维生素B12注射液含量测定 ppt课件
8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析
实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。
二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。
维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。
通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。
维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。
药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。
361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。
药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。
三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。
2．试样维生素B12注射液。
四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。
2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。
五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。
2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。
按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。
《维生素测定》课件
维生素B测定
维生素B是维持身体健康所必需的重要营养素。我们将介绍测定维生素B的方 法和操作步骤，并讨论实验注意事项以及解读和应用结果。
维生素D测定
维生素D在钙和磷的代谢中起着重要作用。我们将学习测定维生素D的方法和 操作步骤，并探讨实验注意事项以及解读和应用结果。
维生素测定的应用
除了在科学研究中的应用，维生素测定技术还在食品、保健品的检测以及临床医学中得到广泛应用。我 们还将展望维生素测定技术的发展和应用前景。
《维生素测定》PPT课件
通过本课件，我们将深入探讨维生素测定的方法和重要性，并了解各种维生 素的测定技术和应用。
么是维生素？
维生素是人体所需的有机化合物，可分为水溶性和脂溶性两类。我们将讨论 它们的定义、分类以及人体对维生素的需求。
维生素测定的意义
维生素含量的检测对于我们了解食物的营养成分非常重要。维生素缺乏或过量对健康有危害，我们将探 究这些危害。
维生素测定的方法
化学法
使用化学方法可以准确测定维生素的含量。我们将讨论这些方法的技术原理、操作步骤，以及它们的优 缺点。
生物学法
生物学法也是一种常用的测定维生素的方法。我们将介绍它的技术原理、操作步骤，以及它的优缺点。
维生素A、C、E的测定
我们将学习测定维生素A、C、E的方法和操作步骤，并探讨实验注意事项以 及解读和应用结果。
维生素B12的教学PPT
03
维生素B12缺乏的症状和影响
维生素B12缺乏的症状
消化系统症状
可能出现食欲不振、腹胀、腹泻 、便秘等症状。
精神症状
可能出现抑郁、焦虑、易怒等症 状。
01
02
贫血
由于红细胞生成减少，可能出现 贫血症状，如乏力、头晕等。
03
04
神经系统症状
可能出现记忆力减退、反应迟钝 、手足麻木、无力等症状。
维生素B12缺乏对神经系统的影响
维生素B12是红细胞形成的必需 营养素，有助于维持红细胞的正 常形态和功能，预防贫血和相关 疾病。
02
缺乏维生素B12可能导致巨幼细 胞性贫血，表现为贫血、乏力、 头晕等症状，严重时可能导致神 经系统受损。
维持神经系统健康
维生素B12是神经系统正常运作的重 要物质，参与神经递质的合成和代谢 ，有助于维持神经元的正常功能。
维生素B12的检测方法
血液检测
通过抽取静脉血液样本，检测血 清或血浆中的维生素B12水平。
尿液检测
检测尿液中维生素B12的排泄量， 但这种方法不如血液检测准确。
微生物培养
利用某些细菌对维生素B12的依赖 性进行检测，但这种方法较为繁琐。
维生素B12缺乏的诊断标准
血清维生素B12水平低于200 pg/mL：一般认 为这是维生素B12缺乏的阈值。
缺乏维生素B12可能导致神经系统病 变，如记忆力减退、情绪异常、肢体 麻木等症状，严重时可能导致痴呆和 神经性疾病。
参与蛋白质代谢
维生素B12在蛋白质代谢中发挥重要作用，参与氨基酸的合成和分解，影响身体 的生长和发育。
缺乏维生素B12可能导致蛋白质代谢紊乱，影响身体的正常生理功能，如影响伤 口愈合、免疫功能等。
VB12注射液鉴别实验教学
2、定量分析
样品名称 所用仪器 型号 测定序号 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 1 检验日期 检测波长 2 3
数据处理
计算样品标示量（含量）
对照样品标示量%=90%-110%，合格
结果讨论
1、试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优 缺点。
2、利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液 在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰 波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解 释。
数据记录
1、定性鉴别
波长（nm） 峰3 277 278 279 峰2 360 A 0.421 0.423 0.403 0.761
A361 /A550=3.15~3.45
A361 /A278=1.70~1.88
361
362 峰1 549
0.778
0.756 0.245
550
551
0.246
0.243
按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
4 检测器 5 信号显示系统
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用方法
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
1.接通电源，开机预热钟
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
2.调节波长
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
3.比色皿加样，依次放入比色槽中 注意：手拿比色皿毛 面，高度为比色皿的 2/3。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
4.调“100%”：光标调到T,将参比溶液对准光路， 按“100%”，仪器自动校正；完毕后显示“100.0”， 即T=100%。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
5. 测定吸光度：将样品溶液对准光路，仪器数值 变动；完毕后显示即样品溶液的吸光度。
维生素B12注射液含量测定
《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。
但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。
我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。
采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。
三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。
1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。
维生素的分析与检验-----维生素B12含量的测定
《生物产品的分析与检验》维生素的分析与检验-----维生素Ｂ12含量的测定目 录1. 认识维生素2. 维生素B12对人体的意义3. 维生素B12的性质4. 维生素B12测定方法一、认识维生素维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。
维生素广泛存在于动、植物和微生物体内。
维生素类物质的分类（按其溶解性质分）脂溶性维生素：主要有A、D、E、K等水溶性维生素：主要有B族（B1、B2、B12等）、维生素C、烟酸、叶酸、泛酸等。
维生素测定方法主要有化学分析法、比色法、分光光度法（紫外和荧光）、层析法、色谱法（气相色谱和高效液相色谱）和微生物法等。
二、维生素B12对人体的意义维生素B 12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。
自然界中的维生素B 12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12 维生素B 12是需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的惟一的一种维生素。
当人体肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。
植物性食物中基本上没有维生素B 12。
三、维生素B12的性质维生素B 12(vitamin B12)，又称钴胺素，是含钴的B族维生素之一;在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，遇强光或紫外线易被破坏。
维生素B 12在紫外区波长处有最大吸收。
在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长。
三、维生素B12含量测定方法◆测定维生素B12的方法有微生物法、比色法、紫外分光光度法、离子交换层析法、原子吸收分光光度法和高效液相色谱法。
紫外分光光度法是较常见的方法。
◆以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素Ｂ12含量的方法。
测定方法一、紫外分光光度法测定维生素Ｂ12含量（一）测定原理在紫外区278nm（纳米）、361nm与550nm波维生素B长处有最大吸收。
在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。
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6.吸光度测定 1.将参比液、测定液装于吸收池中。
A1=
2.以参比液为空白，测定吸光度，记录。 A2=
7.记录与计算 1.计算供试品的百分含量% 2.计算平均百分含量%
标示量%= 平均百分含量%
8.结果与判定 1.将测得的含量与药典规定值比较，得出 结论。 2.相对偏差均应在±0.5%以内。
相对偏差= 结论：
测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数（
E1% 1cm
）为
207计算，即得。
1. 实验原理
二、 任务分解
紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫 外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范 围内的的吸光度，对该物质进行定性和定量分 析的光学分析方法。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处
220
<0.8
340
<0.8
（通则0401） P56
三、实验实施
（二）. 供试品溶液的配制
维生素 B12注射液 水 10.00ml
平行配制2份
100ml
三、实验实施
1.移液管使用
三、实验实施
1.移液管使用
移液管、刻度吸管 移液管的的拿持
润洗
三、实验实施
1.移液管使用
吸液
调节液面
放出液体
三、实验实施
操作内容
数据记录
1. 杂散光的检查
定期检查
1.仪器检定
2.波长准确度、吸光度准确度检定。
3. 杂散光的检查
2.配制供试品溶液
精密量取一定体积定量稀释成规定浓度 的溶液。
供试品的名称、批号、 生产厂家。
3.比色皿配对
使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池 中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸 收池的透光率，如透光率相差在0.3%以 下者可配对使用，否则必须加以校正。
测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出 被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
二、 任务分解
2.计算
根据维生素B12注射液【含量测定】中内容要求 描述，“用水定量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液”。
【规格】（1）1ml：0.05mg （2）1ml：0.1mg （3）1ml：0.25mg （4）1ml：0.5mg （5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg
规格型号 北京通用T6
石英 10ml 100ml 500ml 100ml 2ml 500ml 塑料
数量 1台
1套 1支 2支 1支 1个 1支 1个 1个
用途 含量测定
含量测定 溶液配制 溶液配制 洗涤、稀释
稀释 定容 废液杯 移液
二、 任务分解
二、 任务分解
3. 制定计划 (3)操作步骤
测定步骤
（通则0401）
P55-56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
2.吸光度准确度 精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg
，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至 1000ml，用配对的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液为空 白，在235、257、313、350nm分别测定吸光度，然后换 算成 E11c%m，测得值应符合表1中规定的允差范围。
维生素B12注射液含量测定
ppt课件
1
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则0401），在361nm的波长处
表1 维生素B12注射液含量测定所需药品
药品名称
规格
数量
用途及可用量
维生素B12注射液 2ml：0.5mg/2盒
2盒
药品，1人
水
纯化水
500ml，1人 仪器清洗、溶剂
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
表2 维生素B12注射液含量测定所需仪器
仪器名称 紫外-可见分光光度计
石英比色皿 移液管 容量瓶 洗瓶 小烧杯 胶头滴管 大烧杯 洗耳球
（二）. 供试品溶液的配制
配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容 积一般不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比 较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2 份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴 别或检查可取样品1份。
（通则0401） P56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
表1 分光光度法允差范围
波长 235 257 313 350
吸收强度 最小 最大 最小 最大
吸收系数 E1% 1cm
124.5 144.0 48.6 106.6
允差范围 123.0～126.0 142.8～146.2
47.0～50.3 105.5～108.5
二、 任务分解
3测. 定制步定骤 计划操作内容 (34收.)溶操剂空作白步吸 骤将白溶（剂即置空1白c光m路石中英不吸置收任池何中物，质以）空测气定为其空
吸收光度
数据记录 溶剂空白吸收=
5.确定测定波 长
除另有规定外，在规定的吸收峰±2nm处， 测定波长= nm 再测几点的吸光度，吸光度最大的波长应 在规定的波长±2nm以内，并以吸光度最 大的波长作为测定波长。
（通则0401） P56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
3 .杂散光的检查 可按表2所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石
英池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表2中规定。
试剂
碘化钠 亚硝酸钠
表2 杂散光的检查及限度
浓度（%，g/ml） 测定用波长（nm） 透光率（%）
1.00 5.00
计算稀释倍数
以下均以规格2ml：0.5mg为例
样品溶液：实际使用的维生素B12注射液
供试品溶液：按要求配制的每1mL中约含维生
素B12 25μg的溶液。
稀释倍数
样品溶液浓度 供试品溶液浓度
0.5mg
0.25mg
25ug
2ml
ml 0.025 mg
10
1ml
ml
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.波长准确度 1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确 度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。
（通则0401）
P55-56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.2 波长准确度检定方法 1.用低压汞灯检定 2.用仪器固有的氘灯检定 3.用氧化钬玻璃检定 4.用高氯酸钬溶液检定