维生素B12注射液含量测定
8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12含量的测定(实训案例)
维生素B12含量的测定（实训案例）以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素B12含量的方法。
2.1.紫外分光光度法的测定原理维生素B12在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。
在361nm 波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。
2.2仪器与试剂752N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。
3．维生素B12注射液含量测定步骤准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。
然后将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。
4.结果记录与计算4.1数据记录将所测数据填入下表。
6-2数据记录表4.2.结果计算注射液含量按下式计算。
样品中的维生素B12计算公式：式中 V---样品中维生素B12的含量，mg/mLB12A-----待测溶液的吸光度；-----比色皿的矫正值（吸光度）；AD-----供试样品的稀释倍数；注射液的标示量)，mg/mLW-----样品质量(VB12---吸收系数为207五、注意事项1. 测定过程需避光操作。
2. 在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。
即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差∆T应不大于0.5%。
3. 维生素B12在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，在pH值4.5～5.0弱酸条件下相对稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。
4. 为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。
5. 比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。
过满溶液可能溢出，使仪器受损。
维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析
实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。
二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。
维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。
通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。
维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。
药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。
361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。
药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。
三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。
2．试样维生素B12注射液。
四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。
2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。
五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。
2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。
按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。
实验八维生素B12注射液检验
实验八 维生素B 12注射液检验（吸收系数法和标准曲线法）一、实验目的1、掌握维生素B 12注射液的紫外分光光度法鉴别及含量测定2、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。
二、主要仪器与试药维生素B 12注射液、维生素B 12对照品紫外-可见分光光度仪、石英比色皿、10ml 容量瓶（4个）、5ml 吸量管三、实验准备1. 0.1mg/ml 维生素B 12贮备液：精密称取干燥至恒重的维生素B 1210mg ，置100ml 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
四、实验内容实验原理：维生素B 12分子结构中有共轭体系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。
实验方法：精密量取本品适量，加水稀释至维生素B 12浓度约为25 μg/mL ，作为供试液，照分光光度法，在278nm ，361nm ，550nm 处测定吸光度。
1. 鉴别：规定A 361/ A 278 应为1.70-1.88， A 361/ A 550应为3.15-3.45 。
2. 含量测定吸收系数法：利用上述361nm 处测定得到的吸收度，按其吸收系数E 1％1cm =207 计算含量及标示量百分含量。
标准曲线法：精密量取1.0、2.0、3.0、4.0ml 0.1mg/ml 维生素B 12贮备液，分别置于10ml 量瓶中，用水稀释至刻度。
以溶剂为空白，在361nm 处分别测定吸收度（A ）。
以浓度C 为横坐标，以吸收度A 为纵坐标绘制标准曲线。
将样品在361nm 处测定得到的吸收度代入线性回归方程，计算，即得。
五、计算公式本品为注射剂，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为： 按标准曲线法定量计算： ％稀释倍数标示量％标示量标示量实测100C 100C ×××==E A C％稀释倍数标示量％标示量供标示量实测100C C ××==C C（C 供由A 供代入线性回归方程求得）六、思考题1. 如果取注射液水2ml 稀释30倍，在361nm 处测定A 值为0.698，试计算注射液每1ml 含 B 12多少？如果每1ml 标示量为1mg ，则计算标示量％2. 维生素B 原料药和维生素B 注射液所用的含量测定方法有何不同？3. 吸收系数法与标准曲线法的区别？。
维生素B12注射液的含量测定
维生素B12注射液的含量测定维生素B12是人体必需的营养素之一，它参与脂肪代谢、细胞DNA合成以及神经系统功能的维持等重要生理功能。
因此，维生素B12在医药、保健品和食品等领域中得到了广泛应用。
维生素B12注射液是治疗缺乏维生素B12症状的一种有效途径，适用于恶性贫血、营养不良性贫血、神经系统疾病等疾病的治疗。
维生素B12注射液的主要成分为羟基钴胺素，其品质的好坏对治疗效果十分关键。
因此，对于维生素B12注射液中羟基钴胺素含量的准确测定显得尤为重要。
1.实验仪器和试剂（1）分光光度计（2）枸磺酸和磷酸二氢钾混合液（3）硫酸氢钠溶液（4）含有维生素B12的标准品（5）无水氢氧化钠（6）乙醇2.实验方法（1）标准曲线法准备一系列不同浓度的含有维生素B12的标准品溶液，分别为 2、4、6、8 和 10μg/mL。
取相应浓度的标准品溶液 1.0 mL，加入混合溶液 3.0 mL，用 0.1 mol/L 硫酸氢钠溶液调节溶液 pH 值至 4.2 左右。
最后，用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液稀释至 10 mL，并用分光光度计在 361 nm 波长下测定吸光度。
绘制标准曲线，横坐标为不同浓度的标准品溶液浓度，纵坐标为对应的吸光度值。
利用标准曲线计算样品中维生素B12的含量。
（2）内标法计算维生素B12含量的公式为：维生素B12含量=（样品吸光度-双内标吸光度）/标准曲线斜率。
3.实验注意事项（1）所有试剂应使用纯化和高质量的试剂。
（2）稀释过程要求温度稳定不变，否则会影响结果的准确性。
（3）为确保测定结果准确，对于同一种方法应进行多次实验并取平均值。
总之，维生素B12是人体必需的营养素，维生素B12注射液的含量准确测定对于治疗效果的提高至关重要。
在实验过程中，要严格控制实验基质环境和检测仪器的精准性，以保证测定结果的准确性和可重复性。
维生素B12的定性定量检测
维生素B 12的定性定量检测一、实验目的和要求1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2. 掌握吸收曲线的绘制；3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。
二、实验原理维生素B 12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B 12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B 12的含量。
三、实验步骤 1、溶液配制用加样器移取维生素B 12注射液500μl ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B 12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B 12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B 12，即为合格药品。
EE %1nm 550cm 1%1)nm 361cm 1）（（=AA nm 550nm 360）（）（=136.0467.0=3.432、定量检测根据浓度25μg/ml 维生素B 12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B 12注射液含量，结果在90.0~110.0之间，表明维生素B 12注射液含量合格；其中207维生素B 12为在波长的吸收系数，20为稀释因子。
维生素B 12含量=）标示量（ml /g 20207Anm361⨯x100％=100)/(5.020207467.0x ml mg ⨯=90.2五、实验体会1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。
误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液
【实验内容】
1. 对照品溶液和样品溶液的配制
准确称取维生素B12 对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。
精密吸取维生素B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测
样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液）。
2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别
取对照品溶液进行光谱扫描（250 ~ 600 nm），得到维生素B12 的吸收曲线，寻找吸收峰，
扫描后可得到在278nm，361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰，然后在以上3 个吸
收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度，并计算A361/A278 和A361/A550 的比值。
3. 维生素B12 的定量测定
根据吸收曲线选择最大吸收波长（在361 nm 或附近）作为测量波长，测量维生素B12
【注意事项】
1. 注意石英比色皿的操作使用；
峰位置波长略有差异。
这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须对仪器进行定期的校正。
3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？
吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。
校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于测定。
因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。
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《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案
《维生素B12注射液含量测定》
项目教学案例：维生素B12注射液含量测定
一项目任务：维生素B12注射液含量测定
1 适用专业：中专药剂、检验专业
2 适用岗位： QC人员
3 学习时间：2课时
二教学设计的指导思想
在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。
但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。
我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。
采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。
三项目教学目标：
根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。
1.知识与技能目标：
1）学会查阅所需检验药品的质量标准；
2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；
3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；
2.过程与方法目标：
1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；
3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；
3.情感与价值观目标：
1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；
2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；
四教学重点和难点
项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。
由于学生缺乏综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力，对具体的项目往往不知如何下手，因此工作项目的分解也成为难点。
重点：（1）将工作项目分解为具体的工作任务；
（2）分组完成各项工作。
难点：工作项目的分解。
3根据工作项目，分解工作任务（ 10分钟）
将工作项目分解为必须完成的、具体的工作任务，这是开展项目教学的前提。
教师首先要提出明确的工作项目，组织并引导学生通过讨论将工作项目进行分解，分解成相应的具体工作任务：
（1）如何查阅药品质量标准（中国药典2005年二部），找到维生素B12注射液的质量标准内容；
(2)根据维生素B12注射液的质量标准内容和检验任务分析实验步骤、实验所用试药、所用仪器；
(3)进行试药及仪器的准备工作并进行所需检验药品的核对．按请验单领取所需检验药品，核对品名、批号、规格；
(4)准确配制一定浓度的溶液；
(5)测定吸收值；
(6)数据记录并计算并进行结果判断；
(7)检验原始记录的记录(见学案)；
(8)填写仪器使用记录并清理实验台面及仪器清洗
4学生分组，收集相关信息（15分钟）
要完成以上7项具体的工作任务，需要应用溶液浓度的有关计算、郎伯-比尔定律、制剂含量计算等知识和一定浓度溶液的配制方法、使用紫外分光光度计测定物质溶液的浓度等实验技能。
为了使学生人人参与、实现有效地自主和合作学习，将学生按上、中、下三个层次搭配分成若干个学习小组，每组约4-6人，选出组长；各小组围绕工作项目
搜集相关信息。
对于基础一般或较差的班级，教师需要给予适当的引导和指导。
5制订工作计划（10分钟）
如何将搜集到的知识和技能信息转化为完成工作任务的程序和步骤，是顺利完成工作项目的保证。
为此，开展工作前必须指导学生根据工作任务的目标和要求，利用搜集到的信息，制订具体而明确的工作计划，确定工作步骤、程序、组内分工和组员合作方式，并与教师交流以得到认可。
教师根据学生的基础水平、各小组的实际情况进行适当的点拨、指导、示范。
6实施工作计划（30分钟）
各小组按照拟定的方案、步骤和程序实施工作计划，这是项目的实施阶段，也是教学成败的关键，为此，特别强调教师的指导与学生的合作和互助。
7项目教学评价及总结（15分钟）
1）各小组完成工作后，以小组为单位提交一份检验原始记录，在小组之间进行展示，并交叉检测。
2）以各组组长为主，教师组织全体学生对各小组的工作方案、过程及结果进行讨论，找出成功与不足之处，注意要对工作中出现的问题、学生解决问题的方法进行评价，并对各小组的学习成效进行组间互评，再通过结对的方式，由成功的小组帮助不足的小组进行适当的“补救”。
3）各小组成员根据本小组完成工作的情况、自己的参与程度及所起作用对学习成效开展自评和组内互评，教师则对学生的工作进行检查和评
价。
各小组长根据学生自评、组内互评及教师评价三方面情况计算每位学生本次学习的成绩。
8成果应用
根据评价，让学生将《维生素B12注射液含量测定》进行系统整理，在课后练习写出维生素B12注射液含量测定的标准检验操作规程（SOP）
附学案：
检验原始记录
检验记录编号成检字第号年月日
检品批号检品名称
生产厂家
检验目的□鉴别□检查□含量测定检验依据
仪器型号溶剂
波长范围及选用波长空白吸收值
吸收池配对情况
供试品溶液配制方法：
检验数据及图谱：
计算过程：
结论：
年月日。