不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
【第一作者简介】王珊珊 （1986-） ，女，实习研究员、
硕士，主要从事生殖医学研究。
【摘要】目的 :探讨常规体外受精（ IVF ）及卵胞浆内单 精子注射（ ICSI ）后单原核胚胎的发育潜能，为提高卵子利 用率探寻可行的方法。方法 :回顾性分析 3614个 IVF 周期和 1306个
ICSI 周期的患者资料。按照年龄分为 35岁 3组，分 析不同授精方式下女方年龄对单原核受精卵出现的影响，并 进一步研究 35 岁以下患者中，不同授精方式对单原核胚胎 发育潜能的影响。结果 :在 IVF 和 ICSI 周期中， >35 岁组的 单原核受精卵形成率显著高于 <30岁组（P<0??05）。35岁以下
女性患者中， IVF 组单原核胚胎的囊胚形成率及优质囊胚形 成率显著高于 ICSI 组（28??97% vs 12??12%，11??90% vs 0）， 并具有统计学差异（P<0??05）。结论:女方年龄、授精方式可能 与异常受精的发生有关。在行辅助生殖技术（ ART ）时应综 合考虑这些因素，为临床提高卵子利用率提供新思路。
【关键词】体外受精；卵胞浆内单精子注射；单原核
Influence of different fertilization modes on the
developmental potential of monopronucleus embryosWANG 不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
Shanshan, ZENG Huiming, ZHANG Ningyuan, SUN Haixiang
△ . Reproductive Medicine Center, Drum-Tower Hospital Affiliated
to Nanjing University Medical School, Nanjing 210008, China
【 Abstract 】 Objectives: To investigate the developmental
potential of monopronucleus embryos in in-vitro fertilization (IVF)
and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) to explore a feasible
approach for improving the utilization rate of oocytes. Method: Data
of 3614 patients in IVF cycles and 1306 patients in ICSI cycles
were retrospectively analyzed respectively, and divided into three
groups according to age of patients, 35 years group. The impact of
age on monopronucleus zygotes was analyzed in different
fertilization modes and the influence of different fertilization modes
on the developmental potential of monopronucleus zygotes was
further studied in group of patients under 35 years old. Results:
The formation rate of monopronucleus zygotes for the group >35
years was substantially higher than that in group <30 years
(P<0??05) in IVF and ICSI cycles. Among female patients under 35
years old, the blastocyst rate and high-quality blastocyst rate of
embryos from monopronucleus zygotes in the IVF group were
substantially higher than the ICSI group (28??97% vs 12??12%,
11??90% vs 0), with statistically significant differences
(P<0??05). Conclusion: The age of female patients and fertilization
modes may be related to the occurrence of abnormal fertilization.
Multiple factors should be considered during assisted reproductive
technology (ART), to provide new ideas for improving the utilization
of oocytes.
【Key words 】In vitro fertilization; Intracytoplasmic sperm
injection; Monopronuclear
【中图分类号】R329.1【文献标志码】A
在体外受精 -胚胎移植( IVF-ET )过程中，卵子在常规 体外受精( in vitro fertilization, IVF )或卵胞浆内单精子注射
(intracytoplasmic sperm injection, ICSI )后 16〜18h，显微镜 下观察到两个原核( 2PN ) ，且在卵周隙内可见 2 个极体，该 受精卵则被判断为正常受精， 而出现单原核 ( monopronucleus
zygotes,1PN )及多原核(》3PN )则视为异常受精。有研究 报道，多核胚胎不仅使胚胎的着床失败率和自然流产率升 高，还可导致葡萄胎的产生和染色体异常儿的出生，不能用 于移植\[1 \] 。对于单原核胚胎，是否有可利用价值，目前尚 无定论。因此，临床上通常选择正常受精而发育形成的优质 胚胎进行移植。细胞遗传学研究表明，发生卵裂的单原核卵 子80%为二倍体， 12%为单倍体，另有
7%为三倍体 \[2\]。除 了遗传学因素外，不同授精方式在卵裂的过程中也起着非常 重要的影响，导致1PN胚胎的染色体组成不同。Yan J等\[3\] 研究显示，常规 IVF 周期中约 54??35%的 1PN 胚胎为二倍体， 而 ICSI 周期中只有约 31??51%的 1PN 胚胎为二倍
体，提示 IVF 周期中 1PN 受精卵发育形成的胚胎有一定可利用价值。
本研究通过回顾性分析 4920 个周期的患者资料，探讨 不同年龄及不同授精方式下，单原核胚胎的发育潜能，为进 一步提高卵子及胚胎的可利用率提供指导。
1 材料与方法
1??1 研究对象
选择 2012 年 1 月至 2013 年 8 月在南京大学附属鼓楼医 院生殖医学中心治疗的 3614 个 IVF 周期和 1306 个 ICSI 周 期的患者资料进行回顾性分析。排除完全受精失败、部分受 精失败及卵子发育异常的患者。年龄分组以 30 岁和 35 岁为 界点分为 3 组。由于 35 岁以上女性的卵母细胞质量明显下 降，所以仅研究年龄小于
35 岁患者的 1PN 胚胎的发育潜能。 其中IVF组1159枚1PN胚胎，ICSI组156枚1PN胚胎。
1??2 人卵母细胞的采集与处理
按常规方案超促排卵，卵泡生长发育充分后，在 B 超介 导下经阴道穿刺取卵。 获取的卵丘 -卵母细胞复合物 (OCCs) 经
Gamete (Vitrolife, Sweden) 洗涤后，转入 IVF(Vitrolife, Sweden)序贯培养微滴中，于37 C /6% CO2培养箱行3h的受 精前培养。
1??3 受精与卵裂观察
1??3??1IVF 采用短时受精方法，获卵 3h 后按 10000 条 精
子/卵母细胞的比例加精。精卵共孵育 4 h后机械剥离颗粒
细胞，转入 G1 (Vitrolife, Sweden) 序贯培养液中培养。 通过观 察第二极体是否形成判断受精， 16~18h 后将培养皿置于倒置 显微镜下观察原核。
1??3??2ICSI孵育3h后的卵母细胞经透明质酸酶
(Vitrolife, Sweden) 消化后机械剥离颗粒细胞。 将卵子置于 IVF 培养液预培养 1 h 后，挑选形态相对正常的精子对成熟卵母 细胞行
ICSI 术。注射后的卵母细胞转入 G1 培养液中培养， 16~18h 后将培养皿置于倒置显微镜下观察原核， 判断是否受 精。
若出现单个原核，则为 1PN ;行IVF或ICSI术后，正
常受精卵出现2个原核(2PN)。受精后分别于44 h及68 h在 倒置显微镜下进行胚胎质量评估
1??4 囊胚培养及观察
将 Day3 剩余的分裂期胚胎转入囊胚培养液 G2 (Vitrolife,
Sweden)微滴中，继续培养至 Day6，观察囊胚发育情况。根 据
Garnder 囊胚分级法对囊胚进行分级 \[4\] 。首先，根据囊 胚的扩张及孵出程度将囊胚分成 1~6级：1 级，早期囊胚 ,囊 胚腔体积囊胚总体积的 1/2; 3 级，完全扩张囊胚，囊胚腔占 据整个囊胚; 4
级，扩张后囊胚，囊胚腔体积较早期囊胚明 显扩大，透明带变薄；
5 级，正在孵化的囊胚，囊胚正在从 透明带破裂口孵出； 6 级，孵化出的囊胚 ,囊胚完全从透明带 中脱出。 3~6 级囊胚需要对滋养外胚层细胞 （trophectoderm,
TE）和内细胞团（inner cell mass, ICM）进行进一步评估。TE评
分：A级，细胞数目多，囊胚四周均有细胞分布； B级，细
胞数目较少，上皮细胞较松散； C 级，细胞数目极少。 ICM 评分： A 级，细胞数目多，结合紧密； B 级，细胞数目较少， 结合较松散；C级，细胞数目极少。本中心将评分》 3BC的
囊胚定为优质囊胚。
1??5 统计学分析
结果以均数土标准差（土 s）或率（％）表示，采用 SPSS
17??0软件对数据进行统计分析。 率的比较采用x 2检验，多
组间结果比较采用单因素方差分析（ One-Way ANOV A），
P<0??05为差异有统计学意义。
2 结果
2??1 女方年龄对 ICSI 胚胎单原核形成的影响
在 ICSI 周期中，女方不同年龄组间 1PN 形成率呈递增 趋势， >35 岁女性患者的 1PN 形成率为 2??75%，显著高于 <30岁组（1??59%）,且有统计学差异（P<0??05）。见表1。
表 1ICSI 周期女方年龄对 1PN 形成的影响年龄（周岁） 获卵数 1PN 形成率（ %） 351 1832.75 ± 0.12*P 35 岁组相比
第六章-胚胎发育
第六章-胚胎发育
第六章胚胎发育
精⼦和卵⼦相遇后，在受精的同时，也使得卵⼦得以激活。受精卵中的雌原核和雄原核融合后，细胞质中发⽣重排，然后开始
进⾏分裂和分化，从⽽开始多细胞有机体的形成过程，由⼀个全能性的细胞逐渐形成能够执⾏不同功能的各种各样的细胞。此
外，由于卵⼦的体积⼀般都⽐体细胞⼤很多倍，通过多次的有丝分裂可将⼤量的卵细胞质分配到较⼩的细胞中，使所形成的细
胞的⼤⼩达到体细胞的⽔平。
第⼀节卵裂
⼀、卵裂的过程
卵裂(cleavage)为动物发育的第⼀个阶段，受精卵分裂产⽣很多⼩的细胞，称为卵裂球（blastomere）。虽然不同动物中，卵
裂的⽅式变化很⼤，但⼤多数动物在经过卵裂后，都形成⼀个细胞球，称为囊胚（blastula），中间为囊胚腔
（blastocoel）。但在昆⾍等⽆脊椎动物中并不形成腔。
除哺乳动物外，很多动物的卵裂是⼀个迅速且同步的过程。由于没有胚胎的净⽣长期，分裂速度很快，细胞数⽬越来越多,但
细胞变得越来越⼩。卵裂最终导致胚胎中卵裂球的⼤⼩达到正常体细胞的⽔平。此外，由于卵裂过程使卵裂球之间产⽣差异，
从⽽分化为不同的细胞。
体细胞在分裂时经历正常的细胞周期，即G1、S、G2及M期，⽽且在M期伴随⼀迅速的细胞增长期，使⼦细胞增长到母细胞的
⽔平，然后再分裂。然⽽，在卵裂的胚胎中，并不通过这⼀⽣长期，从⽽使卵裂球越分越⼩，达到体细胞的⽔平。海胆中，从
最初胞质为核体积的550倍，减少到最后的6倍。
另外，在卵裂中，细胞周期缩短，并⽆G1及G2期，只有S及M期，⽽且S及M 期均较短，这期间DNA从多位点上合成，⽽体
细胞中仅在⼏个位点上合成。⽖蟾在第12次卵裂后才有G1及G2期，⽽果蝇则在第14及17次卵裂时才有G1及G2期。
由于受精卵的基因组处于相对的转录不活跃状态，卵裂是同步的过程，主要依赖于卵细胞质中的母源性物质。通常，即使在抑
制转录或去细胞核的情况下，卵裂也能正常进⾏。在两栖类，直到原肠形成期之前，早期胚胎可以从母体核糖核蛋⽩体
胚胎形态对胚胎质量及妊娠结局的影响
・７６・
・论著・
（临床研究） 临京医学工程２０１２年１月第１９卷第１期
胚胎形态对胚胎质量及妊娠结局的影响
李娜，苗聪秀 ，毕慧玲，苗卉
（山西省长治医学院附属和平医院生殖遗传科，山西长治０４６０００）
【摘要】 目的研究探讨胚胎原核期及Ｄ２／Ｄ３胚胎形态学指标对胚胎质量及妊娠结局的影响。方法回顾性分析我院生殖中
心２０１０年８月至２０１１年８月期间行常规体外受精／单精子卵胞浆内注射胚胎移植的不孕症患者１６７例．根据是否妊娠分为２组．
妊娠组８１例，未妊娠组８６例，比较分析２组胚胎形态学评分和胚胎质量以及妊娠之间的关系。结果妊娠组与未妊娠组相比，
评分较高的胚胎、评分较低的胚胎、比较优质胚胎率和妊娠均有显著差异Ｐ＜０．Ｏ５。评分最高的胚胎优质胚胎率可达６７．０５％，而
最高形态评分的胚胎移植也有最高的妊娠率。结论对原核期及Ｄ２／Ｄ３天胚胎形态评分可预测胚胎的发育潜能。提高妊娠率，减
少移植胚胎数目，并可作为胚胎移植时选择胚胎的依据。 【关键词】 胚胎形态；优质胚胎；体外授精一胚胎移植；妊娠率
中图分类号：Ｒ３２１—３３；Ｒ７１ １．６ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４—４６５９．２０１２．０１．００７６
Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｈｍｎａｎ Ｅｍｂｒｙｏ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ Ｅｍｂｒｙｏ Ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ Ｏｕｔｃｏｍｅ
ＬＩ Ｎａ，ＭＩＡＯ Ｃｏｎｇｘｉｕ￣ＢＩＨｕｉｌｉｎｇ，ＭＩＡ０ Ｈｕｉ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｈｅｒｅｄｉｔｙ，ｔｈｅ Ａｆｆｌｉａｔｅｄ Ｈｅｐｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＣｈａｎｇｚｈｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｚｈｉ ０４６０００，Ｃｈｉｎａ；
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＭＩＡ ０ Ｃｏｎｇｘｉｕ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄ２／Ｄ３ ｏｎ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ
不同脱颗粒细胞时间对体外受精-胚胎移植治疗周期的影响
子版）２０１２年４月第６卷第８期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ａｏｆｉｌ １５．２０１２．Ｖｏ１．６．Ｎｏ．８ 不同脱颗粒细胞时间对体外受精。胚胎移植治疗周期的影响 彭良玉杨菁尹太郎 ・短篇论著・ 【摘要】 目的探讨体外受精一胚胎移植（ＩＶＦ—ＥＴ）巾常规ＩＶＦ后脱颗粒细胞时间离采卵的时间不同对 卵子受精与胚胎发育的影响。方法 收集２０１ １年９月至ｌＯ月在武汉大学人民医院生殖中心接受ＩＶＦ—ＥＴ’７厶 疗的１３５例不孕症患者资料，共１３６个周期，分析不同脱颗粒时间对卵子受精与胚胎发育的影响；根据实验 室内脱颗粒时间距离采卵的时间长短分为两组：Ａ组为≤１２ ｈ组，共５４个周期；Ｂ组为＞１２ ｈ组，共８２个周 期，比较两组的受精牢、正常受精率、卵裂率、可用胚胎率及临床妊娠率。结果两组分别穿刺Ｍ Ｕ期卵子 ５０２个和９１６个，Ａ组受精率及卵裂率明 高于Ｂ组，而正常受精率、可用胚胎率、临床妊娠率两组无统计学 差异。结论短时间内脱颗粒细胞能显著提高卵子的受精率及卵裂率。 【关键词】受精，体外；胚胎移植；细胞脱颗粒；卵裂 自从试管婴儿问世，辅助生殖技术发展至今已渐趋成熟，这 项先进的技术无疑给无数不孕不育夫妇带来了希望，对社会的 安定和谐具有重要意义。体外受精一胚胎移植（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａ． １ｉｏｎ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ，ＩＶＦ—ＥＴ）是辅助生殖技术中的一种，尽管 该技术目前已趋完善，但』天『为进行ＩＶＦ—ＥＴ要经历临床到实验室 的过程，其间很多因素都会对卵子的受精、胚胎的发育及妊娠结 局产生影响。体外共培养时间的长短对受精率、优胚率、种植率 及妊娠率的影响也成为近年来研究的热点。本义回顾性地对在 本院接受ＩＶＦ．ＥＴ的患者采集的卵子常规ＩＶＦ后，将脱颗粒细胞 时间距离采卵的时间不同对卵子受精与胚胎发育的影响进行分 析，旨在探索更佳的脱颗粒细胞时间，以提高ＩＶＦ．ＥＴ的成功率。 一、对象和方法 Ｉ．研究对象：选取２０１１年９～１０月在武汉大学人民医院生 殖中心接受ＩＶＦ—ＥＴ治疗的１３５例不孕患者，共１３６个周期，满足 以下两个条件：（１）不孕原因为女方因素，包括输卵管盆腔因素、 子宫内膜异位症、排卵障碍及不明原凶等。（２）男方精子质量均 符合行ＩＶＦ—ＥＴ标准。根据实验室内受精卵脱颗粒细胞距离采 卵的时间长短分为丽组：Ａ组：时间差≤１２ ｈ，共５４个周期，女方 年龄（３２．４６±４．４５）岁，男方年龄（３４．９４±４．２１）岁，不育年限 （４．５ｌ ４－３．０４）年，ＭⅡ期卵子数（９．３０±４．３９）个；Ｂ组：时间差＞ １２ ｈ，共８２个周期，女方年龄（３２．２２±３．８４）岁，男方年龄 （３４．３５±４．８２）岁，不育年限（５．４１ ４－３．６５）年，ＭⅡ期卵子数 （１１．１７±５．７４）个，差异均无统计学意义。 ２．研究方法：（１）促排卵方案及卵子收集：根据患者的年 龄、卵巢储备情况选择不同的方案。①短方案：在月经周期的第 ２天采用短效曲普瑞林（达必佳）０．１ ｍｇ降调节，第５～６天用卵 泡刺激素（ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｍｏｎｅ，ＦＳＨ）／人类绝经期促性腺 激素（ｈｕｍａｎ ｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，ＨＭＧ）启动，根据患者的年 龄不同，选择不同的启动剂量，常规启动剂量为１５０～２２５ ＩＵ；② 长方案在月经周：朗２１ ｄ采用促性腺激素释放激素激动剂（Ｇｎ． ＲＨａ）进行降调节，月经第５～６天用ＦＳＨ／ＨＭＧ启动。当２个以 上主导卵泡直径达１８ ｍｍ时，当晚９点肌注绒毛膜促性腺激素 （ＨＣＧ，丽珠集 ）５０００～１０ ０００ Ｕ，３６ ｈ后在阴道超声引导下穿 ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．Ｉ６７４－０７８５．２０１２．０８．０６０ 作者单位：４３（￣６０武汉大学人民医院生殖医学，Ｉ，心 通讯作者：杨蓿，Ｅｍａｉｌ：Ｄｒ ｙａｎｇｑｉｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ 刺取卵，采卵后第ｌ天开始肌注黄体酮４０ ｍｇ／ｄ。 （２）精液准备：手淫法取精于一次性无菌广口杯中，根据取 精当日精子质量情况用密度梯度离心和（或）上游法洗涤精子， 置３７ ｏＣ，５％ＣＯ２培养箱中备用 Ｊ。 （３）受精及脱颗粒细胞时间：取卵４—８ ｈ后，用ＭⅡ期的成 熟卵子按精卯（２０ ０００～５０ ０００）：１比例混合法受精。Ａ组：精卵 共同孵育小于１２ ｈ后脱去卵周围全部颗粒细胞；Ｂ组：精卵共孵 育超过１２ ｈ后，去掉卵周围的颗粒细胞。 （４）胚胎培养及质量评估：两组均于脱颗粒后将卵转入卵裂 培养基中，在倒置显微镜下观察卵子受精情况，正常受精（２ＰＮ 受精卵）的标准是见到两个清晰的原核。按照本中心的标准评 价可用胚胎并将其冻存。 （５）子宫内膜支持及妊娠结果判定：采卯后第３天根据患者 的年龄及助孕周期数选择２～３个优质胚胎进行移植，移植后给 予黄体酮肌注８Ｏ ｍｇ／ｄ，移植后ｌ２—１４ ｄ测血ＨＣＧ＞１０ ＩＵ／Ｌ为 生化妊娠，移植后４周超声ｆｆＩ现孕囊及心管搏动为临床妊娠。 ３．统计学分析：采用ＳＰＳＳ １６．０统计软件进行分析，资料结 果以均数４－标准差（ ±ｓ）表示，均数比较采用ｔ检验，率比较采 用卡方检验，以Ｐ＜０．０５为有统计学差异。 二、结果 １３６个周期中共获ＭⅡ期卵子１４１８个，其中Ａ组５４个周期 获ＭⅡ期卵子５０２个，Ｂ组８２个周期获ＭⅡ期卵子９１６个。Ａ 组的受精率及卵裂率均明 高于Ｂ组，差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）；Ａ组正常受精率、可用胚胎率高于Ｂ组，临床妊娠率低于 Ｂ组，但差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。两组患者卵子受精及 胚胎发育结果比较见表１。 三、讨论 ＩＶＦ．ＥＴ技术已广泛应用于治疗不孕症，经过临床用药，采集 出的多个可以利用的卵子需在实验室内进行ＩＶＦ、培养，各个生 殖中心有着各自的操作原则，均旨在于更利于培养…优质的胚 胎，提高ＩＶＦ的成功率。 长时间以来，多数生殖医学中心常规ＩＶＦ采用过夜受精（精 卯共培养１６—２Ｏ ｈ）的方法，这种传统受精的方式有很多弊端， 冈为在ＩＶＦ中，传统受精的过程必然导致卵子与颗粒细胞、与共 培育皿中的高密度精子长时间作用，使卵处于一个恶劣的环境 中。故现在人们已经开始探索更利于培养出优质的胚胎、提高 ＩＶＦ成功率的方式。
精子顶体酶活性与受精方式的选择
华北煤炭医学院学报２０１１年１月第１３卷第１期Ｊ Ｎｏａｈ Ｃｈｉｎａ Ｃｏａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１１ Ｊａｎｕａｒｙ，１３（１）
精子顶体酶活性与受精方式的选择
李冬梅李素云 黎平
（广东省江门市中心医院生殖中心 广东江门５２９０７０）
［摘要］ ①目的探讨精予顶体酶活性与不同受精方式下的胚胎发育的关系。②方法回顾性分析因精子顶体酶活性＜３０￣ＩＵ／ＩＯ 精 于行体外受精（ＷＦ）＋卵胞浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）的６８个治疗周期，观察不同受精方式下胚胎发育情况。据顶体酶活性分成３组：Ａ组 （２Ｏ～３０） ＩＵ／１０ 精子，共３５周期；Ｂ组（１０～２０）￣ＩＵ／１０。精予，共２３周期；Ｃ组＜１Ｏ Ｕ／１０。精子，共ｌ０周期。分析每纽ＩＶＦ受精率与
１ＣＳＩ受精率、卵裂率、优胚率。③结果Ａ、Ｂ组行常规ＩＶＦ，其受精率、卵裂率、优质胚胎率均低于ＩＣＳＩ，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 ｃ组行常规１ＶＦ与ＩＣＳＩ相比，其受精率显著降低（Ｐ＜０．０５），且完全不受精的发生率显著增加。④结论顶体酶活性＜１Ｏ￣ＩＵ／ＩＯ 精子
时行１ＶＦ完全不受精发生率增高，可移植胚胎明显减少，建议行ＩＣＳＩ治疗。
［关键词］ 体外受精一胚胎移植顶体酶活性 卵胞浆内单精子注射 ［中图分类号］Ｒ ６９８．２［文献标识码】Ａ［文章编号］ １００８—６６３３（２０１１）Ｏｌ一００１—０２
Ｓｐｅｒｍ ａｃｒｏｓｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ Ｌ／Ｄｏｎｇｍｅｉ，ＬＩ Ｓｕｙｕｎ，ＬＩ Ｐｉｎｇ（Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｊｉａｎｇｍｅｎ
Ｃｅｎｔｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｆｉａｎｇｍｅｎ ５２９０７０，Ｃｈｉｎａ）
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｐｅｒｍ ａｃｒｏｓｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｍｂｒｙｏ ｇｒｏｗｔｈｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ６８ ｐｅｒｉｏｄｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＩＶＦ＋ＩＣＳＩ（ｉｎ
卵母细胞第一极体形态对卵胞浆内单精子显微注射影响
卵母细胞第一极体形态对卵胞浆内单精子显微注射的影响
【摘要】 目的：探讨卵母细胞第一极体形态对提高卵胞浆内单精子显微注射受精率以及胚胎质量的影响。方法：选择60对不孕不育夫妇为研究对象，根据卵母细胞第一级体形态分为a、b、c三组，比较三组卵母细胞受精情况及胚胎发育差异。结果：a组卵母细胞受精后，受精卵3分者占85.0%，明显高于b组（55.0%）和c组（25.0%），差异均有统计学意义（p0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 卵母细胞收集 hmg控制性超排卵，通过肌肉注射的方式为患者应用1万单位hcg，36 h后借助b超技术经患者阴道将卵母细胞取出，然后将卵丘细胞去除，再进行卵胞浆内单精子显微注射[3]。
1.2.2 精子采集 利用手淫方式获得男性精液，然后对精液进行离心和稀释处理，最后放入培养箱中进行保存，培养箱的温度控制在37 ℃，内部co2浓度5%[4]。
1.2.3 icsi 在显微操作器下，借助于显微固定针、培养皿以及注射针进行icsi。
1.2.4 胚胎培养与胚胎移植 在培养液中对受精卵进行完全培养，待其成熟后将其移植至母体子宫内。
1.3 观察指标
（1）对卵母细胞第一极的形态进行认真观察并给予分级。若卵母细胞第一极的表面光滑，形状呈圆形，形态结构十分完整，则评为1级；若卵母细胞第一极的表面粗糙，形态结构比较完整，则评为2级；若卵母细胞第一极的形态结构不完整，且有碎片出现，则评为3级。（2）对受精卵进行认真观察并给予评分。若受精卵的两个核仁分布比较一致，两个原核相互靠近或连接，且大小一致，则评3分（优秀）；若受精卵的两个核仁分布不相似，两个原核相互靠近或连接，且大小一致，则评2分（良好）；若受精卵的两个原核大小不一致，且不相互靠近或连接，则评1分（较差）；若受精卵退化、未受精或多精受精则不予评分。（3）对胚胎发育情况进行认真观察并给予分级。若胚胎无碎片产生，且分裂比较对称，则评为a级；若碎片量低于10%，且分裂比较对称，则评为b级；若碎片量高于10%，则评为c级[4]。
ICSI胞质回吸程度对卵细胞受精及胚胎发育的影响
山东医药２０１２年第５２卷第３０期
ＩＣＳＩ胞质回吸程度对卵细胞受精
及胚胎发育的影响
马博 ，张红。
（１武警广东公安边防总队医院，广东深圳５１８０００；２广西医科大学）
摘要：目的探讨卵胞质内单精子注射（ＩＣＳＩ）时胞质回吸程度对卵细胞受精及胚胎发育的影响。方法 采用
ＩＣＳＩ作为授精方式，且取卵后成熟卵子数量≥１２个（不含无精子症患者）的不孕症患者３６例。取使用达菲林长方
案治疗的不孕症患者的同源卵细胞，根据ＩＣＳＩ中胞质回吸程度不同分等为Ａ、Ｂ、Ｃ组。Ａ组注射针回吸卵细胞胞
质不超过透明带；Ｂ组超过透明带，但在距透明带６５ Ｎｍ（约为卵子的半径）以内；Ｃ组超过透明带，且距透明带的位
置＞６５ ｍ。授精后３ ｄ内连续观察卵细胞受精情况及胚胎发育情况。结果 患者经达菲林长方案治疗后共获得
卵子７１３枚，其中成熟卵子６０１枚，Ａ、Ｂ、Ｃ组分别有１９９、２１７、１８５枚。Ｃ组的未受精率（１３．５１％）明显高于Ａ组
（６．５３％）和Ｂ组（６％），Ｐ均＜０．０５；Ｃ组单原核出现率（０％）低于Ａ组（４．５２％）和Ｂ组（６．９１％），Ｐ均＜０．０５。Ｃ
组退化率（８．１１％）略高于Ａ组（５．５３％）和Ｂ组（６％），Ｐ均＞０．０５。Ａ、Ｂ、Ｃ组卵裂率分别为９３．２９％、９２．４９％、
９３．７１％，优质胚胎率分别为６４．０５％、５６．２５％、５９．７％，其中Ａ组优质胚胎率分别高于Ｂ、Ｃ组（Ｐ均＜０．０５）。结论
ＩＣＳＩ中不同程度回吸卵细胞胞质对卵细胞的受精均无明显影响，但大量回吸胞质可导致卵细胞退化率及不受精
率增高，少量回吸胞质有利于卵细胞的受精及胚胎发育。
关键词：辅助生殖技术；卵胞质内单精子注射技术；胚胎；受精率；卵裂率
中图分类号：Ｒ７１１．６ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００２￣６６Ｘ（２０１２）３０￣０４１－ｏ２
卵胞质内单精子注射技术（ｉｃｓｉ）作为一种有效
辅助生殖技术自从出现以来，研究者就不断尝试不
体外受精后不同时期观察受精对胚胎质量的影响
中国计划生育和妇产科２０１０年第２卷第１期 ・５・
曼
体外受精后不同时期观察受精对胚胎质量的影响
方伟芬，孙燕萍，牛向丽，乃东红。，公方强，黄华，陈自洪
基金项目：广西计划生育委员会（桂人口计生研０７０３）；广西计划生育委员会（桂人口计生研０６０３） 作者单位：５３００２１广西南宁，广西壮族自治区人口和计划生育研究中心生殖研究科 作者简介：方伟芬，毕业于湖南医科大学（现名：中南大学湘雅医学院），副主任医师，主要研究方向为生殖医学
’通讯作者。Ｅ—ｍａｉｌ：ｎｄｈ５２０１６２＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
【摘要】 目的探讨体外受精后不同时期观察受精对胚胎质量的影响。方法随机对进行体外受精一
胚胎移植（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ—ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ，ＩＶＦ—ＥＴ）治疗的２６４个周期分两组进行观察，均于取卵后２—６
小时授精。Ａ组为实验组（１７６周期）：于受精后５小时左右去除卵丘细胞提早进行受精观察；Ｂ组为对照组（８８
周期）：受精后２０小时左右去除卵丘细胞观察原核形成的情况。分别统计两组的年龄、不孕年限、获卵数、正常
受精率、异常受精率、优质胚胎率。结果两组的女方年龄、不孕年限、获卵数、正常受精率、异常受精率、优质胚
胎率等差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ＩＶＦ—ＥＴ中提早观察受精对胚胎质量无明显影响。
【关键词】体外受精一胚胎移植；提早观察受精；胚胎质量
【中图分类号】Ｒ７１１．６ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７４—４０２０（２０１０）０１—０００５—０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—４０２０．２０１０．０１．０ｏ２
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｕｒｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ａｆｔｅｒ聊
ＦＡＮＧ Ｗｅｉ－ｆｅｎ，ＳＵＮ Ｙａｎ－ｐｉｎｇ，ＮＩＵ Ｘｉａｎｇ—ｌｉ，ＮＡＩ Ｄｏｎｇ－ｈｏｎｇ‘，ＧＯＮＧ Ｆａｎｇ－ｑｉａｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｈｎａ，ＣＨＥＮ Ｚｉ・ｈｏｎｇ
不同受精方式对获卵数较少患者妊娠结局的影响
・８２６・
文章编号：１００１—５９４９（２０１１）０９—０８２６—０３
不同受 宁夏医学杂志２０１１年９月第３３卷第９期ＮｉｎｇｘｉａＭｅｄ Ｊ，Ｓｅｐ．２０１１，Ｖｏｌ ３３，Ｎｏ．９
精方式对获卵数
较少患者妊娠结局的影响
吴 昕，罗 艳，刘春莲，胡 蓉，景万红 ・论著・
［摘要］ 目的 比较获卵数少的患者采用不同受精方式对其妊娠结局的影响。方法 回顾性分析１２７个周
期获卵数少于６个的患者，采用体外受精（ＩＶＦ）或卵胞浆内单精子显微注射术（ＩＣＳＩ），比较两组受精率、多精受精
率、取消周期率以及妊娠率的差异。结果 两组患者年龄、不孕年限、不孕原因差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；两
组患者获成熟卵率、可移植胚胎率、优质胚胎率、周期取消率、临床妊娠率差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），ＩＣＳＩ组较
ＩＶＦ组受精率、冷冻周期率明显高（Ｐ＜０．０５）；两组按精液情况分层，男方精液正常的患者ＩＣＳＩ组比ＩＶＦ组受精率
明显升高（Ｐ＜０．０５），但在多精受精率、可移植胚胎率、优质胚胎率、冷冻周期率、取消周期率和临床妊娠率、单个
取卵周期累计妊娠率等差异均无统计学意义；男方临界精液质量组的患者ＩＣＳＩ组可移植胚胎、冷冻周期率、取卵周
期累计妊娠率较ＩＶＦ组显著增加（Ｐ＜０．０５），周期取消率明显降低（Ｐ＜０．０５），受精率、优质胚胎率和临床妊娠率
均高于ＩＶＦ组，但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论男方临界精液质量组获卵少患者采用ＩＣＳＩ可提高卵子的利用
率及累计妊娠率，男方精液正常获卵少患者行ＩＣＳＩ无明显优势。
［关键词］ 卵胞浆内单精子显微注射术；体外受精一胚胎移植；妊娠率
［中图分类号］ Ｒ７１４．】３ ［文献标识码］ Ａ
Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ｌｏｗ ｏｏｃｙｔｅｓ ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ
卵巢生理状态、精子获能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响
ＳＨＩＹＡＮ ＹＡＮＪＩＵ
卵巢生理状态、精子获能时间及精卵共孵育时间
对猪体外受精及胚胎发育的影响
石俊松 ，赵云翔’，罗绿花 ，周荣 ，郑少芳 ，周秀 ，麦然标 ，吴珍芳
（１．广东温氏食品集团有限公司研究院，广东新兴５２７４００；２．华南农业大学动物科学学院，广东广州５１０６４２）
摘要：猪的体外受精受温度、多精受精等因素影响一直效率较低。本文研究了卵巢生理状态、精子 获能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响。实验结果表明：（１）从存在黄体的卵 巢上获取的猪卵母细胞成熟率和卵裂率均显著高于从无黄体存在的卵巢上获取的卵母细胞（Ｐ＜
０．０１），但囊胚率无显著差异。（２）精子在受精液中获能２０ ｒａｉｎ对猪卵母细胞的受精和胚胎发育最 好，卵裂率和囊胚率显著高于其他获能时间（Ｐ＜Ｏ．０１）。（３）精卵共孵育６ ｈ和１２ ｈ对受精和胚胎发
育无显著影响，但孵育１２ ｈ的囊胚率稍高于６ ｈ的。 关键词：猪；体外受精；胚胎发育
中图分类号：￥８１４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５—２７３９（２０１１）０１—００１５—０５
一般情况下，从屠宰场采集到的猪卵巢，按照黄
体情况分为有黄体卵巢（功能黄体以及黄体消退期 的）、无黄体卵巢２种。黄体对卵母细胞的成熟及受
精有何影响，国内鲜有报道。而精子获能时间和精卵
共同孵育的时间是体外受精的关键。关于精子体外 获能时间普遍采用的方式是获能１ ｈ，但也有人认为
不需要额外获能，因为精卵共同孵育时就在受精液 中进行，精子可以在结合前获能…。对精卵结合时间
也颇有争议，虽然现在普遍报道采用５～６ ｈ，但体外
受精时原核形成需要８ ，过早地将受精卵转移到
胚胎培养液，是否会对胚胎发育有影响，尚未可知。 本实验的目的是寻求猪体外受精中合适的精子获能
时间及精卵共孵育时间，以及从屠宰场获取的各种
卵巢的可用性，为猪体外受精效率的提高提供一些
依据。 １材料与方法
女性原发不孕3种体外受精方式效果比较
中国计划生育学杂志２ｏｏ８年第ｌ２期总第１５８期
收稿日期：２００８—０９—２２
作者：许虹南方医科 大学附属南方医 院生殖医学中心 （广州．５１０５１５） 李红南方医科 大学附属南方医 院生殖医学中心 全松南方医科 大学附属南方医 院生殖医学中心 通讯作者：邢福祺南方 医科大学附 属南方医院 生殖医学中 心（广州， ５１０５１５） 女性原发不孕３种体外受精方式效果比较
许虹李红全松邢福祺
摘要目的：探讨女性原发不孕患者行体外受精（ＩＶＦ）、卵细胞浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）和５０％ＩＶＦ
加５０％ＩＣＳＩ ３种受精方式对受精率和胚胎发育潜能的影响，为是否扩大ＩＣＳＩ的应用指征提供依据。
方法：回顾性分析１６３个周期女性原发性不孕患者体外助孕资料，分为Ａ组（１１９个ＩＶＦ—ＥＴ周期）、
Ｂ组（２９个ＩＣＳＩ周期）、ｃ组（１５个５０％ＩＶＦ加５０％ＩＣＳＩ周期），对３组患者的一般情况、促排卵过程
中卵巢反应性指标、受精、胚胎质量和妊娠情况进行分析。结果：Ａ组的每获得卵受精率明显高于ｃ
组和Ｂ组，差异有统计学意义（Ｐ＝０．０００），但３组的受精率、正常受精率差异无统计学意义。３组＞４
细胞胚胎、细胞碎片＜２０％的胚胎和优良胚胎比率以及妊娠率差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。Ａ
组的完全受精失败率为６．７２％（８／１１９），而另外两组均无完全受精失败发生。结论：ＩＣＳＩ不能改善女
性原发不孕患者的体外助孕临床结局，ＩＣＳＩ的扩大应用应慎重。
关键词体外受精一胚胎移植术卵细胞浆内单精子注射受精失败妊娠率
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ３ Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｆｅｍａｌｅ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ Ｘｕ
Ｈｏ ，ｋ Ｈｏ ，Ｑｕａｒｔ Ｓｏｎｇ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｎａｎｆａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ