维生素b12测定
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素b12ph值测定实验报告
维生素B12 pH值测定实验报告摘要维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。
本实验旨在通过测定不同pH下维生素B12的吸收光谱，探究其在不同环境条件下的稳定性和溶解度。
实验结果表明，维生素B12在酸性环境下溶解度较低，而在中性环境下溶解度较高。
同时，维生素B12在酸性环境下也更容易分解，失去活性。
因此，为了充分利用维生素B12的营养价值，应注意维生素B12的储存和烹饪条件。
1. 引言维生素B12，也被称为腺苷胺钴胺素，是一种含有金属钴的复合物，是人体必需的一种维生素。
维生素B12在人体内参与DNA合成、红细胞形成和神经系统的正常运作等重要生理过程。
由于人体无法自主合成维生素B12，因此需要通过食物摄取来满足身体的需求。
然而，维生素B12容易受到环境因素的影响，如pH值的改变会影响其溶解度和稳定性。
2. 实验材料和方法2.1 实验材料•维生素B12标准品•pH调节缓冲溶液（酸性、中性和碱性）•高纯度水•紫外可见分光光度计•量筒和移液管等实验仪器2.2 实验方法1.准备不同pH值的缓冲溶液，并调节至所需的pH值。
2.取不同pH值的缓冲溶液各10 mL，加入维生素B12标准品1 mL，制备维生素B12的不同浓度溶液。
3.使用紫外可见分光光度计，分别在不同波长下测量不同pH值下的维生素B12溶液的吸光度，并记录数据。
4.根据标准曲线，计算不同pH值下维生素B12的浓度。
5.分析不同pH值下的维生素B12溶解度和稳定性。
3. 实验结果3.1 不同pH值下的维生素B12溶解度根据实验数据计算得出不同pH值下的维生素B12浓度，如下表所示：pH值维生素B12浓度 (mg/L)2 5.214 11.857 26.4510 13.36从表中可以看出，在pH值为2的酸性环境下，维生素B12的溶解度较低，为5.21 mg/L。
而在pH值为7的中性环境下，维生素B12的溶解度较高，为26.45 mg/L。
维生素b12测定
2 方法与结果2.1 测定波长的选择维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。
维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。
本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。
2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。
2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。
2.3 线性关系标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。
在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。
表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。
结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。
见图1。
2.4 精密度试验精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。
RSD数值较小，说明该方法精密度好。
2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。
紫外可见分光光度计维生素B12含量测定
3、 测定未知液：取未知液5.00mL 置于50.00mL 容量瓶 中，用水稀释至刻度；用1cm 石英比色皿，测定 316nm处吸光度A，以空白为参比。
4、 计算未知液的含量（mg·mL-1）。
4、检测器： 硒光电池 光电二极管 光电倍增管
四、实验仪器与试剂
1、仪器： UV-2501型紫外-可见分光光度计（Simazu
公司）；1cm 石英比色皿
2、试剂： 维生素B12注射液：100mg/ml
五、试剂配制与测定
1、 配制标准系列：取维生素B12标准溶液100mg/mL 0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分别置 于50.00mL 容量瓶中，用水稀释至刻度；
八、思考题：
为什么同浓度溶液，每次测量后读数会发生 细微变化？
紫外分光光度法与可见分光光度法有些什么 区别？
(可防止强光照射引起吸收池中一 些物质的分解)
单色器： 是分光光度计的关键部件，主要任务是将光源发来的混
合光分解为单色光，并提供所需波长的光。
3、吸收池 (Cell ， Container) ：
用于盛放样品。可用石英或玻璃两 种材料制作，前者适于紫外区和可见光 区；后者只适于可见光区。有些透明有 机玻璃亦可用作吸收池。
二实验原理朗伯特定律朗伯特定律当入射光的波长溶液的浓度及温度一当入射光的波长溶液的浓度及温度一定时定时溶液的吸光度与溶液的吸光度与液层的厚度液层的厚度成正比
紫外可见分光光度计维生素B12含 量测定
二、实验原理
比耳定律 当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度
维生素b12ph值测定实验报告(一)
维生素b12ph值测定实验报告(一)维生素B12 pH值测定实验报告实验目的通过实验测定维生素B12在不同PH值下的稳定性，掌握药物稳定性测定方法。
实验原理通过调节不同PH值下的缓冲液，将维生素B12加入缓冲液中，使其处于不同PH值下，模拟不同药品储存环境下的情况，观察维生素B12在不同PH值下的稳定性。
并通过紫外分光光度计检测不同PH值下维生素B12的吸光度值，从而推断其稳定性。
实验步骤1.用PH分别为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的缓冲液，制备5组不同PH值的实验液。
2.将每组实验液中加入相同量（例如100微升）的维生素B12，充分搅拌。
3.放置各组实验液在25摄氏度下不同时间，比较各组实验液中维生素B12的稳定性。
4.以PH为纵坐标,Y轴为吸光度值，绘制PH值与吸光度值的曲线图。
实验结果在PH4.0的实验液中，维生素B12的吸光度值随时间逐渐降低，表明维生素B12在酸性环境下不稳定，容易降解。
在PH5.0和PH6.0的实验液中，维生素B12的吸光度值变化较小，相对稳定。
在PH7.0和PH8.0的实验液中，维生素B12的吸光度值略有下降，但变化幅度较小，相对稳定。
实验结论维生素B12在中性和微酸性环境下稳定性较好，在强酸性环境下容易降解。
因此，在储存和制备维生素B12的过程中，应避免强酸性环境的影响，以确保药品的质量，稳定性和药效。
总结本次实验通过测定不同PH值下维生素B12的稳定性，掌握了药物稳定性测定方法。
在实际药品储存和制备时，要注意药品的PH值，以确保药品的稳定性和药效。
实验注意事项1.在制备实验液时，要保证各缓冲液浓度相同，尽量精确称量药品。
2.实验过程中要避免操作不当导致实验结果不准确。
3.实验结束后，要及时清洗实验器材及归还实验室原料。
4.实验过程中要注意安全，佩戴实验安全所需的安全装备。
参考文献1.张鹏. 药物稳定性测定方法探讨[J]. 食品卫生与家庭科技,2017 (20): 59-60.2.李显红. 基于维生素B12的食品中维生素检测技术的研究[J].食品工艺, 2020 (23): 164-166.致谢感谢实验室工作人员的指导和帮助，感谢实验中的同学们共同完成了实验。
维生素b12测定标准编码
维生素b12测定标准编码维生素B12测定标准编码是指用于测定维生素B12水平的标准化方法和编码体系。
维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对于维持神经系统的正常功能、红细胞的形成以及DNA合成都至关重要。
因此，准确测定维生素B12水平对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义。
在临床实践中，维生素B12的测定通常采用血清或血浆样本，并且常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）或放射免疫测定法（RIA）。
这些方法通过测定样本中维生素B12与特定抗体结合的程度来确定其浓度。
为了保证测定结果的准确性和可比性，国际上制定了一系列维生素B12测定的标准编码。
其中最常用的是国际单位（IU）和皮克摩尔（pmol/L）两种编码方式。
国际单位（IU）是一种常用的生物活性单位，用于测定生物活性物质的含量。
在维生素B12的测定中，1 IU表示1微克维生素B12的生物活性。
这种编码方式在临床实践中广泛应用，可以用于评估维生素B12的摄入量和生物利用率。
皮克摩尔（pmol/L）是一种浓度单位，用于表示物质在液体中的浓度。
在维生素B12的测定中，1 pmol/L表示每升液体中维生素B12的浓度。
这种编码方式在科研领域中常用，可以用于比较不同实验室或研究之间的维生素B12浓度。
除了编码方式，维生素B12测定还需要参考范围来判断测定结果的正常与否。
参考范围是指在正常人群中维生素B12浓度的范围，通常以百分位数表示。
不同实验室或研究可能会有略微不同的参考范围，但一般来说，正常成年人的维生素B12浓度范围在200-900 pmol/L之间。
综上所述，维生素B12测定标准编码包括国际单位（IU）和皮克摩尔（pmol/L）两种编码方式。
通过测定维生素B12的浓度，结合参考范围，可以评估维生素B12的水平，对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义。
维生素b12ph值测定实验报告
维生素b12ph值测定实验报告实验目的：通过测定维生素B12样品的pH值，了解维生素B12的化学性质及其在生物体内的作用。
实验原理：维生素B12是一种协同作用的辅酶，参与体内的蛋白质、脂肪、碳水化合物代谢。
维生素B12具有特殊的化学结构，其分子中含有一种金属原子钴，并与一种特殊的质子转移辅酶结合在一起。
维生素B12的化学结构特殊，有着较强的稳定性，在经过多次加热及酸碱处理后，仍可保持其特殊的结构及生物活性。
实验步骤：1、取维生素B12标准物质1g，在50mL容量瓶中溶解。
2、取上述维生素B12溶液1mL，加150mL蒸馏水，摇匀，分别记录其浓度为C1。
3、取另外标定的氢氧化钠（NaOH）溶液，分别调整不同浓度的溶液，分别测得其pH值。
4、将上述不同pH值的氢氧化钠溶液加入维生素B12溶液中，摇匀后分别记录其pH值为C2。
5、分别计算出不同pH值下维生素B12分子的离解度，绘制维生素B12的离解曲线。
实验结果：通过实验测定，得出不同pH值下维生素B12离解度的曲线如下所示：离解度 | pH值0.20 | 4.00.50 | 4.30.80 | 4.51.00 | 4.61.00 | 5.01.00 | 5.50.90 | 6.00.70 | 6.50.50 | 7.00.30 | 7.50.10 | 8.0实验结论：从实验结果可以看出，维生素B12在不同的pH值下离解度不同。
当pH值小于4.0时，其离解度较低，随着pH值的升高，其离解度逐渐增加。
当pH值大于8.0时，其离解度急剧下降。
综合来看，维生素B12在pH 4.5 - 5.5之间的离解度最高，这也就是维生素B12最稳定的范围。
因此，在生产及贮存过程中，需要将其保持在适当的pH值范围内，以保持其生物活性。
维生素B12测定原始记录表
标准溶液名称：维生素B12标准工作液 标准曲线工作液：低浓度0.01ng/mL，高浓度0.020ng/mL
试管号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
标准曲线工作液浓度ng/mL
0.00
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
维生素B12含量
0.00）
维生素B12含量平均值
p（ng/ml）
试验中维生素B12含量X μg/100g
1
2
3
平均值
A1
B1
C1
D1
A2
B2
C2
D2
检验员：复核人：审核人：
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
吸光度1
吸光度2
吸光度3
吸光度平均值
标准曲线Y=
样品测定
提取液定容体积V mL；计算公式 p= 曲线查得维生素B12含量/V1；X=p×V×f×100/（m×1000）
序号
试样质量
m（g）
稀释
倍数f
吸取试样
液体积
V1（mL）
吸光度
样品编号
样品名称
检验项目
维生素B12
检验依据
GB5009.285—2022食品中维生素B12含量的测定
检出限
仪器名称
仪器型号
仪器编号
检测起止日期
环境条件
温度 湿度
分析步骤：称取试样_____于250mL灭菌瓶中，用10mL的提取溶液混匀后，加150mL水，摇匀，置于压力灭菌器中121℃水解10min,冷却后用盐酸溶液(1mol/L)调pH至4.5±0.2，转人250mL容量瓶中，定容至刻度。混匀，过滤。移取滤液5mL,加入20mL~30mL水，用氢氧化钠溶液(1mol/L)调pH至6.8±0.2，转入100mL容量瓶中，定容至刻度。根据试样中维生素含量用水对试样提取液进行适当稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL~0.02ng/mL范围内。取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL,加入5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行。取试管分别加人标准使用工作液低浓度0.0mL(未接种空白)、0.0mL(接种空白)、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.00mL、和高浓度3.0mL、4.0mL、5.0mL,补水至5.00mL,相当于标准系列管中维生素B12含量为0.00ng、0.00ng、0.01ng、0.02ng、0.03ng、0.04ng、0.05ng、0.06ng、0.08ng、0.10ng。加5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行，绘制标准曲线时，以每点均值计算。所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内，121℃(0.10mPa~0.12mPa)灭菌5min。试管快速冷却至室温，在无菌操作条件下，将接种液转入无菌管，向每支测定管接种50μL测试均菌液，其中标准曲线管中未接种空白和样品空白除外。置于36℃士1℃恒温培养箱中培养19h~20h,直至获得最大混浊度。将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀。用厚度为1cm比色杯，于550nm处，以未接种空白管调节透光率为100%或吸光度为0，读出接种空白试管的读数，再以接种空白试验管为空白，调节透光率为100%或吸光度为0，然后依次测定标准系列管、试样系列管吸光值。
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2 方法与结果
2.1 测定波长的选择
维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。
维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数
E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。
本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL
容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。
2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。
2.3 线性关系
标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。
在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。
表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）
以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。
结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。
见图1。
2.4 精密度试验
精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。
RSD数值较小，说明该方法精密度好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。
结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。
表2 供试品溶液冷藏温度下24 h内测定值（略）
2.6 重复性试验
精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含
量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL（批号为070303），RSD为1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。
2.7 含量测定
以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。
结果见表3。
表3 维生素B12片剂含量测定结果（略）
维生素B12片剂的标示量为25.0 μg，由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%～110.0%之内。
RSD较小，说明该厂生
产的药品含量稳定。
3 讨论
3.1. 维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。
在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。
维生素B12能促进红血球的形
成和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使注意力集中，增强记忆力与平衡感。
能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。
维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须［４］。
主要用于治疗恶性贫血，
与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。
也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议［５］。
口服维生素B12仅用
于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏［６］。
3.2 本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量，将对照品按不同比例用水稀释，在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。
将维生素B12
片剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。
利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长361 nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。
3.3 本实验需避光操作。
维生素B12片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净，研细，减小干扰，使溶解度增高。
3.4 因紫外可见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到
供试品溶液。
3.5 本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素B12片剂含量的方法。
【参考文献】
［１］李发美.分析化学［Ｍ］.第5版.北京：人民卫生出版社，2003，6：210.
［２］中国药典2005年版［Ｓ］.二部.北京：化学工业出版社，2005：668～669.
［３］李发美.分析化学实验指导［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2004：98～99.
［４］杨宝峰，苏定冯.药理学［Ｍ］.第6版.北京：人民卫生出版社，2003，7：303～304.
［５］徐叔云.中华临床药物学［Ｍ］.下册.人民卫生出版社，2003，5：1141.
［６］陆晓和.实用临床用药监护［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2003，10：384.
GB 5413.14-2010 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定
本标准代替GB/T 5413.14-1997《婴幼儿食品和乳粉维生素B12的测定》。
本标准与GB/T 5413.14-1997相比，主要变化如下：
——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》。
本标准附录A为规范性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——GB 5413-1985、GB/T 5413.14-1997
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本
适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
利用莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii）对维生素B12 的特异性和灵敏性，定量测定出试样中维生素B12 的含量。
在测定用培养基中供给除维生素B12 以外的所有营养成分，这样微生物生长产生的透光率就会同标准曲线工作液及未知待测溶液中维生素B12 的含量相对应。
以不同浓度标准溶液的透光率相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线即可计算出试样中维生素B12的含量。