鸡胚接种技术医学PPT
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鸡胚接种技术
实验动物的遗传学控制分类
近交系(inbred strain)：是指经过连续20代以上全 同胞或亲子交配培育的动物品系。特点有:基因型相 同，表现型一致；对外来刺激反应一致；实验结果重 复性好，可比性强。 封闭群(closed colony)：是指一个不从外界引入新 的血缘，非近亲交配方式繁殖一定代次的实验动物群 体。特点是群体遗传特异性相对稳定，个体间具有杂 合性，存在一定差异。 突变系(mutant strain)：是指由于遗传基因发生突 变而具有某些特殊性状的动物，如肥胖症小鼠、糖尿 病小鼠等。
羊膜
胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。
尿囊腔
位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。
卵黄囊
主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养。
卵白
外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养。
第二节 鸡胚的孵育和检查
受精鸡卵的供给
— 没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病
鸡胚培养法的缺点：
一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递 到鸡胚。 通常鸡胚含有白血病病毒。 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚， 鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。
第一节 鸡胚的结构与生理
第二章 鸡胚接种技术
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养 研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚 繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次体。
鸡胚培养法的优点：
鸡胚的组织分化程度低，可选择适当途 径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和 液体含大量病毒。 鸡胚是一整体，有神经血管的分布及脏 器的构造。 来源充足，操作简单，通常是无菌的， 对接种的病毒不产生抗体。
实验一 鸡胚接种28页PPT
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
实验一 鸡胚接种
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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鸡胚接种技术
气室
功能主要是呼吸和调节压力。
绒毛尿囊膜
壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官。
羊膜
胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。
尿囊腔
位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5 20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。
三、注意事项
防止污染：鸡胚为一活的有机体，因此 防止污染： 要严格无菌操作。 动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。 24小时内死亡应不计结果。 适宜的培养温度：
第四节
无菌试验
病毒的检测
— 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 — 方法: 方法:
第三节 鸡胚接种途径及方法
（一）羊膜腔接种
应用于从临床材料中分离流感病毒 应用于从临床材料中分离流感病毒等，病 临床材料中分离流感病毒等 毒感染后可收集羊水和尿囊液 毒感染后可收集羊水和尿囊液。 羊水和尿囊液。
接种步骤与方法
将10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视，标记气室及胚胎的位置。 10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视 标记气室及胚胎的位置。 日龄的鸡胚在检卵灯上照视， 消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm 6mm的长方 10mm× 消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm×6mm的长方 形裂痕，注意勿钻破壳膜。 形裂痕，注意勿钻破壳膜。 再次消毒钻孔区后，用灭菌的小镊子除去长方形卵壳和外层壳 再次消毒钻孔区后， 膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便 并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明， 观察胚胎的位置。 观察胚胎的位置。 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿， 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入 羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动， 羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入 O.1～0.2ml病毒液。 O.1～0.2ml病毒液。 病毒液 拔出针头，孔区消毒后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳 拔出针头， 的窗口封住， 33～35℃孵育48～72h，要保持鸡胚钝端朝上。 孵育48 的窗口封住，于33～35℃孵育48～72h，要保持鸡胚钝端朝上。
实验一 鸡胚接种25页PPT
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
实验一 鸡胚接种
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
பைடு நூலகம்
【医学实验】禽流感病毒的鸡胚培养法 PPT课件
4. 温度、反应时间、反应体系对血凝试验的结果影 响都很大。温度过高病毒毒力过强会出现溶血， 不利于判定。反应的时间不能太长，对照孔出现 沉淀就可以判定。
思考问题
加病毒液和红细胞悬液时为什么要反向加？ 血凝试验设置空白对照的意义？ 病毒悬液为什么采取倍比稀释而不是更高倍 数如十倍比稀释？
鸡胚原代细胞培养及流感病毒感染细胞的红细胞吸附
鸡胚的结构与生理
鸡胚由三个胚层发育而来，即外胚层，中胚 层和内胚层，它们构成了胚胎的组织与器官
鸡 胚培养的病毒接种
（一）活胚检查
1.血管 2.胎动 3.绒毛尿囊膜
（二）实验材料
鸡受精卵, 照蛋灯, 打孔器或剪刀, 蛋盘, 无菌注 射器和针头, 消毒酒精, 酒精灯, 石腊 病毒毒种用生理盐水稀释备用
1. 第1孔加入0.4ml尿囊液，第2孔加入0.1ml 尿囊液。
2. 吸取0.9ml生理盐水于血凝板第2孔，从第 3孔至第10孔每孔各加生理盐水0.4ml。
3. 反复吹打3～4次第2孔，从混匀的第2孔中 丢弃0.2ml，吸取0.4ml至第3孔混匀，再 吸0.4ml至第4孔，依次稀释到第9孔，第9 孔经稀释吹打后吸出0.4ml，
6）将烧杯中的细胞平均分配于5个25ml细胞瓶中， 补充1640培养基至3ml，置37 ℃培养
7）培养24小时后观察细胞的生长情况并描述细胞形 态。
原代细胞的培养与维持
1) 充分漂洗; 2) 起始的2天中尽量减少振荡; 3) 分离繁殖或测定病毒之用，细胞浓度可以加大，
尽量贴壁形成厚层； 4) 待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，此时的pH
（四）收获病毒
鸡胚为活的有机体，因此要严格无菌操作， 同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。