培养细胞所需的几种主要液体的配制方法
植物组织培养的培养基
★植物组织培养培养基的主要成分1.无机营养物：无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁,这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合。
2.碳源：培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。
3.有机营养成分：包括人工合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。
最常用的有酪朊水解物(水解乳蛋白、水解酪蛋白CH)、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁(CM)及各种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。
维生素：在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有硫氨素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醇）、烟酸。
在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。
这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。
实验一培养基的配制及灭菌
实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、别离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。
在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。
培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。
培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。
一、实验目的1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2．明确培养基的配制原理。
3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。
4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。
二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。
消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。
灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而到达灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高〔160～170℃〕，时间长〔1～2h〕。
但干热灭菌温度不能超过 180℃。
否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。
实验报告——精选推荐
实验报告实验⼀细胞培养室⽆菌环境的建⽴和实验器具的清洗、包装和灭菌⼀、实验原理防⽌污染是决定细胞培养成功的⾸要条件。
由于体外细胞缺乏抗感染能⼒，因此⽆菌技术在细胞培养中显得尤为重要。
⼆、实验⽬的1、通过实验，培养良好的卫⽣观念，确⽴细胞培养的⽆菌意识；掌握细胞培养室的消毒及灭菌⽅法；掌握培养⽤品的⾼温消毒⽅法。
通过细胞培养室和主要设备的⽆菌环境建⽴，逐步掌握⽆菌操作概念。
2、掌握细胞培养室、培养箱和超净台的消毒⽅法；掌握玻璃器⽫、⾦属器械、橡胶制品的清洗、包装和灭菌⽅法。
三、实验材料：细胞培养室环境、培养箱、超净台、边台、紫外线灯、70％酒精等等；玻璃培养瓶、玻璃滴管、⼿术器械、圆筒、铝制饭盒等电动⾼压锅、烘⼲箱、超声洗涤机、酸液及酸缸、纯⽔仪等四、操作⽅法：①、环境消毒细胞培养室环境消毒⽤紫外线灯照射30～60分钟以上才能进⼊其内⼯作。
培养箱箱体内壁和隔板可⽤70％酒精擦拭。
超净台操作野主要⽤紫外线消毒。
②、器械清洗1、玻璃器⽫的清洗：浸泡→刷洗→浸酸→冲洗（详见课件）2、塑料器⽫冲洗反复利⽤塑料器⽫需经清⽔浸泡后流⽔冲洗；流⽔冲洗→晾⼲→2％氢氧化钠浸泡过夜→清⽔冲洗→2～5％盐酸浸泡30min→清⽔冲洗→蒸馏⽔漂洗3遍→晾⼲后包装，以备灭菌。
3、胶塞等橡胶类⽤品的处理新胶塞（含有⼤量滑⽯粉）：⽤清⽔冲洗→ 2％NaOH煮沸15min→清⽔冲洗→2～5％盐酸煮沸15min→清⽔冲洗5次以上→蒸馏⽔漂洗5遍以上→蒸馏⽔煮沸10min →倒掉废⽔，余热烘⼲胶塞备⽤（或经101.3 kPa⾼压灭菌）；旧胶塞：⽤清⽔浸泡→ 2％NaOH煮沸10～20min →清⽔冲洗→1％盐酸煮沸30min→清⽔和蒸馏⽔漂洗5遍以上→蒸馏⽔煮沸10min →倒掉废⽔，余热烘⼲胶塞备⽤（也可经101.3 kPa⾼压灭菌）。
4、⾦属器械的清洗新购⾦属器械：汽油纱布擦去油脂，清⽔冲洗→酒精棉擦拭，晾⼲；⽤过的⾦属器械：清⽔煮沸消毒→擦拭⼲净→包装好⾼压灭菌消毒。
细胞培养-实验前准备
放射灭菌
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紫外光射线 适用范围：控制空气污染，消毒物品表面 。 限制：对皮肤及眼有害，穿透力小，不能透 过玻璃。 电离辐射 适用范围：消毒对热敏感的外科器械等 。 限制：昂贵、需特殊装置。
0.22 ~0.45 µ m
过滤
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膜滤器
适用范围：对热敏感的液体，如血清和动物培养基。 限制：需先清除悬浮物质，一些有用的活性物质可能被 吸附掉。
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单独使用时，一般只用于空气和台面的消毒。如仅用 紫外线照射带菌的器皿，则无法彻底灭菌，所以应与 其他消毒方法结合使用，如先用75％的酒精浸泡，再 照紫外线消毒灭菌等。 ②检查消毒灭菌效果照射后为检查超净台是否达到无 菌效果，可在已照射的洁净台四角和酒精灯旁分别放 置5个含琼脂糖半固体培养基的直径90 mm培养皿， 20 min后再转入37℃培养箱中培养72 h，观察细菌生 长情况。如果每块平皿上无菌落生长，说明洁净台符 合无菌标准。
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玻璃器皿的灭菌包装 � 1 局部包装：较大器皿如培养瓶，烧杯，容量 瓶，三角瓶等以及体积较小瓶口包装方便的容 器如青霉素瓶等，采用局部包装。
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2 全包装：体积较小的培养皿、注射器、胶塞、 尽速器械（剪刀、镊子）等采用全包装。 1 直接装入率饭盒，再用细胞培养灭菌袋灭菌。 缺点：密封不严，不宜长时间使用。 2 纸包装， 要掌握正确包装方法，不要是锐器 扎破包装纸。
常用灭菌方法
物理灭菌法
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湿热灭菌:高温高压法、流动蒸汽或沸水 干热灭菌：烤箱、焚烧、酒精灯 射线照射灭菌：紫外线、电离辐射 过滤灭菌：微孔滤膜、玻璃丝滤器 超声射线消毒灭菌 主要使用6OCo、X射线进行消毒灭菌，可用于 牛血清和塑料制品的灭菌。 (2)紫外线消毒 用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热 灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒 方法之一。 ①消毒方法 现在一般用无臭氧型紫外灯。消毒的效能与距离成反 比，：进行空气消毒时灯管应距地面2.5 m以内；台面的消毒应在 80 cm以内；培养器皿的消毒在30 cm以内。 消毒的时间与效能存 在一定关系，但不是绝对的：照射20 min后，有71％的细菌被消 灭；40 min后79％的细菌被消灭；60 min后86％的细菌被消灭。 紫外线照射时间再长也不是100％的灭菌，最多只能把90％的细菌 消灭，过长的照射是没有意义的。
实验一 培养基母液的制备
二、实验目的
1、了解培养基母液的配制原理 学习和掌握培养基母液的配制方法。 2、学习和掌握培养基母液的配制方法。
三、实验原理
• 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确， 将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、 将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类 分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。 分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。 当配制培养基时， 当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母 液即可。 液即可。 • 对植物外植体进行离体培养时，要依靠培养基提供 对植物外植体进行离体培养时， 生长所需的营养成分。 生长所需的营养成分。不同材料对培养基的要求不 适当的设计和选用培养基， 同，适当的设计和选用培养基，对植物组织培养取 得成功至关重要的。 得成功至关重要的。
缓冲间(过渡室) 缓冲间(过渡室)
• （二）、无菌操作室 ）、无菌操作室
• 无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁 无菌操作室并非无菌， • 1、超净工作台：内设紫外灯、吹风装置 超净工作台：内设紫外灯、 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上， 20分钟以上 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷 酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机， 酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并 且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 • 2、无菌操作用的器具：刀、镊子、剪刀、酒精灯 无菌操作用的器具： 镊子、剪刀、 等 • 3、医用小平车：推送、放置培养基用 医用小平车：推送、
• 一、实验室设计与要求 • 在进行组织培养工作之前，首先应对工作中需要那些 在进行组织培养工作之前， 基本的设备条件有全面的了解。 基本的设备条件有全面的了解。 • 实验室设计最基本应该有三个室： 实验室设计最基本应该有三个室： 准备室 无菌操作室 培养室
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
高三生物培养基知识点
高三生物培养基知识点高三生物学科是高中阶段的最后一门生物学课程，也是很多学生备考高考的重中之重。
其中，生物培养基是生物学中的重要知识点之一。
本文将对高三生物培养基相关的知识点进行探讨和解析。
一、培养基的定义和作用培养基是指培养和繁殖细胞、组织和微生物的基质，其作用是为细胞提供必需的养分、气体和理想的环境条件，为细胞的生长、分裂、分化和繁殖提供合适的环境。
二、培养基的种类1. 基本培养基：基本培养基是指含有维持细胞正常生长必需成分的培养基，如维生素、氨基酸、能量源等。
它提供了细胞所需的最基本的营养物质。
2. 选择性培养基：选择性培养基是指含有一定物质，可以选择性地促进某种特定微生物生长，而抑制其他微生物的生长。
通常用于分离和鉴定特定微生物群落。
3. 差异性培养基：差异性培养基是指通过添加不同化合物，使得不同细菌悬浮液在培养基中呈现出不同的生长特征，从而可以根据这些差异来判定不同细菌的类型。
三、培养基的组成一般来说，培养基含有以下几个主要组成部分：1. 碳源：包括葡萄糖、乳糖等，提供细胞所需的能量。
2. 氮源：包括氨基酸、尿素等，提供细胞合成蛋白质和其他氮化合物的原料。
3. 磷源：提供细胞合成核酸和三磷酸腺苷等磷化合物所需的磷。
4. 硫源：提供合成胱氨酸、半胱氨酸等硫氨基酸所需的硫。
5. 矿质元素：包括铁、钾、镁等，提供细胞所需的微量元素。
四、培养基的制备方法1. 固体培养基的制备：首先，将所需的培养基成分按比例配制，然后加入适量的琼脂或明胶，并在加热条件下溶解。
然后，将溶液分装至培养皿中，并加盖。
最后，加热高温灭菌，使培养基凝固。
2. 液体培养基的制备：将所需的培养基成分按比例配制，并加入适量的蒸馏水。
然后，将混合溶液分装至试管、培养瓶等容器中。
最后，加热高温灭菌，以杀灭其中的微生物。
五、常见的培养基1. 营养琼脂培养基：适用于常见的细菌培养和鉴定，如营养琼脂平皿培养基、营养琼脂管培养基等。
2. 营养液体培养基：适用于微生物学实验室做大量广谱的培养，如液体营养培养基、液体管培养基等。
生化,分子,细胞试验汇总
⽣化,分⼦,细胞试验汇总主要培养基的配制LB液体培养基胰蛋⽩胨10 g，酵母浸出物 5 g，氯化钠10 g，蒸馏⽔1000 ml，⽤ 1 mol/L HCl 调节pH ⾄7.4，121℃⾼压灭菌20 min。
如果需要加抗⽣素，则待灭过菌的培养基温度降到55℃以下后加⼊适量的抗⽣素储存液。
LB 固体培养基在LB液体培养基中加⼊2%琼脂。
DMEM细胞培养基DMEM溶液90%(v/v)，FBS 10%(v/v)，青霉素100U/ml，链霉素100 µg/mlMcCoy’s 5A细胞培养基McCoy’s 5A溶液90%(v/v)，FBS 10%(v/v),青霉素100 U/ml，链霉素100 µg/ml实验试剂及药品的配制1 mol/L Tris-HCl (pH8.0)在800 ml的双蒸⽔中溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)121.1 g，⽤浓盐酸调pH ⾄8.0，⽤双蒸⽔定容⾄1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min，备⽤。
TE 缓冲液(pH8.0)1 mol/L Tris-HCl(pH8.0)10 ml和500 mmol/L EDTA(pH8.0)溶液2 ml，⽤双蒸⽔定容⾄1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min，备⽤。
500 mmol/L ⼄⼆铵四⼄酸⼆钠(EDTA)溶液(pH8.0)在800 mL 的双蒸⽔中加⼊18.6 g ⼄⼆铵四⼄酸⼆钠，充分溶解后，⽤10 mol/L NaOH 溶液调pH ⾄8.0，⽤双蒸⽔定容到1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min，备⽤。
溴化⼄锭(EB)1 g EB，加⼊100 ml 灭菌双蒸⽔中，磁⼒搅拌数h以确保其完全溶解，然后转⼊棕⾊瓶中，4℃保存。
TAE 电泳缓冲液(50×)242 g Tris碱，57 ml冰⼄酸，100 ml 0.5M EDTA，加灭菌去离⼦⽔定容⾄1000 ml，使⽤时稀释50倍。
10% SDS将10 g⾼纯度的SDS置于烧杯中，加⼊约80 ml的ddH2O，68℃加热溶解，滴加盐酸调节pH值⾄7.2，定容⾄100 ml后，室温保存。
第八章——植物细胞培养
4、PH和二氧化碳浓度
在悬浮培养时，PH变动相当大。加入EDTA使铁和其他金属离 子长期处于可利用状态。硝态氮和铵态氮之间进行调整可作 为稳定PH的一种方法。
二氧化碳对细胞培养没有太大影响，但在低密度细胞培养中， 二氧化碳对于诱导细胞分裂可能有重要作用。
植物细胞生长和活力的测定
一、悬浮培养中细胞生长的测定 1、细胞计数：把1份培养液加入到2份8%三氯化铬溶液中，在 70℃下加热2-15分钟，然后将混合物冷却，用力震荡10分钟，用 血球计数板进行细胞计数。 2、细胞总体积：将已知体积的均匀分散的悬浮液放入1个15ml刻 度离心管中，在2000g下离心5min，得到细胞沉积的体积。 细胞密实体积（PCV）：以每ml培养液中细胞总体积的ml数表示。
第八章-植物细胞培养
植物细胞培养简介
• 概念： 在培养基中培养彼此分离的细胞、使之生长、 增殖或分化。 包括固体培养和液体培养2种形式。
固体培养(solid culture)
• 在固体培养基中培养细胞=静止培养。细胞被固定、 不能移动；单细胞分裂后形成细胞团。
优缺点: 1）所得到的各个细胞团均为单细胞形成，遗传成分和 生理特性具有一致性； 2）细胞生长速度较慢； 3）不能长期、连续、大规模培养细胞。
烟草细胞接种密度和植板率
影响植板率的因素
(4) 培养基成分：用营养成分丰富的培养基或条 件化培养基，植板率高。 (5) 培养方式：采用看护培养（nurse culture） 是可以提高植板率。 平板培养是分离、筛选单细胞无性系的有效方法
看护培养（nurse culture）
植物细胞大规模培养生产次生代谢物质
如某个或某种类型的植物细胞是怎样生长、分裂和分化 的？化学物质（激素等）或者物理因素（重力、压力）等是 怎样影响这些过程的？
细胞培养的基本步骤
一．发展概况组织培养(Tissue culture)是在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下。
使从体内取出的组织生存、生长繁殖和传代，并维持原有的结构和功能特性。
广义的组织培养与体外培养同义。
体外培养(Invitro)包括所有结构层次的培养，即：组织培养、细胞培养和器官培养。
所谓细胞培养(Cell culture)是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。
组织培养的发展史已有近百年，最初的组织培养是胚胎学和微生物学的引申，建立于无菌原则上，用天然体液（如胎汁、血浆）来维持从整体切下的组织块，对细胞进行形态和功能的观察。
通过许多学者大的改进和革新，培养基由天然动物血浆改为合成培养基，促进细胞生长物质从胎汁改为动物血清。
现在全世界贮存的细胞约有万种以上。
组织培养不仅是细胞生物学必需的技术，也是分子生物学、肿瘤学、遗传学和免疫学等学科必要的方法。
二．基本原理和方法体外培养细胞的生存条件：(一)营养。
体外培养细胞所需的营养物质与体内相同，主要有糖、氨基酸和维生素三大类。
目前市面上销售的合成培养基如1640、199等所含的氨基酸已足够，但在使用合成培养基时，仍需加入一些天然成份，如人或动物的血清、血浆和胎汁等。
目前主要使用血清，以牛血清为主。
血清的生物效应早已证明，它含有多种促细胞生长因子、促贴附因子及其它活性物质等。
不仅能促进细胞增长且能帮助细胞贴壁。
不同血清对细胞作用不同。
以小牛血清最好，成年牛和马血清次之。
合成培养基中不加血清也能维持细胞生存，但不能很好生长，加入5%的血清，对大多数细胞来说，能维持细胞不死和缓慢生长，要使细胞正常生长，一般需加10～15%的小牛血清。
每个批号血清使用前要加热处理，一般灭活于56℃水浴中30分钟，每个批号血清使用前要加热处理，一般灭活于56℃水浴中30分钟，每5分钟摇一次。
10%血清营养液能促进细胞增殖称为生长液，2～5%血清培养液不能使细胞增殖而只能维持其生存称为维持液。
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培养细胞所需的几种主要液体的配制方法：1．DMEM维持培养基
DMEM基础培养基95ml 95ml
胎牛血清5ml
谷氨酰胺液2ml
含有DMEM基础培养基95ml，胎牛血清5ml，谷氨酰胺液2ml。
混合均匀，密封后与4摄氏度保存。
2．D-hank’s
D-hank’s干粉g(1袋)
NaHCO3
超纯水1000ml
取D-hank’s干粉加入超纯水500ml搅拌均匀，加入的NaHCO3搅拌至完全溶解，倒入1000ml容量瓶中，用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.
3. DMEM完全培养基
85ml,
DMEM基础培养液85ml,
, l-谷氨酰胺溶液, 2ml
1000u/ml双抗液1ml
胎牛血清15ml
取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,
混合均匀,密封于4摄氏度保存.
4. DMEM细胞基础培养基
DMEM干粉(1袋)
Na2HCO3
超纯水1000 ml
取DMEM干粉1袋()倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.
5. l-谷氨酰胺溶液
l-谷氨酰胺
DMEM基础培养基100ml
称取l-谷氨酰胺干粉g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.
青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)
链霉素(注射用) 0.8 g
％生理盐水80ml
取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃
％的胰酶溶液
胰蛋白酶干粉 0.25 g
DMEM基础培养基100ml
称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.
8.mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)
ECGS干粉 15 g(1支)
无菌超净水 6 ml
取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.
9.PBS 液
KCL
Nacl
Na2HPO4.12H2O
KH2PO4
分别取KCL, Nacl, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存
,。