维生素B12注射液的定性鉴别及含量测定2
8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析
实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。
二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。
维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。
通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。
维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。
药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。
361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。
药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。
三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。
2．试样维生素B12注射液。
四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。
2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。
五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。
2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。
按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12注射液(双语)
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B 12注射液【目的要求】1．掌握紫外分光光度计的基本结构及使用方法；2．掌握维生素B 12注射液的鉴别和含量测定方法。
【实验原理】1. 紫外分光光度计的组成与结构紫外分光光度计主要由光源（D 灯、W 灯）、单色器（棱镜、光栅、滤光片）、吸收池、检测器（光电管、光电倍增管、光电池）以及信号放大处理和显示系统等部分组成，其基本结构和工作流程如同21-1所示。
图21-1 单光束紫外分光光度计的基本结构2. 维生素B 12的定性鉴别由于物质的性质和结构不同，物质对光的吸收是具有选择性的。
维生素B 12的吸收曲线反映了其化学结构的基本特征，分别在278nm 、361nm 和550nm 波长处有三个吸收峰，因此可通过它的吸收光谱的特征，利用其特征吸收值之间的比值A 361/A 278和A 361/A 550进行定性鉴别，并了解维生素B 12的纯度，药典规定：A 361/A 278和A 361/A 550的比值应分别在1.70~1.88和3.15~3.45之间。
3. 维生素B 12注射液的定量分析由于维生素B 12在361nm 处的溶液吸收最强（2071%1cm,361nm =E ），且干扰因素少，因此以361 nm 作为测量波长，在此波长下测量其溶液的吸光度A ，采用吸光系数法直接测定浓度，按下式计算维生素B 12的百分含量：由 Cl E A 1%1cm = 则 g/ml)( 31.481020741%1cm μA A l E AC ×=×== %1005.031.48(%)VitB 12×××=∴n A （n 为稀释倍数） 【仪器与试剂】１. 仪器光闸TU1810紫外-可见分光光度计，1 cm石英比色皿。
２. 试剂维生素B12对照品，维生素B12注射液（标示量0.5 mg/ml）。
【实验内容】1. 对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。
维生素B12注射液的定性鉴定及含量
代替。
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色 结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实验原理
通过对最大吸收峰处吸光度比值的计算，可对 其进行实性鉴定。中华人民共和国药典2000版 规定维生素B12的定性鉴定标准为：
E1% 1cm
361nm
A样 207
10
✓ 即为本试样稀释液1L中含维生素B12多少克。
✓ 将此值乘以稀释倍数，即得1L原注射液含维 生素B12多少克（g/L）。
实验步骤
1. 参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。
接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
维生素B12注射液的定性鉴 定及含量的测定
实验目的
了解紫外—可见分光光度计的构造及正确 使用方法。
掌握吸收曲线的绘制方法。 掌握紫外—可见分光光度法对物质的定性
鉴定和含量测定。
实验原理
紫外分光光度法仍然是基于Lambert—Beer 定律
A = k·c·b
其中k为吸光系数。在条件改变时，吸光
E1% 1cm
361nm
E1Байду номын сангаас 1cm
278nm
A361 A278
1.70 ~ 1.88
E1% 1cm
361nm
E1% 1cm
550nm
A361 A550
3.15 ~
3.45
实验原理
维生素B12注射液含量测定是依据标准维生素
B12的
E1% 1cm
VB12注射液鉴别实验教学
2、定量分析
样品名称 所用仪器 型号 测定序号 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 1 检验日期 检测波长 2 3
数据处理
计算样品标示量（含量）
对照样品标示量%=90%-110%，合格
结果讨论
1、试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优 缺点。
2、利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液 在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰 波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解 释。
数据记录
1、定性鉴别
波长（nm） 峰3 277 278 279 峰2 360 A 0.421 0.423 0.403 0.761
A361 /A550=3.15~3.45
A361 /A278=1.70~1.88
361
362 峰1 549
0.778
0.756 0.245
550
551
0.246
0.243
按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
4 检测器 5 信号显示系统
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用方法
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
1.接通电源，开机预热钟
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
2.调节波长
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
3.比色皿加样，依次放入比色槽中 注意：手拿比色皿毛 面，高度为比色皿的 2/3。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
4.调“100%”：光标调到T,将参比溶液对准光路， 按“100%”，仪器自动校正；完毕后显示“100.0”， 即T=100%。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
5. 测定吸光度：将样品溶液对准光路，仪器数值 变动；完毕后显示即样品溶液的吸光度。
维生素B12注射液含量测定
《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。
但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。
我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。
采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。
三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。
1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。
04-维生素B12注射液检验+05-药用辅料苯甲酸钠的质量分析
预习：实验八、戊巴比妥的鉴别及含
量测定
实验九、维生素AD胶丸中维生
素A的含量测定
实验四 维生素B12注射液检验
一、实验目的
掌握维生素B12注射液的紫外分光光度法鉴别及
含量测定
掌握吸收系数法定量测定的计算公式。
二、实验原理
维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫外 吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。
三、实验内容：
（一）定性鉴别：
1、供试液配制：本品针剂1支（0.5mg :1ml）+水→ 25ml 2、比色测定：278nm，361nm，550nm处测定A值 规定：A361/A278 = 1.70~1.88，A361/A550 = 3.15~3.45
掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的基本原理
掌握双相滴定法的基本操作和实验技巧
二、实验原理
苯甲酸钠水溶液呈碱性，若直接用盐酸滴定液滴定，则滴 定过程中析出的苯甲酸不溶于水，且会使滴定终点的pH突跃 不明显，影响滴定终点的正确判断。因此，采用双相滴定法测 定含量。在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂乙醚，则滴定 过程产生的苯甲酸不断萃取入乙醚层中，减少苯甲酸在水中的 浓度，使滴定反应进行完全，终点清晰。
（二）含量测定：
1、吸收系数法： 2、标准曲线法： A A供
A361 A 361 稀释倍数 25 E 100 207 100 标示量% 100% 100% C标示量 0.0005
精密量取VB12贮备液(0.1mg/ml）1.0ml
4.0ml 10ml 40μg/ml C供 C H2O为空白，361nm处测得吸光度A。C为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲 线，得C供。
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实验十一 维生素B 12注射液的定性鉴别及含
量测定
实验者：李丽贝 合作者：倪佳琴
一、实验目的
1.1掌握722G 型分光光度计的操作方法 1.2熟悉定性鉴别及定量测定方法
二、实验原理
维生素B 12注射液为含钴的有机药物，为粉红色至红色的澄明液体，用于治疗贫血等疾病。
维生素B 12在278±1mm 、361±1mm 与550±1mm 波长处最大吸收，根据其吸收光谱的形状和最大吸收波长下吸光度比值，可进行定性鉴定。
测量最大吸收波长下吸光度，可算出供试品浓度。
三、实验仪器与试剂
仪器 722G 型分光光度计，玻璃洗手池，容量瓶（10ml ），吸量管（1ml ） 试剂 维生素B 12注射液（1ml ：0.5mg ）
四 、操作步骤
4.1定性鉴别 根据中国药典（1995年版）规定，取含量测定项下的溶液，在361±1nm 与550±1nm 处测得的吸光光度比值应为3.15~3.45，即为合格。
4.2定量分析 精密量取本品适量，加水定量稀释成1ml 含维生素B 1225ug 的溶液，在361±1nm 处测得吸光度，维生素B 12的吸光系数（E 1%1cm ）按207计算，即得可求得样品的含量
五、实验结果 1.
（1）定性鉴别（吸光度比值）
结果=3.357
(规定为3.15~3.45)
1% E 1cm 1% E 1cm 361nm 361nm = A 361nm A 550nm
（2）定量分析（吸光系数法）
A/E1%1cm x1/100x稀释因子
标示量%= x100% =90.821
标示量（g/ml）
(规定为90.0~110.0)
六、实验体会
这个实验要求我们能正确使用分光光度计，所以还得提前捉摸一下，在这个实验过程中出现了与实际不符合的情况，应该是由于我们的操作失误，又因为数据与数据之间相差很小，所以更加需要细心，在老师的帮助下，顺利的得到了较为准确的数据，体会到自己仍应该更用心地去学习。
七、附加资料
主要功能
1.促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血；维护神经系统健康
2.以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；
3.具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有重要作用。
4.代谢脂肪酸，使脂肪、碳水化合物、蛋白质被身体适当运用
5.消除烦躁不安，集中注意力，增强记忆及平衡感
6.是神经系统功能健全不可缺少的维生素，参与神经组织中一种脂蛋白的形成，
一是提高叶酸利用率，与叶酸一起合成甲硫氨酸（由高半胱氨酸合成）和胆碱，产生嘌呤和嘧啶的过程中合成氰钴胺申基先驱物质如甲基钴胺和辅酶B12，参与许多重要化合物的甲基化过程。
维生素B12缺乏时，从甲基四氢叶酸上转移甲基基团的活动减少，使叶酸变成不能利用的形式，导致叶酸缺乏症。
二是维护神经髓鞘的代谢与功能。
缺乏维生素B12时，可引起神经障碍、脊髓变性，并可引起严重的精神症状。
维生素B12缺乏可导致周围神经炎。
小孩缺乏维生素B12的早期表现是情绪异常、表情呆滞、反应迟钝，最后导致贫血。
三是促进红细胞的发育和成熟。
将甲基丙二酰辅酶A转化成琥珀酰辅酶A，参与三羧酸循环，其中琥珀酰辅酶A与血红素的合成有关。
四是维生素B12还参与脱氧核酸（DNA）的合成，脂肪、碳水化合物及蛋白质的代谢，增加核酸与蛋白质的合成。
缺乏症状
1.恶性贫血（红血球不足）
2.月经不顺
3.眼睛及皮肤发黄，皮肤出现局部（很小）红肿（不疼不痒）并伴随蜕皮；
4.恶心，食欲不振，体重减轻
5.唇、舌及牙龈发白，牙龈出血
6.头痛，记忆力减退，痴呆
7.可能引起人的精神忧郁，
8.引起有核巨红细胞性贫血（恶性贫血）
9.脊髓变性，神经和周围神经退化
10.舌、口腔、消化道的粘膜发炎。
11.小孩缺乏维生素B12的早期表现为精神情绪异常、表情呆滞、少哭少闹、反应迟钝、爱睡觉等症状，最后会引起贫血。
副作用：有些病人对本品有过敏反应，甚至过敏性休克，使用时应注意
主要食物来源
1.动物肝脏、肾脏、牛肉、猪肉、鸡肉、鱼类、蛤类、蛋、牛奶、乳酪、乳制品、腐乳
2.维生素 B 12 不易被胃吸收，大部分是经由小肠吸收，故长效型锭剂效果较好
3.若出现食欲不振、消化不良、舌头发炎、失去味觉等症状，便是缺乏维生素 B 12 的警讯
4.严重缺乏维生素 B 12 时，医师多会以注射方式补充
5.老年人对维生素 B 12 的吸收较困难，可至医院透过注射方式补充。