小鼠肠巨噬细胞使用说明
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
MH-S细胞说明书
北京索莱宝科技有限公司
第1页，共1页MH-S 细胞说明书
细胞名称：MH-S 小鼠肺泡巨噬细胞
生长特性：悬浮生长
细胞生长条件：
细胞接收后的操作流程与注意事项
1.细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2.收到细胞后离心收集细胞，用10ml 完全培养基重悬收集的细胞，放入新的细胞培养瓶/皿中培养过夜，根细胞密度及生长情况分瓶传代。
3.成簇生长：轻轻摇晃培养瓶，将团簇状细胞打散，继续培养或传代。
细胞常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）
1.悬浮细胞常规传代操作为半量换液，分瓶传代，即取出一半细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养；也可根据细胞密度分多瓶传代。
2.注意培养基PH 值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1.我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。
2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
培养基
90%RPMI-1640血清
10%FBS 温度
37℃空气条件
5%CO 2，95%AIR 冻存条件
培养基50%、血清40%、DMSO 10%。
巨噬细胞观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本形态和生物学特性。
2. 掌握巨噬细胞的分离和培养方法。
3. 观察巨噬细胞的吞噬功能，并分析其吞噬能力。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，属于单核吞噬细胞系统。
在机体免疫应答中，巨噬细胞起着重要的作用。
本实验通过分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞，观察其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫应答中的作用。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 实验试剂：无菌生理盐水、台盼蓝染液、鸡红细胞悬液、小牛血清、RPMI-1640培养基等3. 实验设备：解剖显微镜、手术器械、细胞培养箱、细胞培养皿、离心机、显微镜等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离和培养（1）无菌操作下，取小鼠腹腔液，加入等体积的生理盐水，混匀。
（2）将混合液以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（3）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（4）将细胞悬液接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察（1）将培养好的巨噬细胞悬液，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（2）加入台盼蓝染液，染色5 min。
（3）用生理盐水冲洗3次，弃上清液。
（4）加入鸡红细胞悬液，混匀。
（5）将细胞悬液置于细胞培养箱中培养30 min。
（6）取出细胞，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（7）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（8）将细胞悬液滴于载玻片上，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 巨噬细胞的分离和培养在实验过程中，成功分离和培养了小鼠腹腔巨噬细胞，细胞呈圆形或椭圆形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察在显微镜下观察，发现巨噬细胞对鸡红细胞具有吞噬作用。
部分巨噬细胞吞噬了鸡红细胞，细胞质内出现红色颗粒。
3. 吞噬能力分析通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，可以评估其吞噬能力。
实验结果显示，巨噬细胞的吞噬能力较强，吞噬鸡红细胞的数量较多。
巨噬细胞培养
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
3. 胶帽，离心管帽烘干后只能在2％氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。
4. 胶头可用75％酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培养瓶，培养板，冻存管：
6.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70％酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在紫外线下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2—3周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000—100000rad的r射线消毒塑料制品效果最好。
为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制：氯化钻(CoC12·6H2o)2g，30％盐酸10m1，蒸馏水88m1。
注意事项：
1.严格执行高压锅的操作规程：高压消毒时，先检查锅内是否有蒸馏水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压消毒效果。检查安全阀是否通畅，以防高压时爆炸。
1.小鼠颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡3分钟，取出小鼠，置于无菌纸上，腹面朝上；
2.用镊子提起小鼠下腹部皮肤，剪开一小口，撕开皮肤，完全暴露腹膜；
巨噬细胞吞噬实验沉淀实验实验报告
巨噬细胞吞噬实验沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
【分析】抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2)实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验一实验目的1(掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2(熟悉细胞吞噬作用的基本过程二基本原理细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。
巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成;免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
三实验用品1(器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2(试剂:0.9%生理盐水;可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。
(6%淀粉中含0.3%台盼蓝)3(材料:小白鼠;0.5%鸡红细胞悬液四实验步骤1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。
2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。
3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。
4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死)。
5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。
6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。
7. 观察时，将视野调暗。
在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。
鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。
而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起(伪足)，细胞质中有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡)即为巨噬细胞。
小鼠腹腔巨噬细胞的分离与培养
小鼠腹腔巨噬细胞的分离与培养一、引言巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，可以通过吞噬微生物、吸收细胞碎片等功能来保护机体免受外来侵害。
近年来越来越多的研究者将目光投向了巨噬细胞的研究领域，例如探究其功能调控、对特定疾病的影响等。
因此，了解如何分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞是非常重要的。
二、实验材料1.小鼠（BALB/c或C57BL/6等品系）2.70%乙醇3.磷酸盐缓冲液（PBS）4.腺苷酸二钠（ADT）5.玻璃钝刀6.吹瓶（20ml）7.离心管（50ml）8.腹腔灌注针头9.离心机10.培养皿11.消化液（十氟化十六烷、胰酶混合液等）12.FBS（fetal bovine serum）13.RPMI-1640培养基14.静菌枪、离心管、显微镜等三、实验步骤1.准备工作选用2~3个月龄（约20g体重），性别未限制的小鼠，放至3-4人一笼中，在恒定温度（22-24℃）、湿度（40-60%）下，24小时自由进食饮水，减轻其压力。
实验前，将所需物品全部准备好，消毒好所需器材。
消毒方式可以选择用70%的乙醇喷震或者紫外线照射15min等方式进行消毒，确保实验平凡洁净。
2.腹腔巨噬细胞的分离（1）小鼠腹腔巨噬细胞的处理将麻醉过的小鼠放于消毒好的操作台上，用70%乙醇消毒好腹部，剖开腹腔，将肝、脾、小肠等剔除，留下含有腹腔巨噬细胞（PC）的腹腔。
用离心管接住腹腔内的生理盐水，加1mM ADT处理吸入至腹腔中，轻摇腹腔5分钟，将其取出至消化液中，消化液中加入0.2%的凯西酶和50ug/mL的DNA酶，然后用13g钩头灌注针将其搅拌并吸入管内灌注30分钟，在摇床上50转/分钟恒温摇晃1h。
将腹腔液收集到离心管内离心，离心350g 20分钟，去除上清流体，重悬沉淀细胞于PBS液中。
（2）巨噬细胞的筛选将离心沉淀细胞的上清液放在吹瓶中，吹出细胞液，离心25min后，去掉上清，用PBS液中悬浮细胞过滤到细胞培养皿70%PMI-1640中化为单细胞。
实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
实验一巨噬细胞吞噬功能实验ﻫ1、【实验原理】(１)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统得主要细胞,具有活跃得吞噬功能、能清除体内抗原物质及变性得细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用、MΦ受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法,即:在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡红细胞３0mｉn后处死小鼠,取出腹腔液,以冷美蓝染色,油镜下计数吞噬鸡红细胞得百分数,及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色得鸡红细胞得形态、数目,以判断巨噬细胞中得杀伤能力,由此间接地测定机体得非特异免疫水平、２、【实验步骤】(1)试验前3d,小白鼠腹腔注射６％无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml,轻揉腹部,使红细胞在腹腔中分布均匀,利于吞噬(３)3０mｉn后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用吸管取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴0、03％冷美蓝溶液,盖上盖玻片。
ﻫ(4)低倍镜下找到观察区域后,换高倍镜下进行观察,计数3、【实验结果】4、【结果分析】(1)如图所示,在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞得现象,并且可以瞧到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
(2)镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬得鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液与冷美蓝溶液充分混合均匀,使得视野中出现大片深染区域。
总体实验结果较好,视野中央可见清晰得吞噬了鸡红细胞得巨噬细胞、ﻫ5、【注意事项】(1)涂片得薄厚要适当,否则影响计数、(２)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
(3)如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水、(4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
(5)被吞噬得鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间、实验二双向琼脂扩散实验1、【实验原理】(1)可溶性抗原与相应抗体特异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定得温度条件下,经一定得时间,可形成肉眼可见得沉淀线／环得现象,称为沉淀反应、(2)琼脂扩散就是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现得一种沉淀反应。
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小鼠肠巨噬细胞
小鼠肠巨噬细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肠巨噬细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肠巨噬细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肠巨噬细胞产品简介：
产品名称：小鼠肠巨噬细胞
组织来源：小鼠肠组织
产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶
小鼠肠巨噬细胞细胞简介：
巨噬细胞功能及其在疾病发生过程中的作用是目前研究的热点问题之一。
肺巨噬细胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活跃，有重要防御功能。
肠是重要的巨噬细胞储存器官，为结核病的研究提供了重要的材料。
本公司生产的小鼠肠巨噬细胞采用机械研磨贴壁法制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基信息：
1）培养基类型：RPMI-1640
2）添加因子：10%优质胎牛血清、双抗等
小鼠肠巨噬细胞使用方法：
细胞培1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO
2
养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充
细胞培养箱中培养；
新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO
2
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。
之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
小鼠肠巨噬细胞注意事项：
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 该细胞只可用于科研。
备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。
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小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞
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