叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告
叶绿体的分离与荧光观察.ppt
表面张力作用， 从而使细胞发生融合，
进而细胞质沟通，形成一个双核或多核 细胞
实验用品
1.器材：离心机，移液枪，水涡锅，载玻 片，盖玻片，血细胞计数板，刻度试管， 刻度吸管，电炉，冷冻离心管，显微镜， 烧杯， 吸管
2.试剂：Alsever溶液，GKN溶液，0.85% 生理盐水，50%PEG ，蒸馏水
红细胞膨胀 到一定程度时，细胞膜破裂， 即红细胞发生溶血.由于溶质透人速度不 同，溶血时间也不同。
实验用品
试剂：0.17 mol／L氯化钠，0.17 mol／L 氯化铵，0.17 mol／L硝酸钠，0.12 mol／ L硫酸 钠，0.12 mol／L草酸钠，0.12mol ／L醋酸钠， 0.32 mol／L葡萄糖，0.32 mol／L甘油，0.32 mol／L乙醇，0.32mol ／L丙醇。 仪器：显微镜，载玻片，盖 玻片，吸管，小烧杯，试管，试管架
50％PEG混合液： 称取少许PEG(Mw 6000)放人刻度离心管内，在沸水浴中加 热， 使其溶化，待冷却至50℃时，加入 预热至50℃ 的等体积的GKN液，混匀。 注意使用前配制。
实验方法
1.取新鲜的鸡血与Alsever溶液以1：4的 比例混匀，可在冰箱内存放一周（4℃）
2.取1ml贮存鸡血加入4ml0.85%生理盐水， 充分混匀800r/min,3min弃上清，重复离 心两次。
悬浮介质：通常用缓冲的蔗糖溶液，它 比较接近细胞质的分散相，在一定程度 上能够保持细胞器的结构和酶的活性。
詹纳斯活染：詹纳斯绿B是对线粒体专一 的、毒性很小的、活性染料，由于其碱 性，解离后
带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。
线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持 在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。
6 叶绿体的分离与荧光观察
（二）叶绿体的观察 1、用滴管吸取少量叶绿体悬浮液于载玻片上，加盖玻片后， 吸水纸吸去玻片周围多余的溶液，分别置普通光学显微镜 和荧光显微镜下镜检观察。 2、用滴管吸取1滴叶绿体悬浮液于载玻片上，再滴加一滴0.01% 吖啶橙染液，盖好盖玻片后，吸水纸吸去玻片周围多余的溶 液，在荧光显微镜下观察.
Hale Waihona Puke 实验报告】 【实验报告】（一）叶绿体的分离 1、选用生长健壮，最好是连续几个晴天下生长的菠菜叶片 洗净后去除中脉，然后放入 0 ～ 4 ℃冰箱或冰瓶中预冷。 2、取叶片经滤纸吸干水后，称取3g剪成碎片，于45 mL 0.35mol/L氯化钠溶液中，置于研钵中，用手工快速研磨， (注意不要用力过猛，也不必研磨过细)。 3、研磨后将匀浆用6层新纱布过滤，滤液盛于烧杯中。 4、将5 mL滤液装入预冷过的离心管，经天平平衡后，以 1000 rpm ，4 ℃离心 2 min，弃去沉淀。 5、上清液再经3000 rpm ，4 ℃离心 5 min ，倾去上清液， 沉淀即为叶绿体。 6、沉淀用2 mL 0.35mol/L氯化钠溶液悬浮，放入冰箱中备用。
实验七 叶绿体的分离与荧光观察
【实验目的】 实验目的】
1、通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的原 理和方法。 2、掌握荧光显微镜的原理及使用方法。
实验原理】 【实验原理】
细胞或组织经过破碎后制成匀浆，在等渗介质中进行差速 离心，利用细胞各组分质量大小、形状和密度的不同，选择不 同的离心力和离心时间，即可分离得到所需要的细胞器或大分 子组分。分离叶绿体在等渗的缓冲溶液中进行, 最好在0 ～ 4 ℃ 温度下进行, 要迅速分离和观察。 荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测 的一种技术。荧光是某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的 照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极 短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，若停止 供能荧光现象立即停止。直接荧光: 如叶绿素的火红色荧光 间接荧光: 如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光
实验五叶绿体的分离与观察
实验五叶绿体的分离与观察引言：叶绿体是植物和一些藻类细胞中的一种重要细胞器，其内含有叶绿素，参与光合作用，并且能够进行自我复制。
叶绿体的分离与观察可以帮助我们更好地理解叶绿体的结构和功能。
本实验旨在通过破碎叶绿体细胞壁和最后沉淀纯化，获得高纯度的叶绿体样品，并观察其形态和颜色。
材料与方法：1.植物叶片（如菠菜等）2.磨砂棒3.0.5MEDTA（乙二胺四乙酸二钠，含有金属离子螯合剂，可帮助破环细胞壁）4.磷酸盐缓冲液（PH=7.2）5.叶绿体离心管6.离心机7.色谱柱8.吲哚素（荧光指示剂）9.显微镜实验步骤：1.将大约10g的菠菜叶片放入研钵中，加入足够的磷酸盐缓冲液，用磨砂棒研磨，直至叶片完全破碎。
2.将研磨的混合物过筛，将过筛的悬浊液取出置于离心管中。
3.加入适量的0.5MEDTA溶液，溶液中EDTA的浓度约为0.3M，为了破坏细胞壁脱落细胞质中的叶绿体。
4. 将离心管放入离心机中，离心10分钟，以3000 rpm离心速度。
5.将上清液倒入新的离心管中。
6. 用磷酸盐缓冲液把上出来的树珪胶稀释为1 ml，用来测定叶绿素a含量，以叶绿素a含量/体积的值判断叶绿体的提纯程度。
7. 用离心机再一下离心10分钟，以5000 rpm离心速度，取出离心管，倒出上清液。
8.取少量草绿后的混合悬浊液加入色谱柱中，过滤，用于进行吲哚素荧光指示剂的观察和检测。
结果与讨论：通过实验操作，我们成功将叶绿体从菠菜叶片中分离出来，并获得了纯化程度较高的叶绿体样品。
在观察纯化后的叶绿体样品时，我们可以看到其呈现出绿色或草绿色。
这是因为叶绿体内含有大量的叶绿素，而叶绿素能够吸收光线中的蓝光和红光，反射绿光，因此使得叶绿体呈现出绿色。
此外，利用吲哚素荧光指示剂对叶绿体样品进行观察和检测，可以进一步确认我们所提取的物质是否为叶绿体。
吲哚素是一种常用的荧光指示剂，当其与叶绿体内的一些化合物结合时，会发出绿色荧光。
因此，如果我们在观察过程中观察到绿色荧光的出现，就可以确认叶绿体的存在。
叶绿体的染色与观察 实验报告
细胞生物学实验报告叶绿体的分离与荧光观察1.实验目的：通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
观察叶绿体自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、荧光显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管、离心管、离心机、组织捣碎机、（2）实验药品：NaCl溶液、吖定橙染液（3）实验材料：菠菜3.实验原理：（1）将组织匀浆悬浮在等渗介质中进行差速离心是分离细胞器的常用方法。
差速离心是指将组织悬液放在离心机中，依次增加离心场力、离心时间，以达到分离的目的。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决与颗粒的大小、形状和密度，也与离心力以及悬浮介质的黏度有关。
在一给定的离心场中，同一时间，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批称将在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
对于植物细胞而言，分离过程最好在0-5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
动物细胞应冷冻离心。
（2）荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光物质进行观测的一种技术。
其原理基于光致发光。
光致发光是指某种物质被一定的波长照射时，吸收一定的光能进入激发态，从激发态回到基态时，就会以电离辐射的形式释放能量的现象。
如果其释放的激发光的波长比照射光的波长长，且时间小于10-8s以内，这种激发光即可成为荧光。
（3）荧光显微镜比普通显微镜多出的结构是阻断滤片、双色镜和激发滤片。
荧光显微镜有两个光源，一个是激发光源，一般是高压汞灯（发射光的波长在500nm左右）和氙灯；另一个是普通光源，一般采用卤灯泡（发射光的波长在500-600nm左右）。
（4）本实验采用的染料是吖定橙染液。
吖定橙染液是一种核酸染料。
当调节激发光波长为488nm时，吖定橙染液结合于DNA中，其发射波长为540nm，呈绿色；结合于RNA中，发射波长为610nm，呈红色。
当用吖定橙染液对细胞染色后并置于共聚焦显微镜下观察，即可观察到细胞核呈绿色，而细胞质呈红色。
叶绿体色素的提取分离和理化性质实验报告
叶绿体色素的提取分离和理化性质实验报告生物学导论实验报告叶绿体色素的提取分离和理化性质一、提取与分离1、实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2、实验原理提取：叶绿体色素为有机酯类化合物，根据相似相容原理，常用有机溶剂提取。
如酒精、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等。
分离：薄层层析法是将吸附剂均匀的涂抹在玻璃板上形成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待测分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。
流动相通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组成分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱吸附、再吸附……的过程。
由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附能力强的物质相对移动慢一些，儿媳妇能力弱的物质相对移动快一些，从而使各组分有不同移动速度而彼此分开。
3、实验材料与试剂（1）新鲜的菠菜叶；（2）体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末、展开剂（3）钵体、漏斗、三角瓶、剪刀、点样本、毛细管、层析缸、硅胶预制板、滤纸。
4、实验步骤（1）色素提取液的制备取叶4~5片新鲜叶片，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入钵体中。
加入少量碳酸钙，加2~3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加入10ml乙醇，上清液过滤，残渣再用10ml乙醇冲洗过滤。
（2）叶绿体色素的分离取硅胶预制板一个，用点样毛细管取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，风干，重复操作3~4次；在干燥的层析缸中加入适量展开剂，高度0.5cm，将硅胶预制板带有色素一端放入，使其下端浸入展开剂中；当色素较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板的上端边缘时，取出，画线。
Rf=斑点中心到原点距离/溶剂前沿到原点距离5、实验结果与分析从上至下为胡萝卜素（橙色）：Rf=6.95/7.35=0.946叶绿素a（蓝绿色）：Rf=5.35/7.35=0.728叶绿素b（黄绿色）：Rf=4.95/7.35=0.673叶黄素（黄色）：Rf=4.10/7.350.558可知，胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素极性依次增大，与硅胶吸附能力依次增强。
实验一：叶绿体的提取和荧光观察
叶绿体的提取和荧光观察一、实验目的：1. 学习分离制备叶绿体的方法，了解制备细胞器的一般程序，观察光镜下叶绿体的形态。
2. 学习和掌握离心机的原理和基本使用方法。
3. 学习荧光显微镜的使用方法及其应用。
二、实验原理及分析：细胞器分离的过程包括两个主要阶段：破碎细胞和细胞组分的分离。
细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
在等渗溶液中进行组织匀浆、分离，叶绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心法进行。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。
某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
三、实验材料：菠菜叶片四、实验步骤：1. 菠菜叶片洗净吸干。
称取20克，剪成小块；加入40ml完全介质，在研钵中充分研磨。
2.浆状物用双层纱布过滤；3. 汁液置于离心管中，1100 rpm(200g)离心5Min；4. 弃去沉淀，取上清液1900 rpm(600g)离心12Min；5. 弃去上清液，沉淀加入15ml A液，轻轻吹打悬浮；6. 悬浮液600g离心12Min；7. 弃去上清液，取沉淀，悬浮于A液中；8.普通光学显微镜下观察；9. 荧光显微镜下观察1〕荧光镜下紫外直接观察；2〕滴加吖啶橙后观察五、实验结果及分析：在普通显微镜下，叶绿体呈现出绿色椭球形，为正常结构。
可能因为差速离心得到的样品不纯，还观察到一些组织碎片。
菠菜叶绿体的分离及荧光观察
菠菜叶绿体的分离及荧光观察实验目的：1.学习荧光显微镜的基本原理。
2.普通光镜下观察植物叶片中的叶绿体形态特征，并利用荧光显微镜观察叶绿体的自发荧光。
3.吖啶橙染色后观察叶绿体及核碎片中的DNA。
实验原理：荧光显微镜的激发滤片能使标本产生的特定波长的光通过，阻止对激发荧光无关的光。
阻挡滤片可以阻挡掉没有别标本吸收的激发光，有选择地透过荧光。
有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
沉降顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体溶酶体、内质网与高尔基体、核蛋白体。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4 mol ／L蔗糖溶液)中进行．以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000 r ／min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后，在3000 r／min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
分离过程最好在0～5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
实验步骤：1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称30g于150ml0.35mol／L NaCI溶液中，装入组织捣碎机。
2.利用组织捣碎机低速(5000r／min)匀浆3~5min。
3.将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
叶绿体分离的实验报告
叶绿体分离的实验报告叶绿体分离的实验报告引言：叶绿体是植物细胞中的一种重要细胞器，其主要功能是进行光合作用，将光能转化为化学能，为植物提供能量。
叶绿体分离是一种常用的实验方法，通过分离叶绿体，可以更好地研究其结构和功能。
本实验旨在探究叶绿体分离的方法和步骤，并观察叶绿体的形态和特征。
材料与方法：1. 鲜嫩的植物叶片：本实验选择了菠菜叶片作为实验材料，因其叶绿体含量丰富。
2. 0.5% EDTA溶液：用于破坏叶片细胞壁，释放叶绿体。
3. 0.4 M 蔗糖溶液：用于制备蔗糖梯度离心液。
4. 离心管和离心机：用于离心分离叶绿体。
5. 高速离心管：用于收集纯化后的叶绿体。
实验步骤：1. 取一片新鲜的菠菜叶片，并用去离子水清洗干净，去除表面的杂质。
2. 将叶片切碎，放入离心管中，并加入适量的0.5% EDTA溶液。
3. 将离心管放入冰箱中静置20分钟，使叶绿体充分释放。
4. 取出离心管，用玻璃棒轻轻搅拌叶片，使细胞破裂，释放叶绿体。
5. 将离心管置于冰上，使用低速离心机以3000 rpm离心10分钟，沉淀下来的为叶绿体。
6. 将上清液倒掉，用去离子水洗涤沉淀2-3次，以去除杂质。
7. 加入适量的0.4 M 蔗糖溶液，将离心管置于高速离心机中，以12000 rpm离心20分钟，使叶绿体沉积在梯度液体中。
8. 将上清液倒掉，离心管内的梯度液体分为不同层次，叶绿体沉积在较低的层次中。
9. 使用移液管将叶绿体取出，放入高速离心管中。
10. 使用高速离心机以15000 rpm离心10分钟，将叶绿体沉淀下来。
11. 倒掉上清液，收集纯化后的叶绿体。
结果与讨论：通过本实验，我们成功地分离出了菠菜叶片中的叶绿体。
观察分离后的叶绿体，可以发现其呈现绿色，具有椭圆形状，大小约为2-5微米。
叶绿体在显微镜下呈现出明显的双膜结构，其中内膜形成了许多类似硬币的结构，称为类囊体。
类囊体中含有叶绿素，是进行光合作用的关键结构。
此外，叶绿体内还含有DNA和一些酶，用于合成光合作用所需的物质。
实验三 叶绿体的分离与荧光观察
实验三叶绿体的分离与荧光观察【实验材料】1.器材： 1）主要设备: 普通离心机,粗天平,荧光显微镜；2）小型器材: 剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管, 10ml刻度离心管,纱布若干, 无荧光载玻片和盖玻片。
2.材料：新鲜菠菜。
3.试剂： 0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange).0.01%吖啶橙的配制：称取0.1g吖啶橙加蒸馏水100ml做干液，贮棕色瓶，置4℃冰箱保存。
放冰箱备用，临用前取1ml母液加1/15mol/L磷酸缓冲液（pH4.8）9ml稀释。
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种荧光色素，其激发滤光片波长488nm。
阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光（即着色特异性），这是由于DNA是个高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，发绿色荧光，而RNA 聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。
【实验方法】1、叶绿体的分离（1）选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g左右，置于预冷的研钵;（2）加10ml的0.35mol•L-1 NaCl溶液研磨匀浆;（3）用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中;（4）取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀;（5）将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）；（6）沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察（1）滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。
在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光，其颜色如何。
3. 完整细胞中的叶绿体观察（1）用镊子撕取一片菠菜叶子表皮，平铺于载玻片上，滴加一滴提取缓冲液，加盖片后轻压，备用。
（3）将以上两种制片进行以下两种方式的观察：a在普通光镜下观察。
b在荧光显微镜下观察。
01 叶绿体的分离及荧光观察
山东大学实验报告2018年3月12日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：1-1 同组者：科目：细胞生物学实验题目：叶绿体的分离及荧光观察学号：201600140055一、目的要求1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理真核细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成。
细胞质中含有若干细胞器和细胞骨架，这些结构被称为亚细胞组分。
对于细胞的结构和功能的研究，是细胞生物学的基本课题。
其重要的研究手段之一是分离、纯化各种亚细胞组分，然后观察他们的结构，对它们的功能进行生化分析。
1、分离：分离亚细胞组分的主要方法由差速离心和密度梯度离心两种，本次试验中使用差速离心法。
差速离心法是在密度均一的介质中有低速到高速的逐渐离心，用于分离不同大小的物体。
离心速度逐渐提高，样品会按先大后小的顺序沉淀。
在差速离心中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体与叶绿体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体，最后为核糖核蛋白复合体。
由于各细胞器在大小和密度上可能相互重叠，一般重复差速离心2-3次，分离效果会好一些。
差速离心只用于分离密度和大小相差悬殊的细胞或细胞器，并且得到的产物纯度很低。
若对纯度的要求较高，则需要用密度梯度离心来分离、纯化。
2、叶绿体：叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。
由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
3、荧光显微技术：荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
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叶绿体的分离、纯化及荧光观察
实验目的：1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法
2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光实验原理：差速离心法用于分离大小不同的物体。
在差速离心中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、
醉后为核糖核蛋白复合体。
密度梯度离心法是用一定的介质在离心管内形成连续的密度梯度，将
细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力的作用使细胞或细胞
器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与自身密度相同的
沉降区带中。
叶绿体是一种比较大的细胞器，利用差速离心即可分离收集，然后用
密度梯度离心纯化，便可用于各种研究。
实验用品：新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离心机、电子天平、荧光显微镜、剪刀、研钵、移液管、漏斗、滴管、10ml离心管实验步骤：1、选取新鲜嫩绿菠菜叶，去叶梗及粗脉，洗净擦干，称30克放于150ml 0.35M.Nacl溶液中
2、将液、叶同装入组织捣碎机中，匀浆3-5分钟，转速5000r/min
3、将匀浆用纱布（6层）过滤于500ml烧杯中
4、取滤液4ml在1000r/min下离心2min
5、取上层清液在3000r/min下离心5min（沉淀为叶绿体和细胞核混
合物）
6、将沉淀用2-3mlMnacl液悬浮
7、取一滴悬液滴片，加盖玻片后显微镜下观察
8、另取一滴悬液滴片，再滴加一滴0.01%吖啶橙染料，混匀，盖上
盖玻片，在荧光显微镜下观察
实验结果：普通显微镜下，叶绿体呈橄榄形，绿色，高倍镜下可看到基粒（深绿色小颗粒）。
荧光显微镜下，叶绿体自发荧光为“火红色”，次生荧光
为“橘红色”
分析与讨论：1、捣碎叶片式时时间不宜过长，否则会破坏叶绿体
2、用荧光显微镜找到物象后，要先拍照后观察，因为荧光会逐渐
变弱。