维生素B12检测作业指导书医学检验

《文件已阅声明表》

《Procedure circulation form》

文件名称: 维生素B12检测作业指导书表号:KM-MP03.02.02

《文件修改记录页》

《Procedure amendment form》

表号:KM-MP03.02.03

《文件信息表》

《Procedure information form》

表号:KM-MP03•02•04

维生素B12检测作业指导书

（Standard operation procedure for analysis of Vitamin B12）1 原理（Test principle）：

采用竞争法原理，整个过程27分钟完成。

●第1步：15μl标本与维生素B12预处理试剂1和预处理试剂2混匀，结合的维

生素B12被内源性内因子释放。

●第2步：将预处理标本与钌标记的内因子混匀，形成维生素B12-结合蛋白复合物，

其数量取决于标本中待测物的浓度。

●第3步：加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的维生素B12，后者与钌标记的

内因子上仍未占据的位点结合，形成钌标记的内因子-生物素标记的维生素B12复合物。此复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。

●反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液

洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

●检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从

试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。

2 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）：

2.1采集要求(specimen collection)：采血前病人应空腹。

●血清（serum）：按标准常规方法采集。

●血浆（plasma）：肝素锂和EDTA-K3抗凝。

2.2标本用量（volume）：常规抽血量最少2ml,最少血清/血浆标本量为0.6ml,单次用

量50ul,仪器加样量(sample volume)15ul。

2.3标本储存条件(sample storage)：标本2-8℃可稳定2天， -20℃可稳定2个月。

只能冻融1次，避光保存。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的血清。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。

2.4拒收(specimen rejection)：溶血、脂血、黄疸标本拒收，

3 试剂（Reagent）：

3.1 Elecsys维生素B12试剂盒，货号11820753

3.1.1试剂内组份：

试剂包装，100个测试

PT1：预处理试剂1

PT2：预处理试剂2

M：链霉亲和素包被的微粒

R1：钌标记的内因子

R2：生物素化的维生素B12

3.1.2未随试剂盒提供的组分

●Elecsys 维生素B12定标液（CalSet）货号11820869

●Elecsys 通用质控品（PreciControl）货号11731416或伯乐质控品（BL）1和3 ●Elecsys通用稀释液货号1732277

●Elecsys系统缓冲液（ProCell M）货号12135019

●Elecsys测量池清洗液（CleanCell M）货号12135027

●Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141

●Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)

货号12102137

●Elecsys废物盒(wasteliner)货号03023150

●Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) )货号03027651

●Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298500

3.1.3储存和稳定性：

●存放在2－8 度，切莫倒置。

●未开封，可稳定至标明的保质期

●开封后，2－8 度 12周；

●放在Elecsys601上，8周；

3.2试剂准备(reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results.

4 仪器（Instrument）：Elecsys Cobas 601。

仪器准备（Prepare apparatus）：使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液（SysClean）、测量池清洗液(CleanCell M)、反应杯/吸样头盒（AssayCups/AssayTips Combimagazine M)、废物袋(WasteLiner)、系统缓冲液

(ProCell M)的足够。然后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。

如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。

将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/并试剂瓶盖。

5 安全防范（Safety Precautions）：

操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6 校准（Calibration）：

6.1 校准品：Elecsys Cobas 601原装校准品。

要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material。Use it within expiration date，storage in2-8℃。

复溶：用复溶专用加样枪准确吸取1ml去离子水于瓶中，溶解静置30分钟，混匀并用盖容器分装200ul/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于-20℃冻存备用。Label confecting date,calibration lot。Person who confected，expiration date。

复溶后校准品成分的稳定性：

保存于-20℃，可稳定2个月。

6.2每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：

●试剂批号改变(Reagent lot changes)

●同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）。

●同一试剂盒在分析仪上使用超过7天

●根据需要：如质控数据超过额定的限度。Recalibration based on quality control

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6.3步骤：在校准（CALIBRATION）菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少200ul的1、2校准品并放到已指定位置的校准架中，后放入样本通道中。然