酶联免疫吸附测定技术
酶联免疫吸附测定技术
技术简介
酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA 具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。
核心原理：
ELISA必须遵守以下3个核心原理：1）抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。
应用方向：
ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。
在医学领域上，能够进行检测的抗原包括：内分泌方面的雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等，血液学方面的凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、红细胞抗原及结合球蛋白（Hapto Globin）等，肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗
2）再加样品，使目标检测抗原形成抗原-抗体复合物；
2）加入抗体量不合适也会造成结果偏低或偏高——应确定使用的是建议抗体用量，或者为了
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美国麻省理工学院生物医学工程中心。公司以具有自主知识产权的前沿生物
纳米表面技术为根本，定位于生命科学研究、生物医药研发和疾病诊断行业
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狸”的口号是把高端产品做成常规，把常规产品做到极致。海狸公司的
BeaverBeads™系列免疫磁珠具有高度均一的IgG结合能力，一步纯化可从血
清样品中分离出纯度大于90%的抗体。联系：海狸纳米市场部
酶联免疫吸附测定法基本步骤
酶联免疫吸附测定法基本步骤 酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种常用的生物分析技术，主要用于检测生物样本中特定物质的含量。下面将介绍ELISA的基本步骤，包括固相吸附、样品处理、标记物结合、洗涤、底物反应和测定。 1. 固相吸附 酶联免疫吸附测定法首先需要在固相载体上固定特异性抗原或抗体，常用的固相载体有微孔板、磁珠等。将固相载体涂覆抗原或抗体溶液，并在适当的条件下使其吸附在载体表面。这样就形成了固定的抗原或抗体层，用于捕获待测物质。 2. 样品处理 待测样品需要经过一系列处理步骤，以提取或预处理目标物质。这些处理步骤可能包括稀释、加标、离心、洗涤等，以确保样品中目标物质的浓度适宜并且不受其他干扰物质的影响。 3. 标记物结合 经过样品处理后，将待测样品加入固相载体中，并与固定的抗原或抗体发生特异性结合。这样，目标物质就被捕获在固相载体表面上。同时，将与酶结合的二抗或标记物加入到样品中，与待测物质发生结合。标记物可以是酶、荧光物质等，用于标记目标物质的存在。 4. 洗涤
为了去除非特异性结合的物质，需要进行洗涤步骤。通过加入缓冲液并用洗涤缓冲液冲洗固相载体，可以有效去除未结合的物质。洗涤的次数和冲洗的条件可以根据实验要求进行调整，以获得最佳的检测结果。 5. 底物反应 在洗涤后，加入底物反应液。底物与酶结合形成的标记物发生反应，产生可观测的信号。这个信号可以是颜色变化、荧光发射或发光等，用于定量或定性分析目标物质的含量。 6. 测定 使用光谱仪器或其他检测设备测量底物反应产生的信号强度。根据信号强度的大小，可以计算出待测样品中目标物质的浓度或存在与否。 总结： 酶联免疫吸附测定法是一种灵敏、特异性强的生物分析技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究等领域。其基本步骤包括固相吸附、样品处理、标记物结合、洗涤、底物反应和测定。通过这些步骤的有序进行，可以实现对目标物质的高效检测和定量分析。酶联免疫吸附测定法在生物医学领域的应用前景广阔，有助于加深对疾病机制和生物过程的理解，为疾病诊断和治疗提供有力的支持。
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术 酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）和酶联免疫印迹技术（Enzyme-Linked Immunoblotting Assay，Western Blotting）是生物医学研究中常用的两种实验技术。它们能 够高度敏感地检测和定量目标分子，被广泛应用于疾病诊断、药物研 发等领域。 ELISA是一种非常灵敏、特异性强的免疫测定方法，主要用于检测和定量分析抗原或抗体。其原理是将特定的抗原或抗体在微孔板表面 吸附，并通过特异性抗体与样本中的目标分子发生反应。这种方法可 以测定多种生物分子，如蛋白质、肽、荷尔蒙、病毒、细菌等，具有 高灵敏度、高精确度以及自动化程度高的优点。ELISA广泛应用于生物医学研究中，如激素水平的检测、感染病原体的筛查、自身免疫疾病 的诊断等。 而Western Blotting则是一种用于检测和分离蛋白质的方法。首先，通过电泳将复杂的蛋白质混合物分离成单一的蛋白带，然后将其 转移到聚丙烯酰胺凝胶上。接下来，使用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的次抗体来检测和定量目标蛋白质。Western Blotting不仅能够确定蛋白质的相对分子量，还可以检测目标蛋白质 的存在和表达水平。这种方法在肿瘤学、免疫学、分子生物学等领域 具有重要的应用价值。
ELISA和Western Blotting在生物医学研究中有着重要的应用价 值和指导意义。两者都具有高灵敏度和高特异性的优点，可以准确地 检测和定量目标分子。通过ELISA技术，我们可以快速、有效地检测 抗原或抗体的存在和浓度，对疾病的诊断和治疗起到重要的辅助作用。而Western Blotting则提供了一种准确分析蛋白质表达和功能的手段，对深入了解疾病发生机制、药物的作用和效果等方面具有重要的指导 意义。 总之，ELISA和Western Blotting是两种非常重要的生物医学实 验技术。它们的应用能够帮助我们更深入地了解疾病的发生机制、药 物的作用机制，并为疾病的治疗和预防提供有力的支持。随着科学技 术的不断发展，相信ELISA和Western Blotting在生物医学研究中的 应用将会更加广泛和深入。
简述酶联免疫吸附测定的原理
简述酶联免疫吸附测定的原理 酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA） 是一种高度敏感、高通量的免疫技术，常用于检测微量生物分子或抗体的 存在与浓度。ELISA的原理基于抗体与抗原之间高度特异性的结合，以及 酶底物反应的可见色素反应。 ELISA的基本原理如下： 1. 酶联：先将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上。最常用 的固相载体是聚丙烯酸酯（polystyrene），可以牢固地吸附抗原或抗体。 2.结合：在固相载体上固定的抗原与样品中的分子结合，以形成特异 性的抗原-抗体复合物。 3.洗涤：为了去除非特异性结合的物质，需要进行反复的洗涤步骤。 4.检测：加入与目标分子相关的抗体，这些抗体经过标记，通常是酶 标记。这些标记的抗体与复合物中的目标分子结合。 5.洗涤：再次进行洗涤步骤，以去除非特异性结合的物质。 6.底物-酶反应：加入合适的底物，底物与酶标记的抗体发生反应， 并产生可见的色素物质。 7.读数：用光度计测量反应物的吸光度，吸光度的强度与样品中目标 物的浓度成正比。 ELISA的优点是具有高度的特异性和敏感性，可以检测极低浓度的物质。此外，ELISA还可以同时检测多个样品，并且操作相对简单，不需要 昂贵的设备。
ELISA的应用广泛，特别是在医学诊断领域。例如，ELISA可以用来检测一些疾病的标志物，如乳腺癌、艾滋病、流感等。此外，ELISA还用于酶抗体检测、药物监测、细菌和病毒的检测等领域。 虽然ELISA是一种非常有用的技术，但也存在一些局限性。ELISA对样品中的杂质比较敏感，可能会导致假阳性结果。此外，ELISA只能检测已知的抗原或抗体，无法发现新的目标分子。此外，ELISA需要时间较长（通常需要2-4小时）。 综上所述，酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种重要的免疫技术，通过抗原与抗体的特异结合和酶底物反应，可以准确、敏感地检测微量生物分子或抗体的存在与浓度。ELISA在医学诊断和生物科学研究中具有广泛的应用前景。
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附测定法（ELISA） 1.定义 (3) 2.原理 (3) 2.1抗原抗体反应 (3) 2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5) 3.ELISA的类型 (5) 3.1双抗体夹心法测抗原： (6) 3.2双抗原夹心法测抗体 (6) 3.3间接法测抗体 (6) 3.4竞争法测抗体 (7) 3.5竞争性测抗原 (7) 3.6捕获包被法测抗体 (7) 3.7ABS-ELISA法 (8) 4.ELISA试剂的组成 (9) 4.1固相载体： (9) 4.2包被的方式 (9) 4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。 (10) 4.4包被的条件： (10) 4.5洗涤液： (10) 4.7酶的催化性； (11) 4.8结合物的制备 (11) 4.9结合物的保存 (12) 4.10酶的底物 (12) 4.11酶反应终止液 (12) 4.12参考标准品 (13) 4.13加样： (13) 4.14保温 (13)
4.15保温方式： (13) 4.16室温温育的反应 (13) 4.17洗涤 (14) 4.18显色 (14) 4.19比色 (14) 4.20酶标比色仪 (15) 4.21结果判定 (15) 4.22定量测定 (16) 4.23ELISA的操作要点 (16)
1.定义 酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。 2.原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。 2.1抗原抗体反应 2.1.1可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为： Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原和抗体均能保持原有的结构和活性。 2.1.2特异性 抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。因此，在很多时候，测定某一特定的物质不需分离待测物。2.1.3最适比例 只有当抗原抗体的浓度比例是当时，才出现可见反应。 以沉淀反应为例（Ab量固定，Ag量递增）
酶联免疫吸附试验(双抗夹心法)原理
酶联免疫吸附试验（ELISA），又称酶联免疫吸附测定法，是目前广泛用于生物化学和免疫学领域的一种重要实验方法。该技术结合了免疫 学和生物化学的原理，能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，对临床诊断、生物医学研究以及生物制药等领域有着广泛的应用。在 本文中，我们将深入探讨酶联免疫吸附试验的原理、方法和应用。 一、酶联免疫吸附试验原理 酶联免疫吸附试验的原理主要是利用酶标记抗体、抗原和底物的相互 作用来检测特定物质的存在。在双抗夹心法中，试验基本步骤如下： 1. 用待测抗原溶液在固相酶标记抗体包被的微孔板上，充分接触和结合。 2. 经洗涤后，底物溶液被加入，并与酶标记抗体包被的复合物结合。 3. 底物受酶催化分解后，生成有色产物，通过比色法测定其光密度， 间接测定抗原的含量。 在实验过程中，我们不能忽视的是标本处理、试剂选用、仪器操作等 一系列实验细节，这些都对实验结果的准确性和重复性有着重要的影响。 二、酶联免疫吸附试验的方法 不同类型的酶联免疫吸附试验方法包括间接法、夹心法、竞争法和直 接法等。在这次我们重点讨论的是双抗夹心法。该方法通过将待测抗
原与固相酶标记抗体和液相抗体结合，从而提高了对待测抗原的灵敏度和特异性。这种方法在免疫学研究、传染病诊断和药物检测等方面具有重要的应用价值。 除了双抗夹心法，间接法通过检测待测抗体也是常用的酶联免疫吸附试验方法。在实验设计中，根据不同的研究目的和样本特性，我们可以选择不同的方法来进行实验设计和操作。 三、酶联免疫吸附试验的应用 酶联免疫吸附试验在临床诊断、疫苗研制、传染病监测、生物药品开发等领域有着广泛的应用。它能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，为疾病诊断和药物研发提供了重要的技术支持。 在临床诊断中，酶联免疫吸附试验被广泛应用于传染病的早期诊断和鉴定。HIV抗体检测、甲型肝炎抗原检测等都是通过酶联免疫吸附试验来完成的。酶联免疫吸附试验还被应用于药物和疫苗的开发和监控过程中，能够全面地评价新药和疫苗的免疫原性和保护效果。 四、个人观点和理解 酶联免疫吸附试验作为一种成熟的实验技术，其在生物医学领域的广泛应用为我们提供了便利。在未来的研究和实践中，我认为酶联免疫吸附试验会进一步得到发展，不仅在技术上实现更高的灵敏度和特异性，同时也会在实验设计和数据分析上做出更多的创新。
酶联免疫吸附测定技术
酶联免疫吸附测定技术 技术简介 酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA 具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。 核心原理： ELISA必须遵守以下3个核心原理：1）抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。 应用方向： ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。 在医学领域上，能够进行检测的抗原包括：内分泌方面的雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等，血液学方面的凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、红细胞抗原及结合球蛋白（Hapto Globin）等，肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗
酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附试验ELISA 一种酶联免疫技术。用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。 酶联免疫吸附试验(以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体( 聚苯乙烯微量反应板) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。 ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体
由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。 1.辣根过氧化物酶（HRP） 过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和数量。其原理基于抗原-抗体的特异性结合作用以及酶的催化作用。 酶联免疫吸附试验的原理： 酶联免疫吸附试验主要利用酶作为标记物，将待检测的抗原或抗体与其特异性抗体或抗原结合，再用酶标记抗体或抗原与待检测物结合，形成酶-抗原-抗体或酶-抗体-抗原复合物。最后通过酶反应产生的色素变化或发光信号，来间接或直接定量分析待检测物的含量。 酶联免疫吸附试验的基本步骤： 1.固相抗原或抗体的吸附：在反应板的孔中吸附抗原或抗体。一般采用多孔吸附板作为载体，将抗原或抗体溶液加入孔中，经过一段时间的孵育后，以使抗原或抗体与孔板表面结合。 2.无特异性位点的封闭：将未被吸附的非特异性蛋白质如牛血清蛋白（BSA）添加到孔中，对未被特异性抗原或抗体吸附的区域进行封闭，防止非特异性结合的发生。 3.加入标记物：加入被标记的抗体或抗原，使其与孔中的特异性抗原或抗体发生特异性结合。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。 4.洗涤：用缓冲液洗涤孔中多余的未结合抗体或抗原，降低非特异性背景。
5.底物反应：加入适当的酶底物，酶底物与酶结合发生催化反应，使底物产生颜色或发光等可检测的反应产物。 6.反应终止：加入终止剂，停止底物的反应，防止颜色或发光信号进一步变化。 7.读取结果：使用酶标仪或光度计测定标记物的颜色或发光强度，根据标准曲线计算出待检测物的浓度。 总体来说，酶联免疫吸附试验通过特异性抗原-抗体结合和酶催化反应，可以间接或直接测定体内特定抗原或抗体的含量，具有灵敏度高、特异性强和操作简便等优点，因此在医学诊断、病毒学研究和生物学实验等领域得到广泛应用。
酶联免疫吸附测定技术
酶联免疫吸附测定技术 酶联免疫吸附测定技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的分析方法，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。该技术的原理是利用特异性抗体与待测物发生特异性结合，通过酶的 催化作用产生颜色反应或荧光信号，从而得到定量或半定量的结果。 下文将详细介绍ELISA的原理、反应步骤以及其应用领域。 一、ELISA的原理 ELISA的原理基于抗原与抗体的特异性结合。它包括固定期（Coating）、阻断期（Blocking）、结合期（Binding）、洗涤期（Washing）和检测期（Detection）五个关键步骤。 1. 固定期（Coating） 首先，在微孔板中将待测物固定在表面，这一步又称为固相抗原法。通常使用多糖、蛋白质等具有反应性的物质将待测物固定在微孔板上。固定完毕后，洗去多余的待测物。 2. 阻断期（Blocking） 为避免非特异性结合和降低背景干扰，需要在上一步后加入阻断缓 冲液，如牛血清白蛋白（BSA）或鱼明胶等，使孔洞表面被占满，阻 断非特异性吸附位点。 3. 结合期（Binding）
加入待测样本和特异抗体，特异抗体可与待测物发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物。一般将待测物样本加入微孔板后，经过一段时间的孵育，使抗原与特异抗体发生结合。 4. 洗涤期（Washing） 在结合期后，需进行洗涤步骤以去除未结合的物质。洗涤缓冲液通常使用含有洗涤剂的磷酸盐缓冲液，洗涤次数及力度需充分保证去除干净。 5. 检测期（Detection） 在洗涤期后，加入与特异抗体结合的酶标记二抗，例如辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗兔IgG。经过孵育后，待测物与酶标记二抗形成复合物。最后，加入底物使酶催化反应产生颜色或荧光信号。 二、ELISA的应用领域 ELISA技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。 1. 生物医学研究 ELISA被用于检测生物样本中的特定蛋白质、肽、抗体和核酸等。在细胞生物学研究中，ELISA可以用于检测细胞因子释放、蛋白质表达以及细胞信号转导等。在免疫学研究中，ELISA可用于测定抗体的浓度、特异性、亲和力等。此外，ELISA还可用于病毒、细菌和寄生虫等病原微生物的检测。 2. 临床诊断
酶联免疫吸附的原理和应用
酶联免疫吸附的原理和应用 引言 酶联免疫吸附（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的 实验技术，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发领域。本文将介绍酶联免疫吸附的原理和应用。 原理 酶联免疫吸附的原理基于酶标记抗体的特性以及抗原-抗体相互作用的特点。其基本步骤如下： 1.抗体的固定：将抗体固定在固相载体上，例如微孔板表面。这可以 通过物理吸附、共价结合或磁珠结合等方式实现。 2.抗原的结合：待测物中的抗原与固相上固定的抗体结合，形成抗原- 抗体复合物。这个步骤通常需要一定的时间和温度条件。 3.酶标记抗体的结合：将酶标记的二抗或二抗与固相上的抗原结合。 4.底物的添加：加入合适的底物，例如底物是酶底物，它在酶的作用 下会发生可观测的染色反应。染色反应的强度与待测物中抗原的浓度成正比。 5.信号检测：使用合适的装置（如酶标仪）测量染色反应的强度。根 据反应的强度来定量或定性待测物中的抗原。 应用 酶联免疫吸附在生物医学研究、临床诊断和药物研发领域具有广泛的应用，包 括以下几个方面： 生物医学研究 •蛋白质定量：酶联免疫吸附用于测定蛋白质的浓度，比如检测新药的剂量效应。 •蛋白质相互作用研究：通过将一种蛋白质固定在微孔板上，用来检测其他蛋白质与其之间的相互作用。 •病原体检测：酶联免疫吸附可以用来检测病原体，如细菌、病毒等。 •细胞因子测定：测定细胞因子的浓度，用于研究细胞内的信号传导等生理过程。 临床诊断 •疾病标志物检测：酶联免疫吸附广泛应用于检测疾病标志物，例如癌症标志物、心肌损伤标志物等。
•传染病检测：用于检测传染性疾病的诊断，如艾滋病、流感等。 •自身免疫性疾病诊断：酶联免疫吸附可用于自身免疫性疾病的早期诊断，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。 药物研发 •药物代谢酶研究：酶联免疫吸附可用于药物代谢酶的研究，如肝脏中的细胞色素P450等酶。 •药物浓度测定：通过酶联免疫吸附可测定药物在体内的浓度，用于药物吸收、分布、代谢和排泄等研究。 •疫苗研究：酶联免疫吸附可用于评估疫苗对特定抗原的免疫应答。 结论 酶联免疫吸附是一种常用的实验技术，其原理简单但应用广泛。无论在生物医学研究、临床诊断还是药物研发领域，酶联免疫吸附都发挥着重要的作用。随着技术的不断发展，酶联免疫吸附在未来将继续发展，并应用于更多的领域。
酶联免疫吸附实验 (ELISA)
酶联免疫吸附实验(ELISA) 1.实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。 2.实验原理 用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－D－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶催化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。 辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm 纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。