小鼠腹腔巨噬细胞的获取
小鼠腹腔巨噬细胞的获取
1材料准备
好血清56℃灭活1h，完全冷却后1000rpm/5min，然后0.22μm滤膜过滤，配含10%不含双抗的灭活FBS血清的1640培养基，另外再配含有双抗的完全培养基。
泡沫板，小注射器6个，10mL注射器几个，无菌剪刀、镊子。
提前预冷的未加双抗的1640培养基。
加了双抗的完全培养基37℃预热。
50mL管几个。
无菌PBS，台盼兰，75%酒精。
C57BL/6小鼠8-12周。
Corning极低吸附培养板，细胞不能黏附，或者用0.25%胰酶
+0.02%EDTA。
用Hanks液终止胰酶和EDTA消化。
2实验步骤
1）拉颈处死小鼠，在75%酒精浸泡1-2min，移入超净台，把小鼠放到泡沫板上，用枕头固定四肢，用镊子和剪刀剪开皮肤，露出
腹膜，但勿伤及腹膜壁。
注意：在处死老鼠时，如果腹腔内有
血，则这只老鼠不能用，容易有血细胞污染。
2）用10mL注射器吸取提前预冷的无双抗的164010mL，换小针头注射到腹腔中，同时从两侧用手指按压腹膜壁2-5min，使液体在腹
腔内充分流动。
然后放置20-25min。
提前预冷离心机到4℃。
3）轻轻拔出针头，然后从侧壁吸出培养基，注意不要吸到体内器官。
然后再注射5mL的培养基，按压1min，停滞5min，吸出到
提前预冷的50mL的离心管中。
4）500g/8min，然后用无双抗的培养基洗一次，500g/8min，弃去上清液，然后用预热的完全培养基重悬。
5）台盼兰计数，很难消化下来，所以接种的时候，必须直接接种到目的培养器皿中。
如果是96孔板，一般是2X10^5个/mL，如果
温箱孵育2-4h，用提前预热的是6孔板，200w个/mL，5%CO
2
1640洗1-2次，然后换液，洗去未贴壁细胞，贴壁细胞则为单层
的巨噬细胞。
3实验结果
巨噬细胞刚贴壁时偏圆形，或者类似鹅卵石形状，然后慢慢伸出伪
足，铺开呈三角形或多角形。
4注意事项
1)巨噬细胞使终末分化细胞，不会增殖。
在条件适宜下可存活2-3
周，多用原代培养。
每只小鼠可产生200-300w个细胞，其中90%
为巨噬细胞。
培养细胞对低温的耐受力比高温强。
2)很难消化下来。
3)避免交叉感染，每只小鼠换一个注射器。
4)严格无菌操作。
5)吸取细胞悬液时，尽量不要吸到大小肠，容易造成成纤维细胞感
染。
6)巨噬细胞的marker：CD14,CD11b（MAC1），CD68(需要破膜，胞内
细胞因子染色，不仅表达在巨噬细胞上，也表达在淋巴细胞，成
纤维细胞和内皮细胞)，F4/80,CD86.。
单克隆抗体制备流程图
单抗制备流程1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术.这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。
一、细胞融合前准备（一) 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定.1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案:初次免疫1×10７／0.5ml ip （腹腔内注射)↓2～3周后第二次免疫1×10７／0。
5ml ip↓3周后加强免疫（融合前三天）1×10７／0.5ml ip或iv（静脉内注射）↓取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂,常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂.要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫 Ag 1~50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│(一般0.8～1ml 0.2ml／点)↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│(ip剂量不宜超过0.5ml)↓3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂,ip│（5～7天后采血测其效价,检测免疫效果）↓2～3周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv↓3天后取脾融合目前,用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。
小鼠腹腔巨噬细胞的快速提取及培养
周 血 中的单 核 细胞 ， 具 有 吞 噬 降解 细 菌 、 释 放 炎 症 介 质、 介导 炎性 细胞 趋化 、 抗原 提呈 等 活性 ， 在抗感 染 、 抗 肿 瘤免 疫 中发挥 着 非 常 重要 的作 用 。 因此 研 究 巨 噬细胞 的功 能 ， 对于 深 入 理解 机 体 免 疫 防御 和免 疫 调
京华阜康生物科技股份 有限公 司提供 ） 、 生理 盐水 、 胶 头滴 管 、
７ ５ ％ 乙醇 、 眼科 剪 、 眼 科镊 、 １ ０ ｍ Ｌ一 次 性 注 射 器 、 ５ ０ ｍ Ｌ离 心 管、 台 盼蓝 、 瑞 氏染 液 、 奥林 巴斯 Ｉ Ｘ ７ １倒 置 显 微 镜 、 奥 林 巴 斯
Ｅｓ ｔ ａ ｂｌ ｉ ｓ ｈｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ａ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ ｍｕ ｒ ｉ ｎ ｅ ｐ ｅ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎｅ ａ ｌ ｍａｃ ｒ ｏ ｐ ｈａ ｇ ｅ ｓ
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巨噬细胞观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本形态和生物学特性。
2. 掌握巨噬细胞的分离和培养方法。
3. 观察巨噬细胞的吞噬功能，并分析其吞噬能力。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，属于单核吞噬细胞系统。
在机体免疫应答中，巨噬细胞起着重要的作用。
本实验通过分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞，观察其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫应答中的作用。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 实验试剂：无菌生理盐水、台盼蓝染液、鸡红细胞悬液、小牛血清、RPMI-1640培养基等3. 实验设备：解剖显微镜、手术器械、细胞培养箱、细胞培养皿、离心机、显微镜等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离和培养（1）无菌操作下，取小鼠腹腔液，加入等体积的生理盐水，混匀。
（2）将混合液以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（3）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（4）将细胞悬液接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察（1）将培养好的巨噬细胞悬液，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（2）加入台盼蓝染液，染色5 min。
（3）用生理盐水冲洗3次，弃上清液。
（4）加入鸡红细胞悬液，混匀。
（5）将细胞悬液置于细胞培养箱中培养30 min。
（6）取出细胞，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（7）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（8）将细胞悬液滴于载玻片上，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 巨噬细胞的分离和培养在实验过程中，成功分离和培养了小鼠腹腔巨噬细胞，细胞呈圆形或椭圆形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察在显微镜下观察，发现巨噬细胞对鸡红细胞具有吞噬作用。
部分巨噬细胞吞噬了鸡红细胞，细胞质内出现红色颗粒。
3. 吞噬能力分析通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，可以评估其吞噬能力。
实验结果显示，巨噬细胞的吞噬能力较强，吞噬鸡红细胞的数量较多。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
五年制免疫实验课 腹腔巨噬细胞吞噬试验
２. ADCC作用杀伤靶细胞。
形态学检测方法 同位素释放法 酶释放法
抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）
ADCC反应是由多种不同效应细胞群介导的 杀伤性效应机制之一。
NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞具有杀伤作 用。
观察靶细胞被破坏的程度，用来判断它们的 细胞毒性。
补体依赖的细胞毒试验（CDC）
实验原理： 细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)
用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨 噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率 及吞噬指数。 吞噬百分率: 有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％ 吞噬指数:
有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／ 100
抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC） 补体依赖的细胞毒试验（CDC） 细胞介导的细胞毒试验 NK细胞介导的细胞毒试验
生理盐水
1瓶
苦味酸
1瓶
• 器材（每组）
• 1ml注射器
1个
• 玻片（载玻片/盖玻片） 4片
• 1ml微量加样器
1支
• 200ul微量加样器 1支
• tips
若干
• 1.5mlEP管
2个Biblioteka • 剪刀、镊子1套
• 显微镜 • 温箱
1. 实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。 2. 用1毫升注射器给小鼠腹腔注射3％鸡红细胞悬液0.5ml，用
若干
• 剪刀、镊子、解剖盘 1套
• 显微镜
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在 圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min； 加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min； 自来水轻轻冲洗； 待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测 巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、 载玻片 、吸管等 2．试剂： 生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌， 置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主 要 存 在 部 位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有 溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器 官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞， 在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备
巨噬细胞分离
巨噬细胞分离
巨噬细胞是一类免疫细胞，可吞噬并消化细菌、真菌、细胞残骸等外源性或内源性物质，以清除体内垃圾和抵御感染。
分离巨噬细胞的方法有多种，一般采用贴壁法、悬浮法等，其中贴壁法是常用方法之一。
首先将小鼠腹腔注射含有牛血清白蛋白的RPMI-1640培养基，然后从腹腔中取出巨噬细胞，加入含有10%FBS的DMEM培养基中，让其黏附于培养皿中，去除无法黏附的细胞，使得黏附的细胞得以生长和繁殖。
随后根据实验需要可在巨噬细胞培养基中添加适当的细胞因子、药物等以改变巨噬细胞的功能和生理状态。
小鼠三个不同部位巨噬细胞的分离培养与鉴定
小鼠三个不同部位巨噬细胞的分离培养与鉴定[摘要] 目的建立小鼠三种不同部位巨噬细胞体外分离培养的方法，并对其进行鉴定。
方法分别从小鼠腹腔、脾脏、骨髓中分离获取巨噬细胞，经台盼蓝染色计数后于含10%胎牛血清的DMEM培养液、1%小牛血清的RPMI-1640培养基中培养；通过活细胞形态观察；HE 染色光镜观察；吞噬鸡红细胞功能检测；酸性磷酸酶及非特异性酯酶染色测定细胞内酶的表达等生物学技术鉴定培养的贴壁细胞性质。
结果获得高纯度的巨噬细胞，具有巨噬细胞的形态特征，具备良好的吞噬功能，鸡红细胞吞噬率分别为腹腔94.68%，脾脏92.47%，骨髓93.11%；酸性磷酸酶染色阳性率为腹腔89.43%，脾脏85.21%，骨髓88.55%；α-醋酸奈酚酯酶染色阳性率为腹腔85.32%，脾脏81.81%，骨髓85.76%。
结论小鼠三个不同部位均可简便实用的分离出巨噬细胞，可以满足不同的研究目的。
巨噬细胞不仅是许多病原体的宿主细胞,而且在先天性和后天性免疫应答过程中起着关键性作用[1-3],比如调节促炎和抗炎细胞因子的释放、吞噬或杀死胞内微生物和肿瘤细胞、降解和提呈抗原等。
它还可以与其他免疫细胞协同发挥更大的功能，比如树突状细胞、粒细胞、NK细胞和T细胞等。
小鼠巨噬细胞吞噬作用是反映机体非特异性免疫功能的主要指标，也是临床免疫学实验常用的方法之一。
现将已有的巨噬细胞分离方法改进，从3种不同部位分离小鼠巨噬细胞，并做以对比。
1 材料与方法1.1主要试剂和仪器DMEM培养基（Hyclone）；RPMI-1640培养基（GIBCO）；胎牛血清（GIBCO）；倒置显微镜（Olympus）；CO2培养箱（Binder，Thermo）。
1.2 从小鼠腹腔中分离巨噬细胞（1）取6~8周龄左右的小鼠，腹腔注射2mL无菌的液体石蜡。
待3~4d后收集腹腔细胞。
（2）颈椎脱臼法法处死小鼠，消毒，用注射器抽取5mL含双抗的RPMI1640培养基注入腹腔，用绵球轻揉腹部1~2 min，静置5min，用眼科镊稍提起腹腔，并用眼科剪剪开一个小口，用吸管吸取细胞悬液，移入离心管中。
【2017年整理】巨噬细胞培养
巨噬细胞培养巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。
2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。
3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。
4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。
5．用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。
6．小心拔出针头，把液体注入离心管中，1000g 4℃离心10分钟，去上清，加10 ml Eagle培养基。
7．计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105细胞，其中90％为巨噬细胞。
8．为获取3×105个帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106/ml。
9．为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle 液冲洗1～2次后，再加新Eagle培养液置37℃ CO2温箱中培养。
小鼠腹腔巨噬细胞的制备1.小鼠颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡3分钟，取出小鼠，置于无菌纸上，腹面朝上；2.用镊子提起小鼠下腹部皮肤，剪开一小口，撕开皮肤，完全暴露腹膜；3.10ml注射器装上大号针头，注入6 ml Hanks液或PBS，用镊子提起腹膜，向腹腔中注入Hanks液，针尖朝上，避开肠和脂肪，回抽腹腔液，不同方向冲洗数次，吸出腹腔液；4.细胞悬液离心200×g10分钟，用Hanks液洗一次，用RPMI1640－5%小牛血清悬起细胞，2×106细胞/ ml ；5.细胞悬液置入培养瓶，37度培养2小时后，吸弃上清，用预热培养基洗二次，留下贴壁细胞；6.含10 mM EDTA的PBS加入培养瓶，覆盖细胞，37度孵育20分钟，用吸管用力吹打下细胞，或用橡皮擦帚轻轻刮下细胞，即为腹腔巨噬细胞，纯度一般大于90%，每只小鼠平均可得2×106腹腔巨噬细胞。
小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养2013
细胞工程综合实验报告小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养班级 xxxx姓名 xxxx学号 xxxxxxxxxx指导教师 xxxx实验时间 xxxx成绩小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养姓名学号班级一、实验目的1.了解细胞原代培养培养的基本方法和操作过程。
2.初步掌握培养过程中的无菌技术。
3.了解在相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
巨噬细胞属天然免疫细胞，具有趋化运动、吞噬、分泌和参与免疫调节等功能，是科学工作者研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周多用做原代培养，不易长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。
目前，单核巨噬细胞株也有，比如RAW264.7，但价格比较贵，且保存也不方便。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，目前以小鼠腹腔取材法最为实用，而目前获取小鼠巨噬细胞的方法有两种，一种是直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞，还有一种方法向动物腹腔中注射刺激物（如牛血清，淀粉，糖原，脂多糖，矿物油，PRMI1640培养液等），这样使机体产生大量巨噬细胞后再腹腔灌洗，但由于许多刺激物能激活巨噬细胞，而被激活的巨噬细胞大量吞噬刺激物，有此得到的巨噬细胞培养用于培养时，细胞中的刺激物不能很快被消化而残留在细胞中，影响细胞代谢，同时也不能很好的模拟体内环境，所以我们直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞。