染色体22q11区域的基因组病
马端--药物敏感性与出生缺陷
� 每一个药物大约都有10%-40%的人没有疗效 � 5%的住院病人由药物不良反应所致 � 10%的住院病人发生药物不良反应 � 全球每年死于不合理用药75万人 � 我国因药物不良反应住院的病人每年约250万人，直接死亡20万人
Huang SM, Goodsaid F, Rahman A, et el. Toxicology Mechanisms and Methods. 2006;(16) 89-99.
药物转运蛋白
OATP: organic anion transporting polypeptide PEPT: peptide transporter ASBT: ileal apical sodium/bile acid co-transporter MCT: monocarboxylic acid transporter MRP: multidrug resistance protein BCRP: breast cancer resistance protein P-gp, MDR1: P-glycoprotein OCT: organic cation transporter OSTα–OSTβ: heteromeric organic solute transporter NTCP: sodium/taurocholate co-transporting peptide OAT: organic anion transporter BSEP: bile-salt export pump MATE:multidrug and toxin extrusion protein URAT: urate transporter OCTN1: organic cation/ergothioneine transporter OCTN2: organic cation/carnitine transporter
遗传学的分子诊断技术简介
技术难点
检测操作注意事项：
• 试剂的离子成分和PH值对杂交的好坏有直接的影响。 因而在实验的试剂配置准备过程中要注意使用超纯水 进行配置，同时配好的试剂要使用PH试纸或PH仪校准。
• 细胞质较多时也会引起杂交率低下，信号弱，因而在 实验操作时应特别注意消化时间的掌握。
优技术点优：势
• 探针能长期保存，重复性好、稳定； • 安全快速，高灵敏性及特异性； • 可用于中期染色体和间期细胞的分析，不需要细胞
• FISH技术无法达到百分百完全杂交，特别是在应用 较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题。 但随着各种新型分子探针以及更为精密高端的光学
显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世，问 题可以得到解决。 • 无法准确判断断裂基因的具体坐标位置，进一步判
断需要RNA seq来检测。
技术优势
多少基因或染色体可用FISH检测：
培养； • 可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及（羊水）
穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国内外广 泛地用于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体 瘤等方面的检测。 （欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体异常占 30-40%）。
技术优势
缺点：
• 目前FISH主要集中在DNA水平方面检测，而针对 RNA这块比较困难。
如果针对ALK设计一个探针，但是如果发生了融合， 也不能确定是何种融合类型。
技术优势
设计已知融合基 因的探针，比如 针对ALK和 EML4的，ALK 全部用红色探针 覆盖，EML4用 黄色探针覆盖， 正常就是红黄分 开，融合就是红 黄在一起。
ALK EML4技术优势来自设计已知融合基 因的探针，比如 针对ALK的，用 红色和黄色覆盖 ALK基因的上下 游区域，正常就 是红黄在一起， 融合就是ALK发 生了断裂就是红 黄分开了
白血病融合基因
白血病融合基因Last revision on 21 December 2020bcr/abl融合基因慢性粒细胞白血病（Chronic Myelogenous Leukemia,CML）是一种发生于造血干细胞的血液系统恶性克隆增生性疾病。
在受累的细胞系中可找到Ph标记染色体或（和）bcr/abl基因重排。
基因结构人abl基因位于9号染色体长臂，有1b、1a和2-11共12个外显子。
转录始自1b或1a，形成的两种mRNA长度分别为7kb和6kb，合成的两种蛋白质分子量均约为145，前者定位于细胞膜，而后者主要在细胞核内。
abl主要结构有N 端的肉瘤同源2(srchomology,SH2）、SH1。
SH2结合磷酸化的酪氨酸残基，SH1具有酪氨酸激酶活性。
近C端富含酸性氨基酸残基，可结合DNA。
abl蛋白参与细胞周期调节。
在G0期，abl-Rb蛋白复合物与DNA结合。
在G1→S转变过程中，Rb被磷酸化，abl与之分离，并激活，使RNA聚合酶磷酸化，促进转录，细胞进入S期。
bcr基因位于22号染色体长臂，有23个外显子。
蛋白产物分子量均为160。
bcr蛋白第1-63个氨基酸是二聚体化结构，参与bcr蛋白多聚体的形成。
bcr蛋白参与细胞周期调节，但详细过程还不十分明确。
bcr基因断裂点集中在三个区域：主要(major bcr,M-bcr）、次要（minor bcr,m-bcr）和μ（μ-bcr）区域。
abl基因断裂位于第1或第2内含子。
因断裂点不一，bcr/abl融合基因及其mRNA和蛋白产物呈多样性。
CML的bcr基因断裂点常位于M-bcr，主要是b2a2和b3a2，蛋白分子量为210kb。
bcr基因在ALL中大约2/3为m-BCR位点。
Ph1染色体和bcr/abl融合基因是CML的分子基础，并可作为区分典型CML 和非典型CML的诊断指标。
由于t(9；22)(q34；而产生的费城染色体（Ph）在血液肿瘤中具有重要的诊断和预后意义，出现于90%以上的CML、30%的成人ALL、2%-10%的儿童ALL、以及少数的AML和MM患者。
染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在
[收稿日期]2021-07-26 [修回日期]2022-07-20[基金项目]安徽省重点研究与开发计划项目(202004j07020004)[作者单位]1.安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)检验科,安徽合肥230011;2.安徽医科大学附属妇幼保健院医学遗传中心,安徽合肥230001[作者简介]庞 宇(1996-),男,硕士,检验师.[通信作者]朱健生,硕士研究生导师,主任技师,教授.E⁃mail:593130772@[文章编号]1000⁃2200(2022)12⁃1719⁃04㊃检验医学㊃染色体拷贝数变异测序联合STR 分型在流产物遗传学分析中的应用庞 宇1,2,王朝红2,唐俊湘2,王森林2,朱健生2[摘要]目的:对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂方法:选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例自然流产病人,运用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(Short tandem repeats,STR)分型对流产物进行遗传学检测㊂结果:150例流产物均成功检测,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,占染色体异常总数的70.89%,染色体微重复/微缺失4例(2.67%),嵌合体14例(9.33%),染色体数目合并结构异常3例(2.00%),单亲二倍体2例(1.33%)㊂导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),包括染色体非整倍体(32.67%)㊁三倍体(4.67%);其次为嵌合体(9.33%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂结论:CNV⁃Seq 联合STR 技术适用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更多范围的染色体异常,能实现更加准确㊁全面的诊断,对明确自然流产的遗传因素,指导孕妇再次备孕,实现优生优育具有重要的意义㊂[关键词]自然流产;拷贝数变异测序;短串联重复序列;染色体数目异常;染色体结构异常[中图法分类号]R 714.55 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2022.12.023Application of chromosome copy number variation sequencing combinedwith STR typing technique in the genetic analysis of abortionPANG Yu 1,2,WANG Chao⁃hong 2,TANG Jun⁃xiang 2,WANG Sen⁃lin 2,ZHU Jian⁃sheng 2(1.Clinical Laboratory ,Hefei Hospital ,Anhui Medical University ,Hefei Second People′s Hospital ,Hefei Anhui 230011;2.MedicalHeredity Research Center ,Affiliated Maternal and Child Health Hospital of Anhui Medical University ,Hefei Anhui 230001,China )[Abstract ]Objective :To explore the genetic causes of spontaneous abortion and accumulate clinical data by genetic detection and analysis of the 150cases of abortion.Methods :A total of 150patients with spontaneous abortion who underwent in the Obstetrics and Gynecology Department of Anhui Province Maternity and Child Health Hospital from February 2020to July 2020were selected.Copy number variation sequencing(CNV⁃Seq)combined with short tandem repeats(STR)typing technique were used to detect the genetic characteristics of abortion.Results :All 150cases of abortion were detected successfully,71cases were normal(47.33%),79cases were chromosomal abnormalities (52.67%).Among them,56cases (70.89%)had chromosome number abnormality,4cases had chromosome microduplication /microdeletion(2.67%),14cases had mosaicisms (9.33%),3cases had chromosome number and structure abnormality(2.00%),and 2cases had uniparental diploid(1.33%).The main chromosomal abnormality which leading to spontaneous abortion was chromosomal number abnormality (37.33%),including chromosome aneuploidy (32.67%)and triploid(4.67%),followed by mosaicisms(9.33%).The chromosomal abnormalities which closely related to spontaneous abortion were (45,X),trisomy 16,(69,XNN),trisomy 21,trisomy18andmosaic trisomy16.Conclusions :CNV⁃Seq combined with STRtyping technique is suitable for the detection of chromosomal abnormalities in abortion.It can cover more chromosomal abnormalities and also can realize more accurate and comprehensive diagnosis in abortion.It has great significance to diagnose the genetic factors for spontaneous abortion,guide pregnant women to prepare for pregnancy againand realize the[14] LU J,SHEN G,LI Q,et al .Genotype distribution characteristicsof multiple human papillomavirus in women from the Taihu River Basin,on the coast of eastern China[J].BMC Infect Dis,2017,17(1):226.[15] YOU W,LI S,DU R,et al .Epidemiological study of high⁃riskhuman papillomavirus infection in subjects with abnormal cytological findings in cervical cancer screening [J].Exp TherMed,2018,15(5):412.(本文编辑 卢玉清)eugenics.[Key words]spontaneous abortion;copy number variation sequencing;short tandem repeats;chromosome number abnormality; chromosome structure abnormality 胚胎染色体异常是导致自然流产的重要原因之一,占自然流产因素的50%~70%[1],主要为染色体数目异常如染色体三体㊁多倍体㊁X染色体单体等,其次为染色体结构异常如染色体微重复/微缺失㊁染色体嵌合体㊁染色体易位等[2]㊂自然流产不仅对女性的健康造成一定的伤害,而且给社会和家庭增加了负担㊂对流产物的染色体检测,为探究流产的病因,指导孕妇下一次备孕,实现优生优育,具有重要的意义,本研究采用拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV⁃Seq)联合短串联重复序列(short tandem repeats,STR)分型的方法,对150例流产物进行遗传学检测,并对结果进行分析,为探究自然流产的遗传学病因积累临床资料㊂1 资料与方法1.1 一般资料 选择2020年2-7月在安徽省妇幼保健院妇产科就诊的150例流产病人㊂其中初发流产63例,复发流产87例,年龄21~44岁;孕6~ 36+6周,超声诊断为胚胎停育,其中流产组织46份,绒毛104份;经遗传咨询,自愿接受流产的病因学检查,留取流产物(流产组织或绒毛)经处理并保存备用,所有病人均签署知情通知书㊂1.2 方法 1.2.1 流产物的CNV⁃Seq测序 送检的流产组织或绒毛,用0.9%氯化钠溶液反复冲洗,尽量去除母体细胞的污染,放置专用试管内,-20℃冰箱保存㊂选取10mg的流产组织或绒毛,应用Qiaqen QIAamp DNA Blood Mini Kit试验盒,提取基因组DNA,利用Covaris S220超声波破碎仪将DNA打断,文库构建㊁纯化㊁定量㊁DNA混合文库在illumina Nocaseq6000测序仪上进行双端测序,利用Nx Clinical生信分析软件对染色体非整倍体及100kb以上的拷贝数变异(CNV)进行分析,对比至人类基因库[hg19]或[GRCh37],并通过OMIM㊁DGV㊁GLINGEN㊁ClinVar㊁PubMed㊁DECIPHER㊁ISCA㊁NCBI㊁UESC等数据库比对,对检测结果进行判读㊂1.2.2 流产物STR分型检测 把DNA样本进行多重荧光PCR扩增,将其产物在ABI3500Dx遗传分析仪上进行毛细管电泳,检测出不同分型的相对定位,应用Genc Mapper软件对结果进行计算分析㊂2 结果2.1 流产物染色体检测结果 本研究检测流产物150例,均成功检测,检测成功率100%,染色体正常71例(47.33%),染色体异常79例(52.67%)(见表1)㊂2.2 染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果 本研究共检出染色体非整倍体49例(染色体三体38例,X染色体单体11例);多倍体7例(69,XXY, 4例;69,XXX,3例),染色体数目异常在X㊁16㊁21号染色体发生率较高;嵌合体14例,其中16㊁X号染色体嵌合体发生率较高(见表2)㊂表1 不同类型染色体异常的检测结果染色体异常类型具体异常情况n占总数比例/%染色体数目异常染色体非整倍体4932.67多倍体7 4.67染色体结构异常染色体微重复/微缺失4 2.67染色体嵌合体嵌合三体10 6.67嵌合单体2 1.33多条染色体嵌合2 1.33纯合区域单亲二倍体2 1.33两种类型及以上异常染色体数目+结构异常3 2.00合计7952.67表2 150例流产物染色体非整倍体㊁多倍体㊁嵌合体检测结果检测结果n占总数比例/% 45,X117.33 69,XXY4 2.67 69,XXX3 2.00 47,XN,+310.67 47,XN,+43 2.00 47,XN,+52 1.33 47,XN,+1310.67 47,XN,+142 1.33 47,XN,+153 2.00 47,XN,+1610 6.67 47,XN,+185 3.33 47,XN,+2010.67 47,XN,+216 4.00 47,XN,+2210.67 49,XN,+3,+14,+510.67 48,XN,+7,+202 1.33 46,XN/45,X2 1.33续表2检测结果n 占总数比例/%46,XN /47,XN,+32 1.3346,XN /47,XN,+510.6746,XN /47,XN,+610.6746,XN /47,XN,+710.6746,XN /47,XN,+164 2.6746,XN /47,XN,+2110.67多条染色体嵌合体21.332.3 染色体CNV 的检测结果 本研究共检出染色体微重复/微缺失4例(2.67%),同时存在染色体数目㊁结构异常3例(2.00%)㊂涉及1㊁13㊁14㊁17㊁18号染色体,经数据库查询,均存在不同类型的致病性表型(见表3)㊂3 讨论 基于高通量测序的CNV⁃Seq 对流产物染色体的测序,是通过将目标染色体的DNA 剪切成小片段,构建文库,PCR 扩增,以及遗传学信息检测,克服了传统细胞核型技术的染色体制备不良㊁培养失败㊁分辨率低等缺点,对染色体非整倍体和染色体CNV 可以提供更加准确的遗传学信息,但对染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁母源性细胞污染的鉴别仍显不足[3]㊂而STR 分型方法是设计荧光引物扩增特定的序列,再进行毛细管电泳,由荧光峰值面积来表达产物扩增的数量,通过等倍基因的剂量变化,来诊断染色体数目异常,对排除母源性细胞污染,以及染色体多倍体㊁单亲二倍体㊁性染色体数目异常的诊断具有快速㊁准确的特点,可弥补CNV⁃Seq 的不足[4]㊂CNV⁃Seq 联合STR 分型方法应用于流产物染色体异常的检测,可覆盖更大范围的染色体异常,能实现对流产物的遗传信息更加准确㊁全面的诊断,为合理备孕提供科学的依据㊂表3 流产物染色体CNV 的检测结果序号年龄/岁孕周/周孕产史就诊原因检测结果致病性分析1298+3G1P0胚胎停育Seq[GRCh37]1q21.1q21.2(145866610⁃147915109)X1发育迟缓,先天性心脏病,面部畸形,成人期精神分裂症23911+5G4P1胚胎停育Seq[GRCh37]18p11.32(1⁃1553527)X1发育迟缓,心脏畸形,前脑无裂畸形3266+6G1P0稽留流产1:Seq [GRCH37]13q31.2q34(87778439⁃15169878)X12:3q25.32(158047415⁃158583714)X3小头畸形,心脏畸形4289+4G1P0稽留流产1:Seq[GRCh37]14q11.1q33.33(18944037-107349540)X32:45,X智力低下,发育迟缓,肌张力低下,特纳综合征5319+5G1P0胚胎停育1:Seq [GRCh37]17P12(14076298-15490260)X12:47,XN,+22发育迟缓,肾脏畸形,智力低下,22⁃三体综合征6408+5G5P2胚胎停育1:Seq [GRCh37]17p12(14080405⁃15473084)X32:46,XN /47,XN,+22Chareot⁃Marie Tooth 病7349+6G5P2胚胎停育Seq [GRCh37]22q11.21(1888423⁃21524732)X1DiGeorge 综合征 本研究共检出染色体异常79例(52.67%),其中染色体数目异常56例,包括染色体非整倍体49例;三倍体7例;嵌合体14例;染色体微重复/微缺失4例;同时存在染色体数目㊁结构异常3例;单亲二倍体2例㊂本研究的结果提示:导致自然流产最主要的染色体异常为染色体数目异常(37.33%),其中主要是染色体非整倍体(32.67%);其次为嵌合体(9.33%)和三倍体(4.67%)㊂与自然流产密切相关的染色体异常依次为:45,X㊁16⁃三体;69,XNN㊁21⁃三体;18⁃三体;16⁃三体嵌合体㊂在染色体异常中的占比依次为13.92%㊁12.66%㊁8.86%㊁7.59%㊁6.33%㊁5.06%㊂相关的临床表现为:69,XNN,常于孕早期出现流产,胎儿可表现为先天性心脏病,肾脏畸形㊁脑积水㊁脑部畸形和脊髓脊膜膨出等;45,X,表现为特纳综合征,胎儿发育迟缓,身体矮小,先天性性腺发育不良等,部分胎儿发生孕早期流产;16染色体三体,表现为早孕期胚胎停育㊂其他染色体三体也有表现为不同程度的,多样性的胎儿畸形,胚胎停育㊁胎儿宫内生长发育迟缓等临床表现,但检出率较低㊂NIKITINA 等[5]分析了563例自然流产物染色体,染色体正常为296(52.6%),染色体异常为267(47.4%);导致自然流产最主要的染色体异常依次为非整倍体㊁三倍体等,且先前胚胎具有异常核型的孕妇再次受孕后,发生复发流产的频率仍很高㊂因此,自然流产物的遗传学检查,对指导再次妊娠具有积极意义㊂本研究中染色体嵌合体检出14例(9.33%),分布于3㊁5㊁6㊁7㊁16㊁21㊁X号染色体,其中16号染色体三体嵌合体检出率率最高(2.67%)㊂16号染色体三体嵌合主要是胚胎早期 三体自救”形成单亲二倍体,或为16⁃三体/16⁃二体的复合体,临床表现为:胎儿宫内生长受限㊁胚胎停育㊁先天性心脏病㊁多脏器畸形等[6]㊂嵌合体的形成可能会增加自然流产的发生率,且嵌合体中异常核型比例越高,临床症状就越明显[7]㊂单亲二倍体可能因涉及遗传印迹基因㊁隐性基因纯合突变等,使胎儿出现各种临床综合征,表现为胎儿宫内生长受限㊁器官畸形㊁胚胎停育等临床症状㊂本研究中染色体微重复/微缺失以及同时合并染色体数目异常的共7例(4.67%),均存在不同类型的致病性表型㊂其中22q11.2微缺失可能导致DiGeorge综合症㊁腭心面综合症㊁TaKao综合症等,临床表现包括多种先天畸形:先天性心脏㊁胸腺发育不全㊁甲状旁腺功能减退和/或面部畸形㊂随着时间的推移可能出现的其他临床问题是自身免疫㊁肾功能不全㊁发育迟缓㊁胚胎流产㊁恶性肿瘤和神经系统表现,如精神分裂症等[8]㊂17q12微重复涉及Chareot⁃Marie Tooth病1A型的发生以及压迫麻痹性神经病变,表现为一种慢性进行性肌萎缩症[9]㊂1q21.1微缺失综合症表现为小头畸形㊁癫痫发作㊁发育迟缓和各种先天性异常,如心脏异常和泌尿生殖系统异常等,以及成人期精神分裂症的发生相关[10]㊂18p11.32微缺失最常见的特征包括严重程度不一的智力低下㊁身材矮小㊁流产㊁前脑无裂畸形㊁颅面畸形以及言语和认知发育迟缓㊂其他较少见的临床症状包括行为障碍㊁心脏畸形㊁肌张力障碍㊁生长激素缺乏和自身免疫性疾病[11]㊂染色体CNV也是导致自然流产的重要因素[12-13],但其检出率较染色体数目异常低㊂如检查结果为致病性CNV,还需进一步明确其为新发突变,还是来源于父母㊂对于检查结果为非致病性的CNV,可能应寻找CNV遗传因素之外的自然流产病因如精子畸形㊁妇科疾病㊁内分泌疾病㊁感染㊁药物㊁化学毒物㊁自身免疫疾病等,可为再次备孕的产前诊断㊁遗传咨询提供有价值的临床资料㊂综上所述,染色体非整倍体是自然流产的主要遗传学原因㊂流产物的遗传学的检测,仍需更多的样本量的临床研究㊂对流产物染色体易位㊁倒位㊁单基因病等检测仍面临着一定的困难,仍需选择更多精准的检测方法,避免漏检㊂对流产物染色体异常的病人,还应结合夫妻双方染色体的检测,从而明确染色体异常的来源,指导再次妊娠㊂总之,对流产物的遗传学检测可以从基因层面揭示自然流产的病因,对提高生育质量,减少出生缺陷,实现优生优育具有重要的意义㊂[参考文献][1] YANG L,TAO T,ZHAO X,et al.Association between fetalchromosomal abnormalities and the frequency of spontaneousabortions[J].Exp Ther Med,2020,19(4):2505.[2] RAJCAN⁃SEPAROVIC E.Next generation sequencing in recurrentpregnancy loss⁃approaches and outcomes[J].Eur J Med Genet,2020,63(2):103644.[3] ZHANG J,TANG X,HU J,et al.Investigation on combined copynumber variation sequencing and 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胎儿右锁骨下动脉迷走应用单核苷酸多态性微阵列技术检查的价值
㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.04.007胎儿右锁骨下动脉迷走应用单核苷酸多态性微阵列技术检查的价值*陈耿波,江矞颖,傅婉玉,王元白,庄建龙,李燕青ә福建省泉州市妇幼保健院儿童医院产前诊断中心,福建泉州362000摘要:目的探讨单核苷酸多态性微阵列(S N P-a r r a y)检查对胎儿右锁骨下动脉迷走(A R S A)的临床意义㊂方法选取2018年1月1日至2022年7月31日于该院进行产检的75例孕妇的胎儿为研究对象,所有胎儿Ⅱ~Ⅲ级彩超检查提示A R S A,且所有孕妇均在该院产前诊断中心进行羊水/脐血染色体核型分析及S N P-a r r a y检查,总结分析其染色体检查结果㊁临床表型及妊娠结局㊂结果染色体核型分析检出4例染色体结构异常,包含2例致病性变异和2例46,X N,i n v(9)(p11q13),致病性变异检出率为2.67%(2/75);S N P-a r r a y检出12例异常,包含5例致病性变异(p C N V s)㊁2例存在杂合性缺失(L O H)㊁5例临床意义尚不明确(V O U S),致病性变异检出率为6.67%(5/75)㊂合并心脏其他结构畸形的A R S A胎儿染色体p C N V s检出率最高(33.33%),其次为孤立性A R S A胎儿(10.71%)㊂结论 A R S A胎儿建议进行染色体S N P-a r r a y检查排除染色体微小病变㊂关键词:右锁骨下动脉迷走;单核苷酸多态性微阵列;胎儿;染色体异常;致病性变异中图法分类号:R446.9;R714.55文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)04-0463-04C l i n i c a l v a l u e f o r f e t a l r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y v a g u s b y s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m a r r a y t e c h n i q u e*C H E N G e n g b o,J I A N G Y u y i n g,F U W a n y u,WA N G Y u a n b a i,Z HU A N G J i a n l o n g,L I Y a n q i n gәP r e n a t a l D i a g n o s i s C e n t e r,C h i l d r e n's H o s p i t a l,Q u a n z h o u M a t e r n a l a n dC h i l d H e a l t h H o s p i t a l,Q u a n z h o u,F u j i a n362000,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m a r r a y (S N P-a r r a y)i n t h e t r e a t m e n t o f f e t a l a b e r r a n t r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y v a g u s(A R S A).M e t h o d s T h e f e t u s e s o f75p r e g n a n t w o m e n w h o u n d e r w e n t a n t e n a t a l e x a m i n a t i o n i n Q u a n z h o u M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i-t a l f r o m J a n u a r y1,2018t o J u l y31,2022w e r e s e l e c t e d a s t h e s t u d y o b j e c t s.A l l f e t u s e s o f g r a d eⅡt oⅢc o l o r u l t r a s o u n d i n d i c a t e d A R S A,a n d a l l p r e g n a n t w o m e n u n d e r w e n t c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s o f a m n i o t i c f l u i d/u m b i l i c a l b l o o d a n d S N P-a r r a y t e c h n o l o g y e x a m i n a t i o n i n o u r p r e n a t a l d i a g n o s t i c c e n t e r.T h e r e s u l t s o f c h r o m o s o m e e x a m i n a t i o n,c l i n i c a l p h e n o t y p e a n d p r e g n a n c y o u t c o m e w e r e s u m m a r i z e d a n d a n a l y z e d.R e s u l t s C h r o-m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s d e t e c t e d4c a s e s o f c h r o m o s o m e s t r u c t u r a l a b n o r m a l i t i e s,i n c l u d i n g2c a s e s o f p a t h o g e n i c v a r i a t i o n a n d2c a s e s o f46,X N,i n v(9)(p11q13),t h e d e t e c t i o n r a t e o f p a t h o g e n i c v a r i a t i o n w a s 2.67%(2/75).S N P-a r r a y d e t e c t e d12a b n o r m a l i t i e s,i n c l u d i n g5c a s e s o f p a t h o g e n i c v a r i a t i o n(p C N V s),2c a-s e s o f h e t e r o z y g o s i t y l o s s(L O H),a n d5c a s e s o f c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e u n k n o w n(V O U S).T h e d e t e c t i o n r a t e o f p a t h o g e n i c v a r i a t i o n w a s6.67%(5/75).T h e d e t e c t i o n r a t e o f p C N V s i n A R S A f e t u s e s w i t h c a r d i a c m a l f o r-m a t i o n s w a s t h e h i g h e s t,f o l l o w e d b y i s o l a t e d A R S A f e t u s e s.C o n c l u s i o n F e t a l A R S A r e l a t e s c l o s e l y t o c h r o-m o s o m a l l e s i o n s,a n d S N P-a r r a y d e t e c t i o n i s r e c o mm e n d e d t o i m p r o v e t h e d e t e c t i o n r a t e.K e y w o r d s:r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y v a g u s;s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m a r r a y;f e t u s;c h r o m o s o m-a l a b n o r m a l i t i e s;p a t h o g e n i c v a r i a t i o n胎儿右锁骨下动脉迷走(A R S A)是主动脉弓最常见的先天异常,正常情况下,右锁骨下动脉起源于头臂干,而A R S A直接起源于主动脉弓,位于左锁骨下动脉的远端,通常绕气管和食管后方向右肩部走行,临床上多无明显症状㊂健康人群中A R S A的发生率为1.0%~1.5%,在非整倍体人群尸检中检出率为19%~36%,提示A R S A与胎儿非整倍体异常关系密切[1]㊂本研究回顾分析通过单核苷酸多态性微阵列(S N P-a r r a y)技术联合染色体核型分析产前诊断为A R S A的75例胎儿,对其染色体异常检出情况进行总结,以期为产前遗传咨询提供参考㊂1资料与方法1.1一般资料选取2018年1月1日至2022年7月31日于本院进行产检的75例孕妇的胎儿为研究㊃364㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4*基金项目:福建省卫生健康重大科研专项资助项目[闽卫科教函(2021)905号];福建省科技重大专项[闽财指(2021)741号]㊂作者简介:陈耿波,男,副主任医师,主要从事优生优育及计划生育研究㊂ә通信作者,E-m a i l:l i y a n q i n g.v i p@f o x m a i l.c o m㊂对象,所有胎儿Ⅱ~Ⅲ级彩超检查提示A R S A ,且所有孕妇均在本院产前诊断中心接受羊水/脐血染色体核型分析及S N P -a r r a y 检查㊂根据有无合并其他高危因素将75例胎儿分为孤立性A R S A 胎儿组及非孤立性A R S A 胎儿组,非孤立性A R S A 胎儿组高危因素包括胎儿超声结构异常㊁超声软指标异常㊁孕妇高龄㊁唐氏筛查高风险㊁不良孕产史等㊂所有接受介入性产前诊断的孕妇在检查前均充分知情,并签署知情同意书㊂本研究经本院医学伦理委员会批准(2020N O.31)㊂1.2 细胞培养及染色体核型分析 采用超声引导进行羊膜腔穿刺术或脐血穿刺术,抽取30m L 羊水或2m L 脐血用于染色体核型分析和S N P -a r r a y 检查㊂20m L 用于羊水细胞培养,羊水培养后收获细胞,制备染色体并染色后进行核型分析㊂羊水细胞共计数可分析核型30个,分析5个核型㊂1m L 脐血用于脐血细胞培养,计数可分析核型20个,分析5个核型㊂染色体的命名参照人类细胞遗传学国际命名体制标准(I S C N 2020)㊂1.3 S N P -a r r a y 检查 将10m L 羊水或1m L 脐血标本送至第三方检查公司(北京贝康医学检验所)采用A f f y m e t r i x C y t o S c a n 750K 芯片进行S N P -a r r a y 检查㊂按照试剂盒说明书,提取羊水细胞基因组D N A ,经稀释㊁消化㊁扩增㊁纯化后,将芯片上的探针与生物素标记的相应待测片段进行杂交㊁洗涤㊁结合染色后放入G e n e C h i p 扫描仪(A f f ym e t r i x 公司)扫描,采用C h r o m o s o m e A n a l ys i s S u i t e (C h A S )v 4.0软件对荧光信号进行分析㊂根据美国医学遗传学与基因组学学会(A C MG )指南,通过查询D G V ㊁OM I M ㊁P u b m e d ㊁D E C I P H E R 及加州大学圣克鲁斯分校(U C S C )数据库对拷贝数变异的临床意义进行分析㊂2 结 果2.1 染色体核型分析结果 共纳入75例产前超声提示A R S A 胎儿,染色体核型分析检出4例染色体结构异常,包括2例致病性变异(分别为47,X N ,+21和嵌合型T u r n e r 综合征)和2例46,X N ,i n v (9)(p 11q13),总检出率为5.33%(4/75),致病性变异检出率为2.67%㊂2.2 S N P -a r r a y 检查结果 S N P -a r r a y 技术共检出12例异常,包括5例致病性变异㊁2例存在杂合性缺失(L O H )㊁5例临床意义尚不明确(V O U S ),检出率为16.00%(12/75),致病性变异检出率为6.67%㊂见表1㊂S N P -a r r a y 技术对AR S A 胎儿染色体异常的致病性变异检出率比传统染色体核型分析检出率提高4%㊂孤立性A R S A 胎儿组㊁非孤立性A R S A 胎儿组染色体异常检出率比较见表2㊂表1 A R S A 胎儿S N P -a r r a y 异常检出情况及妊娠结局随访序号产前诊断指征S N P -a r r a y 检查结果父母验证临床意义核型分析妊娠结局1A R S A22q11.21重复3.3m b -致病性变异未见异常终止妊娠2N T :5.1m m ;静脉导管a 波反向;室间隔缺损,永存左上腔静脉;A R S Aa r r (21)x 3致病性变异47,X N ,+21终止妊娠3心脏强回声;A R S A3p 22.1p 14.3杂合性缺失13.0m bL O H 未见异常活产4A R S A 4q 31.23q 34.1杂合性缺失21.5m bL O H未见异常活产5A R S A22q11.21重复2.5m b致病性变异46,X N ,i n v (9)(p 11q13)活产6D S 1/200;先天性心脏病:法洛四联症,肺动脉闭锁,A R S A ,左上腔静脉存在并引流入左房可能4q 21.22q 22.2缺失11.5m b 致病性变异未见异常终止妊娠7A R S A ;羊水过多;鼻骨发育不良;中筛m o m 异常;2q12.3缺失0.59m b ;17q11.2重复0.464m b V O U S 未见异常活产8A R S A ;肠道强回声4q27缺失0.17m b 遗传自母亲V O U S 未见异常活产9A R S A10q22.1缺失0.18m b 遗传自母亲V O U S 未见异常出生后失访10A R S A ;心脏强回声;肠道强回声;11p14.3重复1.0m b 新发突变V O U S 未见异常活产11A R S A ;心脏强回声;侧脑室增宽;肾盂扩张;18p11.21重复0.48m bV O U S未见异常活产12A R S A45,X [22%]/46,X X [78%],或X X X /X /X X ,或X X X /X 等形式异常嵌合新发突变致病性变异45,X [47]/47,X X X [3]终止妊娠 注: 表示未验证;D S 为唐氏综合征㊂㊃464㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n ,F e b r u a r y 2024,V o l .21,N o .4表2 A R S A 胎儿具体分组及染色体异常检出情况组别nS N P -a r r a y 检出情况检出异常(n )总检出率(%)致病性变异检出率(%)染色体核型检出情况核型异常(n )总检出率(%)致病性变异检出率(%)孤立性A R S A 胎儿组28517.8610.71310.713.57 心脏其他畸形6233.3333.33116.6716.67超声软指标异常33515.150.0000.000.00非孤立性A R S A 胎儿组 孕妇高龄500.000.0000.000.00 唐氏筛查高风险100.000.0000.000.00 不良孕产史100.000.0000.000.00 伴骨骼发育异常100.000.0000.000.00合计751216.006.6745.332.672.3 妊娠结局随访情况 经遗传咨询后,12例合并染色体异常A R S A 胎儿中例1㊁2㊁6㊁12家属选择终止妊娠;其余8例胎儿家属选择继续妊娠:7例出生后随访家属均自述出生后未见明显异常,1例出生后失访㊂63例染色体核型分析及S N P -a r r a y 检查未发现异常的A R S A 胎儿中1例于羊水穿刺术后1周自然流产(男性无生机儿,外观未见明显异常);1例因超声提示胎儿小头畸形可能,于孕26周5d 在外院引产(无生机儿,性别及外观不祥);57例出生后随访均未见明显异常;4例失访㊂1例超声检查提示A R S A 的胎儿染色体核型分析及S N P -a r r a y 检查均未发现异常,彩超随访发现小头畸形,家属选择终止妊娠㊂3 讨 论染色体微阵列分析(C MA )技术又被称为 分子核型分析 ,目前已广泛应用于产前诊断,能检查出10m b 以下的染色体小片段拷贝数变异[2-4],与传统染色体核型分析相比,不仅能减少检查时间,同时能提高诊断率[5]㊂本研究中S N P -a r r a y 技术对AR S A 胎儿染色体致病性变异检出率为6.67%,与染色体核型分析相比,检出率提高了4%㊂A R S A 与胎儿染色体异常之间存在明显关联[6]㊂目前的研究认为非孤立性的A R S A 会增加胎儿染色体异常的风险,主要是21-三体和22q11微缺失[7-8]㊂本研究中例2胎儿合并心脏其他结构畸形,检出21-三体综合征㊂本研究检出2例22号染色体22q11.21区段存在微重复(分别为3.3/2.5m b ),该片段位于22q11.2缺失/重复疾病的关键区域,已有研究报道22q11.2区段重复可导致不同程度的智力障碍,学习障碍,生长迟滞,肌张力减退等[9],但22q11.21重复与A R S A 的关系鲜有报道,例5作为存活案例,有待继续随访以充实临床数据㊂有研究报道A R S A 可能是T u r n e r 综合征等染色体异常的产前超声表现[10],本研究例12胎儿羊水染色体核型分析及S N P -a r r a y 检出嵌合型T u r n e r 综合征伴X 染色体微重复㊂T u r n e r 综合征是常见的染色体异常疾病之一,也是人类能生存的唯一单体综合征,T u r n e r 综合征典型临床表现为第二性征发育不全㊁原发性闭经㊁身材矮小㊁躯体畸形㊁不能生育等,还可伴发一系列内分泌异常,如糖代谢紊乱㊁甲状腺疾病等[11]㊂例6胎儿超声提示复杂先天性心脏病,羊水S N P -a r r a y 技术检查提示4号染色体4q 21.22q22.2区段存在11.5m b 片段的缺失,内含H N R N P D L ㊁D S P P ㊁P K D 2等46个OM I M 基因,已有小于和相似片段缺失与脑病(n s v 533949,杂合缺失,P a t h o ge n i c )㊁巨头畸形㊁肌张力减退(n s v 3110060,杂合缺失,P a t h o g e n i c )㊁发育迟缓(n s v 993537,杂合缺失,P a t h o g e n i c )㊁视力异常㊁隐睾症㊁癫痫痉挛㊁全面发展迟缓㊁心室肥大㊁腕骨骨化延迟㊁大头畸形(P a t i e n t :306769,P a t h o ge n i c )等临床表型相关的病例报道㊂已有研究报道在智力障碍㊁低眼压㊁矮小等临床表型相关的患者中检查到4q21.3区段的缺失[12],例6胎儿超声表型与既往报道不相符,但本研究只关注染色体微小病变,不排除基因突变㊁环境因素㊁病毒感染等因素引起例6胎儿的超声表型㊂有研究报道L O H 可能与胎儿A R S A 有关,但其机制尚不清楚[7]㊂本研究中例3㊁4分别发现染色体3p 22.1p 14.3及4q 31.23q34.1区段存在L O H ,包含多个常染色体隐性遗传疾病相关的基因,胎儿A R S A 是否与染色体L O H 的发生有关还有待更多的病例被识别和进一步的深入研究㊂孤立性A R S A 通常被认为是一种正常血管变异,大多预后良好㊂对于孤立性A R S A 胎儿是否需要进行介入性产前诊断目前仍没有较一致的观点,部分观点甚至存在冲突㊂有研究报道孤立性A R S A 胎儿预后良好,如果无创产前基因检查(N I P T )结果为低风险,则不需要进行羊水或脐血等介入性检查[13-14]㊂但B E H R AM 等[10]研究发现孤立性的A R S A 可能是21三体综合征㊁D i G e o r ge 综合征等染色体异常的唯一产前预测因子,建议应进行染色体基因组疾病筛查㊂本研究中孤立性A R S A 胎儿组染色体异常检出率为17.86%(5/28),包括3例致㊃564㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n ,F e b r u a r y 2024,V o l .21,N o .4病性的拷贝数变异㊁1例染色体10q22.1区段存在0.18m b片段缺失㊁1例4号染色体L O H,以上5例均不能被传统染色体核型分析技术检出,鉴于孤立性A R S A与染色体微小病变关系密切,建议进行染色体S N P-a r r a y检查以提高检出率,减少因染色体核型分析技术分辨率低而导致漏诊㊂虽然C MA对胎儿染色体疾病的诊断能力很强,但该技术常常发现许多与临床表型相关性不明确的拷贝数改变,给产前临床遗传咨询及家属带来很大的困扰[15]㊂本研究共检出5例V O U S,变异检出率为6.67%(5/75),与文献[16]报道一致㊂部分变异是健康人群的多态性表现,不具有致病性,当检出V O U S 时,建议进行亲本来源验证[17]㊂本研究中共3例V O U S进行父母验证,2例遗传自表型正常的亲代,1例为新发突变;大多数情况下,来源于父母的V O U S 倾向于可能良性[18]㊂若胎儿V O U S为新发突变,则需要结合其所涉及的基因㊁片段大小㊁胎儿影像学检查结果㊁家族史等综合评估胎儿预后[19]㊂5例V O U S 均选择继续妊娠,除1例出生后失访外,其余4例出生后电话随访家属均自述发育良好㊂本研究尚存在一定的局限性:样本量小,可能导致数据分析出现偏差;方法不够完善,基因突变导致的综合征可能出现胎儿A R S A,本研究中1例超声检查提示A R S A的胎儿,两种检测方法检查均未见异常,导致胎儿小头畸形的病因未明确,新一代测序技术能为胎儿发育异常提供更多的有用信息[20],有希望为A R S A胎儿预后的判断提供更全面的依据㊂综上所述,本研究认为A R S A(包括孤立性与非孤立性)与胎儿染色体病变(包括染色体非整倍体和微缺失微重复)关系密切,建议进行介入性产前诊断; S N P-a r r a y技术可以有效提高A R S A胎儿染色体异常的检出率,建议进行介入性产前诊断对胎儿染色体核型分析的同时进行胎儿S N P-a r r a y检查㊂参考文献[1]肖珍,尚宁,冯景煦,等.103例胎儿孤立性迷走右锁骨下动脉的染色体分析[J].国际医药卫生导报,2022,28(4): 529-531.[2]染色体微阵列分析技术在产前诊断中的应用协作组.染色体微阵列分析技术在产前诊断中的应用专家共识[J].中华妇产科杂志,2014,49(8):570-572.[3]孙丹,王小艳,罗曼曼,等.应用单核苷酸多态性微阵列芯片及核型分析检查7例21q部分三体的产前遗传学诊断[J].生殖医学杂志,2022,31(6):834-837.[4]胡仲任,陈敏,张宇,等.染色体微阵列分析技术在产前遗传性疾病诊断中的价值研究[J].中国现代医生,2017,55(30):1-3.[5]B E R I S HA S Z,S H E T T Y S,P R I O R T W,e t a l.C y t o g e-n e t i c a n d m o l e c u l a r d i a g n o s t i c t e s t i n g a s s o c i a t e d w i t h p r e-n a t a l a n d p o s t n a t a l b i r t h d e f e c t s[J].B i r t h D e f e c t s R e s, 2020,112(4):293-306.[6]A T A N A S O V A D,MA R K O V D,P A V L O V A E.A b e r-r a n t r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y(A R S A):a n e w u l t r a s o u n d m a r k e r f o r c h r o m o s o m a l f e t a l a b n o r m a l i t i e s[J].A k u s hG i n e k o l(S o f i i a),2015,54(4):12-17.[7]C A I M,L I N N,F A N X,e t a l.F e t a l a b e r r a n t r i g h t s u b c l a-v i a n a r t e r y:a s s o c i a t e d a n o m a l i e s,g e n e t i c e t i o l o g y,a n d p o s t n a t a l o u t c o m e s i n a r e t r o s p e c t i v e c o h o r t s t u d y[J].F r o n t P e d i a t r,2022,10:895562.[8]赵菲,张婷,齐彩静,等.孕早期胎儿A R S A检出率及其21三体综合征发生的M e t a分析[J].中国妇幼健康研究, 2020,31(7):922-927.[9]WO O DWA R D K J,S T AM P A L I A J,V A N Y A I H,e t a l.A t y p i c a l n e s t e d22q11.2d u p l i c a t i o n s b e t w e e n L C R22B a n d LC R22D a r e a s s o c i a t e d w i t h n e u r o d e v e l o p m e n t a l p h e-n o t y p e s i n c l u d i n g a u t i s m s p e c t r u m d i s o r d e r w i t h i n c o m-p l e t e p e n e t r a n c e[J].M o l G e n e t G e n o m i c M e d,2019,7(2):e00507.[10]B E H R AM M,SÜZ E NÇA Y P I N A R S,e t a l.S h o u l d i s o l a-t e d a b e r r a n t r i g h t s u b c l a v i a n a r t e r y b e i g n o r e d i n t h e a n-t e n a t a l p e r i o d A m a n a g e m e n t d i l e mm a[J].T u r k J O b-s t e t G y n e c o 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SWISNF染色质重塑复合物在乳腺癌中的研究现状
网络出版时间：２０２１－１－１９１５：３１ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２１０１１９．１１００．０１６．ｈｔｍｌＳＷＩ／ＳＮＦ染色质重塑复合物在乳腺癌中的研究现状闫梦丽，吴焕文，梁智勇摘要：ＤＮＡ的复制、转录、修复、重组与染色质状态密切相关。
染色质重塑复合物在染色质重塑过程中扮演重要作用。
其中ＳＷＩ／ＳＮＦ复合物是最先在酵母中发现的一种多亚基复合物家族，可利用三磷酸腺苷的能量（ＡＴＰ）水解重塑核小体。
该复合物亚基在多种肿瘤中发生异常并可作为潜在的治疗靶点，如卵巢癌、非小细胞肺癌、视网膜母细胞瘤等。
然而其在乳腺癌中的相关研究仍然匮乏，现就该复合物与乳腺癌的相关研究进展进行综述，分类讨论各组亚基在乳腺癌形成过程中可能具有的重要作用，为深入研究染色质重塑因子在乳腺癌发生、发展中的作用机制提供理论基础。
关键词：乳腺肿瘤；ＳＷＩ／ＳＮＦ染色质重塑复合物；文献综述中图分类号：Ｒ７３７ ９ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－７３９９（２０２１）０１－００６５－０４ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２１．０１．０１６接受日期：２０２０－１１－０２基金项目：中国医学科学院创新医学项目（２０１６ Ｉ２Ｍ １ ００２）作者单位：中国医学科学院北京协和医学院／北京协和医院病理科北京 １００７３０作者简介：闫梦丽，女，硕士研究生。
Ｅ ｍａｉｌ：２５８６１５６８９８＠ｑｑ．ｃｏｍ梁智勇，男，博士，教授，博士生导师，通讯作者。
Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｚｈｉｙｏｎｇ１２２０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ 乳腺癌的发病率和病死率均位居女性恶性肿瘤的首位［１］。
虽然目前乳腺癌根据分期特点已有多种治疗方式，５年生存率得到了提高，但仍有很多乳腺癌患者因治疗方案有限而无法长期生存。
因此，继续探索乳腺癌中有效的分子标志物对临床治疗具有重要意义［２］。
【江苏省自然科学基金】_探针技术_期刊发文热词逐年推荐_20140815
22q11微缺失
1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27
科研热词 饱和一元醇 轴流泵 紫外-可见光谱 流动测量 数学模型 包合作用 β -环糊精 非线性环量 轴面速度 转基因检测 表面增强拉曼光谱 胶束 离子液体 界面 油菜 水相转移 水力机械 斑马鱼 抗除草剂 吸附 原位杂交 五孔探针 pitx2 pcr morpholino fe电极 cuins2/zns核壳量子点
科研热词 荧光原位杂交 预后 表面增强拉曼光谱 自组装 慢性粒合基底 逆转录聚合酶链反应 表而增强拉曼光谱 衍生9号染色体 脂蛋白酯酶 脂蛋白脂酶 胸苷激酶 肝细胞癌 肝癌 耦合作用 细胞遗传学 细胞株 细胞凋亡 纳米金 磁性 白血病,淋巴细胞,慢性,b细胞 白血病,淋巴细胞,慢性 白血病 电磁场 淋巴细胞 横向迁移 模板 核壳纳米粒子 慢性 异质结 多发性骨髓瘤 基因芯片 原发性肝癌 化学发光 分区流化床 凋亡 免疫表型 光学性质 候选基因 传热系数 传热 survivin sodd scn1q染色体异常 13q14缺失
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35
染色体病的分子生物学检验
3. 能够进行扩增 第二种情况： 目标序列甲基化 连接 +不酶切 能够扩增
2、RT-MLPA
由mRNA逆转率为cDNA，以cDNA为靶序列进行 MLPA，可以检测靶基因的表达水平
3、Array-MLPA
将MLPA和芯片技术结合起来称为Array-MLPA, 可以增加MLPA的检测能力，以微阵列和芯片代 替毛细管电泳
一、荧光原位杂交技术
分子杂交（molecular hybridization）
反应介质
液相杂交 固相杂交
使探针进入细胞或组织内与待测 核酸进行特异性结合形成杂交从 而对待测核酸进行细胞内定位
原位杂交
印迹杂交
制备待测核酸样本，分离/变性/转移/固化DNA片段预杂交
制备携带标记的核酸探针
杂交
一、荧光原位杂交技术
微阵列比较基因组杂交技术 (array comparative genomic
hybridization, aCGH)
aCGH技术图示：正常对照样品和患者样品基因组DNA用两种不同的荧光染料进行标记（正常样 品用Cy3标记呈现绿色，患者样品用Cy5标记呈现红色）。绿色峰（Cy3）表明红色信号缺失， 与对照样品相比患者DNA样品发生缺失。相反如果Cy5信号增强显示为红色峰（红色箭头），表 明患者DNA样品特定基因组区域发生获得。aCGH芯片能够定位DNA拷贝数量变化在基因组的位置 。
酶影响） RNA探针 （无互补连杂交，杂交效率高） 寡核苷酸探针 （一般较短）
探针的标记方法（第四章核酸杂交技术）
1、缺口翻译法 2、随机引物法 3、PCR法 4、体外转录法
（二）FISH的优缺点
1、优点：安全，稳定，周期短，定位准确， 可同时检测多个靶序列，直观可靠
染色体异常与肺癌的关系
星丛匿堂壁墅丕笙坌盟！塑ｉ堡筮堑鲞擅型坠垡垦塑垄！璺墅里！竺！曼！坚鲤墅ｉ！』！！：垫！！！∑！！：堑：璺！旦些染色体异常与肺癌的关系戈霞晖张锦肺癌发生的机制目前尚未阐明，研究表明肺癌是多基因异常的疾病，涉及癌基因的激活、抑癌基因的失活及染色体的异常等方面。
资料表明染色体的异常与肺癌的发生、发展、转移密切相关，本文就近年来肺癌中染色体异常的研究进展做一综述。
１染色体异常与肺癌的关系染色体异常包括染色体数目和结构的改变。
染色体数目的改变表现为整条染色体的丢失或获得，即非整倍体。
染色体结构的改变较为复杂，细胞水平上有染色体重复、缺失、倒位、易位等，表现在分子水平上如杂合性缺失（１０ｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ），即一个位点上两个多态性的等位基因中一个出现突变或缺失，杂合性缺失在肺癌的发生、发展中很常见。
徐道觉等人先后对多种肿瘤细胞的染色体进行研究，发现肿瘤细胞染色体数目变化范围较大，从几条至几百条不等，肺癌胸水染色体数目可多达上千条。
Ｌｅｒｅｂｏｕｒｓ等人用流式细胞仪检测７７例非小细胞肺癌时，发现６２％的肿瘤细胞为高倍体。
国内外大量资料证实肺癌存在染色体数目异常。
肺癌染色体结构的改变却更为复杂，本文重点阐述肺癌染色体结构的异常及其应用。
１．１不同组织类型肺癌其染色体异常表现各异在临床中发现ＳＣＬＣ转移早、预后差，而鳞癌与吸烟有一定的关系，腺癌多发生在女性。
以上不同组织类型的肺癌所表现出不同的临床特点必由其各自的遗传基础所决定即不同组织类型的肺癌其染色体异常的表现也应不同。
过去用细胞水平的研究方法（如核型分析法）对肺癌的研究结果提示：在小细胞肺癌中，１ｐ、３ｐ、５ｑ、１７ｐ染色体区域存在部分缺失；ＮＳＣＬＣ中３ｐ、６ｑ、８ｐ、９ｐ、９ｑ、１３ｑ、１７ｐ、１８ｑ、１９ｐ、２１ｑ、２２ｑ区域有高频染色体部分缺失。
随着分子水平研究方法的应用如ＬＯＨ分析．发现细胞水平分析低估了肺癌染色体变化范围及程度。
医学遗传学重点
医学遗传学一、概念1．母系遗传人类受精卵的线粒体几乎全部来自卵母细胞，即来自母系，精子很少提供线粒体给受精卵。
线粒体的这种传递方式为母系遗传。
2．Ph染色体（费城染色体）大部分CML（慢性粒细胞白血病）病人都发生特异的染色体易位t（9;22）（q34;q11），9q34→qter和22q11→qter相互易位产生9q＋和22q－两条易位染色体，22q-就是CML的标记染色体（第22号染色体长臂缺失而形成的畸变染色体，其断裂段易位于9号染色体长臂末端，有CML早期诊断价值），因首先由美国费城研究小组发现、鉴别，故称为费城染色体，简称Ph染色体。
3．HLA单倍型一条6号染色体上HLA的基因组成。
4．转位因子在人的基因组中，存在多种可转移的DNA成分，被称为转位因子。
5．RFLP（限制性片段长度多态性）根据人群中DNA存在的多态性，用同一种限制性内切酶切割不同的DNA时，可出现不同大小的DNA片段为RFLP。
6．癌家族在一个家系中，恶性肿瘤的发病率很高，且发病年龄都较早，但肿瘤发生的部位并不局限于同一种组织或器官，在家族中肿瘤呈常染色体显性遗传，这样的家系称为癌家族。
7．动态突变（一种串联重复序列的重复次数在一代一代传递过程中出现明显的增加。
）动态突变是导致遗传病的一种新的突变类型，它主要表现为突变速率与重复顺序的拷贝数有关，突变体与其长辈的突变速率不同，拷贝数随着世代传递而不断增加。
8．遗传背景两个基因组中除决定某一性状的一对等位基因（主基因）以外的所有其他基因，对主基因的表达起修饰作用。
9．遗传早现与亲代印迹（强直性肌营养不良（AD），Huntington舞蹈病，脊髓小脑性共济失调，多发性神经纤维瘤病Ⅱ型）A．遗传早现：有些遗传病在传递过程中，有发病年龄逐代超前，病情逐渐加重的现象。
B．亲代印迹（遗传印迹）：指来自双亲的基因存在功能上的差异，因而子女来自父方或母方的基因表达可以不同。
10．基因与基因组A．基因：指储存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及基因表达所必需的全部核苷酸序列。
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染色体22q11区域的基因组病
染色体22q11区域的基因组病
赵欣荣1 Weimin Bi2 Cheung Sau W2
【期刊名称】中国循证儿科杂志
【年(卷),期】2015(010)005
【总页数】5
·综述·
基因组病是指由于人类基因组DNA的异常重排而引起临床表型的
一类疾病[1]。人类的22号染色体是一个端着丝粒染色体，多个基因组
病发生于22q11染色体区域。该区域富含具有高度同源性，导致基因
组不稳定的低拷贝重复序列(low-copy repeats, LCRs)，又称为片段重
复(segmental duplications)。其中的8个LCRs是学者们关注的热点,
也是研究较为详细的序列。由此，形成了2套命名体系，LCR22-A至
LCR22-H或LCR22-2至LCR22-8等片段序列(图1)[2,3]。在基因组不
同位置出现的LCRs配对并发生序列的交换，即非等位同源重组
(nonallelic homologous recombination, NAHR)，导致位于LCRs之
间的序列重排，包括缺失、重复和倒位[4,5]。LCRs导致22q11区域
不稳定，容易发生重排。大量22q11区域的不同大小的再发性重组已
被报道，包括常见的3 Mb 22q11.2缺失、重复及芯片检测到的微小
重排。位于22q11区域的致病基因由于重排导致剂量不平衡，引起临
床表型，即基因组病。不断更新的文献报道详细地阐述了多个22q11
区域基因组病的分子机制和临床表型。
本文主要总结近年来关于22q11区域基因组病遗传基础的研究报
道，并着重阐述引起这些疾病的遗传来源，为临床能够发现和诊断该
系列综合征提供信息。
1 22q11.2缺失综合征