GMP培训资料--轧盖密封完好性试验

三、试验步骤
3.5将消毒后的试样品放入塑料袋中，置30～35℃ 下培养7天。检查试样品内微生物生长情况， 有生长记作“﹢”，无生长记作“﹣”。
3.5.1如果试样品长菌，则按照2.1所述方法确认生 长菌是挑战微生物――铜绿假单胞菌。
三、试验步骤
3.5.2 如果所有试样品均不长菌，则从浸过菌悬液 的A组试样中取10甁，B组试样中取5瓶，按2.所 述方法对试样品进行营养性试验。
三、试验步骤
4.3如果任何挑战试验中长菌的试样品不 是由于容器封口明显的物理性缺损所 致，容器密封性挑战试验作失败论。
三、试验步骤
5、贮存稳定性:
5.1将剩余未经挑战试验的容器放入箱中，保存在 室温黑暗处； 5.2在适当的时间间隔（如12个月、24个月）取出 一些容器，重复挑战性试验（步骤同上）。
3.6微生物侵入试验用菌悬液经灭菌后丢弃。
三、试验步骤
4、结果评价:
4.1步骤2、3.4中进行的营养试验和3.5.2中 进行的阳性对照试验都合格，微生物侵 入试验才有效。
三、试验步骤
4.2挑战试验中A组和B组如有长菌，需记录长菌 的试样数。在A组中如出现长菌，则须按下述 要求作进一步调查。
4.2.1仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查 容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。 4.2.2将观察到试样品封口的缺陷，采用拍照或其 他适当方式详细记录。
二、试验准备
3.3将灭菌后的培养基（TSB配制液）通过 未装滤膜及滤芯的过滤系统，在灌装机 的数控器上调节好装量（3.5ml）进行灌 装半加塞。
3.4将灌装半加塞的培养基在百级层流保护 下转移至冻干机内抽真空，Байду номын сангаас束后全压塞、 出箱、轧盖。
二、试验准备
4、制备微生物菌悬液：
4.1从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上 取一整环培养物，分别接入含6ml无菌培养基的 试管中，在30～35℃下培养18～24h。 4.2将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基 的容器内，于30~35℃下培养18～24h。在培养结 束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。 4.3在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度 （活菌数）必须达到1×106CFU/ml。
试验准备
试验准备
洗
瓶
胶塞处理
培养基
菌悬液
二、试验准备
批量：1000瓶/批 1、洗瓶: 清洗西林瓶1100只，经305℃干热灭菌12分钟 后送至灌装间备用。
2、胶塞处理: 清洗胶塞1100只，经121 ℃湿热灭菌20分钟后 备用。
二、试验准备
3、配制培养基:
3.1 预先对配制、灌装系统按照冻干粉针剂无菌操 作要求进行清洁、灭菌。 3.2 按照培养基生产厂商要求，每批按 TSB（胰 酪胨大豆肉汤培养基）32.3g，加1L注射用水 的比例进行配制，加热溶解并标定至4.5L，置 于灭菌柜中用纯蒸 汽121℃灭菌20min。
三、试验步骤
图1 微生物挑战试验示意图
三、试验步骤
3.3将A组和B组试样品在菌悬液中持续浸泡约4h 后，取出试样品，擦干试样品容器外残余的菌 悬液，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消 毒五分钟（注意不要破坏其密封口）。
3.4从1.2试样品中另取有盖和去盖的培养基各两 个，做阳性对照。阳性对照试样品不经菌悬 液浸泡，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙 醇消毒五分钟后，接种10～100CFU铜绿假单 胞菌，按营养试验的步骤进行阳性对照试验。
三、试验步骤
3、微生物侵入试验操作步骤:
微生物培养及侵入试验应在不影响生产 环境的地方（中心化验室阳性室）进行。
三、试验步骤
3.1 将新鲜的铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的 菌悬液倒入适当的容器内，用试管架固定 试样品。
3.2 从上述1.2试样品中再取50只带盖试样品为 A组，另取25个去盖 试样品为B组，均倒 置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充 分接触封口内表面，试样品的颈部及封口 的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如下图 1所示）。
再 验 证 周 期
四、再验证周期
1、当轧盖设备发生变化时应进行再验证;
2、改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材质 时应进行再验证。
三、试验步骤
2.1.1若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品 中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌 生长能力可判为合格。使用革兰染色后，并置 于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试 样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌， 即为阳性。
2.1.2若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品 中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌 种污染，则试验失败，需重新作营养试验。
三、试验步骤
1.3在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长 菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重 新从头开始试验。
三、试验步骤
2、确认培养基促菌生长能力―营养试验：
2.1所有试样品培养14天均不长菌时，从上述1.2 试样品中随机取20个带盖试样品，每个试样 品内接种100CFU铜绿假单胞菌。在30～35℃ 下培养7天，或培养至所有试样品都呈阳性结 果。
轧盖密封完好性试验
目
一、概 述
录
二、试验准备
三、试验步骤
四、再验证周期
概 述
一、概述
1、试验目的：用微生物侵入试验对冻干粉针剂 车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧 盖后容器密封系统的完好性。 2、试验概述：取西林瓶灌装入已灭菌培养基， 在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。此后， 将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出 并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系 统的完好性。同时，须做阳性对照试验，确认 培养基的促菌生长能力。
试验步骤

营养试验
微生物侵入试验 阳性对照实验 微生物侵入试验后 营养试验



三、试验步骤
1、试验样品的制备:
1.1从1000瓶培养基中取150瓶作为本次试验的试 样品。
1.2用剪刀轻轻从斜侧面去除至少50瓶试样品的整 个铝盖（注意不要破坏其密封口，将去铝盖时 不慎损坏容器密封性的所有试样品剔除），另 取80瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培 养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～ 35℃竖立倒置培养14天。