肠道病毒的分类与检测
肠道病毒
肠道病毒（enterovirus）1.肠道病毒：（1）属于小RNA病毒科中的肠道病毒属成员，由粪-口途径传播。
（2）虽然感染胃肠道，但却很少引起胃肠道疾病，其靶器官以神经系统、肌肉和其他系统为主，引起脊髓灰质炎、脑膜炎、脑膜脑炎、心肌炎、心周炎、手足口病等疾病。
（3）一种病毒血清型可引起几种不同的疾病综合征，而几种不同的血清型又可引起同一种疾病。
2. 肠道病毒种类与分型（1）脊髓灰质炎病毒(poliovirus)：分1、2、3三型（2）柯萨奇病毒(coxsackie virus) ：分A、B两组；（A组：包括A1~A22、A24型；B组：包括B1~B6型；）（3）埃可病毒(ECHO virus)：包括1~9、11~27、29~33型（4）新型肠道病毒：包括68、69、70、71型3. 脊髓灰质炎病毒：①是引起脊髓灰质炎的病原体；②脊髓灰质炎又称为小儿麻痹症，是一种危害中枢神经系统的传染病。
（1）临床意义：①传播途径：经粪-口途径感染，潜伏期2~10天②传染源：患者及无症状隐性感染者③临床表现：无症状感染、顿挫型脊髓灰质炎、无麻痹性脊髓灰质炎、麻痹型脊髓灰质炎1~2%（2）致病机制：（3）生物学特性：①病毒近似球形，直径27～30nm，核心为单正链RNA，约7.2～8.5kb，核衣壳呈20面体立体对称，无包膜。
②衣壳含4种蛋白（VP1～VP4），VP1、VP2和VP3暴露在病毒体表面，是抗体结合位点；VP4在核心内部与RNA结合。
（4）培养特性：①细胞：人胚肾、人胚肺、猴肾细胞、Hela、HEp-2、Vero等②最适温度：36～37℃CPE：培养3～5天出现③抵抗力较强（5）微生物学检验：1.标本采集与处理标本：粪便、发病早期的咽部分泌物等2.病毒分离与鉴定：人或猴肾原代细胞、Hela、V ero等细胞24～48小时可出现典型CPE3.抗原检测：ELISA法4.核酸检测：用RT-PCR等方法5.抗体检测：单份血清检测IgM，双份血清检测抗体效价升高4倍（6）减毒活疫苗：①剂型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型；②用法：口服（温水）；③机理：产生分泌型IgA，阻止病毒入血；4. 柯萨奇病毒（Coxsackievirus）：柯萨奇病毒是1948年在美国纽约州柯萨奇镇，从一名疑似脊髓灰质炎患者粪便中用接种乳鼠的方法首次分离出的，因而得名。
肠道感染病毒剖析
手 足 口 病
新肠道病毒
1976年ICTV决定新发现的肠道病毒不再划分以来某一 型别，而统称为新肠道病毒××型
68型——与呼吸道感染有关（从呼吸道感染者咽部分离 69型——未发现与人类疾病有关（从直肠拭子中分离） 70型——急性出血性结膜炎病毒
从患者结膜中分离 生物学特征符合肠道病毒 致病性不同——不具有嗜肠道性（存在于眼结膜）
破坏脊髓前角运动细胞
非麻痹型（无菌性脑膜炎） 发热、头痛、颈项强直、疼痛等
麻痹型—肢体麻痹 （个别死亡）
暂时型 永久型
免疫力： 对同型可获得牢固免疫力
Polio victims
Professor sabin
防治
一般预防：隔离患者、保护水源、注意 饮食卫生
特异预防：口服减毒活疫苗 紧急预防——丙种球蛋白
➢ ——直接或间接接触感染 ➢ ——最适合温度低于（33℃）优先感染眼部
所致疾病——急性出血性结膜炎“红眼病”
71型——与柯萨奇病毒相似，抗原性不同 除脊髓灰质炎以外的肠道病毒尚无疫苗
第二节 轮状病毒
是引起婴幼儿急性腹泻最重要病原体，可导 致死亡。
球形双股DNA，20面体，双层衣壳，无包 膜，外形呈车轮状——具有诊断价值
病毒在肠道中繁殖，靶器官在肠道外，临床症 状多样化
▪ 无菌性脑膜炎、脑炎和轻瘫 ▪ 疱疹性咽颊炎 ▪ 手足口病 ▪ 流行性胸痛、肌痛
▪心肌炎、心包炎 ▪急性上感、肺炎 ▪急性结膜炎等
埃可病毒
（人肠道致细胞病变孤儿病毒 ECHO）
生物学性状与脊髓灰质炎病毒相似，可引起人、 猴肾细胞的CPE，但对猴及乳鼠均不致病
肠道病毒不同种类病毒最初的区分标准
脊髓灰质炎
肠道病毒医学PPT
核酸检测
利用分子生物学技术，如 PCR、基因测序等，直接 检测病毒核酸。
抗原检测
通过免疫学方法检测病毒 抗原，快速简便，但可能 出现假阳性。
诊断与检测的注意事项
采集标本
实验室安全
准确性与可靠性
采集新鲜、无污染的标 本，避免交叉感染。
遵循生物安全操作规程， 防止病毒扩散和感染。
选择可靠的诊断方法和 检测技术，确保诊断结 果的准确性和可靠性。
治疗与预防的注意事项
及时就医
一旦出现肠道病毒感染症状，应立即就医，以便早期治疗和预防 并发症。
遵循医嘱
按照医生的建议进行治疗和预防，不要自行更改治疗方案或停药。
监测病情
在治疗和预防过程中，密切监测病情变化，如有异常及时就医。
04 肠道病毒与其他医学领域的关系
CHAPTER
与免疫学的关系
免疫应答
疾病控制
了解肠道病毒的传播方式和影响因素有助于制定 有效的防控策略，减少病毒传播和疾病发生。
3
公共卫生教育
针对肠道病毒的传播和预防进行公共卫生教育， 提高公众的防控意识和自我保护能力。
05 肠道病毒的未来研究方向
CHAPTER
新药研发和治疗方法的研究
抗病毒药物的研发
针对肠道病毒的抗病毒药物的研发是 未来的重要研究方向，旨在寻找更有 效、更安全的治疗药物，以降低肠道 病毒对人类的危害。
谢谢
THANKS
设计抗病毒药物。
药物筛选
02
利用肠道病毒进行药物筛选，可发现具有抗病毒活性的小分子
化合物或天然产物。
药物作用机制
03
研究肠道病毒与药物的相互作用有助于深入了解药物的作用机
制，提高疗效和降低副作用。
第27章肠道病毒
肠道病毒肠道病毒（enterovirus）归属于小RNA病毒科（Picornaviridae ）,有67个血清型，分型的主要依据为交叉中和试验。
与其在同一科和人类致病有关的病毒还有鼻病毒及甲型肝炎病毒。
人类肠道病毒包括：1．脊髓灰质炎病毒（poliovirus）有1、2、3三型；2．柯萨奇病毒(coxsackievirus)分A、B两组，A组包括1~22，24型；B组包括1~6型；3．人肠道致细胞病变孤儿病毒（简称埃可病毒）（enteric cytopathogenic human orphan virus,ECHO）包括1~9，11~27，29~33型。
4．新肠道病毒，为1969年后陆续分离到的，包括68，69，70和71型。
脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒是脊髓灰质炎的病原体。
病毒侵犯脊髓前角运动神经细胞，导致弛缓性肢体麻痹，多见于儿童，故亦称小儿麻痹症。
一、生物学性状球形，直径27nm，核衣壳呈二十面体立体对称，无包膜(图27-1)。
基因组为单正链RNA，长约7.4kb,两端为保守的非编码区，在肠道病毒中同源性非常显著，中间为连续开放读码框架。
此外，5’端共价结合一小分子蛋白质Vpg，与病毒RNA合成和基因组装配有关；3’端带有polyA尾，加强了病毒的感染性。
病毒RNA为感染性核酸，进入细胞后，可直接起mRNA作用，转译出一个约2200个氨基酸的大分子多聚蛋白(polyprotein),经酶切后形成病毒结构蛋白VP1~VP4和功能性蛋白。
VP1、VP2和VP3均暴露在病毒衣壳的表面，带有中和抗原位点，VP1还与病毒吸附有关；VP4位于衣壳内部，一旦病毒VP1与受体结合后，VP4即被释出，衣壳松动，病毒基因组脱壳穿入。
图27-1病毒对理化因素的抵抗力较强，在污水和粪便中可存活数月；在胃肠道能耐受胃酸，蛋白酶和胆汁的作用；在pH3-9时稳定，对热、去污剂均有一定抗性，在室温下可存活数日，但50(C可迅速破坏病毒，1mol/L MgCl2或其它二价阳离子，能显著提高病毒对热的抵抗力。
肠道传染病常见致病菌实验室检测
（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）
副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP） 是一种革兰氏阴性，无芽胞， 呈弧状、杆状、丝状等多种 形状的嗜盐性细菌。进食含 有该菌的食物可致食物中毒， 临床上以急性起病、腹痛、 呕吐、腹泻及水样便为主要 症状。传染源主要为带菌的 海产品，近海淡水鱼带菌较 高。
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（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）
1 诊断依据 1.1 流行病学史：患者有不洁饮食和（或） 与菌痢患者接触史。 1.2临床表现 1.2.1 潜伏期：数小时至 7d，一般 1d～ 3d。 1.2.2 临床症状和体征：起病急骤，畏寒、 寒战伴高热，继以腹痛、腹泻和里急后重， 每天排便 10 次～20 次，但量不多，呈脓 血便，并有中度全身中毒症状。重症患者伴 有惊厥、头痛、全身肌肉酸痛，也可引起脱 水和电解质紊乱，可有左下腹压痛伴肠鸣音 亢进。 1.2.3 临床分型 1.3 实验室检测 1.3.1 粪便常规检查，白细胞或脓细胞 ≥15/HPF（400 倍） ，可见红细胞、吞 噬细胞。 1.3.2 病原学检查，粪便培养志贺菌阳性。
2 诊断 带菌者 ：无任何临床表 现、从粪便中分离到伤寒 沙门菌或副伤寒沙门菌。 疑似病例：1.1任何一项 +1.2.1或 1.2.1+1.2.2 任何一项 体征或1.2.1+1.3.1 临床诊断病例： 1.2.1+1.2.2 中任何一 项体征+（1.3.1或 1.3.2） 确诊病例： 1.2.1+1.3.3或 1.2.1+1.3.4
分离培养：新鲜粪便或肛拭子直接划线接种 或于3%氯化钠碱性胨水36℃±1℃增菌816h后接种于弧菌显色或硫代硫酸盐柠檬酸 盐胆盐蔗糖琼脂 (TCBS)等培养基 36℃±1℃培养18-24h。 LOGO
肠道病毒及检验ppt课件
髓灰质炎的病原体。人是其唯一自然宿 主，传染源是患者和无症状隐性感染者， 经粪-口传播，最终侵入中枢神经系统破 坏脊髓前角运动神经元，引起肢体肌肉 不对称弛缓性麻痹。
8
特性
球形无包膜单股正链RNA病毒，核衣壳呈二十
面体立体对称。根据抗原性可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型，三型间无交叉。 病毒分离培养以人胚肾、猴肾细胞最佳，病毒 增殖引起严重的CPE。 在自然环境中生命力较强，对热、紫外线抵抗 力差。 病后，对同型具有牢固的免疫力，主要是SIgA、 血清中IgG、IgA、IgM体液免疫发挥作用。
肠道病毒及检验
微生物检验教研室
1
第三十七章 肠道病毒及检验
第一节 第二节 第三节 第四节
概述 脊髓灰质炎病毒 柯萨奇病毒与埃可病毒 其他肠道病毒
2
第一节 概述
分类
（一）小RNA病毒科，肠道病毒属 脊髓灰质炎病毒（poliovirus）：1-3型 柯萨奇病毒（coxsackievirus）：A组1-22，24型；B组16型 人肠道致细胞病变孤儿病毒或埃可病毒（enteric cytophogenic human orphan virus，ECHO）：1-9，1127，29-31型 新型肠道病毒：68-71型 （二）急性胃肠炎病毒 急性胃肠炎病毒：轮状病毒（rotavirus）、肠 道腺病毒（entreic adenovirus）、Norwalk病毒
12
脊髓灰质炎死活苗的比较
项目 接种方法 抗体产生 间接免疫 稳定性 副作用 活疫苗 （OPV） 口服糖丸 死疫苗 （IPV） 肌肉注射
血清抗体、分泌抗体 血清抗体 能通过接种者粪便 排毒免疫更多人群 差,不易保存 易保存 极少数引起疫苗相关 脊髓灰质炎 更好 一般没有
肠道病毒的分类与检测修订稿
肠道病毒的分类与检测 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-肠道病毒的分类与检测摘要肠道病毒可引发多种感染，并且发病以综合症出现，一种综合症可有不同病毒所引起，同一种病毒可以导致不同综合症是肠道病毒感染的普遍现象。
目前除脊髓灰质炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的重要病原之一。
肠道病毒主要经粪一口或呼吸道传播，所以对肠道病毒感染作出准确、及时的诊断是非常必要的。
肠道病毒（Enterovirus）是小RNA病毒科，有67个血清型。
人类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、埃可病毒（Echo）、甲型肝炎病毒以及新型病毒。
目前常用的检测肠道病毒的方法有病毒分离培养、血清学鉴定、分子生物学方法，近年来，一些新型方法也使得肠道病毒的检测快速化与准确化。
关键词肠道病毒/诊断/分类1 肠道病毒形态特点肠道病毒是球形、无包膜、核衣壳20面体立体对称。
肠病毒属在酸性pH下，在病毒制品中可观察到空衣壳，有时可观察到少量（1%）的重颗粒。
组单一的VPg蛋白，但不编码L蛋白。
不同肠道病毒及肠道病毒与鼻病毒间整个序列一致性大于50%，一种肠道病毒不同株之间整个核苷酸序列的一致性大于75%。
病毒主要在肠道中，也能在、和其它一些中复制。
大多数病毒无明显症状，病毒感染的临床症状包括轻、脑炎、肌炎、和炎。
耐酸和脂溶剂，不易被胃酸和胆汁灭活，在污水和粪便中活数月。
2肠道病毒的分类2.1脊髓灰质炎病毒此病症的典型临床经过六个阶段（、前驱期、、瘫痪期、恢复期和残留）。
期间表现为低热及、、、不安、嗜睡、、症、、过敏，突发急性弛缓性麻痹等症状，最后多遗留下终生残疾。
脊髓灰质炎病毒通过患者的粪便或分泌物传染。
人类是脊髓灰质炎病毒的唯一宿主，长期携带的情况（例如无症状，但仍持续排出病毒长达6个月以上）很罕见。
肠道病毒
复制 互补RNA（-）
病毒蛋白质合成
Poliovirus基因组 作模板 翻译 前体蛋白质(2200aa) 结构蛋白+酶蛋白 VP3+VP1+VP0 VP4+VP2
复制
病毒RNA（+）
抗原组成
D 抗原(N抗原): 完整的病毒颗粒，有感 染性，为型特异性抗原。根据其D抗原 的不同，分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。
白VP4（血凝素，决定血清 型和感染性），VP7（糖蛋 白，促病毒穿入），均为中 和抗原。
病毒外衣壳
轮状病毒的分组
根据轮状病毒抗原性及遗传性的不同将其分 为A～G 7个血清型，其中A、B、C 3型是人类 腹泻的重要病原，D～G型只引起动物腹泻。血 清型之间无交叉反应。 A组 B组 C组 D组 E组 人类致病的主要病原体---婴儿 感染人----成人 感染猪，偶尔也感染人 感染鸟类 感染猪
双链RNA病毒，分11个节段，分别编码6个结构 蛋白和5个非结构蛋白，其中：
1、2、3片段编码核心蛋白VP1、VP2和VP3，具 有转录酶和复制酶的作用。
轮状病毒
轮状病毒的结构及其核心RNA11条节段与编码蛋白质
病毒内衣壳
6片段编码内衣壳 蛋白VP6，为病毒组 和亚组特异性抗原。
4和9片段编码外衣壳蛋
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肠道病毒
Enterovirus
主要内容
脊髓灰质炎病毒 急性胃肠炎病毒
甲型肝炎病毒
肠道感染病毒
简称肠道病毒(enterovirus)，通过污染的饮食， 经粪－口途径传播，引起消化道传染病。
主要包括肠道病毒和急性胃肠炎病毒
肠道病毒 (小RNA病毒科)
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肠道病毒的分类与检测摘要肠道病毒可引发多种感染，并且发病以综合症出现，一种综合症可有不同病毒所引起，同一种病毒可以导致不同综合症是肠道病毒感染的普遍现象。
目前除脊髓灰质炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的重要病原之一。
肠道病毒主要经粪一口或呼吸道传播，所以对肠道病毒感染作出准确、及时的诊断是非常必要的。
肠道病毒（Enterovirus）是小RNA病毒科，有67个血清型。
人类肠道病毒包括：脊髓灰质炎病毒（Poliovirus）、柯萨奇病毒（Coxsackievirus）、埃可病毒（Echo）、甲型肝炎病毒以及新型病毒。
目前常用的检测肠道病毒的方法有病毒分离培养、血清学鉴定、分子生物学方法，近年来，一些新型方法也使得肠道病毒的检测快速化与准确化。
关键词肠道病毒/诊断/分类1 肠道病毒形态特点肠道病毒是球形、无包膜、核衣壳20面体立体对称。
肠病毒属病毒粒子在酸性pH下稳定，在病毒制品中可观察到空衣壳，有时可观察到少量（1%）的重颗粒。
基因组编码单一的VPg蛋白，但不编码L蛋白。
不同肠道病毒及肠道病毒与鼻病毒间整个核苷酸序列一致性大于50%，一种肠道病毒不同株之间整个核苷酸序列的一致性大于75%。
病毒主要在肠道细胞中复制，也能在神经、肌肉和其它一些组织中复制。
大多数病毒感染无明显症状，病毒感染的临床症状包括轻微脑膜炎、脑炎、肌炎、心肌炎和结缔组织炎。
耐酸和脂溶剂，不易被胃酸和胆汁灭活，在污水和粪便中活数月。
2肠道病毒的分类2.1脊髓灰质炎病毒此病症的典型临床经过六个阶段（潜伏期、前驱期、瘫痪前期、瘫痪期、恢复期和残留麻痹）。
感染期间患者表现为低热及咽痛、咳嗽、腹泻、不安、嗜睡、多汗、脑膜刺激症、肌肉疼痛、皮肤感觉过敏，突发急性弛缓性麻痹等症状，最后多遗留下终生残疾。
脊髓灰质炎病毒通过患者的粪便或口腔分泌物传染。
人类是脊髓灰质炎病毒的唯一宿主，长期携带病毒的情况（例如无症状，但仍持续排出病毒长达6个月以上）很罕见。
服用脊髓灰质炎疫苗（现在我国使用I、II、III型混合糖丸疫苗，是由减毒的脊髓灰质炎病毒制成的）是预防本病的主要措施。
消灭脊髓灰质炎最根本的手段是提高人群免疫水平，断绝脊髓灰质炎野毒株在人群中的传播。
脊髓灰质炎病毒分为三个血清型；两种不同抗原：D抗原和C抗原。
D（dense，致密）抗原：具有病毒RNA，为完整的病毒颗粒，又称N（native）抗原；C（coreless，无核心）抗原：不含RNA，是D颗粒经56 ℃灭活，RNA释放后形成的无核酸空心衣壳，故又称H（heated）抗原；不同型别病毒C抗原可发生交叉反应，但D抗原无交叉反应；传播方式主要是粪-口传播，所致疾病是脊髓灰质炎。
中毒机理：粪－口途径传播为主—上呼吸道，咽喉，肠道为侵入门户—先在局部粘膜和淋巴结中增殖—入血，形成第一次病毒血症—带有受体的靶组织（脊髓前角细胞、背根神经节细胞、运动神经细胞等）—在靶细胞中再次增殖后形成第二次病毒血症及临床症状。
检测方法第一是微生物学检查，检测方法：病毒分离检查：取咽漱液、粪便等样本，细胞培养出现CPE；血清学诊断：中和试验；病毒核酸测定。
第二是防治:口服减毒活疫苗或者注射灭活疫苗.2.2 柯萨奇病毒柯萨奇病毒[2]对乳鼠的敏感性很高，根据它们感染乳鼠产生的病灶，柯萨奇病毒可以分为a、b两组。
a组有23型病毒，b组有6型病毒。
A组病毒：诱发新生乳鼠弥漫性骨胳肌炎，导致驰缓性麻痹。
B组病毒：诱发新生乳鼠局灶性骨胳肌炎，导致痉挛性麻痹。
通过型特异性抗原，经中和试验。
Elisa方法等可以对各型进行鉴定。
所有的b组及a组的第9型有共同的组特异性抗原，在b组内病毒之间有交叉反应，但是a组病毒没有共同的组特异性抗原。
a组某些型别的型特异性抗原可在37℃引起人类O型红细胞凝集反应。
柯萨奇病毒A型感染潜伏期1-3天，上呼吸道感染，起病急，流涕、咳嗽、咽痛、发烧，全身不适。
典型症状为疱疹性咽峡炎，即在鼻咽部、会厌、舌和软腭部出现小疱疹，粘膜红肿，淋巴滤泡增生、渗出，扁桃体肿大，伴吞咽困难，食欲下降。
据调查（R0binson，1958）伴有口咽部疱疹和皮疹的急性热病中，79%为柯萨克A型病毒所致。
检测方法：1.病人体液（脑脊液、疱疹液、心包液、胸水等）分离出病毒即可确诊。
）2．恢复期血清出现抗体，或双份血清抗体效价增高4倍以上。
2.3 埃可病毒埃可病毒(ECHO)（ECHO-viruses）病毒即肠性细胞致病性人类孤独型病毒（enteric cytopatho-genic human orphan virus）。
只对人类有感染性，多发于夏、秋季，绝大多数是隐性感染。
ECHO病毒分为30多个型（1-34型，其中8、10、28、34型已归入其他病毒）。
各型致病力和致病类型也不同，如ECHO6、19型致病力较强，它类似于柯萨奇病毒B型引起急性胸痛和心肌病。
主要经口-粪途径传播，也可通过咽喉分泌物排除病毒经呼吸道传播。
病毒进入人体在咽部机肠粘膜细胞增殖后，侵入血流，形成病毒血症。
ECHO病毒感染的临床表现类似于风疹，第一孕季感染虽可累及胎儿，但很少引起畸形。
发病年龄2.5～33岁，常见的症状为上呼吸道感染、发烧、非化脓性脑膜炎和皮疹。
皮疹为斑丘疹或麻疹样皮疹，持续1～3天自然消退。
可从大便、咽分泌物和脑脊液中分离出病毒。
防治：埃可病毒疹尚无特殊疗法。
皮疹对症处理。
对易感的婴幼儿可注射丙球蛋白3～6ml，脊髓灰质炎减毒疫苗可干扰本病毒的感染。
ECHO-3，4，6，9，11型减毒活疫苗正在研制中。
目前尚未有特效治疗，主要采用对症和支持疗法。
静脉注射人血丙种球蛋白对新生儿严重感染可能有效，婴幼儿腹泻也有导致脱水及酸中毒的可能，须酌情给予输液治疗。
2.4 甲型肝炎病毒临床上表现为急性起病，主要表现为乏力、食欲减退、及肝功能异常，部分病例可出现黄疸。
甲型肝炎病毒主要通过粪口途径传播，传染源多为病人。
甲型肝炎的潜伏期为15-45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5-6天就存在与患者的血液和粪便中。
发病2-3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也随之消失。
从感染者的粪便中排出，通过不同的途径污染了食物和用具，又经过口侵入人体。
这就是甲肝病毒的传播方式。
2.5 新型病毒新型病毒指在1969年以后鉴定的除脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒以外的几种小RNA病毒，主要包括68-71共四个血清型。
其中68型分离自下呼吸道感染者，69型分离自健康人肛门拭子，70型分离自急性出血性结膜炎患者，71型分离自无菌性脑膜炎患者的粪便和脑脊液。
EV70主要引起流行性出血性结膜炎；EV71感染主要引起手足口病，还可引起中枢神经系统和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统疾病。
3 检测方法3.1 病毒分离培养利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的标准。
病人标本是最常采集的标本。
病毒培养对缩短抗生素治疗和住院期有积极作用，但是病毒的分离鉴定繁琐、费力、耗时，一般一周才能观察到细胞病理反应，而且许多肠道病毒不能进行细胞培养，或者可以培养但不出现细胞病理效应。
3.2 血清学鉴定[2]分离病毒和利用组合血清中和试验是对病毒定型的重要方法。
肠道病毒的血清学鉴定中，多选用组合血清。
此方法检测中不适用于早期诊断，可作为回顾性诊断；且由于肠道病毒血清型众多，临床使用检测价值有限，而多为流行病学采用。
3.3 分子生物学诊断3.3.1 PCR技术由于各型病毒具有共同基因组序列，也可检出几乎所有血清型。
PCR检测材料用量少、快速、灵敏度高且具有特异性，并可通过设计不同的引物进行病毒分型，用于检测相当宽的肠道病毒血清型。
卢亦愚[3]等人发明了用肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒及检测方法，灵敏度高，非常适用于如手足口病等有肠道病毒感染引起突发疫情的实验室早期诊断，该方法具有高特异性。
3.3.2 核酸杂交技术[4]由于EV各型间存在序列高度保守区，利用针对此保守区的通用互补脱氧核糖核酸(cDNA)核酸探针可进行大范围的EV诊断。
3.3 其他新型方法2000年，Notomi 等开发了一种新颖的恒温核酸扩增方法，即所谓环介导等温扩增法。
[5]该方法利用一种链置换DNA 聚合(BstDNApolymerase)和两对特殊的引物，特异地识别靶序列上的6 个独立区域，使反应在模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，从而保证引物可以在等温条件下(65℃左右)与模板结合并进行链置换扩增反应。
RT-LAMP 检测方法在满足特异性同时，灵敏度可达到普通RT-PCR 法的10-100 倍，或荧光RT-PCR 法的1/10 或与之在同一水平。
优点：（1）高特异性（2）高灵敏度（3）鉴定简便（4）操作简单（5）快速、高效：整个扩增反应只需1-1.5小时[5]。
参考文献[1]腾峥，张曦上海市疾病预防控制中心微生物检验室肠道病毒的检测方法及评价[2]张素兰，张霞平柯萨奇病毒感染临床表现的多样性中国医学文摘[3]卢亦愚，严菊英，徐昌平浙江省疾病预防控制中心肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒及检测方法[4]杨秀惠，严延生肠道病毒诊断与分类[5]何雅青深圳市疾病预防控制中心 RT_LAMP技术在肠道病毒检测中的应用[6]赵化冰，尹光雅，赵宏中国人民武警警察部队医学院用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的引物组及检测体系。