IL-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD5+T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血

Ｈａｉｎａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｌｙ　２０１４，ＶｏＬ　２５，Ｎｏ．１３　海南医学２０１４年７月第２５卷第１３期　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—６３５０．２０１４．１３．０７５７　

ＩＬ一１７　ＣＤ４＋Ｔ（Ｔｈｌ７）细胞和　ＩＬ一１７　ＣＤｓ＋Ｔ（Ｔｃ１７）细胞　在肺癌患者外周血中的表达水平比较　谢志翔　（达州市中西医结合医院检验科，四川　达州　６３５０００）　

【摘要】目的对比白细胞介素（Ⅲ）一１７　ＣＤ，＋Ｔ（Ｔｈｌ７）细胞和ＩＬ－１７　ＣＤ。＋１ｒ（Ｔｅｌ７）细胞在肺癌患者外周血中　的表达水平。方法选择２０１０年３月至２０１３年３月我院接诊的７０例肺癌患者进行研究（肺癌组），同时选择４Ｏ例　健康体检者作为对照组。采用流式细胞术对两组的Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达情况进行检测并分析。结果检　测发现，腺癌、鳞癌、小细胞癌三种病理类型患者的Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达水平差异无统计学意义（　１．７６２　１，　Ｐ＝０．１７９　８；Ｆ＝０．１６１　３，Ｐ＝０．８５３　０）。表明Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达水平与肺癌患者的病理类型无关。不同　ＴＮＭ分期的肺癌患者的Ｔｈｌ７细胞和Ｔｃｌ７细胞表达水平差异有统计学意义（Ｆ＝５．７８３　ｌ，Ｐ－－０．００４　８；Ｆ＝３．７５１　４，　Ｐ＝０．０２８　７），且随着患者ＴＮＭ分期的升高，Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达水平也逐渐增高（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论１１１ｌ７细　胞和Ｔｅｌ７细胞在不同ＴＮＭ分期肺癌患者的外周血中的表达水平不同，Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞在肺癌患者中表达　水平明显升高。　【关键词】肺癌；Ｔｈｌ７细胞；Ｔｅｌ７细胞　【中图分类号】Ｒ７３４．２　【文献标识码】Ａ　【文章编号】　１ｏ０３—６３５０（２Ｏ１４）１３—１９５３—Ｏ３　

Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅＢ　ｏｆ　ＩＬ一１７　ＣＤ４　Ｔ（Ｔｈｌ７）ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ＩＬ一１７　ＣＷＴ（Ｔｅｌ７）ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｐａｆｉｅｎ￣ｗｉｔｈ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ．Ｘ１Ｅ　Ｚｈｉ－ｘｉａｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｄａｚｈｏｕ　ｃ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｗｉｎｅ，Ｄａｚｈｏｕ　６３５０００，Ｓｗｈｕａｍ　ＣＨｌＮＡ．　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　ＩＬ一１７　ＣＤ４＋Ｔ（Ｔｈｌ７）ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ＩＬ一１７　ＣＤｓ　Ｔ（Ｔｅｌ７）ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｅｖｅｎｔｙ　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｃｈ　２０１０　ｔｏ　Ｍａｒｃｈ　２０１３　ｉｎ　ｏｕｒ　ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ａｎｄ　４０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎ．　ｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｇｒｏｕｐｓ　Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　Ｔｃｌ７　ｃｅｌｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ａｎａ－　ｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｅｅ　ｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆＴｈｌ７　ａｎｄ　Ｔｃｌ７　ｃｅｉｌｓ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｆｏｕｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏ．　ｍａ，ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｓｍａｌｌ　ｅｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（　１．７６２　ｌ，Ｐ＝０．１７９　８；Ｆ＝０．１６１　３，Ｐ＝０．８５３　Ｏ）．Ｔｈｉｓ　ｉｎｄｉ．　ｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｔｈｌ７　ａｎｄ　Ｔｃ１７　ｃｅｌｌｓ　ｉｓ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａ－　ｔｉｅｎｔｓ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｔｈｌ７　ａｎｄ　Ｔｅｌ７　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＴＮＭ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ（Ｆ＝５．７８３　１，Ｐ＝０．００４　８；Ｆ＝３．７５１　４，Ｐ＝－０．０２８　７），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｈ１７　ａｎｄ　Ｔｃｌ７　ｃｅｉｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｄｉｓｅａｓｅ（ｓｔａｇｅ　ＩＩＩ　ａｎｄ　ＩＶ）ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｏｓｅ　ｗｉｔｈ　ｓｔａｇｅ　Ｉ　ａｎｄ　ＩＩ（Ｐ＜　０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｗｅ　ｆｏｕｎｄ血ａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆＴｈ１７　ａｎｄ　Ｔｃｌ７　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｗｅｒｅ　ｄｉｆｉｅｒｏ　ｅｎｔ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＴＮＭ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ，ａｎｄ　Ｔｈ１７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　Ｔｅｌ７　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｗｅｒｅ　ｉｎ—　ｃｒｅａｓｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ；Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ；Ｔｅｌ７　Ｃｅｌｌ　

临床研究显示外周血的免疫状况与肺癌的发生　有着密切的联系ｎ－２］，而Ｔ淋巴细胞是肿瘤的微环境　的主要效应细胞　】，最新研究发现调节性Ｔ细胞　（Ｔｒｅｇ细胞）和白细胞介素（ＩＬ）一１７　ＣＤ４＋Ｔ（Ｔｈｌ７）细胞　在传统ＣＤ，＋Ｔ细胞的基础上为肿瘤的免疫机制提出　了新的观点［４－５］ｏ本文旨在对比分析Ｔｈｌ７细胞和　ＩＬ一１７　ＣＤ８￣Ｔ（Ｔｅｌ７）细胞在肺癌患者外周血中的表达　通讯作者：谢志翔。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｎｇ，５４１２６＠１６３．ｃｏｒｎ　水平，现将结果报道如下：　１资料与方法　１．１一般资料选择２０１０年３月至２０１３年３月　我院接诊的７０例肺癌患者进行研究，同时选择４０例　健康体检者作为对照组。入选标准：肺癌组患者均经　肺部组织病理活检及各项影像学资料检查确诊为肺　癌。两组均无糖尿病、高血压、肾脏疾病等临床基础　

・１９５３・　海南医学２０１４年７月第２５卷第１３期　Ｈａｉｎａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ’Ｊｕｌｙ　２０１４，Ｖｏ１．２５，Ｎｏ．１３　疾病，排除合并有肺部及全身重症疾病的患者。肺癌　组７０例中男性４５例，女性２５例，年龄４１～８８岁，平均　（５６．４＋２．３）岁；其中病理诊断腺癌３ｌ例，鳞癌２２例，小　细胞癌ｌ７例；ＴＮＭ分期情况：Ｉ～ⅢＡ期１９例，ⅢＢ期　１８例，Ⅳ期３３例。健康组４０例，其中男性２３例，女性　１７例，年龄４３～８６岁，平均（５５．６￣２．５）岁。两组的年龄、　性别等一般资料比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），具　有可比性。　１．２方法具体的操作方法是流式细胞术检　测。步骤为：（１）于清晨，患者在空腹状态下收集外周　静脉血于真空的采血管中。（２）将收集到的外周血进　行分离，得到外周血中的单个核细胞２００　ｌ置于细胞　培养板内。（３）在平板的细胞培养板上，加入新生小　牛血清ＲＰＭＩ　１６４０培养液、５０　ｎｇ＾１ｌｌ的ＰＭＡ、１０　ｎｌ　的ＢＦＡ培养，并加以混匀。（４）在平板内加入固定剂，　并于室温内培养１５　ｍｉｎ后加入磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）　进行洗涤离心，离心半径为１４．６　ｃｍ，１　５００　ｒ／ｍｉｎ离心　５　ｍｉｎ，将上清液去除。（５）采用１０　ｌ　ＣＤ，ＰｒｅＣＰ和　１０山ＣＤ。一ＡＰＣ进行混匀，并在避光的室温内进行培　养２０　ｍｉｎ。（６）再次采用ＰＢＳ进行洗涤离心，离心半　径为１４．６　ｃｍ，１　５００　ｒ／ｍｉｎ离心５一ｍｉｎ，将上清液去　除。在其中加入１Ｏ　ｌ的ＰＥ．Ⅲ－１７单抗，在室温内培　养２０　ｒａｉｎ。再次进行重复的离心。（７）对Ｔｈｌ７细胞和　Ｔｃｌ７细胞水平进行分析。　１－３统计学方法应用ＳＰＳＳ１８．０软件进行数　据分析，计量数据采用均数４－标准差（　士ｓ）表示，其组　间比较采用ｔ检验，多组计量资料比较采用Ｆ检验，　计数资料的比较采用）ｃ２检验，以Ｐ＜０．０５为差异具有　统计学意义。　２结果　２．１两组的Ｔｈｌ７细胞和Ｔｃｌ７细胞表达水平比　较通过流式细胞术检测发现，肺癌组患者的Ｔｈｌ７　细胞表达的比例明显高于健康组，两组比较差异有统　计学意义（　３．２６５　４，Ｐ＝０．００１　５），肺癌组患者的Ｔｃｌ７　细胞表达比例明显高于健康组，两组比较差异有统计　学意义（　３．７６３　１，Ｐ＝－０．０００　３），见表１。　

表１两组Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达水平比较ｉｆ．ｓ）　

・ｌ９５４・　

２．２不同病理类型肺癌患者Ｔｈｌ７细胞和Ｔｃｌ７　细胞表达水平比较检测发现，腺癌、鳞癌、小细胞癌　三种病理类型患者的Ｔｈｌ７细胞和Ｔｃｌ７细胞表达水平　差异无统计学意义（　１．７６２　１，Ｐ＝０．１７９　８；Ｆ＝０．１６１　３，　Ｐ＝Ｏ．８５３　０　。表明Ｔｈ１７细胞和Ｔｃｌ７细胞表达水平与　肺癌患者的病理类型无关，见表２。　

表２不同病理类型肺癌患者Ｔｈ１７细胞和Ｔｃｌ７细胞表达水平比较　。％）　

２．３不同ＴＮＭ分期肺癌患者的Ｔｈ１７细胞和　Ｔｃ１７细胞表达水平比较检测发现，不同ＴＮＭ分期的　肺癌患者的Ｔｈ１７细胞和Ｔｃ１７细胞表达水平差异有　统计学意义（　５．７８３　ｌ，Ｐ＝－０．００４　８；Ｆ＝３．７５１　４，ｐ＝－　０．０２８　７），且随着患者ＴＮＭ分期的升高，Ｔｈｌ７细胞和　Ｔｃ１７细胞表达水平也逐渐增高（Ｐ＜０．０５），见表３。　

表３不同ＴＮＭ分期肺癌患者Ｔｈｌ７细胞和Ｔｅｌ７细胞表达水平比较　．　

３讨论　肺癌是临床中呼吸科常见的恶性肿瘤之一，发病　率和死亡率增长较快，是威胁人群健康和生命最大的　恶性肿瘤之一［６］。肺癌在病理分型上分为腺癌、鳞　癌、小细胞癌三种类型，ＴＮＭ分期分为Ｉ￣ⅢＡ期、ⅢＢ　期、Ⅳ期口】。多项研究发现恶性肿瘤的患者均存在着　免疫功能的紊乱，但是肿瘤细胞也存在逃离免疫系统　的攻击ＩＳ吲。在肿瘤免疫中，以Ｔ淋巴细胞为主的细胞　免疫为主导，地位十分重要。目前，国内外对于调节　性Ｔ细胞（Ｔｒｅｇ细胞）和Ｔｈ１７细胞的采用成为抗肿瘤　治疗的一个热点。尤其是对于Ｔｈｌ７细胞的深入研究　发现白细胞介素（ＩＬ）一１７可能在肿瘤免疫中发挥着重　要的作用，可帮助肿瘤细胞实现免疫逃逸和免疫耐　受，从而不被体内的免疫系统消除【ｍ】。ＣＤ，＋Ｔ细胞是　细胞免疫中的一种新的细胞类型，而Ｔｈ１７细胞以分