键词:脂肪酶;发酵;无患子;酶活;双水相 中图分类号:Q 93 文献标识码:A
Effect of Soapberry Extraction on Lipase Activity of Fusarium sp.and Lipase Extraction by Aqueous Two—Phase Systems
ZHANG Hai—rong ,CAI Yu jie , IAAO Xiang—ru ,ZHANG Feng ,ZHANG Da—bing! (1.Educational Ministry Key I.aboratory of Industrial Biotechnology,School of Biotechnology,Jiangnan Universi ty,Wuxi 214122,China;2.Jiang Su Hanhon Science&.Technology Co.1ad,Huai’an 22300l,China)
Abstract:Effect of surfactant on lipase production of Fusarium sp.was investigated in this manuscript.The results showed that lipase activity was achieved at the maximum value in adding soapberry extraction,which indicated that soapberry extraction is the best surfactant,and lipase activitv was the highest when the liqui&to solid ratio is 6:1(mI :g).Lipase extractmn by Aqueous Two—phase System following the precipitation of the crude enzymes by am ̄lonlunl suIfate was a1so studied.The results indicated that the highest of decontamination factor F and extraction rate Sf achieved when the conditions of extraction showed as follows:the molecular weight of PEG was 4000,the concentration of PEG(M 4000)was 30 g/dI ,and the concentration of NaH 2 PO4 was 20 g/dI .At last,the lipase was purified 7.92 folds and the recovery was 48.30 by Aqueous Two—phase Systems. Key words:lipase,fermentation,soapberry,enzyme activity,aqueous tWO—phase
收稿日期:2010 10 20 基金项目:国家863计划项目(2010AA101501)。 通信作者:廖祥儒(1964 ),男,江西南康人,农学博士,教授,博士研究生导师,主要从事生化及分子生物学研
究。Email:13771 104596@1 63.conl 第6期 张海蓉等:无患子提取物对Fusarium sp.发酵产脂肪酶的影响及其双水相萃取分离 929 脂肪酶,又称三酰基甘油酰基水解酶,是一种 作用于甘油三酯的酯键水解酶_1]。鉴于脂肪酶水 解和合成反应的能力,它们有着重要的商业价值, 应用极广泛,包括洗涤剂、化妆品、药物、和乳制品 等[2]。微生物来源的脂肪酶品种丰富,生产条件可 人为控制,成本低等优点,而被大量研究[3]。 无患子的主要化学成分是无患子皂苷、脂肪 油、蛋白质【4]。无患子可作为天然表面活性物质用 于天然洗发香波及各种洁肤护肤化妆品中L5 ;无患 子皂苷还具有降血压、抗真菌、杀虫等多种生物活 性,如TamuraE 等发现从无患子果皮中提取的皂 苷混合物SP—mix有明显的抗菌活性;ojha[7 等研 究表明,无患子皂苷对乳酸杆菌的毒性低,可用于 女性卫生用品。本实验通过在培养基中添加无患 子提取物,大大的提高了酶活,为工业化大生产提 供了很好的科学意义。 双水相萃取技术是近年来出现的很有发展前 途的新型生化分离技术,其原理是利用物质在互不 相溶的两相中分配系数的差异进行分离纯化_8],与 传统脂肪酶的提纯方法相比,操作简单、产品活性 损失量小、适合大规模应用等特点_g]。本文研究了 双水相萃取体系对脂肪酶粗酶液的萃取,并对该系 统进行了优化,对脂肪酶的工业化大生产有一定的 参考价值。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1 茵体 真菌Fusarium sp.SYBC Lz,由本 实验室人筛选并保藏在一20℃的冰箱中。 1.1.2 主要试剂 吐温20、吐温80、聚氧乙烯辛基 苯基醚(乳化剂OP)、无患子;(NH )。SO 、PEG (M 1000)、PEG(M 2000)、PEG(M 4000)、PEG (M 6000);K2 HPO4、KH2 PO4、NaH2 PO4;对硝基 苯丁酸酯(P—NPB)、Tris—HC1缓冲液(pH 9.5)、 Tris—HC1缓冲液(pH 7.0),考马斯亮蓝G一250等。 1.1.3主要仪器 无菌超净工作台购于苏州安泰 空气技术有限公司产品;回转式恒温调速摇瓶柜购 于上海苏坤实业有限公司产品;电子天平购于上海 民桥精密仪器有限公司产品;pH计购于梅特勒一 特利多仪器(上海)有限公司;低温高速离心机购于 日本日立(HITACHI)公司;恒温水浴锅购于上海 一恒科技有限公司;紫外可见分光光度计购于尤尼 科(上海)仪器有限公司;立式压力蒸汽灭菌锅购于 上海医用核子仪器厂;恒温培养箱购于广东仪 器厂。 1.2 方法 1.2.1培养基 1)平板培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基 PDA。 2)种子培养基:蛋白胨5 g/L,酵母膏3 g/L, 蔗糖12 g/L,麦芽糖3 g/L。500 mL的三角瓶装液 量为5O mL,121℃蒸汽灭菌20 min。 3)发酵培养基:蛋白胨5 g/i ,酵母膏6 g/L, Nail PO 3 g/L,羊油20 g/L,无患子提取液20 mL/L。500 mL的三角瓶装液量为50 mL,121℃ 蒸汽灭菌20 min。 1.2.2无患子提取物的获得 将无患子果洗净、 晾干、剥壳、粉碎,采用不同的固液比,55℃去离子 水,水提液静置约3 hl】 ,离心除沉淀,留上清液。 1.2.3粗酶液的制备低温贮存的菌种经过平板 活化后,接种于种子培养基中,摇床培养(30℃,120 r/rain,1 d);然后接种于摇瓶发酵培养基中,接种量 为3 ~4 ,摇床培养(30℃,120 r/rain,3 d);低 温高速冷冻离心机离心,8 000 r/rain,离心15 rain; 收集上清液,然后在脱脂棉上脱脂,除去多余的油 脂,收集这些酶液,冷冻干燥得到干粉,每1 g的该 干粉用10 mL Tris—HCL缓冲液(pH 7.0)溶解,得 到粗酶液,4℃贮存备用。 1.2.4脂肪酶活性测定方法 脂肪酶活性的测定 以对硝基苯丁酸酯(p-NPB)为底物,参考Marge— sin_1 等人的测定方法并略作修改。每4 mL测定 体系中含:3.7 mL Tris—HCI(pH 9.5)缓冲液,30℃ 水浴锅保温15 rain后,加入0.1 mL酶液,再加入 0.1 mol/L对硝基苯丁酸酯0.2 mI ,快速震荡,在 405 nm下测定吸光值。利用对硝基酚的消光系数 为18 600 L/(tool×cm)计算对硝基酚的产生量,以 1 rain内催化产生1“mol的对硝基酚所需的酶量 为1个酶活力单位(U)。 1.2.5蛋白质含量的测定 蛋白含量的测定本实 验采用Bradford检测法。在试管中加人0.1 mL酶 液,对照为100 L双蒸水替代相应的酶液,再加入 4 mL 0.01 g/L考马斯亮蓝G一250溶液,振荡摇匀。 5 rain后在595 nm处测定吸光度。测量在1 h内 完成。 1.2.6 盐析范围的确定 取一定体积的粗酶液, 分级加入不同量的硫酸铵,第一次加完硫酸铵后, 静置2 h左右,离心得到第一个分级沉淀,上清液以 同样的操作加人硫酸铵,得到第二个分级沉淀,如 此连续进行便可得到多个分级沉淀,将每个分级沉 淀重新溶解于一定体积的pH值7.0的Tris—HC1
初中高中生物实验汇总
目录初中七年级上册实验 (3)一.练习使用显微镜 (3)二.观察植物细胞 (3)三.观察人的口腔上皮细胞 (4)四.观察人体的基本组织 (4)五.观察草履虫 (4)六.观察种子的结构 (4)七.观察叶片的结构 (5)八.绿叶在光下制造有机物 (5)初中七年级下册 (7)一、测定某种食物中的能量 (7)二、比较不同蔬菜或水果中维生素C的含量 (7)三、馒头在口腔中的变化 (8)四、胆汁对于食物的消化作用(注) (8)五、观察家畜小肠的内部结构 (9)六、为家长设计一份午餐食谱 (9)七、测量胸围差 (9)八、模拟膈肌的运动 (9)九、采集和测算空气中的尘埃粒子 (10)十、用显微镜观察人血的永久涂片 (11)十一、观察小鱼尾鳍内血液的流动 (11)十二、血液和血液制品与人类生活的关系 (12)十三、人的瞳孔大小能改变吗? (12)十四、膝跳反射 (12)十五、测定反应速度 (12)十六、酸雨对生物的影响 (13)十七、拟定保护当地生态环境的计划 (13)初中八年级上册 (15)一、鱼鳍在游泳中的作用 (15)二、观察和思考:鱼 (15)三、饲养和观察蚯蚓 (15)四、观察活兔的外表、运动、四肢长度、牙齿以及内部结构 (16)五、鸟适于飞行的特点 (16)六、观察图片中昆虫的翅并举例。
(16)七、哺乳动物的骨骼和肌肉。
(16)八、菜青虫的取食行为 (16)九、动物的绕道取食 (17)十、蚂蚁的通讯 (17)十一、检测不同环境中的细菌和真菌 (18)十二、制作孢子印 (19)十三、发酵现象 (19)十四、制作甜酒 (19)十五、设计并安放人工鸟巢或饲养台 (20)初中八年级下册 (21)一、扦插材料的处理 (21)二、家蚕的生殖与发育 (21)三、鸟卵的结构 (24)四、花生果实大小的变异 (25)五、模拟保护色的形成过程 (26)六、调查当地常见的几种传染病 (27)七、酒精或烟草浸出液对水蚤心率的影响 (29)高中必修一 (31)一、使用高倍镜观察几种细胞 (31)二、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 (34)三、观察DNA和RNA在细胞中的分布 (37)四、体验制备细胞膜的方法 (38)五、用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体 (39)六、探究植物细胞的吸水和失水 (40)七、比较过氧化氢在不同条件下的分解 (41)八、影响酶的活性的条件 (43)九、探究酵母菌细胞呼吸的方式 (45)十、绿叶中色素的提取和分离 (47)十一、环境因素对光合作用强度的影响 (49)十二、细胞大小与物质运输的关系 (51)十三、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 (51)高中必修二 (52)一、性状分离比例的模拟 (52)二、观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片 (53)三、观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片 (54)四、制作DNA双螺旋结构模型 (55)高中必修三 (56)一、生物体维持pH稳定的机制 (56)二、探索生长素类似物促进插条生根的最适浓度 (57)三、用样方法调查草地中某种双子叶植物的种群密度 (58)四、培养液中酵母菌种群数量的变化 (58)五、土壤中小动物类群丰富度的研究 (59)六、土壤微生物的分解作用 (60)初中七年级上册实验一.练习使用显微镜——第二单元第一章第一节37页1.材料及仪器:显微镜2.实验步骤:1)取镜和安放右手握住镜臂,右手托住镜座。
沙葱水溶性提取物对绵羊瘤胃发酵功能(体外)的影响
各 项测定结果综合分析 , 适宜 的 A 添加 范围为: 2 gk ~ 9m /g日 。 E W 4 m /g 48 gk 粮 0 关键词 : 体外 法 ; 沙葱水洛 性提取 物( W ) 绵羊 ; 瘤 胃发酵 A E ;
中图分 类号 : ¥2 . 86 1 文献标识码 : A 文章编 号 :0 9— 55 20 ) l 0 2 0 10 3 7 (0 8 O 一 0 6— 6
sep et t ga d o vl o W e rm sbt t w r e a 0( ot l ru ) 0 6 O 7 , .3, . 1 O 9 , . he . s n d t nl es A ei i i e E pr g u s a ees t cnr o p , .7, .5 O 8 O 9 , . 9 1 f 2 a re t og
沙 葱 水 溶 性 提 取 物 对 绵 羊 瘤 胃发 酵 功能 ( 外 ) 体 的影 响
哈 斯额 尔敦 , 敖 长金 , 张巧娥 , 张 霞 , 刘战
( 内蒙古农业大学物科学 与医学学院 , 呼和浩特 00 1 ) 10 8
摘 要 : 采用批次培养 的方 法, 研究 了体外条件下 日粮添加沙葱水溶性提取 物( WE 对 绵羊瘤 胃发酵功能 的影响及 A ) 适宜添加量 的筛选。A E W 在每 2 g培 养底 物 中 的添加水 平 为 0 , .7 ,。 5 g 0 8 mg0 9 mg0 9 m ,.7 mg0 6 mg0 7 m , .3 , . 1 ,. 9 g 10 mg 11 rg以及 12 mg ,.5 a .3 。结果表 明 日粮 添加 A E W 可 以提高培养液 中的挥发性脂肪 酸( F 含量 ; 以提高培养液 V A) 可 中的菌体蛋 白( C ) B P 含量 , 以 0 7 m 并 .5 g的添加 量效果 最佳( 0 0 ) 添加 A P< .5 ; E W 可提 高 N F降解率 , D 添加 量在 0 . 6 mg时, 以显著( 0 0 ) 高培 养液 中的 N F降解率 ; 培养液 中的产气量和 N 3一 7 可 P< . 1 提 D 对 H N浓度 无显著 影响。根据
美味牛肝菌中油脂提取工艺研究
现代农业科技2023年第13期食品科学美味牛肝菌中油脂提取工艺研究杨蕾1陈艺1张瑞1杨桂莲1王沁1李锐扬2李琛1*(1玉溪师范学院化学生物与环境学院,云南玉溪653100;2玉溪师范学院物理与电子工程学院,云南玉溪653100)摘要采用超声波辅助法提取美味牛肝菌中的油脂,在单因素(提取时间、液料比和温度)试验的基础上,以油脂提取率为指标,通过响应面法对美味牛肝菌油脂的提取工艺进行优化。
结果表明:美味牛肝菌中油脂最佳取工艺为液料比34.2mL/g,温度36℃,提取时间4.5h,此条件下油脂提取率为3.54826%。
试验结果能为美味牛肝菌中的综合利用提供一定的参考。
关键词超声波辅助法;美味牛肝菌;油脂;响应面法;提取工艺中图分类号S646文献标识码A文章编号1007-5739(2023)13-0198-03DOI:10.3969/j.issn.1007-5739.2023.13.049开放科学(资源服务)标识码(OSID):Study on Extraction Process of Oil from Boletus edulisYANG Lei1CHEN Yi1ZHANG Rui1YANG Guilian1WANG Qin1LI Ruiyang2LI Chen1*(1School of Chemistry,Biology and Environment,Yuxi Normal University,Yuxi Yunnan653100;2School of Physics and Electronic Engineering,Yuxi Normal University,Yuxi Yunnan653100) Abstract Ultrasonic assisted method was used to extract oil from Boletus edulis.On the basis of single factor (extraction time,liquid-material ratio,temperature)experiment,the extraction process of oil from Boletus edulis was optimized by response surface methodology with the oil extraction rate as the index.The results showed that the optimum extraction process of oil from Boletus edulis was as follows:liquid-solid ratio of34.2mL/g,temperature of36℃, extraction time of4.5h.Under this condition,the oil extraction rate was3.54826%.The results can provide references for the comprehensive utilization of Boletus edulis.Keywords ultrasonic assisted method;Boletus edulis;oil;response surface methodology;extraction process美味牛肝菌别名白牛肝菌、大脚菇、大脚蘑等,为伞菌目牛肝菌科牛肝菌属真菌[1],主要分布于四川、云南、福建等地的针阔叶混交林地[2-3]。
无患子总皂苷含量的测定
无患子总皂苷含量的测定
魏凤玉;张静;解辉
【期刊名称】《天然产物研究与开发》
【年(卷),期】2008(020)B05
【摘要】以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色体系,采用分光光度法测定无患子总皂苷含量。
结果表明,无患子总皂苷在478nm处有最大吸收,在100~300pg范围内吸光度与无患子皂苷质量呈良好的线性关系,其回归方程为:
A=0.00388m~0.064,r=0.99963。
平均加标回收率为104.56%,RSD为3.69%。
该方法简便、准确、稳定,是一种快速测定无患子总皂苷的有效方法。
【总页数】4页(P81-83,102)
【作者】魏凤玉;张静;解辉
【作者单位】合肥工业大学化工学院,合肥230009
【正文语种】中文
【中图分类】O657.32
【相关文献】
1.浙贝母花、地上茎与鳞茎总生物碱、总皂苷含量测定的比较 [J], 陈文君;郑卫红;项颖华
2.紫外分光法测定无患子果皮中总皂苷的含量 [J], 唐青涛;邱海燕;廖伟玲;马忠华
3.无患子总皂苷表面活性及其含量测定方法的研究 [J], 李智斌;张彦焘
4.五加科源保健食品中总皂苷含量测定方法研究 [J], 任召珍;曾海英;吴晴晴;刘志敏
5.苗药地瓜藤的理化鉴别及其总皂苷含量测定 [J], 徐锋;吴洁;陈滕;张梅;黄旭龙;吴红梅
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诱导型和组成型启动子对酿酒酵母合成紫杉二烯的影响
够在细胞生长开始便表达异源酶从而产出目标化合 物 " 但采用组成型启动子调控 " 细胞必须能够耐受 产物的毒性 % 因而两种启动子各有利弊 " 针对不同 的目标化合物和表达体系 " 何种启动子更为适配不 能一概而论 " 需要进一步的探究 % 本文将研究在酵母中生产目标化合物紫杉二 烯 % 首先通过 过 表 达 截 短 的 羟 甲 戊 二 酰 辅 酶 : 基 因 ! ! " # %# 和 法 尼 基 焦 磷 酸 合 酶 基 因 ! & % ' (# $ $ 对酵母底盘的内源模块进行改造 " 在改造的底盘细 胞中导入外源紫杉二烯合 酶 基 因 ! #和?牛儿基 ! 4 ? 牛儿基焦磷酸合酶基因 ! # 模 块"从 而 实 4 $ $ + + 现酵母底盘 的 紫 杉 二 烯 生 产 % 在 此 基 础 上 将! 4基 因的启动子由诱导型替换为组成型 " 以进一步提高 产量 % 由于组成型启动子调控的基因能够在葡萄糖 的环境中表达 " 不仅有利于酵母细胞的生长 " 而且 无须使用 半 乳 糖 作 为 诱 导 剂 使 得 发 酵 成 本 更 为 低 廉 " 符合工业化生产的要求 %
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生物样品中短链脂肪酸的提取与测定
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生物样品中短链脂肪酸的提取与测定
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( $ $ 南京大学生命分析化学教育部重点实验室,江苏 南京 !$""/3 ; ! $ 南京军区南京总医院普通外科研究所,江苏 南京 !$"""! ) 摘要: 综述了生物样品 ( 主要为粪便、 尿液、 血液和培养液) 中 短 链 脂 肪 酸 的 提 取 与 测 定 方 法, 讨论了各种样品提取 方法的优缺点, 并比较了气相色谱、 高效液相色谱和毛细管电泳分离检测的优点和局限性。引用文献 #3 篇。 关键词: 短链脂肪酸; 生物样品; 提取方法; 气相色谱; 高效液相色谱; 毛细管电泳; 综述 中图分类号: 7#2,0 0 文献标识码: 8 0 0 文章编号: $""" &,.$3 ( !""# ) "$ &"",$ &".0 0 栏目类别: 专论与综述
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色
谱
第 !" 卷
异性不强, 准确度差。随着色谱技术的发展, 气相色 谱 ( !" ) 、 高效液相色谱 ( #$%" ) 以及毛细管电泳 已广泛用于 ’"() 的测定。但极性大、 挥发性 ( "& ) 强和水溶性大 的 特 点 使 ’"() 难 以 定 量, 生物基质 ’"() 的复杂性也更增加了定量工作的难度。同 时, 的测定首先需要对样品进行提取纯化, 因此, 提取纯 化方式的选择也一直是研究热点。
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水酶法从花生中提取蛋白质与油_碱提工艺研究
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中图分类号: *$22YZ Y
文献标识码: )
文章编号:[33; X <<:< 5 2332 7 31 X 3334 X 3>
[0 20 2 水酶法从花生中提蛋白质与油工艺流程 花生仁 ’烘干 ’去红衣 ’破碎 ’碱提 ’提取液 ’油
酶解 ’灭酶 乳状液 ’破乳 ’油
3
前言 花生是世界上占第四位的植物油料,约占世界油
20 20 ?
温度对蛋白质与油提出率的影响
控制体系
固 液 比 为 4 @ <, 8+ 9 :0 1;, 在 不 同 的 温 度 下 提 取
4>,离心分离,测定蛋白质与油提出率。如图 2 所
示,蛋白质与油提出率在起始时随温度升高而增加, 当温度超过 <3= 以后,蛋白质在长时间热的影响下 易变性,由于疏水基团的暴露和展开、蛋白质分子的 聚集,使蛋白质溶解度下降,导致碱提时蛋白质与油 的提出率下降。因此,碱提温度不宜过高。由差示扫 描 量 热 分 析 5 #$% 6 测 得 花 生 蛋 白 的 起 始 变 性 温 度 为
质提出率的两个多项式数学模型。 关键词:花生蛋白;花生油;碱提;响应面
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实验材料和方法 实验材料 花生仁:购自无锡市北塘顺达食品厂;酶制剂:
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!"#$%&’$( BC@AD EFGEF@AH I/ @A@I@EFFJ HKILEMI 8L/IH@A EAN /@F OL/? 8HEAPI @C IQH REC@C /O ESPH/PC HATJ?EI@M HKILEMI@/A /O 8HEAPI 8L/IH@A EAN /@F0 *QH ?E@A OEMI/LC @AOFPHAM@AD IQH HKILEMI@/A J@HFN /O 8L/IH@A EAN /@F UHLH EAEFJTHN RJ 6$)0 *QH /8I@?P? 8ELE?HIHLC /O EFGEF@AH HKILEMI@/A UHLHV 8+ :0 :3W IH?8HLEIPLH ;<= W HKILEMI@/A I@?H 4>?@A0 *U/ ?EIQ X ?/NHFC UHLH /RIE@AHNW UQ@MQ M/PFN 8LHN@MI IQH HKILEMI@/A J@HFN /O 8L/IH@A EAN /@F0 )*+ ,-%.#( 8HEAPI 8L/IH@AW 8HEAPI /@FW EFGEF@AH HKILEMI@/A W 6$)
