(整理)小鼠口服氯化钠的急性毒性实验.
小鼠口服氯化钠的急性毒性实验
丁 * *
（***学院*****专业******班2*************）
摘要：研究氯化钠溶液对小鼠的急性毒性，学习动物实验的基本实验方法，掌握经口灌胃技术，学习半数致死剂量（LD50）的计算及毒性判定。选用SPF 昆明小鼠，经口灌胃两次给药,统计死亡率，用改良寇氏法计算半数致死量(LD50)，并观察毒性作用。结果氯化钠对小鼠的口服LD50为8.48g/kg，95%可信区间为8.32g/kg～8.64g/kg。表明氯化钠属于低毒性的物品，在日常生活中可正常适量食用。
关键词：氯化钠；SPF昆明小鼠；口服；急性毒性；半数致死;LD50
作为烹饪调料的主要材料之一，氯化钠在生活中的用途无处不在，我们的生活已经和氯化钠紧紧联系在了一起。这就造成了人们普遍以为氯化钠是“无毒”的。这其实是一个错误的认识，氯化钠其实并不是大家所认为的“无毒”。为了探究氯化钠急性毒性的级别，本实验采用SPF昆明小鼠作为实验对象，进行口服氯化钠的急性毒性实验，根据实验结果，采用改良寇氏法计算半数致死量，得出氯化钠的毒性等级。
1 材料与方法
1.1 实验动物
小鼠 SPF昆明小鼠37只，小鼠体重要保证组内差异<20%（20～24g），雌雄各半，保证雌性未产、无孕。饲养前需要对小鼠的饲养房、笼具、饮水瓶等进行消毒。小鼠饲养在方形透明鼠笼中，保证充足的饮水和食物。实验前饲养2～3天，以适应实验环境，并观察其正常生长活动和健康状况。给药前禁食处理--空腹过夜（不禁水）。
1.2药物
氯化钠。查阅相关资料文献后，我们得知氯化钠的LD0为200mg/kg，LD50为4000mg/kg，因此我们设定LD100为8000mg/kg，分为5个实验组，组距为：i ＝(lg8000-lg200)/4=(3.9-2.3)/4=0.4，r=（n-1）√（LD100/LD0）=4√（8000/200）=2.51，因此得到各组剂量设计见表1：
表1 各组剂量分配结果
配制氯化钠溶液时，我们考虑到小鼠的灌胃容量约为0.4ml/只，需要配制的溶液浓度＝最高剂量/灌胃容量，实际需要溶液的量为：V＝最低体积＋耗量＝动物数×灌胃量＋耗量，由此可得各组的溶液配制情况见表2：
表2 各组溶液配置情况
1.3方法
1.3.1分组和标记
将小鼠按照随机分组的原则分成6组，每组雌雄各半，经过对染色法、耳缘孔口法、烙印法、挂牌法等方法的比较后，我们决定采用染色法对各组小鼠进行标记。染色法就是用不同颜色的染料涂擦于动物不同部位来表示不同号码。染色剂采用甲基紫酒精饱和液，按左前肢、左肋、左后肢、颈部、背中、尾根、右前肢、右肋、右后肢的顺序编号为1～9号，并对应于各小组成员。
1.3.2 灌服和观察
我们实验组Ⅴ组由于需灌胃量大，在小鼠胃的一次性容量之外，所以分两次灌胃，两次灌胃间隔半小时。灌胃前禁食8h，但不限制饮水。小鼠灌胃的方法：
（1）左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其身体垂直，即使上消化道成一直线；（2）右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口角插入，避牙齿、舌头，贴咽后壁缓缓滑入食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深入胃部，一般进针深度 2.5～3cm；（3）将盐水轻轻注入胃中。（4）如遇动物挣扎，应停止或将针拔出，千万不能强行插入，以免刺伤食管或内脏。
灌胃后及时观察小鼠的临床症状，是否有异常行为、异常生理变化。之后的7天每天都要观察小鼠的活动情况。
1.3.3 体重、采食和饮水
每天用电子称称取每只小鼠的体重、食料重量及饮水重量，记录小鼠每日体重、采食量及饮水量。记录数据见表3：
表3 实验组第Ⅴ组小鼠体重、饮水量及采食量数据记录表
记录时间
小鼠体重（g）
饮水量
（g）
采食量
（g）1 2 3 4 5 6 7
7日晚23 20 22.5 18.5 21.5 19 19 0 0 8日晚X 18 21 16.5 19.5 17.5 17 29 21 9日早X 20 19 17 21.5 17 17 16 7
9日晚X 20 X
16.5 20 18 17 10
6.5
10日晚
X 21 X 16.5
21 19 X
17.5
17.5
11日晚
X
23.5 X 18.5 22.5 21 X 24.5 19.5
12日晚X 24.5 X 21 23.5 22 X 24.5 16.5 13日晚X 26 X 21.5 24.5 24 X 27 16 14日晚X 28 X 23.5 26 25 X 30 14.5 注：X表示小鼠已死亡。
1.3.4 解剖
对死亡小鼠或者直到实验最后一天依然存活的小鼠进行解剖。解剖方法：（1）将小鼠腹部朝上平放在解剖盘里，用镊子在小鼠的后肢之间处夹起毛皮，用解剖剪剪开一个口，从剪口处用双手分别同时向首尾方向撕开小鼠毛皮；（2）用镊子在小鼠的后肢之间处夹起内层皮，用解剖剪从中间分别向两侧斜上方剪开，用双手将小鼠内层皮撕开，即可看到小鼠腹腔；（3）剪开小鼠肋骨即可看到小鼠胸腔。
解剖后观察小鼠的各个器官，尤其是药物作用的靶器官，看是否有异常，并分析小鼠中毒特点及死亡原因。
2 结果
2.1 临床症状
我的实验组第Ⅴ组的4号小鼠经第一次灌胃后全身毛稍微炸起，出现痉挛现象。第二次灌胃后迅速出现全身毛炸起，痉挛，抽搐麻痹，运动失调，转圈的情况，第二天除了毛有炸起，稍微有痉挛现象外，其它情况消失。第三天后只有毛炸起现象，之后逐渐消失。实验过程中小鼠的眼睛，口鼻，肛门，阴茎等并没有异常现象。
异常现象见下面配图：
灌胃时小鼠挣扎剧烈
小鼠出现炸毛现象（第一次灌胃，稍微炸起）
小鼠出现痉挛现象
小鼠运动失调，右后爪出现无力现象
小鼠出现转圈现象（第二次灌胃后，毛炸起明显）
2.2 剖检病理变化
对我的小鼠进行剖检，口鼻，肛门，阴茎附近并没有异常现象，肝脏、肺、心脏、胃、肾脏并没有明显的眼观病理变化。
精品文档
2.3 LD50计算
LD50的计算公式为：
校正公式为：
标准误差为：
LD50 的95%可信限 式中：
i--组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 Xm —最大剂量对数
P —各剂量组死亡率(死亡率均用小数表示) Pm —最高死亡率
q —各剂量组存活率，q=1-p Pn —最低死亡率
∑p—各剂量组死亡率之和 n —各组动物数
Sx50—logLD50的标准误
本次实验中，对照组和实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组没有小鼠死亡，实验第Ⅴ组7只小鼠死亡3只。由上面各式可计算出：LD50=8.48g/kg ；Sx50=0.0808；LD50的95%可信区间为：8.32～8.64g/kg 。 3 讨论
将计算结果和查阅文献资料所得的数据进行对比，显然偏差较大。从我们组实验操作过程、小鼠存活情况以及剖检分析中，能得出产生偏差的原因有以下几个方面：（1）给小鼠的灌胃量不够。由于我们组氯化钠溶液浓度为最高，在给小鼠灌胃过程中，小鼠不肯饮下，甚至吐出来，造成了一部分溶液并没有灌入。（2）给小鼠灌胃后给小鼠供水较早，以至于小鼠饮水后冲淡了灌胃溶液，使毒性降低。
从实验结果数据来看，这次实验结果并没有达到预期结果，但是通过本次实验我们掌握了动物实验的基本实验方法，掌握了经口灌胃技术，掌握了半数致死剂量（LD50）的计算及毒性判定。 4 结论
由实验结果数据计算出的氯化钠的LD50为8.48g/kg ，95%可信区间为8.32～8.64g/kg ，在急性毒性分级标准中属低毒。对于人来说，在日常生活中可以正常适量食用。
= log-1(log LD50±1.96×Sx50)
色胺酮对小鼠急性和亚急性毒性实验
2012年11月第9卷第32期 ·论著· CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报色胺酮（TRYP ）为吲哚喹啉类生物碱，其化学名称为吲哚[2，1-b]喹唑啉-6，12-二酮（6，12-dihydro-6，12-dioxoindo lo-[2，1-b]-quinazoline ），主要存在于马蓝（Strobilanthes cusia ）、蓼蓝（Polygonum tinetorium Lour ）、菘蓝（Isatis tinctoria L.）等产蓝植物中，现也可通过微生物发酵或人工合成得到[1]。近年来药理研究表明其具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗疟和杀虫作用，特别是可以通过多种途径对肿瘤细胞增殖具有抑制作用[1-9]。经文献报道和本课题组研究发现，色胺酮对K562白血病细胞有突出的抑制和诱导凋亡的作用[2-3]。为了评价其成药的安全性，为进一步制剂的剂量设计提供参考，笔者对其极性毒性进行了研究，现将结果报道如下：1仪器与试药 ABX MICROS 60三分类细胞计数仪（西京医院儿科）；COBAS INTEGRA 400Plus 全自动生化分析仪；分析天平（德国赛多利斯）。 色胺酮（TRPY ）粉末由西北大学生命科学院提供，经HPLC 法检测其含量高于95%，其他试剂均为分析纯，临用前配制成混悬液用以灌胃。 昆明种小鼠，雄性，体重（20±2）g ，使用许可证号：SCXK （军）字第2007-007号。2方法与结果2.1急性毒性实验 取适应性饲养3d 后的小鼠10只，禁食不禁水12h ，每组于 1d 内按50mg/kg 剂量灌胃给药3次，每8小时给药1次。给药 后仔细观察小鼠的外观、行为、活动、精神、食欲、皮毛、呼吸和鼻、眼、口及大小便等。结果连续观察3d ，体重略有减轻，但未见死亡，其他未见异常，无法测出半数致死量（LD 50）。对小鼠进行大体解剖，发现胃肠道有明显的黄色粉末状物体，推测是未被完全吸收的色胺酮粉末，其他未见明显异常。2.2亚急性毒性实验 2.2.1日常行为观察取小鼠40只，随即分为对照组和高、中、低三个剂量组。根据药代动力学研究[10]定其剂量分别为：高剂量组80mg/kg 、中剂量组50mg/kg 、低剂量组25mg/kg ，对照组给同体积生理盐水，连续给药30d 。每日观察动物的精神、活动、毛色状态、记录摄食量及体重变化。见表1、2。结果表明各剂量组体重和进食量与对照组比较差异均无统计学意义（P >0.05）。 2.2.2血常规检查末次给药后2h 眼球取血，进行血常规和生化指标测定，即红细胞（RBC ）、白细胞（WBC ）计数、血红蛋白（HGB ）、平均血红蛋白（MCH ）等。见表3。 2.2.3脏器系数检测末次给药2h 后摘眼球取血，取血后解剖大鼠，观察各组织脏器均无明显异常，摘取心、肝、脾、肺、肾和脑等组织，用生理盐水清洗，滤纸吸干多余水分后称重，按以下公式计算脏器系数，脏器系数（‰）=脏器重量（g ）体重（g ）×100‰， 结果见表4。用SPLM 3.0版软件进行统计学检验和方差分析显示，其结果差异无统计学意义（P >0.05）。3讨论 白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤。当前，白血病的临床治疗仍采用传统的大剂量联合化疗，但此 色胺酮对小鼠急性和亚急性毒性实验研究 李捷缪珊王四旺王剑波谢艳华 第四军医大学天然药物学教研室，陕西西安 710032 [摘要]目的观察色胺酮灌胃后小鼠产生的急性毒性反应，以评价色胺酮原料药的安全性。方法将色胺酮设定3个剂量组，灌胃给药，小鼠未出现死亡，故以高、中、低三个给药剂量进行亚急性毒性研究。连续喂养观察体态行为，30d 后摘眼球取血作血常规检测。结果试验小鼠的行为未出现异常，无小鼠死亡。各组小鼠的体重及其增重、进食量、食物利用率与对照组比较差异均无统计学意义（均P >0.05）；各计量组血常规指标与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论色胺酮具有较好的安全性。[关键词]色胺酮；安全性；急性毒性试验；小鼠[中图分类号]R282.71[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）11（b ）-0013-02 Acute and sub-acute toxicity test of TRYP in mice LI Jie MIAO Shan WANG Siwang WANG Jianbo XIE Yanhua Department of Nature Medicine,the Fourth Military Medical University,Shaanxi Province,Xi ′an 710032,China [Abstract]Objective To evaluate the safety of TRYP by observing the acute toxic reaction of mice after oral administra -tion.Methods The mice were oral administrated with TRPY at three different dosages.No death of mice was found.So three doses of the high,middle and low for subacute toxicity study were given.After feeding for 30days,the blood hema -tology was detected.Results Dreg-treated mice had no behavior anomaly and death in the observation period.The differ -ence of body weight,weight increased,food in-take and utilization ratio in each group was not significant (P >0.05).The hematology in each dose group had no significant difference compared with control group (P >0.05),either .Conclusion TRYP is relatively safe. [Key words]TRYP;Safety;Acute toxicity;Mice [基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（项目编号：2011ZX09401-308）。 [作者简介]李捷（1983-），女，硕士研究生，助教；研究方向：中药药理学。[通讯作者]王四旺（1958-），男，教授，博士生导师；研究方向：中药新药开发。 13
小鼠的急性毒性试验
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精品文档 . 1141 异常毒性检查法 异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引入或其他 原因所致的毒性。 本法系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。 供试品溶液的制备按品种项下规定的浓度制成供试品溶液。临用前，供试品溶液应平衡至室温。 试验用动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。做过本实验的动物不得重复使用。 非生物制品试验 除另有规定外，取小鼠5只，体重18～22g，每只小鼠分别静脉给予供试品溶液0.5ml。应在4～5秒内匀速注射完毕。规定缓慢注射的品种可延长至30秒。除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。 生物制品试验 除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验，试验中应设同批动物空白对照，观察期内，动物全部健存，且无异常反应，到期时每只动物体重应增加，则判定试验成立。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。 ⑴小鼠试验法除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称体重，应为18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5ml，观察7天。观察期内，小鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。 ⑵豚鼠试验法除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只小鼠称体重，应为250～350g。每只豚鼠腹腔注射供试品溶液5.0ml，观察7天。观察期内，豚鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只豚鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，可用4只豚鼠复试1次，判定标准同前。
急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。 一、啮齿类动物单次给药的毒性试验 （一）试验条件 1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。 2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。 3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。 （二）试验方法： 由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。 1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。 2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。 3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应，那就用下一个挡次的剂量进行预试，如该动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物，雌雄各半。根据预试的结果，由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量；如预试结果表明，50mg/kg引起死亡，则降低一个剂量档次试验。
小鼠急毒实验标准操作LD50 SOP
标准操作规程(Standard Operating Procedure) 小鼠LD50毒性试验 编号： 制定日期： 起草人： 审核人：
BALB/c 小鼠LD50毒性试验 1.实验目的 衡量化合物的毒性，寻找安全剂量范围，为进一步体内活性评价提供数据支持。 2.实验原理 经口一次性给予或24 h 内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD50来表示。 3.实验内容 (1) 探测化合物的LD50剂量范围。 (2) 确定组数并计算各组剂量。 (3)正式实验：给不同组的小鼠灌胃不同剂量的药物，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。 (4)记录实验结果，并计算LD50。 4.实验材料 试剂：化合物，生理盐水。 材料：电子天平，注射器，灌胃针。 实验动物：动物品系：BALB/c小鼠；性别：雌性；级别：SPF级；年龄：7周龄，实验周期内的动物年龄约为8-10周龄；体重，20±2g，实验前禁食12h。 5.实验方法与步骤 1．预实验：取小鼠20只，以3只为一组，分成5组。单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选取一组剂量，进行化合物溶液灌胃给药。 给药前禁食不禁水12小时，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围。
2．正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1:0.7或1:0.8）和生理盐水溶媒对照组，各组动物数为10只，分别用marker笔标记。 动物的体重和性别随机分配，完成动物分组和剂量计算后灌胃给药最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。 6.观察与记录 首日给药后4小时内每小时密切观察小鼠活动状态和死亡情况，每天对各组小鼠进行称重，统计死亡数量。连续观察1-2周。 7.LD50的计算 1.改良寇氏法计算[2]
实验二 经口急性毒性试验
毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目得 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LＤ５０得试验设计原则 3、小鼠得经口灌胃技术 二、试剂与材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年IＣR小鼠,体重18g～22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ｍｌ)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物得选择与性别鉴定 选择健康得雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号与随机分组 选择体重在1８-22 g得小鼠,采用随机分组得方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色得苦味酸饱与液标号１ ~9,10号小鼠不标记、 3、受试化学物溶液得配制 (1)确定灌胃量:0、１mｌ/10ｇ (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突得距离。 5、毒性体征得观察与LＤ５０计算 (１)毒性体征得观察: 染毒后注意观察小鼠中毒得发生、发展过程及死亡数与死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为３0 min （2）ＬD５０得计算: ａ、实验各组剂量得确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: ｄ为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD０依次加d,取反对数,即可得出各组剂量。 b、LD5０得计算(见附件):
动物急性毒性试验-小鼠
动物急性毒性试验(Acute toxicity test,Single dose toxicity test),研究动物一次或24小时内多次给予受试物后,一定时间内所产生的毒性反应.拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1].急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段,对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义.急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值,并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息 [实验目的] 通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性 毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。 1、计算敌百虫半数致死量。 [实验材料] 小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。（计算机仿真实验） [实验方法] 1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。 2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。 3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。通常药后要观察3-7天。根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。 [实验结果] 在给药后1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：
实验二 经口急性毒性试验
毒理学实验二经口急性毒性试验 1、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物： （1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g （2）样品来源：首都医科大学实验动物部 2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。 3、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。） 肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 （1）确定灌胃量：0.1ml/10g （2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积 （3）药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 （1）毒性体征的观察：
染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min （2） LD50的计算： a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为： d为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d，取反对数，即可得出各组剂量。 b、LD50的计算（见附件）： C、求半数致死量的95%可信区间 4、实验过程 1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A组和B组)，分别在不同实验室。每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。 集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。 各小组活动： 每小组1人（共4人），进行动物标记。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行体重记录。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行灌胃。（1-10号） 每小组1人（共4人），根据体重吸取受试物（0.1ml/10g）
实验二-经口急性毒性试验
毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物： （1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g （2）样品来源：首都医科大学实验动物部 2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。 三、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。） 肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 （1）确定灌胃量：0.1ml/10g （2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积 （3）药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 （1）毒性体征的观察： 染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min
组数 ：各组死亡率：数相邻两组对数剂量之差：最大剂量的对数 P d :X )P P (d 21X lg 150i i k i i k LD ∑++-=)lg 96.1(lg lg 95%:1)P 1(P d lg 50501-50LD S LD ni ni LD S i i ±--=∑可信区间：实验动物数。标准误公式： （2）LD50的计算： a 、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为： d 为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d ，取反对数，即可得出各组剂量。 b 、LD50的计算（见附件）： C 、求半数致死量的95%可信区间 四、实验过程 1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A 组和B 组)，分别在不同实验室。每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。 集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。 1 lg lg d 0100--=组数LD LD
小鼠急性毒性实验及文献资料讲解学习
小鼠急性毒性实验及 文献资料
苏贝止咳颗粒小鼠急性毒性实验 【摘要】 苏贝止咳颗粒组方来自民间验方，该方在临床使用多年，疗效确切，安全可靠。具有散寒宣肺，祛痰、止咳、平喘之功，用于急性气管、支气管炎（风寒袭肺证）所致的咳嗽、咳痰稀薄、咽痒、气急等症状。根据该方的功能主治、各味药材的理化性质和验方汤剂的临床应用实践，我们对其进行了止咳、祛痰、抗炎、解热、抗病毒、抗菌等主要药效学实验和急性毒性实验研究。 苏贝止咳颗粒经国家食品药品监督管理总局药品审评中心技术审评，发补充资料通知（药审补字[2014]第1030号），其中药理毒理方面要求为：本品进行的急毒试验未提供剖检结果，建议补充。如果没有观察该方面的内容，建议补充规范的急性毒性试验。针对该问题，该项目研究在前期的申报材料中的确没有详述相关内容，因此按照中心老师的发文内容和相关规定对该品种的急性毒性实验重新进行规范性实验，对实验所有动物进行大体解剖、并对相关重要脏器进行病理形态学观察。 实验结果显示，苏贝止咳浸膏小鼠口服急性毒性实验测不出LD50，从而进行小鼠ig最大给药量实验，单次最大给药剂量164g生药/kg，单次最大给药容积为0.8mL/20g，24h内给药3次，连续观察13天，所观察的各项指标均正常，未见动物死亡，实验观察期结束时对所有动物大体解剖和相关重要脏器进行病理形态学观察，未见与药物相关性病变。 因此苏贝止咳浸膏小鼠一日口服最大给药剂量为492g生药/kg，相当于临床拟用量的424.1倍。表明苏贝止咳浸膏急性毒性较低，提示苏贝止咳浸膏在临床上急性用药具有一定的安全性。 【实验目的】观察苏贝止咳浸膏的小鼠急性毒性。 【供试品】 1.名称：苏贝止咳浸膏（本实验采用苏贝止咳颗粒为浸膏，实验代号：SB-补1），含量规格及配置：4.1g生药/每毫升浸膏，人用临床拟用剂量81g生药 /d。采用小鼠灌胃给药，以最大给药剂量164g生药/kg，最大给药容积为
什么是急性毒性试验
什么是急性毒性试验 急性毒性试验，其实就是一种毒性研究，当然对我们来讲对这种常识问题，很多人都不会去注重，因为毕竟不是作为学术研究的人，但是对这些常识有一些基本的常识了解，其实对我们的生活，也可以带来一定的帮助功效，下面就为大家具体介绍一下，什么是急性毒性试验。 急性毒性试验是指一次或24小时每多次染毒的试验，是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，以提供受试物质的急性毒性资料，确定毒作用方式、中毒反应，并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。试验概述及染毒方法 概念和实验目的 急性毒性是指机体(人或实验动物)一次(或24小时内多次)接触外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至引起死亡。
但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的 程度，可因所接触的化合物的质与量不同而异。有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内，就可发生中毒症状，甚至死亡。而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡，即迟发死亡。此外，实验动物接触化合物的方式或途径不同，“一次”的 含义也有所不同。凡经口接触和各种方式的注射接触，“一次” 是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续 地接触受试化合物的过程，所以“一次”含有时间因素。 以上就是关于急性毒性试验的内容介绍，希望通过这些介绍，每个人对这些常识，都有一定的认识和了解，虽然说很多时候在生活当中，我们运用不到，但是毕竟对这种常识有一定的了解，对自己身体的保护，也是比较有利的。
急性毒性试验[1]
实验一急性毒性试验(Acute Cytotoxicity Test) 一、实验目的： 了解生物材料急性毒性的含义，掌握急性毒性试验的基本方法。 二、实验原理： 医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的，并以半数致死量（median lethal dose, LD50）来衡量药物急性毒性的大小。所谓LD50是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量，由于LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点，而且有易测、准确和重复性好的优点，以此作为药物使用的安全指标。但对于生物材料而言，它与药物在体内的反应机理不同，大多数生物材料不能计算LD50，所以在试验过程中，通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在24、48和72h的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标，判定某种生物材料的急性毒性作用。 三、实验对象：小鼠 四、实验器材和药品： 聚甲基丙烯酸羟乙酯（PHEMA），蒸馏水，生理盐水（0.9％），注射器（1ml），量筒（10ml），小烧杯（50、100ml），高压消毒器。 五、实验步骤： 1．浸提液制备： 按评价标准裁剪试样，选择适当浸提温度制备浸提液。 2．将10只体重在17～23g间的健康、未做过其他实验的小鼠随机分为实验组和对照组，每组5只。 3．将浸提液按每公斤小鼠体重注射50ml于实验组小鼠尾静脉（50ml/kg），用生理盐水按同样方法作空白对照。 4．记录试样表面积和使用浸提液的容量；记录注射后24h、48h、72h两组小鼠的体重，观察其各种生物学反应情况。 六、评价方法：
2．结果判断标准： 2．1 在72h观察期内，注射材料浸提液的动物反应不大于对照组动物，则认为该材料符合急性毒性试验要求。 2．2在72h观察期内，注射材料浸提液动物中有2只以上出现轻度毒性症状或仅1只动物出现明显毒性症状死亡，或实验组5只动物的体重均下降，即使无其他中毒症状都要进行重复试验。 2．3 重复试验的动物数量应加倍，即每组需10只小鼠。浸提液应该重新制备。重复试验若符合2．1 项要求，则认为该材料合格。 2．4 如实验组动物有2只以上发生死亡或3只以上出现明显毒性症状或动物普遍出现进行性体重下降，则不需要重复试验，可认为该材料不符合急性毒性试验要求。 附：小鼠静脉注射方法 小鼠的尾部有三条静脉，一般采用两侧的静脉。把动物固定在暴露尾部的固定器内（可用烧杯、铁丝罩或粗试管邓物代替固定器）。拔去尾部静脉走向的毛，置尾巴于40～500C 温水中浸泡几分钟，或用75％乙醇棉球反复擦抹，使尾部血管扩张。行尾部注射时，尽量采用与尾部平行的角度进针，抽吸法不能验证是否穿刺成功，开始注药时应尽量缓慢，仔细观察，如果有白色皮丘出现，说明未刺入血管，应重新向尾部方向移动针头，再次穿刺，直至注射时无皮丘出现，才能正式注射药物，有时在注射药物的同时可见静脉血被进去的药物向前推进。 实验二致热源试验(hypersusceptibility test) 一、实验目的： 掌握致热源实验的基本方法。 二、实验原理： 致热源试验是通过被测材料或其浸提液注入实验动物体内，若浸提液存在热源物质，作用于单核细胞、巨噬细胞等靶细胞后，促使其产生内出性热源，作用于丘脑体温调节中枢，使动物体温上升，因此，观察动物的体温变化可用来判断该材料或其浸提液中所含热源量是否符合人体的要求。 三、实验对象：兔 四、实验器材和药品： 硅橡胶、蒸馏水、生理盐水（0.9℅）、注射器（50ml）、烧杯(150ml)、量筒（100ml）、高压消毒器、体温计（肛测）。 五、实验步骤： 1．浸提液制备： 1.1将所有与浸提液接触的容器、量器等玻璃器皿均应先置于干燥箱内250℃加热30min，或180℃加热2h去除热原物质。 1.2 浸提液所用灭菌0.9℅生理盐水应是热原检查合格者，试样浸提前应用同一批号灭
急性毒性试验
急性毒性试验 试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计 提供参考信息等。 一、啮齿类动物单次给药的毒性试验 （一）试验条件 1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。 2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控 制情况。 3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。 （二）试验方法： 由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急 性毒性试验。 1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。 2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产
生死亡的剂量。 3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动 物，观察动物的反应。 4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选择5、50、500和2000mg/kg四个 固定剂量。 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应，那就用下一个挡次的剂量进行预试，如该动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7 天仍然存在，尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物，雌雄各半。根据预试的结果，由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量；如预试结果表明，50mg/kg引起死亡，则降低一个剂量档次试验。 试验观察：给受试药物后至少应观察2周，根据毒性反应的具体特点可适当延长。对每只动物均应仔细观察和详细记录各种毒性反应出现和消失的时间。给受试药物当天至少应观察记录两次，以后可每天一次。观察记录的内容包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主及中枢神经系统行为表现等。动物死亡时间的记录要准确。给受试药物前、给受试药物后1周、动物死亡及试验结束时应称取动物的体重。所有动物包括死亡或处死的动物均应进行尸检，尸检异常的器官应作病理组织学检查。固定剂量试验法所获得的结果，参考下表标准进 行评价。 单次口服固定剂量试验法结果的评价
小鼠的苯急性吸入毒性试验的分析
小鼠的苯急性吸入毒性试验的分析 摘要： [目的]掌握毒理学动物实验的动物分组方法；了解急性毒性试验剂量组距的确定方法及各染毒剂量的计算；掌握寇式法计算急性毒性参数LD50的方法；学会对化学物进行急性毒性评价及分级。 [方法]随机选取昆明种的，健康的，初成年的，性成熟的，体重介于18至25g的小鼠雌雄各半共70只，按照随机区组法将小鼠分成6个实验组，1个对照组，每组雌雄各半共十只，然后按照公式确定每个组的染毒剂量，对照组不染毒，观察120min，记录不同染毒剂量下各时段小鼠的中毒反应，最后统一分析。 [结果] 苯具有急性毒性，中毒表现：兴奋症状、抑制症状（闭眼、侧卧），呼吸急促转衰弱，除低剂量组外每组都应该有小鼠死亡运用。改良寇氏法公式得㏒LC50=1.848，故LC50=70.47×103mg/l；s=0.0193(LD50的标准误)；LD50 95%CI（可信区间）=（70.45×103，70.50×103）mg/L。 [结论]：LC50为70.47×103mg/l，属于低毒毒物 关键词：苯；急性毒性；LD50；随机分组；改良寇式法 （一）材料与方法： 1.昆明种小鼠：雌雄各半，70只； 2.动物天平：2只； 3.染号液：饱和结晶紫（紫色）、饱和苦味酸（黄色）乙醇溶液； 4.静式染毒罐：60L 7个； 5.随机数字表 试验方法： 1.试验动物选择与处理：选择健康、初成年，性成熟的昆明种小白鼠70只（沈阳医学院实验中心提供），17~25g，雌雄各半，分别按性别称重，编号。预实验得出LD0与LD100，LD50的计算方法符合改进寇氏公式的条件，随机分组，分6个剂量组和一个NS组，每组10只。 ①编号方法：采用不同颜色标记法，即黄色代表个位，蓝色代表十位，以此类推，只是让出 11、22、33号…….，避免混淆。 ②分组方法：随机区组法，将两性别分别按体重从小到大排序，按每组动物数划分为n个区组（如每组10只动物，就划分为10个区组），每区组动物数与组数相等；然后每只动物选取一个随机数字，用组数n去除随机数字得余数，按余数将动物分到各组：0→A组；1→B 组；2→C组；3→D组；4→E组；5→F组；6→G组以此类推。 按上述原则线条不重复数字分组，遇重复数字分到其余各组。 2.确定染毒剂量：按照于是结果求出对数组距i=（）（组数）求出各组染毒剂量及加样量。 a=CL/d*1000*x 其中a为加苯量（ml）；C为染毒剂量（mg/L）；L染毒罐容积（L）；X为苯的纯度；d为苯的