临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验.
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一、名词解释
1、抗凝剂：应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂。
2、决定性方法：准确度最高，系统误差最小；经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的方法。主要有重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。
3、参考方法：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。
4、常规方法：具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要的方法。
5、标准品：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。
6、一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。
7、二级标准品：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。主要用于常规方法的标化和控制物的定值。
8、控制物：控制物用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。有定值血清和未定值血清两种。控制物不能用于标定仪器或方法。
9、实验误差：简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
10、系统误差：是指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。它具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。
生化检验
名解
急诊检验：是实验为配合临床对危急重症患者的诊断和抢救而实施的一种特需服务。
危机值：是指某些检验结果出现了可能危及患者生命的极限值。
线性范围：指检测物浓度与检测信号的大小成正比例的范围。
决定性方法：准确度最高，系统误差最小，详细研究未发现产生误差，测量结果与“真"最接近的方法。
回收实验：是指用已知浓度的样本加入不同浓度的物质再测定被测物质的浓度最后计算实际浓度与加入浓度之比来显示系统误差
回收率：
室内比对：在同一个实验室，同一个检测项目如果用两种或两种以上的相同的或不同的检测系统经行检测对其结果经行对比。
电泳技术：是利用带电粒子在电场的作用下定向移动，对混合物经行分离·纯化合测定的一项技术。
实验误差：是量值得给出值与其客观真值之差
医学决定水平：就是对临床诊治疾病具有决定性作用的被分析物质的浓度，是临床上按照不同病情给予不同治疗方案而确定的阀值
解答
1.危急值与急诊检验的区别
答：急诊检验的结果无论正常还是异常必须通过报告单的书面形式快速的发出，但危急值报告不受医生申请方式的限制，无论急诊检验还是普通检验，只要检验结果出现了规定的危急值数值实验室均因执行电话报告程序
2.分子的形状性质对电泳的影响
答：①分子量小，移动速度越快②球状分子比纤维状分子移动速度快，表面电荷密度高的比低的移动的要快③带点量越多的移动速度越快
3.缓冲液PH与两性电解质等电点的关系
答：PH=PI，粒子全部为兼性离子，净电荷为0，在电场中不移动
PH〉PI，羧基电离加强，氨基电离减弱，粒子带负电荷，在电场中向正极移动
PH〈PI，羧基电离减弱，氨基电离加强，粒子带正电荷，在电场中向负极移动
4.电泳时缓冲液的选择
答：因选用1价的正负离子移动速度相近的电解质，ph最好在4.5~9.0之间，具有导电性，化学性质稳定，缓冲容量大，电导率低，离子移动性好、离子强度在0.05~0.1mol/L为宜
5.电泳的原理以及影响电泳的因素
临床化学体外诊断试剂盒质量检验
临床化学体外诊断试剂盒质量检验
总 则
Inspcctiori criteria of the quality of
cllnical chemistry in vltro diagnostic kits
-General guideline
1范围
本标准规定了临床化学体外诊断试剂盒的质量检验的通用技术要求。
本标准适用于对临床实验室常规检验用临床化学体外诊断试剂盒的质量检验。
2质量要求
下列要求适用于冻于、干粉及液体试剂。但液体试剂可免去含水量的检验。
2.1外观
于粉试剂应为白色粉末。液体硎剂溶液的外观应澄清、无异物。冻干品或干粉试剂经复溶后，其溶液应澄清、无异物。
2.2质量检验内容线性范围，批内精密度（瓶间差）、批同精密度（批间差）。准确度，试剂空白吸光度，试剂空白吸光度变化，含水量，稳定性。
3检验实验
3.1外观
目测法。
3.2仪器
比色法测定时可使用配有恒温剥置的、波长范围包括340 nm到700 nm的分光光度计。测定吸光度的灵敏度应达到0.001 A以上，比色光径应为1.00 cm，恒温装置在设定温度的变化范围应在±0.1℃以内。
3.3试剂和水
3.3.1试剂在未注明其他要求时，坷使用分析纯以上试剂。
3.3.2水在未注明其他要求时，使用符合《中华人民共和固药典》。蒸馏水一规格的蒸馏水或纯水。
3.4线性范围 确立线性范围至少应取6点（包括线性范围的下限（或零）、中间浓度及上限（高浓度））。每点应重复测定3次。根据式(1)，(2)，(3)计算出直线方程y=a+bx。
„„„„„„„„„„(1)
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式中：b——回归线的斜率；
——回归线截距的绝对值；
r——回归系数；
Xi——测定管溶液的浓度；
Yi——3次重复测定的与测定管溶液浓度相对应的吸光度均值；
试验测试线性范围的确认
化学分析方法确认
线性范围
a) 采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点（包括空白），浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多；对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98；对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99。
b) 校准用的校准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围内并能覆盖该范围。在理想的情况下，不同浓度的校准溶液应独立配置，低浓度的校准点不宜通过稀释校准曲线中高浓度的校准点进行配置。
c) 浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%～150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的0%～150%。
d) 应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。实验室应提供文献或实验数据，说明目标分析物在溶剂中、样品中和基质成分中的稳定性，并在方法中予以明确。通常各种分析物在保持条件的稳定性都已有很好的研究，监测保存条件应作为常规实验室确认系统的一部分。对于缺少稳定性数据的目标分析物，应提供能分析其稳定性的测定方法和确认结果。
检出限
a) 仪器检出限（IDL）：为用仪器可靠的将目标分析物信号从背景（噪音）中识别出来时分析物的最低浓度或量，该值表示为仪器检出限（IDL）。随着一起灵敏度的增加，仪器噪声也会降低，相应IDL也降低。
b) 方法检出限（MDL）：为用特定方法可靠的将分析物测定信号从特定基质背景中识别或区分出来时分析物的最低浓度或量。即MDL就是用该方法测定出大于相关不确定度的最低值。确定MDL时，应考虑到所有基质的干扰。
注：方法的检出限（LOD）不宜与仪器最低相应值相混淆。使用信噪比可用来考察仪器性能但不适用于评估方法的检出限（LOD）。
c) 确定检出限的方法
1) 目视评估法评估LOD
目视评估法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次的独立测试，通过绘制阳性（或阴性）结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阀值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。
IVD试剂性能评估指标
IVD试剂性能评估指标
体外诊断试剂是疾病诊断与治疗的重要辅助手段。一个新开发的试剂能否真正面市，除了进行反应模式和体系等优化外，合理的性能分析与评估，是必经的程序，也是质量保障的基础。通常，体外诊断试剂产品性能评估包括检测限、线性范围、可报告范围，准确度，精密度，干扰实验，稳定性，参考区间。
1.检测限
检测限是指检测方法可检测出的最低被检测量浓度，也称为分析灵敏度。
分析灵敏度：一般用95％可信限计算：重复测定空白样本20次，计算20次反应测得的均值（X）和标准差（SD），以X+2SD（夹心法）或X-2SD（竞争法）计算出相应的浓度，即为体外诊断试剂的分析灵敏度，也是注册资料所需提供的内容。
功能灵敏度：将低值样本倍比稀释后重复测定10次以上，计算每个低值样本检测信号的均值、标准差和变异系数（CV），选择CV大于 20％时所对应的低值样本平均浓度，这就是体外诊断试剂的功能灵敏度。
2.线性范围
线性范围是指检测系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度成正比的范围。
建立一种定量测定方法的线性范围，需在预期测定范围内选择7-11个浓度水平。准备足量的高值（H）样本和低值（L）样本，经不同比例混合配制成中间浓度样本，比例关系可按等间距或其他确定的比例。其中，有几个重要的浓度水平需要考虑：1）最低分析浓度或线性范围下限；2）不同的医学决定水平值；3）最高分析浓度或线性范围上限。
3.可报告范围
可报告范围是指对检测有意义的待测物浓度范围。
可报告范围低限：以方法性能指示的CV值为可接受界值，由数据中选取CV值等于或小于可接受界值的最低浓度水平作为可报告范围低限。
可报告范围高限：当测定值超出线性范围上限时，此测定值应视为不准确值，需要对标本进行稀释。由于基质效应的影响，任何标本并非可以做无止境的稀释。也就是说，每一个实验项目有其最大稀释倍数。这个最大稀释倍数与线性范围上限的乘积即为可报告范围高限。
临床生化检验试题（卷）库
临床⽣化检验试题（卷）库
⼀、名词解释1、抗凝剂：应⽤物理或化学⽅法除去或抑制⾎液中的某些凝⾎因⼦，阻⽌⾎液凝固，称为抗凝。阻⽌⾎液凝固的化学试剂称为抗凝剂。2、决定性⽅法：准确度最⾼，系统误差最⼩；经过详细研究未发现产⽣误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的⽅法。主要有重量分析法、中⼦活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。3、参考⽅法：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的⽅法。这类⽅法⼲扰因素少，系统误差很⼩，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。4、常规⽅法：具有⾜够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实⽤，其性能指标符合临床或其它⽬的的需要的⽅法。5、标准品：它的⼀种或⼏种物理或化学性质已经充分确定，可⽤以校正仪器和某种测定⽅法的物质。
6、⼀级标准品：已经确定的稳定⽽均⼀的物质，其数值已由决定性⽅法确定或由⾼度准确的若⼲⽅法确定，所含杂质已经定量。主要⽤于校正决定性⽅法，评价和校正参考⽅法以及为“⼆级标准品”定值。7、⼆级标准品：这类标准品可以是纯溶液（⽔或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。可由实验室⾃⼰配制或为商品，其中有关物质的量由参考⽅法定值或⽤⼀级标准品⽐较⽽确定。主要⽤于常规⽅法的标化和控制物的定值。8、控制物：控制物⽤于常规质量控制，以控制病⼈标本的测定误差。有定值⾎清和未定值⾎清两种。控制物不能⽤于标定仪器或⽅法。9、实验误差：简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
10、系统误差：是指⼀系列测定值对真值存在同⼀倾向的偏差。它具有单向性，⽽没有随机性，常有⼀定的⼤⼩和⽅向；⼀般由恒定的因素引起，并在⼀定条件下多次测定中重复出现。当找到引起误差的原因，采取⼀定措施即可纠正，消除系统误差能提⾼测定的准确度。11、随机误差：是指在实际⼯作中，多次重复测定某⼀物质时引起的误差。误差没有⼀定的⼤⼩和⽅向，可正可负，数据呈正态分布；具有不可预测性，不可避免，但可控制在⼀定范围内；分析步骤越多，造成这种误差的机会越多；随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。12、精密度：是表⽰测定结果中随机误差⼤⼩程度的指标。它表⽰同⼀标本在⼀定条件下多次重复测定所得到的⼀系列单次测定值的符合程度。13、准确度：是指测定结果与真值接近的程度，⼀般⽤偏差和偏差系数表⽰。
ADVIA XPT全自动生化分析仪的性能验证
ADVIA XPT全自动生化分析仪的性能验证
张长军
【摘 要】目的 了解并验证西门子公司ADVIA XPT全自动生化分析仪的性能,以确保检测结果的准确性和可靠性.方法 根据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的标准指南要求,参照西门子厂家提供的项目性能验证方案,对该生化分析仪检测的20个生化检验项目〔包括天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、血钙(Ca)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿酸(UA)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、肌酐(Cr)、尿素(Ure)、葡萄糖(Glu)、血磷(P)、脂蛋白a(LPa)、前白蛋白(PA)〕的正确度、精密度、线性范围和参考区间进行性能评价.结果 上述20项指标检测结果的批内精密度和总精密度均小于厂家精密度要求的范围;正确度在卫生部临床检验中心室间质量评价标准(NCCL)允许最大误差的1/3要求范围之内;厂家提供的各检测项目的线性范围和参考区间均通过验证.结论 使用ADVIA XPT全自动生化分析仪进行血生化指标检测的项目均达到质量标准的要求,满足临床标本检测分析的要求.
【期刊名称】《实用检验医师杂志》
【年(卷),期】2018(010)002
【总页数】4页(P111-114)
【关键词】全自动生化分析仪;性能验证;精密度;正确度;线性范围;参考区间
【作 者】张长军
【作者单位】102200 北京,北京市昌平区中医医院检验科 【正文语种】中 文
按照《医学实验室质量和能力认可准则》和《医疗机构临床试验室管理方法》的规定［1-2］，对临床实验室的全自动生化分析仪进行安装后，因其对安装和使用环境有特殊的要求，故应对所开展项目的性能进行分析评价，以保证检验结果的可靠性［3］。同时，生化项目性能评价也是实验室认可的重要内容及要求［4］。结合本实验室的情况，选取天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、碱性磷酸酶（alkaline
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
线性范围是指在一定的浓度范围内，检测结果与样本浓度之间呈线性关系的范围。线性范围试验的目的是确定试剂盒的线性范围及其上下限。线性范围的确定对于准确测量样品浓度非常重要，因为如果超出了线性范围，测量结果将不准确。
试验前需要准备一系列不同浓度的样品，通常使用稀释法制作。然后依次使用这些样品进行检测，记录每个样品的测量结果。在绘制一个标准曲线时，可以将样品的测量结果作为纵坐标，样品的浓度作为横坐标，在纸上标出一系列点，并通过这些点拟合一条直线。这条直线称为标准曲线。
标准曲线的斜率和截距可以反映试剂盒的灵敏度和误差。斜率表示单位浓度变化时，测量值的变化情况，斜率越大，灵敏度越高。截距表示零浓度时的测量值，截距越小越接近零浓度。
通过分析标准曲线的相关系数可以评估试剂盒的线性程度。相关系数越接近1，线性程度越好。一般认为，相关系数超过0.99，即可认为试剂盒满足线性要求。
在进行线性范围试验时需要注意以下几个方面：
1.样品浓度的选择：应根据所测定物质的生理浓度范围来选择样品浓度，以保证测试的实用性。
2.样品的制备与存储：样品的制备应精确控制，避免因稀释或浓缩不准确而影响试验结果。样品的存储应避免长时间曝光于大气中，以免发生化学反应导致样品浓度的变化。 3.试剂盒的选择：应根据所测定物质的特性和预期的分析结果，选择适宜的试剂盒进行测试。
4.试剂盒的操作：应按照试剂盒说明书的要求进行操作，严格控制操作步骤和时间，以减少试验误差产生的可能性。
5.数据处理和分析：应根据所测定物质的特性和测量结果，采用适当的统计方法进行数据处理和分析，并在数据分析报告中详细说明试验设计、方法和结果。
通过进行线性范围试验，可以确定试剂盒的线性范围及其上下限，为临床生化检验提供可靠的测试数据，为临床诊断提供准确的参考依据。同时，线性范围试验还可以评估试剂盒的稳定性和重复性，为试剂盒的质量控制提供参考依据。因此，线性范围试验在临床生化检验中具有重要的意义。
(仅供参考)检验科性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考) 1 生化 生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近0的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。 1.1 精密度 1.1.1 标本准备及要求 质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。 1.1.2 方案 1.1.2.1 方案1： 对验证材料每天分析1批次，2个浓度，每个浓度重复测定4次，连续5天。记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。 1.1.2.2 方案2： 批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本20次。记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）和批内变异系数CV（%）。 批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本20次，同一批号室内质控品某一时间段（至少20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。 1.1.3 结果判断 从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的1/4和1/3作为检测系统不精密度性能的的可接受标准（或用卫生部临检中心的允许总误差、卫生标准等），且又小于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理作出判断。
生化试剂盒线性范围高值的简单评价方法
・ １６７８・ 检验医学与临床２０１２年７月第９卷第１３期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊｕｌｙ ２０１２，Ｖｏ１．９，Ｎｏ．１３
若完全按说明书操作，则可能导致在设定温度下的反应时间不 够。研究表明 ５］，若延长加酶温育时间至６４ ｍｉｎ阳性质控对
照和弱阳性标本ＯＤ值的增加幅度超过１ｏ ，中阳性标本ＯＤ
值增加８．５ ，强阳性标本增加５．５ 。阴性对照标本的ＯＤ
值变化无统计学意义。 洗涤液温度对保证ＦＡＭＥ的洗板效果及检测结果的重复
性有重要意义。研究发现，若洗液的温度下（小于１４℃）较低，
则ＦＡＭＥ的洗板效果会减弱，使得阴性样本的检测曲线变宽，
脂血严重的样本可能会出现假阳性。因此，冬季有必要对洗液 桶进行适当预温，使其达到１８℃后再用于检测＿６］。
３质量控制 科学合理的质量控制是保证检验结果准确可比的基础，实
验室应该根据《医疗机构临床实验室管理办法》、ＩＳＯ １５１８９：
２００７《医学实验室一质量和能力的专用要求》和美国临床化学
标准化委员会（ＣＬＳＩ）的相关文件指南以及实验室的实际情况
进行合理的质量控制。 ３．１方法确认和性能验证 对于配套的检测系统，实验室在
使用前应该对ＦＡＭＥ进行性能验证。目前大多数实验室采用 的都是非配套系统，因此需要建立ＦＡＭＥ检测仪与所用试剂
构成的新系统的性能数据，主要包括以下２个方面。
重复性研究（精密度研究）：主要是指接近临界值浓度分析
物的重复性实验，其目的是为确定检测方法的临界值浓度，并
明确该临界值正负某一百分数浓度范围是否位于临界值９５
区间内。具体方案可参考：（１）制备足够２Ｏ次重复检测的同一
份样品，分别为处于临界浓度、高于临界浓度２Ｏ 和低于临界
浓度２０ 的样品。（２）重复检测样品２Ｏ次，确定每一份样品
结果为阳性和阴性的百分比。（３）评价临界浓度是否准确，评
价＋２Ｏ至一２Ｏ 的浓度范围是否包含于、位于或者超出这种
方法的９５ 区间。 准确性研究（ＴＹ法间比较）方法：另一种定性方法（如使用