布氏杆菌病试管凝集试验作业指导书

依据标准

SN/T 1090—2002

1 适用范围

适用于羊种、牛种、和猪种布氏杆菌感染家畜的检疫。

2 试剂和材料

2.1 试剂

2.1.1 试验用蒸馏水为GB/T6682中的三级水。

2.1.2 稀释液：0.5%石碳酸生理盐水（含0.5%石碳酸、0.85%氯化钠溶液）。检验羊血清时用含0.5%石碳酸的10%盐溶液（含0.5%石碳酸、10%氯化钠溶液）。

2.1.3 标准抗原：按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液做1：20稀释。

2.1.4 标准阳性血清：冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

2.1.5 标准阴性血清：冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

2.2 材料

2.2.1 试管架

2.2.2 玻璃试管：规格为13mm×100mm，圆底，洁净。

2.2.3 微量移液器。

2.2.4 可调连续加样器。

2.3 被检血清

2.3.1 按常规方法采血分离血清。

血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。

3 操作方法

3.1 确定被检血清的稀释度

牛、马、骆驼稀释用1：50、1：100、1：200、1：400（4个稀释度）；猪、山羊、绵羊和狗用1：25、1：50、1：100、1：200（4个稀释度）。

大规模时也可用2个稀释度，即牛、马、骆驼稀释用1：50、1：100；猪、山羊、绵羊和狗用1：25、1：50。

为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。

3.2 稀释被检血清

3.2.1猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释

3.2.1.1 每份被检血清用4支试管,标记检验编号后第1管加1.15ml稀释液,第

2-4管各加入0.5ml稀释液。

3.2.1.2 取被检血清0.1ml,加入第1管,充分混匀后吸弃0.25 ml。

3.2.1.3 从第1管中吸取0.5 ml加入到第2管,混合均匀后,再从第2管吸取0.5

ML至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4管弃去0.5ml,稀释完毕。

3.2.1.4 从第1至第4管的血清稀释度分别为1:12.5、1:25、1:50、1:100。3.2.2 牛、马和骆驼血清的稀释

牛、马和骆驼血清的稀释方法与3.2.1基本一致,差异是第1管加1.2ml稀释液和50 被检血清。

3.3 加抗原

将0.5ml抗原(1:20)加入巳稀释好的各血清管中,并振摇均匀,猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1:25、1:50、1:100、1:200、1:400。各反应管反应总量为1ml。

3.3 设立对照

每次试验都应设立下列对照。

3.3.1 阴性血清对照

阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。

3.3.2 阳性血清对照

阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度,加抗原的方法与被检血清同。3.3.3 抗原对照

在0.5ml稀释液中,加0.5ml抗原(1:20)。

3.5 配制比浊管

每次试验均须配制比浊管,作为判定凝聚反应程度的依据,先将抗原(1:20)用等量稀释液作一倍稀释,然后按表1配制比浊管。

所有试验管充分震荡后,置37℃温箱感作20ｈ。

4．判定

4.1确定每份被检血清效价

比照比浊管判读,出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。4.2 结果判定

当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(-),阳性血清的凝集价达到其标准效价±1个滴度,则证明试验成立,可以判定。否则，试验应重做。

4.2.1牛、马和骆驼于1:100血清稀释度,猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释

度出现“++”以上的凝集现象时,被检血清判定为阳性反应。

4.2.2 需要采用国际凝集单位表示试验结果时,可按照附录A中的换算公式换算成国际凝集单位。